CN104447944A - 一种葡萄籽蛋白的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种葡萄籽蛋白的提取方法，以葡萄籽为原料，先提取原花青素，再提取葡萄籽油，最后再提取蛋白质，即先用乙醇溶液浸提法从整粒葡萄籽中分离提取葡萄原花青素，再将该批葡萄籽用压榨法分离提取葡萄籽油，最后将提取了原花青素和葡萄籽油的葡萄籽残渣用酸碱二次溶解沉淀法分离提取葡萄籽蛋白。同目前的其他提取方法比较，本发明充分利用了葡萄籽资源，同一批葡萄籽原料可以同时获得三种产品，葡萄籽资源利用率高，在其提取工艺中，前一物质的提取不影响后一物质的提取，还有利于后一物质的提取，简化了提取步骤，具有节约资源、工艺简便、减少成本、提高效率、增加效益等优点；采用酸碱二次溶解沉淀法进行葡萄籽蛋白的提取，提取率可达到90％以上。

Description

一种葡萄籽蛋白的提取方法

技术领域

本发明属于生物技术天然物质提取技术领域，具体地说，涉及一种葡萄籽蛋白的提取方法。

背景技术

葡萄籽是指葡萄浆果内含有的种子，在葡萄酒厂酿制葡萄酒后剩余的葡萄残渣中含有大量葡萄籽。众多学者研究报道了葡萄籽中含有葡萄原花青素、葡萄籽油和葡萄籽蛋白等多种生物活性物质及其提取分离方法，并有多家工厂进行了葡萄原花青素和葡萄籽油的批量生产。但现有报道和应用的提取分离方法都是针对其中某一物质的，即都是以葡萄籽为原料，从中提取或是原花青素、或是葡萄籽油、或是蛋白质，造成了资源的浪费。

目前，报道和应用的葡萄籽蛋白提取法是建立在葡萄籽蛋白为酸性蛋白的理论基础上，先采用碱溶或盐析法进行溶解，再利用等电点原理进行分离提取，提取率一般在70％左右，提取率并不高。

发明内容

本发明的目的在于针对现有从葡萄籽中提取蛋白质时存在的资源浪费、提取率不高等上述不足，提供一种葡萄蛋白的提取方法，该方法以葡萄籽为原料，在提取蛋白质之前，先提取原花青素和葡萄籽油，充分利用了葡萄籽资源，具有节约资源、工艺简便、减少成本、提高效率、增加效益等诸多优点。

本发明的技术方案是：一种葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽为原料，其工艺步骤为：

(1)提取原花青素：

采用葡萄渣加工处理器将葡萄籽原料进行处理和清洗，再将葡萄籽置于温度为45-50℃、浓度为30％的乙醇水溶液浸提10-20小时，过滤得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽备用；将原花青素提取物溶液经蒸发浓缩、柱层析吸附分离及洗脱，收集洗脱后的原花青素提取物进行干燥处理后获得原花青素产品；

(2)提取葡萄籽油：

将上述过滤得到的葡萄籽经过破碎、软化、炒坯、压饼、压榨工艺处理，得到葡萄籽油和压榨后的葡萄籽残渣，压榨后的葡萄籽残渣备用，压榨处理后得到的葡萄籽油经过纯化精炼处理后获得葡萄籽油产品；

(3)提取葡萄籽蛋白：

A、将上述压榨后的葡萄籽残渣置于pH值为7.8-8.3、温度为40-42℃的碱性溶液中浸提12-24小时，料液比为1:10，浸提期间每隔1小时充分搅拌一次；

B、完成上述浸提过程后，再将该碱性提取液中加入盐酸溶液并调节pH值为3.3-3.6，继续在温度为40-42℃条件下浸泡6-12小时，同样浸泡期间每隔1小时充分搅拌一次，静置沉淀后，弃除底层沉淀物，收集上层浸提液备用；

C、将上述浸提液加入氢氧化钠溶液调节pH值为4.1-4.2，静置6-12小时，析出沉淀，采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀后，再将该提取液加入氢氧化钠溶液调节pH值为6.8-6.9，静置6-12小时，析出沉淀，同样采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀，将两次收集的沉淀合并后，置于温度为40-50℃的烘干箱中干燥后获得葡萄籽蛋白产品。

本发明的有益效果是：本发明建立了从同一批葡萄籽原料中，先提取原花青素，再提取葡萄籽油，最后再提取蛋白质的工艺技术方法，即先用乙醇溶液浸提法从整粒葡萄籽中分离提取葡萄原花青素，再将该批葡萄籽用压榨法分离提取葡萄籽油，最后将提取了原花青素和葡萄籽油的葡萄籽残渣用酸碱二次溶解沉淀法分离提取葡萄籽蛋白，同目前的其他提取方法比较，本发明充分利用了葡萄籽资源，同一批葡萄籽原料可以同时获得三种产品，葡萄籽资源利用率高，且在其提取工艺中，前一物质的提取不仅不影响后一物质的提取，还有利于后一物质的提取，简化了提取步骤，具有节约资源、工艺简便、减少成本、提高效率、增加效益等诸多优点。本发明建立了用酸碱二次溶解沉淀法进行葡萄籽蛋白的提取，提取率可达到90％以上，提高了葡萄籽蛋白的提取效率。

具体实施方式

具体实施方式一：一种葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽为原料，其工艺步骤为：

(1)提取原花青素：

采用葡萄渣加工处理器将葡萄籽原料进行处理和清洗，再将葡萄籽置于温度为45℃、浓度为30％的乙醇水溶液浸提10小时，过滤得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽备用；将原花青素提取物溶液经蒸发浓缩、柱层析吸附分离及洗脱，收集洗脱后的原花青素提取物进行干燥处理后获得原花青素产品；

(2)提取葡萄籽油：

将上述过滤得到的葡萄籽经过破碎、软化、炒坯、压饼、压榨工艺处理，得到葡萄籽油和压榨后的葡萄籽残渣，压榨后的葡萄籽残渣备用，压榨处理后得到的葡萄籽油经过纯化精炼处理后获得葡萄籽油产品；

(3)提取葡萄籽蛋白：

A、将上述压榨后的葡萄籽残渣经105℃恒温干燥后，用凯氏定氮法测定蛋白质含量为11.8％，取干燥后的葡萄籽残渣200g，将其置于pH值为7.8、温度为40℃、溶液体积为2L的氢氧化钠溶液中浸提20小时，浸提期间每隔1小时充分搅拌一次；

B、完成上述浸提过程后，再将该氢氧化钠提取液中加入盐酸溶液并调节pH值为3.3，继续在温度为40℃条件下浸泡10小时，同样浸泡期间每隔1小时充分搅拌一次，静置沉淀后，弃除底层沉淀物，收集上层浸提液备用；

C、将上述浸提液加入氢氧化钠溶液调节pH值为4.1，静置10小时，析出沉淀，采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀后，再将该提取液加入氢氧化钠溶液调节pH值为6.8，静置10小时，析出沉淀，同样采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀，将两次收集的沉淀合并后，置于温度为45℃的烘干箱中干燥后获得葡萄籽蛋白产品。

具体实施方式二：一种葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽为原料，其工艺步骤为：

(1)提取原花青素：

采用葡萄渣加工处理器将葡萄籽原料进行处理和清洗，再将葡萄籽置于温度为48℃、浓度为30％的乙醇水溶液浸提15小时，过滤得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽备用；将原花青素提取物溶液经蒸发浓缩、柱层析吸附分离及洗脱，收集洗脱后的原花青素提取物进行干燥处理后获得原花青素产品；

(2)提取葡萄籽油：

将上述过滤得到的葡萄籽经过破碎、软化、炒坯、压饼、压榨工艺处理，得到葡萄籽油和压榨后的葡萄籽残渣，压榨后的葡萄籽残渣备用，压榨处理后得到的葡萄籽油经过纯化精炼处理后获得葡萄籽油产品；

(3)提取葡萄籽蛋白：

A、将上述压榨后的葡萄籽残渣经105℃恒温干燥后，取干燥后的葡萄籽残渣500g，将其置于pH值为8.0、温度为41℃、溶液体积为5L的氢氧化钠溶液中浸提18小时，浸提期间每隔1小时充分搅拌一次；

B、完成上述浸提过程后，再将该氢氧化钠提取液中加入盐酸溶液并调节pH值为3.5，继续在温度为41℃条件下浸泡8小时，同样浸泡期间每隔1小时充分搅拌一次，静置沉淀后，弃除底层沉淀物，收集上层浸提液备用；

C、将上述浸提液加入氢氧化钠溶液调节pH值为4.1，静置10小时，析出沉淀，采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀后，再将该提取液加入氢氧化钠溶液调节pH值为6.8，静置10小时，析出沉淀，同样采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀，将两次收集的沉淀合并后，置于温度为45℃的烘干箱中干燥后获得葡萄籽蛋白产品。

具体实施方式三：一种葡萄籽蛋白的提取方法，采用葡萄籽为原料，其工艺步骤为：

(1)提取原花青素：

采用葡萄渣加工处理器将葡萄籽原料进行处理和清洗，再将葡萄籽置于温度为50℃、浓度为30％的乙醇水溶液浸提20小时，过滤得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽备用；将原花青素提取物溶液经蒸发浓缩、柱层析吸附分离及洗脱，收集洗脱后的原花青素提取物进行干燥处理后获得原花青素产品；

(2)提取葡萄籽油：

将上述过滤得到的葡萄籽经过破碎、软化、炒坯、压饼、压榨工艺处理，得到葡萄籽油和压榨后的葡萄籽残渣，压榨后的葡萄籽残渣备用，压榨处理后得到的葡萄籽油经过纯化精炼处理后获得葡萄籽油产品；

(3)提取葡萄籽蛋白：

A、将上述压榨后的葡萄籽残渣经105℃恒温干燥后，取干燥后的葡萄籽残渣1kg，将其置于pH值为8.3、温度为42℃、溶液体积为10L的碱性溶液中浸提24小时，浸提期间每隔1小时充分搅拌一次；

B、完成上述浸提过程后，再将该碱性提取液中加入盐酸溶液并调节pH值为3.6，继续在温度为42℃条件下浸泡12小时，同样浸泡期间每隔1小时充分搅拌一次，静置沉淀后，弃除底层沉淀物，收集上层浸提液备用；

C、将上述浸提液加入氢氧化钠溶液调节pH值为4.2，静置12小时，析出沉淀，采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀后，再将该提取液加入氢氧化钠溶液调节pH值为6.9，静置12小时，析出沉淀，同样采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀，将两次收集的沉淀合并后，置于温度为45℃的烘干箱中干燥后获得葡萄籽蛋白产品。

以上所举实施例仅用为方便举例说明本发明，在本发明所述技术方案范畴，所属技术领域的技术人员所作各种简单变形与修饰，均应包含在以上申请专利范围中。

Claims (1)

1.一种葡萄籽蛋白的提取方法，其特征在于：采用葡萄籽为原料，其工艺步骤为：

(1)提取原花青素：

采用葡萄渣加工处理器将葡萄籽原料进行处理和清洗，再将葡萄籽置于温度为45-50℃、浓度为30％的乙醇水溶液浸提10-20小时，过滤得到葡萄籽和原花青素提取物溶液，葡萄籽备用；将原花青素提取物溶液经蒸发浓缩、柱层析吸附分离及洗脱，收集洗脱后的原花青素提取物进行干燥处理后获得原花青素产品；

(2)提取葡萄籽油：

将上述过滤得到的葡萄籽经过破碎、软化、炒坯、压饼、压榨工艺处理，得到葡萄籽油和压榨后的葡萄籽残渣，压榨后的葡萄籽残渣备用，压榨处理后得到的葡萄籽油经过纯化精炼处理后获得葡萄籽油产品；

(3)提取葡萄籽蛋白：

A、将上述压榨后的葡萄籽残渣置于pH值为7.8-8.3、温度为40-42℃的碱性溶液中浸提12-24小时，料液比为1:10，浸提期间每隔1小时充分搅拌一次；

B、完成上述浸提过程后，再将该碱性提取液中加入盐酸溶液并调节pH值为3.3-3.6，继续在温度为40-42℃条件下浸泡6-12小时，同样浸泡期间每隔1小时充分搅拌一次，静置沉淀后，弃除底层沉淀物，收集上层浸提液备用；

C、将上述浸提液加入氢氧化钠溶液调节pH值为4.1-4.2，静置6-12小时，析出沉淀，采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀后，再将该提取液加入氢氧化钠溶液调节pH值为6.8-6.9，静置6-12小时，析出沉淀，同样采用滤纸抽滤方式进行分离并收集沉淀，将两次收集的沉淀合并后，置于温度为40-50℃的烘干箱中干燥后获得葡萄籽蛋白产品。