CN104396559A - 一种提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接育苗方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于新兴特色果树蓝莓的优质高抗苗木无性繁殖技术领域，涉及一种提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接育苗方法。本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，包括以下步骤：采穗圃营建；砧木苗培育；嫁接苗培育；出圃建园。本发明采用中国江南地产的乌饭树嫁接南高丛蓝莓品种夏普蓝，砧木取材容易、易于繁殖，嫁接方法简便、成活率高，嫁接树融合了砧木树种和接穗品种各自优良的生物学性状，定植后蓝莓树生长势明显较同龄蓝莓扦插树强健，植株早果性、丰产性和果实的风味、营养与保健品质也较蓝莓扦插树的显著改善，表现出明显的优势和潜力，在中国的蓝莓栽培实践中非常值得推广。

Description

一种提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接育苗方法

技术领域

本发明属于新兴特色果树——蓝莓(Vaccinium spp.)优质高抗苗木无性繁殖技术领域，具体涉及一种用乌饭树(Vaccinium bracteatum)嫁接改良从而显著提高“夏普蓝”(Sharpblue)蓝莓对高pH土壤适应性的技术方法。

背景技术

蓝莓果树根系纤细，主根不明显，根毛稀少，非常不发达，且根与根之间常交织在一起，在土壤中分布浅、伸展很狭窄，土壤理化性质对其生长发育的影响远远大于其它果树树种。尤其，蓝莓喜好酸性、强酸性土壤，适宜的土壤pH值为3.8～5.0，包括中国在内的世界各国在pH5.0以上的土壤上栽培蓝莓几乎无一例外地要大幅度调酸土壤以使土壤pH值降低至5.0以下。这些生理生态特性，极大地限制了蓝莓的发展区域和适生范围，也显著增大了蓝莓的生产成本。因此，探索一种在中国江南地区有更强生态适应性的蓝莓优质高抗苗木繁育方法，提高蓝莓果树的土壤生态适应性和栽培效益，在蓝莓栽培实践中有非常重要的意义。

嫁接是一项古老而有无穷生命力的世界性植物技术，在农林业的诸多方面有不可替代的价值。1976年，美国园艺家Blount最早报道了蓝莓嫁接育苗，他所用的砧木是自然分布在美国南部的臼莓(farkleberry)，但此后的很多年间世界上再无关于蓝莓嫁接的报道，直到2007年童正仙等人报道了挖掘野生乌饭树苗芽接蓝莓品种“蓝丰”和“薄雾”的试验结果。迄今未见有其它关于蓝莓嫁接栽培的研究报道。

乌饭树(Vaccinium bracteatum)是与蓝莓同科同属的植物，多数为灌木，稀为小乔木，中国南北各地均有分布，尤以江苏、浙江、福建3省为多，浆果成熟时紫黑色、味清甜可口。乌饭树根系发达，耐贫瘠，结果早，适应性强，一直处于野生状态，但其优良的风味和生态适应性为当地蓝莓研究者和种植者所关注。2007年，童正仙等人报道了挖掘野生乌饭树苗芽接蓝莓品种“蓝丰”和“薄雾”的试验，表明2个蓝莓品种和乌饭树均有良好亲和性，蓝莓嫁接苗比乌饭树野生苗生长势和结果表现好。

目前，世界范围内蓝莓砧木育种及其繁育尚未得到重视。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，该方法是一种在中国江南地区有更强生态适应性的蓝莓优质高抗苗木繁育方法，有效提高了蓝莓果树的土壤生态适应性和栽培效益。

本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，包括以下步骤：

(1)采穗圃营建：秋末或早春时节，挖掘立地条件相近、长势良好的野生乌饭树植株，剪除病枝、枯枝、细弱枝，选留3～5个健壮枝条修剪成50～60cm高的灌丛式，按80cm×150cm的株行距开沟或起垄定植在采穗圃中，施足基肥，强化管理；

(2)砧木苗培育：生长季的6月上旬，从采穗圃中培养的乌饭树植株上，剪取生长健壮、直径4.0～6.0mm的半木质化枝条，用清水将表面的泥土和污物漂洗干净后置于5000倍高锰酸钾溶液中消毒2-3min，消毒后的枝条放入清水中漂洗至水清无色为止；然后将这些枝条剪成长4～5cm、带3个芽、顶部留1～2片小叶或半片大叶的茎段作为插穗；

扦插用50孔穴盘，扦插基质为干燥的水苔sphagnum(Herba Sphagni)，不施任何肥料；将水苔装入事先准备好的穴盘中，水苔高度低于穴盘0.5cm左右，水苔应松紧适度，成一整体；

在穴盘中打孔，深度为1-2cm，将插穗插满穴盘后，浇1遍透水；将扦插后的穴盘放入塑料温室内，穴盘摆满后，浇1遍抑菌脲和恶霉灵各1000倍的混合药剂，待叶片风干后将温室门窗关闭；温室顶部的塑料膜上覆盖遮阳网，使透光率在75％以下；扦插后3天内，温室内相对湿度保持在85％左右，此后，单侧放风，将拱棚内湿度控制在65％左右，室内白天的温度调节为26-28℃，夜温控制在18-20℃以上；水苔发白时浇1遍透水；每2周喷1次抑菌脲和恶霉灵各1000倍的混合药剂；生根前不施肥；生根后，每周叶面喷施1次0.1％的磷酸二氢钾溶液，每3周用稀醋醋溶液调节1次水苔pH值；每次叶面施肥后喷水，将叶面上的肥料淋洗掉；

扦插苗长至约10cm高时，移栽至较大尺寸的塑料薄膜袋中，袋高20cm、上口直径15cm、中下部打6个孔；袋中的育苗基质组成(V/V)是：泥炭∶珍珠岩∶河砂(1mm≤粒径≤2mm)＝3∶1.5∶0.5；移栽前30d，每袋施硫磺粉2.5g，将基质pH值调整到5.0(±0.2)；此后，实行常规育苗管理；继续培育1年供嫁接时作砧木；

(3)嫁接苗培育：扦插第2年的8月下旬、第3年的2月下旬，选择地径达6mm以上的部分乌饭树扦插苗嫁接南高丛蓝莓品种“夏普兰”；砧木苗在离地面8-10cm处剪断，从饱满、健壮的秋梢上剪取接芽和接穗；嫁接口愈合后，每周淋施1次浓度为0.2％磷酸二氢钾+0.4％尿素溶液；进入8月份，每3周追施1次复合肥，施肥量5g/株，共计3次；当接芽新梢长到5～7cm长时，及时去掉绑带；砧木上萌发的根蘖和新梢，及时抹除；

(4)出圃建园：培育1年的蓝莓嫁接苗(3年生根至1年生枝)，大部分可出圃建园；合格出圃的蓝莓嫁接苗，应具以下条件：大小匀称，发育良好；砧桩剪除，剪口环状愈合或完全愈合，接合部愈合；株高40cm以上，地径0.50cm以上，具3～4个分枝，整形带内饱满芽数在6个以上；根系均匀、舒展、不卷曲；根皮和茎皮，无干缩皱裂，无新损伤。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(2)中，扦插前，将插穗基部置于300mg/L的吲哚乙酸(IBA)溶液中处理60分钟，在阴凉处阴干后即插。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(2)中，扦插用的穴盘的孔深:口径:底径为5.0cm:5.0cm:2.2cm。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(2)中，扦插前1天，将穴盘用0.1％-0.3％的高锰酸钾浸泡30-60min后用清水漂洗干净备用。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(2)中，扦插前1天，将水苔撕开后，用清水浸泡，并用稀醋醋溶液(50ml/L)将水苔的pH值调至4.6-4.8。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(3)中，所述嫁接方法为嵌芽接(芽接)方法。

优选地，所述嵌芽接的方法是：选发育充实的穗芽，在芽下方0.8～1.0cm处以45°角向下切一刀，然后，在芽上方0.5～0.8cm处向下削1刀至第1刀刀口底部，削成厚2～3mm、长1.5～2.0cm的带木质部的芽片；在砧木苗上，按前述方法削出1个大小和形状同接芽片相当的嵌槽，从接穗上取下接芽片后迅速镶嵌入该嵌槽中,使削取的芽片和砧木上削出的嵌槽的下口及其左右两边的形成层对齐，用塑料薄膜条从下往上缠严绑紧,露出芽体。

根据本发明所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法的进一步特征，所述步骤(3)中，所述嫁接方法为单芽切接(枝接)。

优选地，所述单芽切接的方法是：在接穗枝条饱满芽下方0.5cm处向前平削1刀，深至皮层与木质部之间，削去的表皮不带木质或稍带木质，长度1.0～1.5cm；再将接穗翻转过来，在接芽的背面斜削一刀，削面长度短于第一个削面，两削面的夹角为35°～45°；在接芽上方0.5～0.6cm处剪断接穗，接穗长2.0～2.5cm；接着，在已经削平的砧木的断面上略微向上斜削一刀，在削面下方沿皮层略带木质部向下纵切一刀，切口长1.0～1.5cm；最后，按长削面朝外、短削面朝内，把切削好的单芽接穗迅速垂直插入砧木切口内，对准接穗形成层和砧木形成层，用厚0.01mm、宽3cm的塑料薄膜条绑严接口部位和接穗顶端，只露出叶柄和芽。

本发明从江南本地土壤生态和乌饭树资源实际出发，从砧木苗扦插育苗开始，以乌饭树为砧木用2种嫁接方法培育成功南高丛蓝莓代表性优良品种“夏普兰”嫁接苗，并以乌饭树自根苗、蓝莓自根苗、乌饭树砧蓝莓嫁接苗为试材，设计pH4.6、pH 5.8和pH 7.0的3种处理，研究了3种苗木对pH胁迫的适应性，在田间进行了连续3年的规模栽培和分析测试，结果表明，在高pH胁迫下，以乌饭树嫁接蓝莓促进蓝莓植株根系发育、生长量提高和干物质积累，提高叶片叶绿素含量、叶绿素a/b的比值、叶绿素荧光化学效率和光合效能，改善叶片矿质营养状况，尤其是提高Mg和Fe元素的含量水平，显著促进蓝莓树生长、开花和结果。

本发明与现有技术相比，其有益效果是：提高南方生态型枣属植物苗木耐盐性的组织培养快繁方法，集成了传统的枣属植物组织培养快繁育苗与人工逆境诱导、锻炼、驯化植物两种方法各自的优势，是对枣属植物苗木培育理念、原理和技术方法的一项重要革新，弥补了中国南方枣属植物栽培发展中没有优良耐盐枣属植物品种及砧木的欠缺，而且，繁育的南方生态型枣属植物苗木耐盐性显著提高，繁殖系数大，工序简便，成本较低，没有突出的额外工作量，能保持亲本原有的优良性状，省工省时，移栽及定植成活率高，苗木抗逆性强。

本发明的创新之处主要有下列几点：

(1)本发明是从建立插穗采穗圃、培育砧木扦插苗开始做起，比起挖掘野生砧木苗直接嫁接更加主动、可行；

(2)通过对大量砧木的嫁接繁育实践，表明乌饭树为砧木嫁接南高丛蓝莓品种“夏普兰”，无论嵌芽接或单芽切接(枝接)都适合选择，均具有很高成活率，但单芽切接效果更佳；

(3)历经几年的种植园栽培试验证实，以乌饭树嫁接蓝莓，显著促进蓝莓树生长发育，提高蓝莓果实产量和品质，乌饭树是嫁接蓝莓的良好砧木种类，是蓝莓生产中的一项技术创新，有重要推广应用价值；

(4)首次初步揭示了以乌饭树嫁接蓝莓这一优良砧—穗组合的生理生态机制，即显著提高蓝莓树对土壤生态特别是高pH条件下土壤生态的适应性。与“夏普蓝”(南高丛蓝莓品种)适应性和栽培区域相近的其他蓝莓品种可资借鉴。

综上所述，本发明采用中国江南地产的乌饭树嫁接南高丛蓝莓品种夏普蓝，砧木取材容易、易于繁殖，嫁接方法简便、成活率高，嫁接树融合了砧木树种和接穗品种各自优良的生物学性状，定植后蓝莓树生长势明显较同龄蓝莓扦插树强健，植株早果性、丰产性和果实的风味、营养与保健品质也较蓝莓扦插树的显著改善，表现出明显的优势和潜力，在中国的蓝莓栽培实践中非常值得推广。

利用乌饭树嫁接蓝莓在本发明之前虽然已有文献报道(童正仙等人)，但已有报道是用挖掘野生乌饭树苗进行的试验，而本发明是从建立采穗圃、培育砧木扦插苗开始的，而且，在水培条件件进行了不同pH胁迫的试验研究，在大田条件下进行了连续3年的规模栽培和分析测试，因此，结果更为准确、可靠，技术更为成熟、可行，适于在蓝莓栽培实践中推广应用。

附图说明

图1A是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木根生物量(克/株)的差异。

图1B是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木茎生物量(克/株)的差异。

图1C是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶生物量(克/株)的差异。

图1D是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木全株生物量(克/株)的差异。

图2A是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素a含量的差异。

图2B是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素b含量的差异。

图2C是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素a/b的差异。

图2D是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素总含量(叶绿素a+叶绿素b)的差异。

图3A是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中N元素含量的差异。

图3B是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中P元素含量的差异。

图3C是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中K元素含量的差异。

图3D是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中Ca元素含量的差异。

图3E是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中Mg元素含量的差异。

图3F是柱形图，显示pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中Fe元素含量的差异。

上述各附图中，柱状图中同一栏的3个数字，误差线上方的小写字母不相同，表示相应处理间差异显著(p≤0.05)。

具体实施方式

以下详述本发明的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法。

(1)插穗采穗圃营建：秋末或早春时节，挖掘立地条件相近、长势良好的野生乌饭树植株，剪除病枝、枯枝、细弱枝，选留3～5个健壮枝条修剪成50～60cm高的灌丛式，按80cm×150cm的株行距开沟或起垄定植在采穗圃中，施足基肥，强化管理。定植当年，采穗圃可提供部分砧木苗插穗，翌年的产量大幅增加，重视夏季修剪，保持树冠通风透光。

(2)砧木苗培育：生长季的6月上旬，从采穗圃中培养的乌饭树植株上，剪取生长健壮、直径4.0～6.0mm的半木质化枝条，用清水将表面的泥土和污物漂洗干净后置于5000倍高锰酸钾溶液中消毒2-3min，消毒后的枝条放入清水中漂洗至水清无色为止。然后，将这些枝条剪成长4～5cm、带3个芽、顶部留1～2片小叶或半片大叶的茎段作为插穗。扦插前，将插穗基部置于300mg/L的吲哚乙酸(IBA)溶液中处理60分钟，在阴凉处阴干后即插。

扦插用50孔(孔深/口径/底径＝5.0cm/5.0cm/2.2cm)穴盘50-hole plug，扦插前1d，将穴盘用0.1％-0.3％的高锰酸钾浸泡30-60min后用清水漂洗干净备用。扦插基质为干燥的水苔。扦插前1天，将水苔撕开后，用清水浸泡，并用稀醋醋溶液(50ml/L)将水苔sphagnum(Herba Sphagni)的pH值调至4.6-4.8。然后将处理好的水苔装入事先准备好的穴盘中，水苔高度低于穴盘0.5cm左右，水苔应松紧适度，成一整体。扦插前，基质中不施任何肥料。

用单片手术剪或较粗的钉子做打孔器，打孔器在扦插前用75％酒精浸泡或擦拭后使用。打孔的深度为1-2cm，将插穗插入后，用打孔器将水苔封严。插满穴盘后浇1遍透水。将扦插后的穴盘放入塑料温室内，穴盘摆满后浇1遍抑菌脲和恶霉灵各1000倍的混合药剂，待叶片风干后将温室门窗关闭。温室顶部的塑料膜上覆盖遮阳网，使透光率在75％以下。扦插后3d内，温室内相对湿度保持在85％左右，此后，单侧放风，将拱棚内湿度控制在65％左右，室内白天的温度调节为26-28℃，夜温控制在18-20℃以上。水苔发白时浇1遍透水。每2周喷1次抑菌脲和恶霉灵各1000倍的混合药剂。生根前不施肥。生根后(扦插后20d)，每周叶面喷施1次0.1％的磷酸二氢钾溶液，每3周用稀醋醋溶液调节1次水苔pH值。每次叶面施肥后喷水，将叶面上的肥料淋洗掉，以免伤害叶片。

扦插苗长至约10cm高时，移栽至较大尺寸的塑料薄膜袋中，袋高20cm、上口直径15cm、中下部打6个孔。袋中的育苗基质组成(V/V)是：泥炭∶珍珠岩∶河砂(1mm≤粒径≤2mm)＝3∶1.5∶0.5。移栽前30d，每袋施硫磺粉2.5g，将基质pH值调整到5.0(±0.2)。此后，实行常规育苗管理。当年8月底调查，乌饭树、蓝莓平均生根率分别为88.5％、82.0％，苗高分别为21.5cm、14.8cm。继续培育1年供嫁接时作砧木。

(3)嫁接苗培育：扦插第2年的8月下旬、第3年的2月下旬，选择地径达6mm以上的部分乌饭树扦插苗嫁接南高丛蓝莓品种‘夏普兰’。砧木苗在离地面8-10cm处剪断，从饱满、健壮的秋梢上剪取接芽和接穗。可有2种嫁接方法——嵌芽接(芽接)和单芽切接(枝接)。

嵌芽接类似于“T”字形芽接，只是由于蓝莓皮层不易剥离，接芽片带有木质部，削嵌槽的时候也会削去木质部。方法是:选发育充实的穗芽，在芽下方0.8～1.0cm处以45°角向下切一刀，然后，在芽上方0.5～0.8cm处向下削1刀至第1刀刀口底部，削成厚2～3mm、长1.5～2.0cm的带木质部的芽片。芽片带木质部有利于对生长点的保护，同时，带木质部的芽片与砧木贴的更紧密，更有利于接口愈合。在砧木苗上，按前述方法削出1个大小和形状同接芽片相当的嵌槽，从接穗上取下接芽片后迅速镶嵌入该嵌槽中,务使削取的芽片和砧木上削出的嵌槽的下口及其左右两边的形成层对齐，用塑料薄膜条从下往上缠严绑紧,露出芽体。

单芽切接时的单芽，是切下来的带有一段枝的芽体。方法是：在接穗枝条饱满芽下方0.5cm处向前平削1刀，深至皮层与木质部之间，削去的表皮不带木质或稍带木质，长度1.0～1.5cm。再将接穗翻转过来，在接芽的背面斜削一刀，削面长度短于第一个削面，两削面的夹角为35°～45°。在接芽上方0.5～0.6cm处剪断接穗，接穗长2.0～2.5cm。接着，在已经削平的砧木的断面上略微向上斜削一刀，在削面下方沿皮层略带木质部向下纵切一刀，切口长1.0～1.5cm。最后，按长削面朝外、短削面朝内，把切削好的单芽接穗迅速垂直插入砧木切口内，对准接穗形成层和砧木形成层，用厚0.01mm、宽3cm的塑料薄膜条绑严接口部位和接穗顶端，只露出叶柄和芽。

嫁接后1周内不浇水,以利接口愈合。嫁接口愈合后，每周淋施1次浓度为0.2％磷酸二氢钾+0.4％尿素溶液；进入8月份，每3周追施1次复合肥,施肥量5g/株，共计3次。当接芽新梢长到5～7cm长时,及时去掉绑带。砧木上萌发的根蘖和新梢，及时抹除。

(4)出圃建园：培育1年的蓝莓嫁接苗(3年生根—1年生枝)，大部分可出圃建园。合格出圃的蓝莓嫁接苗，应具以下条件：大小匀称，发育良好；砧桩剪除，剪口环状愈合或完全愈合，接合部愈合；株高40cm以上，地径0.50cm以上，具3～4个分枝，整形带内饱满芽数在6个以上；根系均匀、舒展、不卷曲；根皮和茎皮，无干缩皱裂，无新损伤。

1 材料与方法

1.1 苗木培育

生长季的6月上旬，从采穗圃中培养的乌饭树和‘夏普兰’蓝莓植株上，剪取生长健壮的半木质化枝条，剪成长10～12cm的茎段作为插穗，插穗置于300mg/L的吲哚乙酸(IBA)溶液中处理60min后，扦插于高20cm、上口直径15cm、中下部打6个孔的塑料薄膜袋中。育苗基质的组成(V/V)是：泥炭∶珍珠岩∶河砂(1mm≤粒径≤2mm)＝3∶1.5∶0.5。扦插前2周，每袋施硫磺粉2.5g，将基质pH值调整到5.0(±0.2)。

扦插苗在塑料温室中培育，插后第1个月棚上方覆盖遮阳网，重视温度和喷雾管理，保持室内气温(白天/夜间)28(±1.0)℃/20(±1.0)℃、相对湿度85(±2.0)％以上。此后，常规水肥管理。当年10月底调查，乌饭树、蓝莓平均生根率分别为88.5％、82.0％，苗高分别为21.5cm、14.8cm。继续培育1年。

扦插第3年的2月下旬，2种扦插苗在距地面5-10cm处剪断、平茬。同时，选择地径达6mm以上的部分乌饭树扦插苗嫁接南高丛蓝莓品种‘夏普兰’。砧木也在离地面5-10cm处剪断，从饱满、健壮的秋梢上剪取接芽和接穗。嫁接方法为单芽切接(枝接)，接穗“单芽”是切下来的带有一段枝的芽体，芽眼下方的削面不带木质部、恰到形成层。切口、接芽和接穗，用塑料薄膜带包严。嫁接后继续培育1年，方法同常规育苗。翌年2月中旬，选择大小匀称、发育良好的嫁接苗及2种扦插苗进行砂培实验。

1.2 砂培实验

培养的前述3种苗木(苗龄均为根3年生、枝1年生)，包括乌饭树扦插苗、蓝莓扦插苗和乌饭树砧蓝莓嫁接苗，2月中旬定植于塑料(PVC)盆中，每盆1株。塑料盆下部具孔，盆高22cm，上口直径25cm，下口直径18cm，石英砂基质，盆底置托盘。塑料温室中避雨栽培，自然光照。以1/2Hoagland溶液(用0.05mol L^–1H₂SO₄或KOH调整pH值至5.4)浇灌栽培至当年5月中旬、生长完全正常时，进一步选择大小均匀、发育良好的植株进行不同pH胁迫的处理。浇灌液的配方为完全Hoagland溶液，设计3种pH值，分别是：pH 4.6(模拟强酸性土壤)、pH 5.8(模拟中等酸性土壤)和pH 7.0(模拟中性土壤)，以pH 4.6的处理作为对照；3种苗木、3种pH胁迫各自处理6株，3次重复，共计162株(盆)。视天气情况，每1～2d浇灌1次处理液，每次每盆浇灌400mL，每浇灌2次用自来水冲洗石英砂1次。栽培90d(8月中旬，生长明显减缓)时，测量各处理苗木的株高、地径和冠幅，全株从盆中取出测定生物量干重，取样测定叶片中N和P、K、Ca、Mg、Fe元素的含量。在植株从盆中取出前1周时间，选择晴朗天气，测试分析各处理苗木叶片叶绿素荧光参数——初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)、潜在光化学效率(Fv/Fo)和最大光化学效率(Fv/Fm)以及气体交换参数—光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和光合水分利用效率(WUE)的值。

1.3 分析测试方法

叶片叶绿素含量参照Arnon的方法测定。叶片叶绿素荧光参数和气体交换参数的值用LI—6400X型便携式光合测定系统测定。

叶片矿质元素含量：选取植株发育枝正数第4～6片生长成熟的叶片，每处理每株苗按方位各取5片叶，叶片用0.1％中性洗涤剂清洗，用清水冲洗，再用无离子水冲洗3次，吸干水分后置于105℃烘箱中杀青20min,80℃烘烘至恒量后，磨细、过筛。叶片全氮量测定用H₂SO₄-H₂O₂消煮-全自动凯氏定氮法；全磷量测定采用H₂SO₄-H₂O₂消煮，钼锑抗比色法；K、Ca、Mg、Fe含量使用电感耦合等离子体—原子发射光谱法(inductively coupled plasma atomic emission spectrometry，ICP-AES)。

各项指标所获结果以≥3次重复的平均值±标准差表示，差异显著性用t-检验进行分析。

2 结果及分析

2.1 pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木的生长差异

测量结果清楚表明，用pH 4.6(对照)、pH 5.8和pH 7.0的营养液分别浇灌栽培90d，蓝莓嫁接苗等3种苗木的生长响应差异显著。由表1A、B、C、D可见，3种苗木植株的大小特点是：乌饭树扦插苗>蓝莓嫁接苗>蓝莓扦插苗；随pH值增大，3种苗木的株高、地径和冠幅均下降，尤其是对冠幅生长的抑制作用，但pH 5.8和pH 7.0胁迫下乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗的株高和地径与对照无显著性差异，而蓝莓扦插苗的株高和地径均较其对照的显著减小，尤其是株高的减小幅度更大；乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗的冠幅在pH 7.0胁迫下较各自对照的显著下降，蓝莓扦插苗的冠幅在pH 5.8和pH 7.0下的均显著小于对照。

表1 pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木株高、地径和冠幅的差异

1)砂培，3次重复，每1重复6株(盆)，栽培90d；2)蓝莓品种为‘Sharpblue’，南高丛蓝莓；3)表中的数字为平均数±标准差；4)同一栏的3个数字，其后小写字母不相同，表示期间差异显著(p≤0.05)。

与株高、地径和冠幅这些植株大小的指标的响应相似，pH 5.8和pH 7.0胁迫下，乌饭树扦插苗及其蓝莓嫁接苗的根、茎、叶生物量的减小幅度不大，均与对照(pH 4.6)差异不显著，但蓝莓扦插苗的则不然；pH 7.0胁迫下的茎生物量较对照显著降低，pH 5.8和pH 7.0胁迫下的叶生物量较对照显著降低且三者之间的差异均达显著水平。同时，由于累加效应的关系，3种pH值下3种苗木全株生物量的响应更加明显这，其中：乌饭树扦插苗及其蓝莓嫁接苗在pH 7.0胁迫下的与对照差异显著，在pH 5.8胁迫下的与对照差异不显著，而蓝莓扦插苗的在pH 5.8和pH 7.0胁迫下均与对照有显著性差异且两两之间差异显著。生物量响应特性的测定结果进一步表明，以乌饭树为砧木的蓝莓嫁接苗较传统的蓝莓扦插苗对pH胁迫的适应性得到显著增强(参见图1A至图1D)。

2.2 pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素含量、叶绿素荧光参数和气体交换参数的差异

随浇灌液pH值增大，3种苗木叶片叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素(a+b)以及叶绿素a/叶绿素b的比值均发生一定程度的降低，降低幅度叶绿素a的>叶绿素b的，叶绿素a/b的响应比叶绿素含量的响应明显，蓝莓扦插苗比其它2种苗木明显敏感(参见图2A、2B、2C和2D)。由图2A至图2D可见，只有蓝莓扦插苗的叶片叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素(a+b)在pH 7.0胁迫下显著低于其对照；蓝莓嫁接苗叶片的叶绿素a/b在pH 7.0胁迫下较对照显著降低，蓝莓扦插苗的在pH 5.8、pH 7.0胁迫下均显著低于对照。

同时，随浇灌液pH值增大，3种苗木叶片叶绿素初始荧光(Fo)升高，最大荧光(Fm)、潜在光化学效率(Fv/Fo)和最大光化学效率(Fv/Fm)降低，光合速率(Pn)和蒸腾速率(Tr)降低，光合水分利用效率(WUE)升高，但叶绿素荧光参数的响应表现出比气体交换参数更加灵敏的特性，乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗叶片这些参数值的变化幅度明显小于蓝莓扦插苗的(表2)。

表2 pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片叶绿素荧光参数和气体交换参数的差异

同一栏的3个数字，其后小写字母不相同，表示期间差异显著(p≤0.05)。

由表2可见，pH 5.8、pH 7.0胁迫下，3种苗木叶片Fo、Fm和WUE的值均与各自的对照无显著性差异；Fv/Fo的值，pH 7.0胁迫下乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗的与对照达显著差异水平，而蓝莓扦插苗在pH 5.8、pH 7.0胁迫下均与对照有显著性差异，且两者之间差异显著；Fv/Fm的值，3种苗木在pH 5.8胁迫下均与各自对照无显著性差异、在pH 7.0胁迫下显著低于对照，但蓝莓扦插苗在pH 5.8胁迫下的与pH 7.0胁迫下的无显著性差异，乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗在在pH 5.8胁迫下的显著大于pH 7.0胁迫下的；Pn和Tr的值，蓝莓扦插苗在pH 7.0胁迫下显著低于对照，乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗的与对照差异不显著。

2.3 pH胁迫下蓝莓嫁接苗等3种苗木叶片中N和Fe等6种重要矿质元素含量的差异

3种苗木叶片中N(图3A)、P(图3B)、K(图3C)、Ca(图3D)、Mg(图3E)和Fe(图3F)元素含量由高到低的排序是：Ca>N>K>Mg>P>Fe；以pH 4.6、pH 5.8、pH 7.0的溶液浇灌栽培90d，随pH值增大，3种苗木叶片中6种矿质元素的含量都降低，但P、K、Ca 3种元素的含量降低幅度很小，2种pH胁迫下的均与对照(pH 4.6)无显著性差异，主要是N、Mg、Fe 3种元素含量的响应不同。由图3的分析结果可见，蓝莓扦插苗叶片的N元素含量在pH 7.0胁迫下比其对照显著降低；pH 7.0胁迫下蓝莓嫁接苗叶片中Mg元素含量较对照显著降低，而蓝莓扦插苗在pH 5.8、pH 7.0胁迫下的都较对照显著降低；乌饭树扦插苗和蓝莓嫁接苗叶片中Fe元素的含量在pH 7.0胁迫下显著降低，蓝莓扦插苗的在pH 5.8、pH 7.0胁迫下都较对照显著降低(参见图3A至图3F)。这些结果清楚说明，高pH值胁迫下，蓝莓扦插苗叶片中N素含量水平特别是Mg和Fe元素含量水平的显著降低，应是其叶片失绿黄化症产生的重要原因。

3 结论与讨论

蓝莓嫁接苗在pH胁迫下的优良生长表现，应主要得益于乌饭树砧木的优良生长特性，这从3种苗木各自的株高、地径、冠幅以及根、茎、叶和全株生物量的差异上可充分体现，特别是根系的发达程度。嫁接苗的性状，既受砧木影响，也受接穗影响，而在抗性方面受砧木的影响更大，这已为大量生产实践和实验研究所证实。在本文的实验中，蓝莓嫁接苗充分利用了乌饭树砧木根系发达、生长势强、适应性广的特性，同时，乌饭树砧木对蓝莓接穗中基因的表达应该也产生了显著影响。以越橘属其它植物嫁接蓝莓及其在pH胁迫下的生长响应，本文没有涉及，有待扩展研究。

植物器官和植株生长的基础是细胞生长。在植物细胞中，叶绿体是对逆境最敏感的细胞器。许多研究表明，逆境胁迫下叶片中叶绿素含量及组成的变化，是植物响应和适应逆境胁迫的重要方面。叶绿素具有惊人的多功能性，但最主要功能是捕获光能并驱动电子转移到光反应中心，因此，对植物的生长和产量形成具极重要影响。pH胁迫下，蓝莓叶片叶绿素含量、组成及光合参数的变化报道不多。本文的结果清楚表明，较高pH胁迫下，蓝莓嫁接苗叶片叶绿素a含量、叶绿素总含量及叶绿素a/叶绿素b的比值较其扦插苗的显著提高，特别是叶绿素a含量在胁迫下具有明显的稳定性，这应是其光合效能差异的重要生理基础。但pH胁迫下，蓝莓扦插苗和嫁接苗叶片叶绿素荧光参数和气体交换参数的响应与叶绿素含量及组成的差异并非完全匹配，叶绿素荧光参数的敏感性强于气体交换参数，2种关键荧光参数中Fv/Fo的敏感性强于Fv/Fm，而嫁接不改变蓝莓苗木叶片的这些基本特性。

前人的大量研究和实践业也表明，pH值作为土壤/介质的一项化学性质，对植物的矿质营养有重要影响。蓝莓在pH值不适宜的土壤上栽培，包括N素在内的矿质营养严重失调，导致叶片普遍发生“黄化”失绿现象甚至是整株死亡。本文的实验结果与前人的成果相符，不同苗木种类在不同pH值水平下的表现差异大，但砂培条件下，在pH 4.6～pH 7.0的范围内，高pH值水平下实验材料叶片中的N素含量才显著降低，P、K、Ca元素的含量受pH值的影响不显著，Mg和Fe元素则存在显著差异，蓝莓扦插苗的显著降低，而蓝莓嫁接苗的降低幅度显著为小。本文的结果强烈暗示，pH胁迫下，在保障N、P、K元素良好营养的同时，栽培蓝莓应特别重视对Mg和Fe营养的管理，活化、提高介质中有效态Mg和Fe的含量水平具重要意义。

综上所述，以乌饭树为砧木培育蓝莓嫁接苗，与传统使用的蓝莓扦插苗相比，促进蓝莓在高pH值水平下的生长发育和适应性，同时，有着坚实的植物生理生态学基础，是蓝莓繁育和栽培中的一项适用技术创新。

Claims (10)

1.一种提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接育苗方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A.采穗圃营建：秋末或早春时节，挖掘长势好的野生乌饭树植株，修剪成50～60cm高的灌丛式，开沟或起垄定植，施足基肥；

B.砧木苗培育：6月上旬，从采穗圃剪取半木质化的乌饭树枝条，用5000倍高锰酸钾溶液消毒2-3min，剪切后扦插至干燥的水苔sphagnum(Herba Sphagni)基质上培育，至8～10cm高时移栽至塑料薄膜袋中继续培育1年；

C.嫁接苗培育：扦插第2年的8月下旬或第3年的2月下旬，选择地径达6mm以上的部分乌饭树扦插苗嫁接南高丛蓝莓品种“夏普兰(Sharpblue)”，嫁接口高度在距地面8—10cm处；

D.出圃建园：培育1年的蓝莓嫁接苗(3年生根—1年生枝)，选择接合部愈合、生长发育良好、具3～4个分枝、根系舒展、无明显损伤的苗木出圃建园。

2.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤B中，扦插前，将插穗基部置于300mg/L的吲哚乙酸(IBA)溶液中处理60分钟，在阴凉处阴干后即插。

3.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤B中，扦插用的穴盘的孔深:口径:底径为5.0cm:5.0cm:2.2cm。

4.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤B中，扦插前1天，将穴盘用0.1％-0.3％的高锰酸钾浸泡30-60min后用清水漂洗干净备用。

5.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤B中，扦插前1天，将水苔撕开后，用清水浸泡，并用稀醋醋溶液(50ml/L)将水苔的pH值调至4.6-4.8。

6.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤B中，扦插成活后至嫁接前的旺盛生长期，每周叶面喷施1次0.1％的磷酸二氢钾溶液。

7.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤C中，所述嫁接方法为嵌芽接(芽接)方法。

8.根据权利要求7所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述嵌芽接的方法是：选发育充实的穗芽，在芽下方0.8～1.0cm处以45°角向下切一刀，然后，在芽上方0.5～0.8cm处向下削1刀至第1刀刀口底部，削成厚2～3mm、长1.5～2.0cm的带木质部的芽片；在砧木苗上，按前述方法削出1个大小和形状同接芽片相当的嵌槽，从接穗上取下接芽片后迅速镶嵌入该嵌槽中，对齐芽片和砧木上嵌槽的下口及其左右两边的形成层，用塑料薄膜条从下往上缠严绑紧,露出芽体。

9.根据权利要求1所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述步骤C中，所述嫁接方法为单芽切接(枝接)。

10.根据权利要求9所述的提高蓝莓对高pH土壤适应性的嫁接繁育方法，其特征在于，所述单芽切接的方法是：在接穗枝条饱满芽下方0.5cm处向前平削1刀，长度1.0～1.5cm，削去的表皮不带木质或稍带木质；在接芽背面斜削一刀，长度短于第一个削面，两削面的夹角为35°～45°；在接芽上方0.5～0.6cm处剪断接穗，接穗长2.0～2.5cm；在削平的砧木的断面上向上斜削一刀，在削面下方沿皮层略带木质部向下纵切一刀，切口长1.0～1.5cm；按长削面朝外、短削面朝内，把切削好的单芽接穗垂直插入砧木切口内，对准接穗形成层和砧木形成层，用塑料薄膜条绑严接口部位和接穗顶端。