CN104434940A

CN104434940A - 竹节参皂苷Ⅳa在防治心血管疾病及其并发症中的应用

Info

Publication number: CN104434940A
Application number: CN201410716872.8A
Authority: CN
Inventors: 奚苗苗; 殷英; 段佳林; 闫佳佳; 牟菲; 郭超; 翁琰; 关月; 朱艳荣; 卫国; 王艳华
Original assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Current assignee: Fourth Military Medical University FMMU
Priority date: 2014-12-02
Filing date: 2014-12-02
Publication date: 2015-03-25

Abstract

本发明涉及竹节参皂苷Ⅳa在防治心血管疾病及其并发症中的应用。本发明实验证明竹节参皂苷Ⅳa对缺血/再灌注的C57小鼠心肌具有明显的保护作用，并确定出给药的最佳剂量，可进一步制备防治心血管疾病及其相关并发症的药物。

Description

竹节参皂苷Ⅳa在防治心血管疾病及其并发症中的应用

技术领域

本发明涉及竹节参皂苷Ⅳa 在医药领域中的新用途，具体是指竹节参皂苷Ⅳa在防治心血管疾病及其并发症中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

冠心病已成为影响人类健康的主要疾病，也是全球死亡率最高的疾病之一。根据世界卫生组织2011 年的报告，中国的冠心病死亡人数已列世界第二位。同时国家心血管疾病中心发布的《中国心血管病报告2012》指出，我国心血管病患者人数为2.9亿，每10秒就有1人死于心血管病。膳食不合理、吸烟、饮酒和缺乏运动等不良生活习惯，导致心脑血管病危险因素流行趋势明显，病患人数呈快速增长态势。

近年来，从中药植物中发现治疗心脑血管疾病的活性成分主要包括皂苷类、生物碱类、黄酮类、萜类等。三萜皂苷是一大类具有多种生理功能的生物活性物质，其心脑血管保护作用的研究进展迅速。太白楤木特产于我国中西部秦巴山区及其余脉，其主要化学成分为三萜皂苷。早期资料显示，楤木皂苷具有抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、降血脂、降血糖等药理作用，对心脑血管系统也有一定的作用。

竹节参皂苷Ⅳa（分子式：C₄₂H₆₆0₁₄，分子量：794，CAS号：51415-02-2）是齐墩果烷类五环三萜配糖体，主要来源于五加科植物竹节参的干燥根茎，是楤木皂苷中的一种单体活性皂苷类物质。到目前为止，已有部分专利涉及从珠子参中分离制备竹节参皂苷Ⅳa的方法及其保肝降酶作用，竹节参皂苷Ⅳa制备α-葡萄糖苷酶抑制剂用于治疗Ⅱ型糖尿病及其并发症。尚未发现有关竹节参皂苷Ⅳa对心血管疾病及其并发症防治作用的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种竹节参皂苷Ⅳa在防治心血管疾病及其并发症中的应用。

本发明的具体实现过程如下：

结构式(I)所示化合物在防治心血管疾病及其并发症中的应用，

(I)

所述心血管疾病及其并发症为心律失常、心室纤维化、心肌梗死、冠心病、心绞痛、心力衰竭、充血性心力衰竭、心肌缺血、心肌缺血/再灌注、心肌炎、动脉粥样硬化、外周组织器官或四肢缺血、休克、缺血或再灌注引起的组织器官急慢性损伤、失调或间接后遗症。竹节参皂苷Ⅳa对心肌缺血或再灌注引起的组织器官损伤疾病更为有效。

防治心血管疾病及其并发症的药物组合物可以为竹节参皂苷Ⅳa与一种或多种药学上可接受的载体/辅料混合制成的，也可以为竹节参皂苷Ⅳa与其他化合物或中药组成的复方制剂，剂型如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂、颗粒剂或乳剂。

发明人测定了不同剂量组（低剂量组70mg/kg/day、中剂量组140 mg/kg/day、高剂量组280mg/kg/day)竹节参皂苷Ⅳa对心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）小鼠的心肌保护作用。实验结果发现，不同剂量组的竹节参皂苷Ⅳa均具有生物活性，其中高剂量组的竹节参皂苷Ⅳa对心肌保护作用最好。实验证明竹节参皂苷Ⅳa对缺血/再灌注的C57小鼠心肌具有明显的保护作用，同时确定出给药的最佳剂量。

附图说明

图1为小鼠不同处理后各组心肌梗死面积（，n=6），Sham：假手术组；MI/RI：模型组；MI/RI+low：模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+middle：模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+high：模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa。与Sham组相比: ^#P＜0.01；与MI/RI组相比：* P＜0.05，** P＜0.01；

图2为小鼠不同处理后血清乳酸脱氢酶（LDH）的测定（，n=6），Sham：假手术组；MI/RI：模型组；MI/RI+low：模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa； MI/RI+middle：模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+high：模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa。与Sham组相比:^#P＜0.01；与MI/RI组相比：* P＜0.05，** P＜0.01；

图3为小鼠不同处理后血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）的测定（，n=6），Sham：假手术组；MI/RI：模型组；MI/RI+low：模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+middle：模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+high：模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa。与Sham组相比: ^#P＜0.01；与MI/RI组相比：* P＜0.05，** P＜0.01；

图4为小鼠不同处理后血清肌钙蛋白（cTnI）的测定（，n=6），Sham：假手术组；MI/RI：模型组；MI/RI+low：模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa； MI/RI+middle：模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa；MI/RI+high：模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa。与Sham组相比:^#P＜0.01；与MI/RI组相比：* P＜0.05，** P＜0.01；

图5为小鼠不同处理后各组病理损伤切片（，n=6），A：假手术组；B：模型组；C：模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa；D：模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa；E：模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa。

具体实施方式

实施例1：不同剂量组的竹节参皂苷Ⅳa对小鼠MI/RI的保护作用

（1）试验材料

1)实验动物

健康C57小鼠30 只，质量20-22g，购自第四军医大学动物中心。动物分笼饲养（环境温度24℃，湿度60%-70%），术前1 h 禁食，自由饮水。

2)主要药品与试剂

竹节参皂苷Ⅳa，规格3g（成都普菲德生物技术有限公司，CAS号：51415-02-2，纯度≥98%）；乳酸脱氢酶LDH和考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒（南京建成生物工程研究所）；CK-MB、cTnI试剂盒（德国曼海姆公司）；2,3,5-氯化三苯基四氮唑蓝（TTC）染色剂（美国Sigma-Aldrich 公司，T8877）；伊文思蓝（EB）染色剂（美国Sigma-Aldrich公司，E2129）。

3)主要仪器

HX-100E 小动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；BL-420S 多道生理记录仪（成都泰盟科技有限公司）；5417 型低温高速离心机（Eppendorf 公司）；COOLPIX S1 型照相机（Nikon公司，日本）；680 型酶标仪（BIO-RAD 公司）。

（2）实验方案及结果

1)MI/RI小鼠模型的制备

将C57小鼠随机分为5 组：假手术组（Sham）, 模型组（MI/RI）, 模型+低剂量竹节参皂苷Ⅳa（MI/RI+low），模型+中剂量竹节参皂苷Ⅳa（MI/RI+middle），模型+高剂量竹节参皂苷Ⅳa（MI/RI+high），每组6只，造模前给药组连续灌胃7天。小鼠称重后，4μL/g腹腔注射6%水合氯醛，仰卧位固定，连接心电图监测，气管插管并接呼吸机（频率：75 次/min；潮气量：8-9 mL；吸：呼=1:2），胸骨左缘旁纵行切开第3-5肋间做横行切口，剪开并挑起心包，暴露心脏，以左心耳与肺动脉圆锥交界处的左冠状动脉前降支(LAD)为标志，于左心耳下方1-2 mm 处进针、穿线（横跨左冠状动脉前降支），将一小硅胶管从丝线两端穿入，稳定10 min 后结扎，缺血30 min 后，再灌注3 h 结束。成功标准：结扎LAD 后心电图II 导联ST 段出现弓背向上抬高，T 波高耸等为缺血成功；放松结扎线后，抬高的ST 段下降1/2 以上为再灌注成功。假手术组动物只穿线，不结扎，其余五组均进行30min缺血和3h再灌注。

2)心肌梗死面积测定

再灌注24h后，将小鼠心脏立即取出，放入预冷的PBS液中，把残留血挤干净后，用平头2ml注射针插入主动脉血管并固定，向心脏内注射生理盐水进行清洗，然后1% TTC溶液（pH=7.4）灌入心脏，于37℃孵育5min，滤纸吸除心室腔中残余染液，-80℃冻存。取出后自心尖向心底平行房室沟方向将其切成相等厚度的5片，4%多聚甲醛固定4℃过夜，次日用2% 伊文思蓝（EB）溶液复染。经染色后白色代表梗死区（AN），红色代表缺血但未梗死区，蓝色代表正常区，危险区（AAR）为红色和白色面积之和。采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行分析。梗死程度采用梗死区面积（AN）与危险区面积（AAR）的比值表示。小鼠缺血30 min 再灌注3 h后，模型组动物心肌出现明显的梗死，梗死区面积与危险区面积的比为77.9%。与假手术组比较，模型组动物心肌梗死面积显著增加（P＜0.01），提示MI/R 损伤模型制作成功。与模型组相比较，中、高剂量组竹节参皂苷Ⅳa治疗后能明显降低大鼠MI/RI后心肌梗死面积（中：P＜0.05；高：P＜0.01），低剂量组降低梗死面积程度与模型比无显著差异，见图1。

3)血清生化指标测定

再灌注3 h 后，腹主动脉取血，离心（4000 r/min）12 min，分离血清，试剂盒检测LDH、CK-MB和cTnI的活性，按照说明书操作。与假手术组相比，模型组小鼠血清LDH、CK-MB和cTnI水平明显增加（P＜0.01）。各给药组大鼠血清LDH、CK-MB和cTnI水平都有明显下降，与模型组相比有统计学差异，小鼠血清LDH、CK-MB 和cTnI水平分别见图2、3、4。

4)病理组织学检查

将心肌组织脱水、包埋后用超薄切片机切成厚度4μm薄片，进行常规苏木精-伊红染色法（HE）染色，并在40倍光镜显微镜下观察缺血区心肌组织的病理学改变。病理组织学的幻灯片显示，假手术组小鼠心肌保存正常组织的结构和形状，细胞核清楚，没有炎性细胞浸润（图5A）。与假手术组相比，模型组的心肌组织出现广泛的心肌结构紊乱和局部破裂，并且肌纤维的淋巴细胞和巨噬细胞有中度渗透裂解（图5B）。但由图5C、5D和5E观察可知，不同剂量组的竹节参皂苷Ⅳa能不同程度的减少心肌组织坏死和炎症细胞浸润的程度，并且具有剂量-效应关系，高剂量组竹节参皂苷Ⅳa效果最好，其小鼠心肌组织结构趋向正常。

Claims

1.结构式(I)所示化合物在防治心血管疾病及其并发症中的应用，

(I)。

2.根据权利要求1 所述应用，其特征在于：所述心血管疾病及其并发症为心律失常、心室纤维化、心肌梗死、冠心病、心绞痛、心力衰竭、充血性心力衰竭、心肌缺血、心肌缺血/再灌注、心肌炎、动脉粥样硬化、外周组织器官或四肢缺血、休克、缺血或再灌注引起的组织器官急慢性损伤、失调或间接后遗症。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述的心血管疾病及其并发症为心肌缺血或再灌注引起的组织器官损伤疾病。

4.组合物，包含权利要求1所述化合物。

5.根据权利要求4所述的组合物，其为片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂、颗粒剂或乳剂。