CN104434777A - 一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法 - Google Patents

一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,步骤是:在恩拉霉素发酵培养结束之后,对发酵液进行高温灭活,灭活后降温,分别按壳聚糖溶液和聚丙烯酸钠溶液进行预处理。处理好的发酵液进行板框过滤、喷雾干燥,从而制备成预混剂成品。本发明相比现在的恩拉霉素生产技术来说,通过对发酵液进行预处理同时调整了干燥方式,从而改变恩拉霉素成品的品质。本发明可操作性强,成本低,与不进行预处理或者其他方式进行预处理得到的成品相比,通过此种方式处理得到的恩拉霉素预混剂成品基本不降解,其成品储存过程稳定性增加。本发明解决了恩拉霉素预混剂成品在运输、存储、使用过程的稳定性问题。

Description

一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法
技术领域
本发明涉及一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,属于工业生物技术,发酵工程领域。
背景技术
恩拉霉素(Enramycin)又称安来霉素、持久霉素、恩霉素等,是一种由13种不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子所组成的多肽类抗生素,主要组分有恩拉霉素A(C107H138C12N26O31)和恩拉霉素B(C108H140C12N26O31)两种,以其盐酸盐形式应用。该产品早在1966年,由日本武田药品工业株式会社研发,1974年在日本正式注册,其后在许多国家被注册并广泛使用。我国在1993年批准注册恩拉霉素预混剂,用做药物饲料添加剂。2005年国内企业浙江海正药业股份有限公司和美国先灵葆雅动物保健品公司开始合作生产恩拉霉素预混剂,2009年武汉兴鼎生物科技有限公司获得国内企业唯一的生产许可文号。由于只需要添加微量的恩拉霉素就可以呈现出优良的促生长和改善饲料利用率的作用,并且其具有很高的低毒性、低的药物残留性,且对革兰氏阳性菌有很强的抑制作用,特别是对肠道有害的梭菌有较强的抑制作用,长期使用后不产生耐药性,印象被世界上很多国家推荐作为动物促生长剂,是一种很好的饲料添加剂。
虽然恩拉霉素在国内有很好的发展前景,但是恩拉霉素预混剂成品容易降解,其不稳定性影响了恩拉霉素在存储、运输及应用过程中品质,进而影响了其销售和使用。
发明内容
本发明提供一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,该方法简单易行、生产成本低,得到的恩拉霉素预混剂品质稳定,基本不降解。
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度27-30℃,罐压0.03-0.06MPa,通气比1:1,周期24-36h,转速100-140rpm;发酵培养条件为:温度27-30℃,罐压0.03-0.06MPa,通气比v/v =1:0.8-1,发酵周期168-216h,转速100-140rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至40-45℃,升温灭活温度为50℃、70℃或90℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液或1.0 kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠或者聚丙烯酰胺,添加量为0.05-0.08kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠或聚丙烯酰胺为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5-0.7MPa,压滤时间为1-2h;喷雾干燥进风温度130-138℃、140-148℃或150-158℃,出风温度65-75℃、75-85℃或85-95℃;气流量为8-9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
步骤(1)中,种子培养所用的培养基包括以下成分:玉米粉30g/L,玉米浆25g/ L,玉米蛋白粉5g/ L,硫酸铵2.5g/ L,磷酸二氢钾1 g/ L,硫酸亚铁0.2 g/L,碳酸钙10 g/L。
 
步骤(1)中,发酵所用的培养基包括以下成分:玉米粉100g/L,玉米蛋白粉30g/L,玉米浆10g/L,葡萄糖10g/L,硫酸铵3g/L,氯化钠1g/L,豆油1g/L,轻质碳酸钙5g/L,水余量。
杀真菌链霉菌是在北京北纳创联生物技术研究院购买的,信息来自于http://www.mum800.com/p_86/p_6386.html。
具体信息如下:
平台资源号: 1511C0001ACCC40880  
菌株保藏编号: 40880 
中文名称: 杀真菌链霉菌 
属名: Streptomyces 
种名加词: fungicidicus 
来源历史: ←湖北省生物农药工程研究中心 
原始编号: IEDA 00652,C5 
原产国: 中国 
资源归类编码: 15131517101 
模式菌株: 非模式菌株 
主要用途: 研究、生产 
特征特性: 孢子丝松环螺旋;不产H2S;不产类黑色素;明胶液化;纤维素上生长;牛奶凝固且轻微胨化;淀粉水解;利用葡萄糖、D-果糖、D-木糖、肌醇,对L-阿拉伯糖、蔗糖、鼠李糖、棉子糖利用可疑;细胞壁含有DL-2.6二氨基庚二酸、甘氨酸、葡萄糖、乳糖。 
具体用途: 产生代谢产物具有抑菌活性 
本发明相比较现在的恩拉霉素生产技术来说,主要是对发酵液进行灭活处理,灭活后发酵液预处理添加壳聚糖溶液,同时配合喷雾干燥的温度变化从而改变恩拉霉素预混剂的成品品质。本发明简单易行、生产成本低,与不进行灭活预处理或者其他方式预处理得到的成品相比,此种灭活后预处理得到的恩拉霉素预混剂品质更稳定,使得恩拉霉素预混剂成品在存储、运输及应用过程中更加方便、稳定。 
具体实施方式:
实施例1:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度27℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期29h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度27℃,罐压0.03MPa,通气比v/v =1:0.8,发酵周期168h,转速100rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至40-45℃,升温灭活温度为50℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠,添加量为0.05kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5MPa,压滤时间为1h;喷雾干燥进风温度130-138℃,出风温度65-75℃;气流量为8m3/min;添加的载体为稻壳粉。
步骤(1)中,种子培养所用的培养基包括以下成分:玉米粉30g/L,玉米浆25g/ L,玉米蛋白粉5g/ L,硫酸铵2.5g/ L,磷酸二氢钾1 g/ L,硫酸亚铁0.2 g/L,碳酸钙10 g/L。
步骤(1)中,发酵所用的培养基包括以下成分:玉米粉100g/L,玉米蛋白粉30g/L,玉米浆10g/L,葡萄糖10g/L,硫酸铵3g/L,氯化钠1g/L,豆油1g/L,轻质碳酸钙5g/L,水余量。
实施例2:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:0.90,发酵周期192h,转速120rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至42℃,升温灭活温度为70℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为1.0 kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠,添加量为0.07kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5-0.7MPa,压滤时间为1-2h;喷雾干燥进风温度140-148℃,出风温度75-85℃;气流量为9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
实施例3:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度30℃,罐压0.06MPa,通气比v/v =1:1,发酵周期216h,转速140rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至40-45℃,升温灭活温度为90℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为1.0 kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酰胺,添加量为0.08kg/m3发酵液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.7MPa,压滤时间为2h;喷雾干燥进风温度150-158℃,出风温度85-95℃;气流量为9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
实施例4:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度26℃,罐压0.07MPa,通气比v/v =1:0.7,发酵周期150h,转速150rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至35℃,升温灭活温度为50℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酰胺,添加量为0.09kg/m3发酵液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.8MPa,压滤时间为3h;喷雾干燥进风温度130-138℃,出风温度65-75℃;气流量为7m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
实施例5:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度29℃,罐压0.04MPa,通气比v/v =1:0.8,发酵周期180h,转速110rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至41℃,升温灭活温度为70℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠,添加量为0.07kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5MPa,压滤时间为1h;喷雾干燥进风温度140-148℃,出风温度75-85℃;气流量为8m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
实施例6:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度28℃,罐压0.04MPa,通气比v/v =1:0.8,发酵周期190h,转速130rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至42℃,升温灭活温度为90℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酰胺,添加量为0.05kg/m3发酵液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.6MPa,压滤时间为1h;喷雾干燥进风温度140-150℃,出风温度70-80℃;气流量为8m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
实施例7:
一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌(Streptomyces fungicidicus),接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度30℃,罐压0.06MPa,通气比v/v =1:1,发酵周期200h,转速130rpm;
(2)预处理方法:发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠,添加量为0.07kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.7MPa,压滤时间为2h;喷雾干燥进风温度150-158℃,出风温度85-95℃;气流量为9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
其余同实施例1。
各个实施例制得的恩拉霉素预混剂质量指标如下表所示:
分析各个实施例的情况,实施例1-3为在本发明工艺参数范围内,实施例4为在本发明工艺参数之外,实施例5为工艺中不加壳聚糖溶液,实施例6为改变了喷雾干燥进风和出风温度,实施例7为工艺不进行灭活处理。
从以上表格数据可以看出,在本发明工艺参数范围内的实施例1-3制得的恩拉霉素预混剂的收率、成品30天效价降低率、存放降解率明显优于实施例4-7,尤其是以实施例2效果最佳,可见工艺参数的不同(实施例4)、未添加壳聚糖溶液进行预处理(实施例5)、喷雾干燥进风和出风温度不同(实施例6)、未进行灭活处理(实施例7)这些工艺的改变都会影响制得的恩拉霉素预混剂的收率和稳定性,所以本发明采用特定的工艺参数、添加壳聚糖溶液进行预处理、选择特定的喷雾干燥进风和出风温度、采用了灭活处理,制得的恩拉霉素预混剂不仅提高了收率,也提高了稳定性。

Claims (5)

1.一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,其特征为:
是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备;(2)发酵液灭活;(3)预处理方法;(4)预混剂制备。
2.一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,其特征为:
是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌,接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度27-30℃,罐压0.03-0.06MPa,通气比v/v =1:1,周期24-36h,转速100-140rpm;发酵培养条件为:温度27-30℃,罐压0.03-0.06MPa,通气比v/v =1:0.8-1,发酵周期168-216h,转速100-140rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至40-45℃,升温灭活温度为50℃、70℃或90℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为0.5kg /m3发酵液或1.0 kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠或者聚丙烯酰胺,添加量为0.05-0.08kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5-0.7MPa,压滤时间为1-2h;喷雾干燥进风温度130-138℃、140-148℃或150-158℃,出风温度65-75℃、75-85℃或85-95℃;气流量为8-9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
3.如权利要求2所述的一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,其特征为:
是通过以下措施实现的:
(1)发酵液制备:将恩拉霉素产生菌杀真菌链霉菌,接入种子罐进行种子培养,把种子液按10%接种量接到发酵罐,种子培养条件为温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:1,周期28h,转速120rpm;发酵培养条件为:温度28℃,罐压0.05MPa,通气比v/v =1:0.90,发酵周期192h,转速120rpm;
(2)发酵液灭活:发酵液进行升温灭活30min,灭活后发酵液降温至42℃,升温灭活温度为70℃;
(3)预处理方法:降温后的发酵液先添加质量浓度为0.5%的壳聚糖溶液,添加量为1.0 kg /m3发酵液,混合搅拌均匀后再加入聚丙烯酸钠,添加量为0.07kg/m3发酵液,聚丙烯酸钠为质量浓度为0.1%的水溶液;
(4)预混剂制备:预处理后的发酵液混合搅拌均匀后,经板框过滤、喷雾干燥、添加载体制得恩拉霉素预混剂,板框过滤压力为0.5-0.7MPa,压滤时间为1-2h;喷雾干燥进风温度140-148℃,出风温度75-85℃;气流量为9m3/min;添加的载体为稻壳粉。
4.如权利要求2或3所述的一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,其特征为:步骤(1)中,种子培养所用的培养基包括以下成分:玉米粉30g/L,玉米浆25g/ L,玉米蛋白粉5g/ L,硫酸铵2.5g/ L,磷酸二氢钾1 g/ L,硫酸亚铁0.2 g/L,碳酸钙10 g/L。
5.如权利要求2或3所述的一种提高恩拉霉素预混剂成品稳定性的方法,其特征为:步骤(1)中,发酵所用的培养基包括以下成分:玉米粉100g/L,玉米蛋白粉30g/L,玉米浆10g/L,葡萄糖10g/L,硫酸铵3g/L,氯化钠1g/L,豆油1g/L,轻质碳酸钙5g/L,水余量。
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