CN104497087A - 一种化合物endecaphyllacins B的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种化合物endecaphyllacins B的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明从白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.)果皮中制备分离得到化合物endecaphyl lacins B，该化合物具有显著的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物。因此，本发明的实现为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用白木香植物资源提供了科学依据。

Description

一种化合物endecaphyllacins B的制备方法
本申请是申请日为：2012年12月26日，申请号为：201210576060.9，发明名称为：化合物endecaphyllacins B的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用的分案申请。
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，具体涉及化合物endecaphyllacins B的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
恶性肿瘤又称为癌症，是一种危害人类生命和生活质量的主要疾病之一。据世界卫生组织统计，世界上每年有1000万人患上癌症，约有600万人死于癌症，占全球死亡人数的12％。而且由于吸烟人数增多，体育运动减少，饮食中缺少果蔬等不良习惯可能会导致患癌症的人数增多。我国癌症发生率正处于快速上升时期，每年癌症发病人数约260万，死亡180万。因此寻找有效的抗癌药物是新药开发的重点领域。
我国的药用植物资源极为丰富，利用药用植物防治疾病具有悠久的历史。近年来，一些从天然植物中提取的抗肿瘤植物药及其衍生物因其活性强、作用机制独特、毒副作用低等特点而在临床上得到了广泛的应用。因此，从植物中寻找新的具有抗肿瘤活性的药物成为新药研发的热点之一。
化合物endecaphyllacins B，其结构式如式(Ⅰ)所示，最早公开于文献“Chen J C,Zhang G H,Zhang Z Q,et al.Octanorcucurbitane and cucurbitane triterpenoids from the tubers of Hemsleya endecaphylla with HIV-1inhibitory activity[J].J.Nat.Prod,2008,71:153-155”，该文献报道了该化合物具有抗人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的活性，其半最大效应浓度(EC50)为 12.0μg/mL。但到目前为止，在国内外文献报道中，均未涉及化合物endecaphyllacins B具有抗肿瘤活性的报道。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一种化合物endecaphyllacins B的制备方法。
本发明的化合物endecaphyllacins B的制备方法，其特征在于，化合物endecaphyllacins B是从白木香果皮中分离制备得到的。
所述的化合物endecaphyllacins B从白木香果皮中分离制备得到的，优选，具体包括以下步骤：
(a)将干燥的白木香果皮粉碎，用乙醇或乙醇水溶液浸提，将浸提液浓缩，再用水悬浮，悬浮液用乙酸乙酯萃取至悬浮液基本无色，萃取液经浓缩后得浸膏；
(b)浸膏经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，从体积比100：0～1：1梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱下来的馏分，再经Sephadex-LH20凝胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇体积比50：50作为洗脱剂洗脱，收集馏分，再经制备薄层色谱，用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，显色为蓝紫色，收集比移植Rf在0.4～0.7之间的馏分，得到化合物endecaphyllacins B。
所述的乙醇水溶液优选为体积分数98％的乙醇水溶液。
本发明还提供白木香果皮在制备化合物endecaphyllacins B中的应用。
本发明通过抗肿瘤实验发现，化合物endecaphyllacins B对肿瘤细胞株SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2的IC50值分别为5.6、12.6、2.9和19.5μmol/L，阳性对照药物顺铂对上述四种肿瘤细胞株的IC50值分别为5.2、4.1、1.9和2.7μmol/L。此结果表明：本发明的化合物endecaphyllacins B具有显著的抗肿瘤活性。
因此，本发明的第二个目的是提供化合物endecaphyllacins B在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物优选为抗神经癌、乳腺癌、肺癌或肝癌的药物。
本发明的第三个目的是提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，包含化合物endecaphyllacins B作为活性成分。
所述的抗肿瘤药物优选为抗神经癌、乳腺癌、肺癌或肝癌的药物。
本发明从白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.)果皮中制备分离得到化合物endecaphyllacins B，该化合物具有显著的抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物。因此，本发明的实现为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用白木香植物资源提供了科学依据。
附图说明：
图1是化合物1(endecaphyllacins B)的1H-NMR谱；
图2是化合物1(endecaphyllacins B)的13C-NMR谱。
具体实施方式：
下面通过具体实施例来对本发明做进一步的阐述，但是本发明并不受限于下面的实施例。
实施例1：
一、化合物endecaphyllacins B的制备
白木香果皮10Kg粉碎后用体积分数为98％的乙醇水溶液冷浸提取多次至提取液基本无色，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加500mL水悬浮，悬浮液再用乙酸乙酯萃取5次至悬浮液基本无色，合并乙酸乙酯萃取液，在40℃下减压浓缩得浸膏167.9g。
浸膏进行硅胶柱层析(硅胶200-300目)，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱，石油醚-乙酸乙酯从体积比100：0～1：1进行洗脱，用薄层色谱(TLC)检测(显色剂为茴香醛-浓硫酸试剂)，合并相似组分。将以石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱下来的馏分经Sephadex-LH20凝胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇体积比50：50作为洗脱剂洗脱，收集馏分，再经制备薄层色谱，用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，显色为蓝紫色，收集比移植Rf在0.4–0.7之间的馏分，制得目标化合物1(29.8mg)。
化合物1经质谱和核磁共振波谱分析，1H-NMR谱和13C-NMR谱如图1和图2所示。
其结构鉴定如下：
化合物1具有以下理化和波谱特性：白色固体。正离子ESI-MS m/z:357[M+H]+,结合1H-和13C-NMR数据提示其分子式为C22H28O4。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:5.93(1H,dd,J＝2.8,0.6Hz,H-1),5.78(1H,m,H-6),3.18(1H,d,J＝14.7Hz,H-12a),2.56(1H,d,J＝17.6Hz,H-17a),2.45(1H,d,J＝14.3Hz,H-12b),2.26(1H,d,J＝16.8Hz,H-15a),2.09(1H,d,J＝17.2Hz,H-15b),2.00(1H,d,J＝17.6Hz,H-17b),1.37(3H,s,20-CH3),1.28(3H,s,21-CH3),1.26(3H,s,22-CH3),1.10(3H,s,19-CH3),1.03(3H,s,18-CH3)；13C-NMR(125MHz,CDCl3)δ:216.9(C-16),212.0(C-11),199.4(C-3),145.6(C-2),137.8(C-5),121.1(C-6),115.4(C-1),51.2(C-9),51.1 (C-15),50.1(C-17),48.5(C-4),46.8(C-12),46.0(C-14),45.2(C-13),43.0(C-8),35.8(C-10),28.7(C-21),25.1(C-18),24.9(C-7),21.1(C-20),20.9(C-19),19.4(C-22)。上述数据与文献[Chen J C,Zhang G H,Zhang Z Q,et al.Octanorcucurbitane and cucurbitane triterpenoids from the tubers of Hemsleya endecaphylla with HIV-1inhibitory activity[J].J.Nat.Prod,2008,71:153-155]中endecaphyllacins B的记载值基本一致。
因此，经过上述方法分离的目标化合物1为endecaphyllacins B，其结构式如式(Ⅰ)所示：
实施例2：
采用SRB法[Skehan P,Storeng R,Dominic S.New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening[J].J Natl Cance Inst,]测试化合物endecaphyllacins B的抗肿瘤活性。
1、实验用试剂：将本发明制备的化合物endecaphyllacins B用二甲基亚砜(DMSO)溶解得浓度为10mmol/L的母液，再用RPMI-1640培养基稀释至所需浓度。阳性对照为顺铂水溶液。
本实验所用肿瘤细胞株为神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、非小细胞肺癌细胞NCI-H460和肝癌细胞HePG-2。
2、实验方法：取对数生长期的NCI-H460、SF-268、MCF-7和HePG-2细胞，用胰酶消化， 台盼蓝染色计数，台盼蓝排斥实验检测细胞活力大于95％后，用新鲜RPMI-1640培养基调整细胞浓度为3×104个/mL，细胞接种于96孔板，每孔加入180μL的细胞悬液，并设3个空白孔调零，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。待细胞贴壁后，每孔加入20μL一定浓度的上述化合物endecaphyllacins B的溶液，阴性对照加20μL RPMI-1640培养基，以顺铂作阳性对照。置37℃、5％CO2培养箱中培养72h后，加入50μL 50％冷三氯醋酸固定细胞，4℃放置1h后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的浓度为4mg/mL的SRB溶液100μL/孔，室温中染色30min，去上清，用1％冰醋酸洗涤5次。最后加入200μL/孔10mmol/mL的Tris溶液溶解，用酶标仪测定570nm处的吸光值(A)，用以下公式计算药物对细胞生长的抑制率：细胞生长抑制率(％)＝(1-A样品组/A对照组)×100％。
3、实验结果：本发明制备的化合物endecaphyllacins B对肿瘤细胞株SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2的IC50值分别为5.6、12.6、2.9和19.5μmol/L，阳性对照顺铂对上述四种肿瘤细胞株的IC50值分别为5.2、4.1、1.9和2.7μmol/L。此结果表明：本发明的化合物endecaphyllacins B具有显著的抗肿瘤活性，因此，本发明的实现为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用白木香植物资源提供了科学依据。

Claims (4)

1.一种化合物endecaphyllacins B的制备方法，其特征在于，化合物endecaphyllacins B是从白木香果皮中分离制备得到的。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的化合物endecaphyllacins B从白木香果皮中分离制备得到的，具体包括以下步骤：
(a)将干燥的白木香果皮粉碎，用乙醇或乙醇水溶液浸提，将浸提液浓缩，再用水悬浮，悬浮液用乙酸乙酯萃取至悬浮液基本无色，萃取液经浓缩后得浸膏；
(b)浸膏经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，从体积比100：0～1：1梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱下来的馏分，再经Sephadex-LH20凝胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇体积比50：50作为洗脱剂洗脱，收集馏分，再经制备薄层色谱，用体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，显色为蓝紫色，收集比移植Rf在0.4～0.7之间的馏分，得到化合物endecaphyllacins B。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液为体积分数98％的乙醇水溶液。
4.白木香果皮在制备化合物endecaphyllacins B中的应用。
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