CN104402610B - 玉米追肥专用复合微生物肥料 - Google Patents

玉米追肥专用复合微生物肥料 Download PDF

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Abstract

玉米追肥专用复合微生物肥料,由双菌株菌肥加腐植酸钾和尿素组成,用作玉米5叶期或喇叭口期的追肥使用,双菌株混菌发酵协同增效显著,能降低玉米的果穗秃顶率,提高玉米的穗行数、行粒数、穗粒数和千粒重,比不同处理的对照组增产7.3%~21.6%。

Description

玉米追肥专用复合微生物肥料
技术领域
本发明涉及微生物菌肥技术领域,特别涉及玉米追肥专用复合微生物肥料。
背景技术
玉米是我国的主要农作物,喜水喜肥,田间管理在5叶期施和喇叭口期要施追肥,玉米追肥常用尿素,尿素长期大量施用会在土壤中积累大量的氨离子,导致土壤PH值升高,使有益微生物的数量减少,土壤的渗透性和维持养分的平衡能力降低,从而导致农作物生长不良,产量减少,品质下降,农残增加,由此造成的土壤污染更是日趋加重,减少尿素等化肥的使用量,发展微生物肥料,改善作物品质,保护土壤已经成为我国乃至当今世界各国共同关注的课题。微生物肥料是一类含有特定活性微生物的肥料制品,微生物肥料种类繁多,按照微生物的作用机理可分为根瘤菌肥料、自生固氮菌肥料、解磷细菌肥料、解钾细菌肥料、抗生菌肥料等,微生物肥料具有分解土壤中的难溶磷矿物,释放出其中的磷、分解土壤中的有机质,将有机磷变为植物可以吸收利用的无机磷为作物提供有效磷素、分解硅酸盐类矿物并释放出钾等元素供植物利用、以及可将空气中的N2还原为可以被作物吸收利用的NH4+等不同功效,但是,这些微生物肥料也存在一些问题,如菌种单一、产品活菌数低、品种少、菌种配伍随意、使用效果差、增效慢、共生固氮菌宿主专一性限制使用范围等,这些问题导致微生物肥料肥效慢、增产效果不明显、推广受阻,因此,大多数微生物肥料只用做基肥,用于追肥的快速、高效又长效的微生物肥料少之又少,增效型的复合微生物肥料更少,用于玉米追肥专用的复合微生物肥料至今未见有报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种复合增效型的玉米追肥专用复合微生物肥料,所用巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为CGMCC NO.9489,玉米追肥专用复合微生物肥料由双菌株菌肥65~85%,腐植酸钾5~15%,尿素10~20%组成,双菌株菌肥由巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2)加胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK) 按“分别制取种子液—顺序接种、制得双菌株混合发酵菌液—加入灭菌的泥炭土搅拌吸附”而成,双菌株混合发酵菌液中巨大芽孢杆菌C2菌液和胶冻样芽孢杆菌XK菌液的比例为质量比1:1,双菌株混合发酵菌液与加入的灭菌的泥炭土的比例为1:1~2,将双菌株菌肥与腐植酸钾和尿素按比例混合搅拌均匀,经粉碎机粉碎至60~80目即成玉米追肥专用复合微生物肥料。
该肥料中的胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为CGMCC NO.6030,中心的地址在北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
玉米追肥专用复合微生物肥料适用于玉米5叶期或喇叭口期,施肥位置以离玉米植株十厘米以上距离为好,可播施、穴施、沟施或冲施,不可撒施,使用量为50kg/亩。
本发明通过以下技术方案实现发明目的:
一、菌株筛选
取小麦根际土壤样品,通过阿须贝培养基(无氮)分离筛选出一株自主固氮菌巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2),现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC 9489,阿须贝培养基(无氮)配方为:葡萄糖10.0 g,K2HPO4·3H2O 0.5 g,NaCl0.2g, CaCO31.0g,MgSO4·7H2O0.2 g,琼脂17.0 g,pH7.0,去离子水定容至1L。
取小麦根际土壤样品,通过在含钾矿石的培养基上所产溶钾透明圈大小的初筛和液体摇瓶发酵解钾能力大小的复筛,筛选出一株高效解钾菌株胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK),现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC NO.6030,含钾矿石的培养基为:蔗糖10.0g,MgSO4•7H2O0.5g,(NH4)2SO4 0.2g,NaCl0.1g,CaCO3 0.1g,钾长石粉5.0g,琼脂20.0g,蒸馏水1000ml,pH值7.2。
二、制取种子液
将巨大芽孢杆菌C2接种于LB培养基中,37℃摇床培养24~48h,制得巨大芽孢杆菌C2种子液;LB培养基配方为:胰化蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、NaCl 5.0g,pH7.0,用去离子水定容至1L。
将胶冻样芽孢杆菌XK接种于硅酸盐培养基中,37℃摇床培养24~48h,制得胶冻样芽孢杆菌种子液,硅酸盐培养基配方为:蔗糖5.0g、磷酸氢二钠2.0g、硫酸镁0.5g、碳酸钙0.1g、三氯化铁0.005g,pH7.5,用去离子水定容至1L。
三、顺序接种,制得双菌株混合发酵菌液
先按5~10%的接种量将胶冻样芽孢杆菌XK的种子液在发酵罐中培养12~24h, 然后再按5~10%的接种量添加巨大芽孢杆菌C2的种子液,同时添加混合发酵产芽孢培养基在发酵罐中,进行混菌发酵培养24~48h,制得双菌株混合发酵菌液,混合发酵产芽孢培养基配方为:麸皮1.5%、豆粕1.5%、NaCl 0.5%、CaCL2 0.1%、CaCO3 0.02%、MnSO4·H2O 0.02%、MgSO4·7H2O 0.02%,pH7.0~7.5。
四、制取双菌株菌肥
将混合发酵菌液与灭菌的泥炭土按比例混合搅拌均匀,二者的比例为质量比1:1~2,吸附后得双菌株菌肥。
五、混合与粉碎
将双菌株菌肥、腐植酸钾、尿素按65~85%、5~15%、10~20%的比例充分混合搅拌均匀,经粉碎机粉碎至60~80目即得玉米追肥专用复合微生物肥料。
巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2)是一株自主固氮菌,它具有高固氮酶活和解磷解钾能力,30℃、160r/min培养5d后固氮效能达到1.5193 mg/100mL菌液,发酵5d解无机磷能力达211.185mg/L,解钾能力达3.68mg/L。
胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK)具有较强溶解土壤中被矿化的钾元素功能,37℃、160r/min摇床培养5d解钾能力达13.875mg/L,溶磷能力达152.8495mg/L,可促进作物碳水化合物代谢和蛋白质的代谢,促进糖分转化和运输,将光合产物产物迅速运到茎、叶和种子,促进根茎膨大、种子饱满。
巨大芽孢杆菌C2和胶冻样芽孢杆菌XK二者混菌发酵48h左右后产芽孢率达到100%,37℃、160r/min摇床培养5d, 固氮效能达到5.458 mg/100mL菌液,解钾能力达到18.9897mg/L,溶磷能力达325.6114mg/L,效果显著高于单个菌株;盆栽试验结果显示:施用双菌株菌肥的土壤中碱解氮的含量高达168.467mg/kg,远远高于单施巨大芽孢杆菌C2单菌肥或胶冻样芽孢杆菌XK单菌肥料的土壤中碱解氮的含量33.833mg/kg和59.967mg/kg,二者协同增效作用极显著;本发明每克产品活菌数和芽孢数均达2亿以上,远远高于国家NY884-2004行业标准的有效活菌数(cfu)≥0.2亿个/g;经拮抗试验证明这两株菌互相没有拮抗作用,抗逆能力强,易于在土壤中存活。
本发明所提供的玉米追肥专用复合微生物肥料,是通过将双菌株菌肥与腐植酸钾和尿素安一定复配后制得的复合微生物肥料,它兼有各类肥料的优点,不仅具有微生物肥料的高效、环保、缓释长效、增产、节约生产成本等功能,而且还兼有化肥的速效功用。玉米田间试验结果表明:施用玉米追肥专用微生物肥料处理组(50kg/亩)能降低玉米的果穗秃顶率,提高玉米的穗行数、行粒数、穗粒数和千粒重,比施用基质处理增产19.55%,差异极显著,比施用绿陵复合肥料处理增产7.3%,差异极显著,比不施肥料的空白对照增产21.6%,差异也极显著。
本发明所提供的玉米追肥专用复合微生物肥料具有以下技术效果:
1.充分利用了微生物的生命活动可将空气中的惰性氮素转化为农作物可以直接吸收的离子态氮素、将土壤中难溶的无机物如磷酸钙等变成可溶的无机物、能够自我更新增殖和永续利用的特性,促进被土壤固定养分的释放,激活迟效态养分,增加土壤中的有效氮、有效磷、有效钾含量,活化磷钾元素,自主固氮,为作物提供更多丰富的养分。
2. 本发明产品中的芽孢菌株能分泌促植物生长的物质,达到刺激作物生长、增强玉米抗病能力、促进根系发育、提高玉米的抗倒伏能力、防病能力和提高品质的作用。
3.本发明不仅可以减少化肥用量,还有助于提高化肥肥效、减少环境污染,起到增加土壤生物多样性、调整土壤结构、改善土壤理化性状、培肥地力的作用,具有缓释、增产、增效、抗病和节本增效等多重功效。
4. 本发明克服了现有的单纯氮肥、复合肥以及单菌种生物菌肥的不足,既具有速效、高效和长效的作用,又具有操作工艺简单,生产周期短,成本低,应用效果好,对环境友好,易于推广等效果。
本发明提供的玉米追肥专用复合微生物肥料与现有的生物有机肥的区别还在于:
1.玉米追肥专用复合微生物肥料采用顺序接种的混菌发酵模式,节约了发酵时间和生产成本,混菌发酵48h左右产芽孢率达到100%。
2.本发明提供的玉米追肥专用复合微生物肥料以廉价的泥炭土为载体,降低了生产成本,有利于大批量的工业化生产和销售,每吨成本约需1000元左右,而现有生物有机肥的生产成本每吨需要1500~2000元、单纯的生物菌肥每吨需上万元,尿素市场批发价在1680元/吨左右。
3.本发明的玉米追肥专用复合微生物肥料肥效期长,可以减少追肥次数,从而减少肥料用量,降低生产成本。而现有的单纯的生物有机肥只能做基肥,不能做追肥,且使用量较大、使用效果较差。
4.本发明的玉米追肥专用复合微生物肥料改变了现有的生物有机肥只可以用于基肥的现状,可以用作玉米专用的追肥。
具体实施方式
实施例一
一、菌株筛选
取小麦根际土壤样品,通过阿须贝培养基(无氮)分离筛选出一株自主固氮菌巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2),阿须贝培养基(无氮)配方为:葡萄糖10.0g,K2HPO4·3H2O 0.5 g,NaCl0.2g, CaCO3 1.0g,MgSO4·7H2O0.2 g,琼脂17.0g,pH7.0,去离子水定容至1L。
取小麦根际土壤样品,通过在含钾矿石的培养基上所产溶钾透明圈大小的初筛和液体摇瓶发酵解钾能力大小的复筛,筛选出一株高效解钾菌株胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK),含钾矿石的培养基为:蔗糖10.0g,MgSO4•7H2O0.5g,(NH4)2SO40.2g,NaCl0.1g,CaCO3 0.1g,钾长石粉5.0g,琼脂20.0g,蒸馏水1000ml,pH值7.2。
二、制取种子液
将巨大芽孢杆菌C2接种于LB培养基中,37℃摇床培养24h,制得巨大芽孢杆菌C2种子液,LB培养基配方为:胰化蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、NaCl5.0g,pH7.0,用去离子水定容至1L。
将胶冻样芽孢杆菌XK接种于硅酸盐培养基中,37℃摇床培养24h,制得胶冻样芽孢杆菌种子液,硅酸盐培养基配方为:蔗糖5.0g、磷酸氢二钠2.0g、硫酸镁0.5g、碳酸钙0.1g、三氯化铁0.005g,pH7.5,用去离子水定容至1L。
三、顺序接种,制得混合发酵菌液
先按5%的接种量将胶冻样芽孢杆菌XK的种子液在发酵罐中培养24h, 然后再按5%的接种量添加巨大芽孢杆菌C2的种子液,同时添加混合发酵产芽孢培养基在发酵罐中,进行混菌发酵培养48h,制得混合发酵菌液;混合发酵产芽孢培养基配方为:麸皮1.5%、豆粕1.5%、NaCl0.5%、CaCL20.1%、CaCO30.02%、MnSO4·H2O0.02%、MgSO4·7H2O0.02%,pH7.5。
四、制取双菌株菌肥
将混合发酵菌液与灭菌的泥炭土按比例混合搅拌均匀,二者的比例为质量比1:1,吸附后得双菌株菌肥。
五、混合与粉碎
将双菌株菌肥、腐植酸钾、尿素按65%、15%、20%的比例充分混合搅拌均匀,经粉碎机粉碎至60~80目即得玉米追肥专用复合微生物肥料。
实施例二
一、菌株筛选
取小麦根际土壤样品,通过阿须贝培养基(无氮)分离筛选出一株自主固氮菌巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2),阿须贝培养基(无氮)配方为:葡萄糖10.0 g,K2HPO4·3H2O 0.5 g,NaCl0.2g, CaCO3 1.0g,MgSO4·7H2O0.2 g,琼脂17.0 g,pH7.0,去离子水定容至1L。
取小麦根际土壤样品,通过在含钾矿石的培养基上所产溶钾透明圈大小的初筛和液体摇瓶发酵解钾能力大小的复筛,筛选出一株高效解钾菌株胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK),含钾矿石的培养基为:蔗糖10.0g,MgSO4•7H2O0.5g,(NH4)2SO40.2g,NaCl 0.1g,CaCO3 0.1g,钾长石粉5.0g,琼脂20.0g,蒸馏水1000ml,pH值7.2。
二、制取种子液
将巨大芽孢杆菌C2接种于LB培养基中,37℃摇床培养48h,制得巨大芽孢杆菌C2种子液,LB培养基配方为:胰化蛋白胨10g、酵母提取物5. 0g、NaCl5.0g,pH7.0,用去离子水定容至1L。
将胶冻样芽孢杆菌XK接种于硅酸盐培养基中,37℃摇床培养48h,制得胶冻样芽孢杆菌种子液,硅酸盐培养基配方为:蔗糖5.0g、磷酸氢二钠2.0g、硫酸镁0.5g、碳酸钙0.1g、三氯化铁0.005g,pH7.5,用去离子水定容至1L。
三、顺序接种,制得混合发酵菌液
先按10%的接种量将胶冻样芽孢杆菌XK的种子液在发酵罐中培养12h, 然后再按10%的接种量添加巨大芽孢杆菌C2的种子液,同时添加混合发酵产芽孢培养基在发酵罐中,进行混菌发酵培养24h,制得混合发酵菌液,所述混合发酵产芽孢培养基配方为:麸皮1.5%、豆粕1.5%、NaCl0.5%、CaCL20.1%、CaCO3 0.02%、MnSO4·H2O0.02%、MgSO4·7H2O0.02%,pH7.2。
四、制取双菌株菌肥
将混合发酵菌液与灭菌的泥炭土按比例混合搅拌均匀,二者的比例为质量比1:2,吸附后得双菌株菌肥。
五、混合与粉碎
将双菌株菌肥、腐植酸钾、尿素按85%、5%、10%的比例充分混合搅拌均匀,经粉碎机粉碎至60~80目即得玉米追肥专用复合微生物肥料。
实施例三:
一、菌株筛选
取小麦根际土壤样品,通过阿须贝培养基(无氮)分离筛选出一株自主固氮菌巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2),阿须贝培养基(无氮)配方为:葡萄糖10.0 g,K2HPO4·3H2O 0.5 g,NaCl0.2g, CaCO31.0g,MgSO4·7H2O0.2 g,琼脂17.0 g,pH7.0,去离子水定容至1L。
取小麦根际土壤样品,通过在含钾矿石的培养基上所产溶钾透明圈大小的初筛和液体摇瓶发酵解钾能力大小的复筛,筛选出一株高效解钾菌株胶冻样芽孢杆菌XK(Paenibacillus mucilaginosus XK) ,含钾矿石的培养基为:蔗糖10.0g,MgSO4•7H2O0.5g,(NH4)2SO40.2g,NaCl0.1g,CaCO3 0.1g,钾长石粉5.0g,琼脂20.0g,蒸馏水1000ml,pH值7.2。
二、制取种子液
将巨大芽孢杆菌C2接种于LB培养基中,37℃摇床培养32h,制得巨大芽孢杆菌C2种子液, LB培养基配方为:胰化蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、NaCl 5.0g,pH7.0,用去离子水定容至1L。
将胶冻样芽孢杆菌XK接种于硅酸盐培养基中,37℃摇床培养30h,制得胶冻样芽孢杆菌种子液,硅酸盐培养基配方为:蔗糖5.0g、磷酸氢二钠2.0g、硫酸镁0.5g、碳酸钙0.1g、三氯化铁0.005g,pH7.5,用去离子水定容至1L。
三、顺序接种,制得混合发酵菌液
先按7%的接种量将胶冻样芽孢杆菌XK的种子液在发酵罐中培养18h, 然后再按7%的接种量添加巨大芽孢杆菌C2的种子液,同时添加混合发酵产芽孢培养基在发酵罐中,进行混菌发酵培养30h,制得混合发酵菌液,所述混合发酵产芽孢培养基配方为:麸皮1.5%、豆粕1.5%、NaCl 0.5%、CaCL2 0.1%、CaCO3 0.02%、MnSO4·H2O0.02%、MgSO4·7H2O0.02%,pH7.0。
四、制取双菌株菌肥
将混合发酵菌液与灭菌的泥炭土按比例混合搅拌均匀,二者的比例为质量比1:1.5,吸附后得双菌株菌肥。
五、混合与粉碎
将双菌株菌肥、腐植酸钾、尿素按75%、10%、15%的比例充分混合搅拌均匀,经粉碎机粉碎至60~80目即得玉米追肥专用复合微生物肥料。
田间应用试验例
时间:2014年6月,地点:江苏省沭阳县汤圩村,供试土壤为两合土,土壤耕层养分为:有机质含量1.4%、全氮含量1.4g/Kg、有效磷含量29.84 mg/kg、速效钾含量209.06 mg/kg、pH 值为7.01,供试玉米品种:“苏玉20”,施用时期:玉米5叶期,使用量:50kg/亩,使用方法:沟施追肥,玉米追肥专用微生物肥料为实施例1的配比:双菌株菌肥65%、腐植酸钾15%、尿素20%,对照组1:施用基质50kg/亩处理,对照组2:施用绿陵复合肥料,对照组3:不施肥料的空白对照,试验结果如下:
从上表数据可以看出,实施例1比对照组1增产19.55%,比对照组2增产7.3%;比对照组3增产21.6%。进一步统计表明,实施例1与各对照组间的差异均极显著,能够真实的反映本发明的技术效果。

Claims (4)

1.玉米追肥专用复合微生物肥料用巨大芽孢杆菌C2,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC NO.9489。
2.利用权利要求1所述巨大芽孢杆菌C2所制备的玉米追肥专用复合微生物肥料,其特征在于,该肥料由双菌株菌肥65~85%,腐植酸钾5~15%,尿素10~20%组成;
所述双菌株菌肥由巨大芽孢杆菌C2Bacillus megaterium C2)和胶冻样芽孢杆菌XK(Bacillus mucilaginosus XK) 按“分别制取种子液—顺序接种、制得双菌株混合发酵菌液—加入泥炭土搅拌吸附”而成,胶冻样芽孢杆菌XK(Bacillus mucilaginosus XK)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC NO.6030。
3.如权利要求2所述玉米追肥专用复合微生物肥料,其特征在于,配方比例为双菌株菌肥65%、腐植酸钾15%、尿素20%。
4.权利要求2所述玉米追肥专用复合微生物肥料在玉米追肥中的应用,其特征在于,在玉米的5叶期或喇叭口期施用,播施、穴施、沟施或冲施,不可撒施,每亩使用量为50kg。
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