CN104478952A - 一种用作化疗的化合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用作鳞癌化疗的化合物，其以下述结构式所示，所述鳞癌为口腔鳞癌、宫颈鳞癌或食道鳞癌。

Description

一种用作化疗的化合物

技术领域

本发明涉及食品和医药化学领域。更尤其涉及一种用作化疗的化合物。

背景技术

灵芝(GanodermaLucidum)治愈万症，其功能应验，灵通神效，故名灵芝，又名“不死药”俗称“灵芝草”，多孔菌科类、一年生真菌，其中以长白山赤灵芝尤为著名。是担子菌纲多孔菌科（Polyporaceae）灵芝属（Ganodelma）真菌赤芝G．lucidum·karst和紫芝G．japonicrn L loyd的总称，具有扶正固本等功效，被《本经》称为上品。近年来，对灵芝属真菌的化学成分及临床研究颇多，对灵芝的生殖细胞——孢子药用价值的研究也颇受重视，本文综述灵芝孢子的研究近况。灵芝孢子褐色，卵形，一端平截，（8.5～11.2）μm×（5.2～6.9）μm，具双层壁。在每个孢子的褐色内层产生许多针状小突起，深深地伸入孢子壁的透明外层，外层孢壁光滑。灵芝孢子包裹的两层壁十分坚韧，一般的化学，物理方法很难将其打破，故限制了对其化学成分、生物活性成分的研究。建立有效的破壁方法，可以促进对其生物活性成分的提取及药用价值的研究。灵芝品种约200多种，并不是每种灵芝都能药用，其中包括不能食用的毒芝。医学证明赤灵芝、紫芝、云芝药用价值最高。在全国最大的原始森林，长白山自然保护区最适宜生长。但是由于多年来人类的过度采摘，野生灵芝的存量越来越少。

灵芝化学成分主要含麦角甾醇0.3%～0.4%，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。在水溶性提取液中含有水溶性蛋白质，天门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，多肽及多糖类。尚含树脂、内酯、香豆精等。紫芝含麦角甾醇，有机酸为顺蓖麻酸，反丁烯二酸。此外，并含氨基酸、葡萄糖、多糖类、树脂及甘露醇。一般灵芝有生物碱、甾醇、内酯、香豆精、酸性树脂、氨基酸、油脂、还原性物质等反应。灵芝属的化学成分较为复杂，且因所用菌种、菌种产地、栽培方法、提取工艺、制剂方法不同而各异。灵芝属的子实体、菌丝体和孢子中含有多糖类、核苷类、呋喃类衍生物、甾酵类、生物碱类、蛋白质、多肽、氨基酸类、三萜类、倍半萜、有机锗、无机盐等。灵芝多糖是灵芝的主要有效成分之一， 具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化、降血脂与抗衰老作用。灵芝所含三萜类不下百余种，其中以四环三萜类为主， 灵芝的苦味与所含三萜类有关。三萜类也是灵芝的有效成分之一，对人鳞癌细胞具有细胞毒作用，也能抑制组织胺的释放，具有保肝作用和具有抗过敏作用等。

本发明人惊奇地发现，由灵芝提取的式I化合物，在鳞癌化疗，特别是口腔鳞癌、宫颈鳞癌或食道鳞癌方面具有特别的作用和效力。

发明内容

一方面，本发明提供了一种式I化合物，其以下述结构式表示：

I。

优选式I化合物用于治疗、预防、改善鳞癌，所述鳞癌为口腔鳞癌、宫颈鳞癌或食道鳞癌。

本发明的第二个方面是式I化合物在制造用于治疗、改善、防御、预防、和/或防治一种或多种所说的鳞癌的药物中的用途。特别优选的是，使用式I化合物来治疗、预防、改善、防御、和/或防治所说的鳞癌。

本发明的第三个方面是式I化合物在治疗、改善、防御、预防、和/或防治鳞癌中的用途。

本发明的第四个方面包括一种用于治疗、预防、改善、防御和/或防治所说的鳞癌的治疗剂，其中既可以仅含有式I化合物，也可以同时含有一种或多种载体或赋形剂。

本发明的第五个方面涉及一种治疗组合物，其中含有式I化合物和一种或多种药用载体和/或赋形剂。组合物优选含有式I化合物。

本发明的第六个方面涉及一种饮料或食品，其中含有式I化合物。优选食品中含有式I化合物。

在本发明中，式I的化合物进行治疗所需的剂量与许多因素有关，包括具体应用、所用化合物的性质、进行治疗的疾病的状态、给药方式和病人的状况。通常，每个病人给药的日剂量是0.1mg-2g；典型的日剂量是0.5mg-1g；优选50mg-200mg。

式I的化合物可以以常规方式和剂量使用。例如，见Goodman andGilman，治疗的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics，1299)(第7版，1985)。所用的具体剂量与进行治疗的疾病的状态、受治疗者的状况、给药途径以及其它如上所述的已知因素有关。

制备用于治疗所说的适应症的药物组合物，是将式I的化合物(为方便起见，下文称为“活性化合物”)与一种或多种本领域所熟知的可药用或可兽药用载体和/或赋形剂混合。

当然，载体必须是药物可接受的，也就是与制剂中的其它任何成份都相配伍，并且必须对受治疗者无害。载体或赋形剂可以是固体或液体， 或两者都是，并且优选制成化合物为一个单位剂量的制剂，例如，一种片剂，其中可以含有0.5％-59％重量比的活性化合物，或高达100％重量比的活性化合物。本发明中的制剂可以含有一种或多种活性化合物，可以使用任何熟知的药学技术来制备，基本上包括将组分混合，可选择地包括一种或多种辅助成分。

本发明中的制剂包括适于口服、直肠、眼内、口腔(例如舌下)、肠胃外(例如皮下、肌内、真皮内、静脉内)和透皮给药的制剂，虽然在任何具体的病例中，最适合的给药途径与所治疗的疾病的特性和严重程度以及所用特定活性化合物的性质有关。

适于口服给药的制剂可以制成单个的单位，例如胶囊、扁囊剂、锭剂、或片剂，其中每一单位中含有预定剂量的活性化合物；粉剂或粒剂；在水或非水液体中的溶液或悬浮液；水包油乳液或油包水乳液。这些制剂可以用合适的药物学方法制备，其中包括将活性化合物与合适的载体(可能含有一种或多种如上所述的辅助成分)混合这一步骤。通常，本发明中的制剂是这样制备的，将活性化合物与液体或分散的很细的固体载体或既与液体又与固体载体均匀而紧密地混合，然后，如果需要的话，将得到的混合物定形，例如制成一个单位剂量形式的制剂。例如，片剂可以通过将含有活性化合物的粉末或颗粒压片或铸模制备到，其中所述的粉末或颗粒中可选择地含有一种或多种辅助成分。压片可以通过将自由流动的化合物例如粉末或颗粒在合适的机器中压制而成，其中所述的粉末或颗粒中可选择地混有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂/分散剂。模制片可以通过将用惰性液体粘合剂润湿的粉末状化合物在合适的机器中铸模来制备。

适于口腔(舌下)给药的制剂包括活性化合物存在于调味基质中的锭剂，调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶；活性化合物存在于惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的软锭剂。

本发明中适于肠胃外给药的组合物通常包含活性化合物的无菌含水制剂，制剂优选与打算接受给药者的血液等渗。虽然也可以通过皮下、肌内、或真皮内注射来达到给药效果，但是这些制剂优选静脉给药。通 常，可以通过将活性化合物与水或甘氨酸缓冲液混合，然后将得到的溶液灭菌并且调到与血液等渗来制备这些制剂。根据本发明的注射制剂通常含有0.1％-60％w/w的活性化合物，并且以0.1ml/min/kg的速度给药。

适于直肠给药的制剂优选制成含有单位剂量的栓剂。这些栓剂可以通过将活性化合物与一种或几种常规固体载体，例如椰子油混合，然后将得到的混合物定形来制备。

适于对皮肤局部给药的制剂或组合物优选制成软膏、乳膏、洗剂、糊剂、凝胶、喷雾剂、气溶胶、或油剂。可使用的载体包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、乙醇、和其两种或多种的组合物。活性化合物的浓度通常是0.1％-0.5％w/w，例如0.5％-2％w/w。这些组合物的实例包括皮肤用化妆品乳膏。

适于透皮给药的制剂可以制成单个的贴剂，其适于与受药者的表皮长时间紧密地接触。这种贴剂可适当地含有作为缓冲水溶液的活性化合物，例如，所说的活性化合物在这种缓冲水溶液中的浓度是0.1M-0.2M。

适于透皮给药的制剂也可以通过离子电渗疗法释放活性化合物(见，例如，药理学研究(Pharmaceutical Research)3(6)，318(1986))，并且典型的使用形式是活性化合物任选的缓冲水溶液。合适的制剂中包含柠檬酸盐或bis/tris缓冲液(PH6)或乙醇/水，并且含有0.1M-0.2M的活性成份。

活性化合物可以以食品的形式提供，例如以加入、混合、包衣、结合或其它途径加到食品中去。术语食品是指从最广义上讲，包括液体食品，例如包括乳制品在内的饮料，和其它食品，例如健康条状食品、甜点等。含有本发明化合物的食品能依据标准方法容易地制备。

本发明的化合物具有有效的抗氧化剂活性，因此能广泛地应用于药学和兽药学、化妆品例如能防止皮肤衰老的护肤乳膏、防晒剂、食品、健康饮料、洗发剂以及类似物中。

我们惊奇地发现，式I的化合物与维生素E能互相协同作用以保护脂质、蛋白质和其它生物分子不被氧化。相应地，本发明进一步提供了一种组合物，其中含有一种或多种通式I的化合物、维生素E、和可选择地含有药物、兽药或化妆品可接受载体和/或赋形剂。

治疗方法、用途和组合物可以是对人或动物进行给药，所说的动物是，例如宠物和家养动物(例如狗和猫)、鸟(例如小鸡、火鸡、鸭子)、家畜(例如牛、绵羊、猪和山羊)等。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均购自Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents公司；灵芝为普通商购产品。

实施例1：式I化合物的制备：

(1)：称取适量干燥灵芝，用5倍量乙醇回流提取1~3次，每次2h，合并滤液，置于蒸发皿中，水浴蒸至相对密度为1.35~1.55的稠膏。后将稠膏置减压干燥箱内于0.16 Mpa，60℃下干燥24h，取出研碎即得；

(2)：称取干燥的粉浸膏1g，精密称定，置50ml的具塞锥形瓶中，加入75 wt %甲醇50mL；

(3)：使用高效液相色谱提取，精密吸取供试品溶液15mL，色谱条件如下：色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18分析柱，填料粒径3 μm，柱长100 mm，柱内径4.6 mm，柱温35℃，流动相为石油醚-乙酸乙酯(体积比：1:3)混合而成，采用流动相二元梯度洗脱系统： 0min→5min→38min→65min，石油醚：5 wt %→15 wt %→25 wt %→100 wt %，乙酸乙酯95 wt %→85 wt %→70 wt %→0% 流速为1 mL·min^-1，检测波长为230±2nm；得到无色晶体状式I化合物。

¹H NMR(400MHz，MeOD；COSY)δ/ppm:δ2.20[s，3H]，3.27[m，1H]，3.38[m，1H]，3.39[m，1H]，3.42[m，1H]，3.60[dd，1H，J＝6.6，11.9Hz]，3.86[dd，1H，J＝2.2，11.9Hz]，4.71[d，1H，J＝7.3Hz]，6.14[d，1H，J＝15.7Hz]，6.74[d，1H，J＝8.4Hz]，6.82[dd，1H，J＝10.2，15.4Hz]，6.86[d，1H，J＝15.4Hz]，7.02[dd，1H，J＝2.0，8.4Hz]，7.32[dd，1H，J＝10.2，15.7Hz]，7.43[d，1H，J＝2.9Hz]。

实施例2：药效试验：

表1列出了试验用细胞株

表1 试验用细胞株

*ATCC：American Type Culture Collection

应用磺酰罗丹明B蛋白染色法，检测药物对鳞癌细胞增殖生长的抑制作用。主要步骤如下：

根据预试验测定的细胞生长速率(倍增时间)，接种一定数量的对数生长期细胞于96孔培养板(90 μl/孔)。生长24小时，避光条件下加入不同浓度的式I化合物及其晶体形式。同时设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞凋零孔。然后癌细胞在37℃、5% CO₂条件下培养72小时，弃去培养液，用10% TCA固定细胞。4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1%冰醋酸配置的SRB(Sigma) 4 mg/ml溶液100 μl/孔，室温中染色15分钟，去上清液，用1%醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入150 μl/孔的Tris溶液，酶标仪(VERSAmax) 520 nm波长下测定OD值，计算抑制率：

抑制率 = (OD值_对照孔 - OD值_给药孔) / OD值_对照孔×100%

根据各浓度抑制率，采用LOGIT法计算半数抑制浓度IC₅₀。以上每个实验重复2-6次，求出2-6次实验的平均IC₅₀值。

表2累出了本发明化合物对两种鳞癌细胞和正常细胞的体外细胞的抑制作用。

表2本发明化合物对不同细胞的抑制作用

结果表明，本发明的式I化合物对KB和HELA的人类实体瘤细胞有很强的杀伤作用，说明本发明的化合物对鳞癌细胞株均有显著的生长抑制作用，但对正常组织细胞没有杀伤作用。

Claims (3)

1.一种用作鳞癌化疗的化合物，其特征在于其以下述结构式所示：

I所述鳞癌为口腔鳞癌、宫颈鳞癌或食道鳞癌。

2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)：称取适量干燥灵芝，用5~15倍量乙醇回流提取1~3次，每次0.5~3h，合并滤液，置于蒸发皿中，水浴蒸至相对密度为1.35~1.55的稠膏；后将稠膏置减压干燥箱内于0.12Mpa~0.18 Mpa，50℃~60℃下干燥24h~48h，取出研碎即得；

(2)：称取干燥的粉浸膏0.1g~1g，精密称定，置50ml的具塞锥形瓶中，加入75 wt %甲醇35~50mL；

(3)：使用高效液相色谱提取，精密吸取供试品溶液2~20mL，色谱条件如下：色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18分析柱，填料粒径3 μm，柱长100 mm，柱内径4.6 mm，柱温20℃~35℃，流动相为石油醚-乙酸乙酯(体积比：1:3)混合而成，采用流动相二元梯度洗脱系统： 0min→5min→38min→65min，石油醚：5 wt %→15 wt %→25 wt %→100 wt %，乙酸乙酯95 wt %→85 wt %→70 wt %→0% 流速为1 mL·min^-1，检测波长为230±2nm；得到式I化合物。

3.权利要求1所述化合物在制备化疗药物方面的用途。