CN104388520A - 一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及病理检测领域，特别涉及一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法。首先配置A液：由金胺O、乙醇、苯酚、水组成，B液：由37%盐酸和乙醇组成，C液：由高锰酸钾和水组成，然后再利用上述染色液进行检测。本发明的染色液染色简单、时间短，无沉渣，荧光镜下菌体呈现明亮橘黄色，背景黑暗，特征对比清晰，荧光染色后保存时间长，阳性率高、不易漏检等优点。本发明对抗酸杆菌的鉴别诊断和治疗具有重要意义。

Description

一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法

（一）      技术领域

    本发明涉及病理检测领域，特别涉及一种荧光抗酸染色液及用该染色液检测抗酸杆菌的方法。

（二）      背景技术

结核(Tuberculosis，简称TB)是常见并可致命的一种传染病，由分枝杆菌又称结核杆菌导致。结核通常感染并破坏肺以及淋巴系统，但其它器官如脑、中枢神经系统、循环系统、泌尿系统、骨骼、关节、甚至皮肤亦可受感染。据世界卫生组织统计资料显示，全球目前有近三分之一的人感染结核杆菌，结核病患者达2000万人，每年新增患者880万人，死亡200万人。因此，早期、快速、有效的病原学诊断对及时治疗结核病、减少病死率和后遗症极其重要。

目前，临床上检测结核病主要依靠抗酸染色法（Ziehl－Neelsen）来确诊。抗酸染色法作为经典的方法，结果较为准确且长期用于诊断结核病，但由于镜检时间较长，由于操作原因可能导致颜色对比不明显，阳性检出率较低，无法完全满足临床需求。

（三）      发明内容

    本发明为了弥补现有技术的缺陷，提供了一种方法简单、阳性检出率高的荧光抗酸染色液，同时提供了利用该染色液检测抗酸杆菌的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种荧光抗酸染色液，其特征是，

包括A液：每1000ml溶液中包含下列组分：

金胺O 0.5-1.3g，95%乙醇 50-130ml，苯酚50-130ml，余量为水；

其配置方法为：将金胺O加入到95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70℃加热溶解的苯酚，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌1h；

B液：为由37%盐酸20-100ml、95%乙醇900-980ml组成的混合溶液，其配置方法为：先加入37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至1000ml后搅拌均匀；

C液：每1000ml溶液中，高锰酸钾2-10g，余量为水，其配置方法为：先将高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌1h。

所述A液：每1000ml溶液中包含下列组分：金胺O 1.2g，95%乙醇 100ml，苯酚100ml，余量为水。

所述B液的组成成分为：37%盐酸30ml、95%乙醇970ml。

每1000ml溶液中，高锰酸钾7g，余量为水。

使用上述任一项所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤 ：

1）将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色15min或加热5min；

2）冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液；

3）加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；

4）水洗，冲去脱色液,如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；

5）加C液1-2滴，复染2-4min；水洗，干燥后在暗室镜检。

本发明的有益效果是：

本发明的染色液染色简单、时间短，无沉渣，荧光镜下菌体呈现明亮橘黄色，背景黑暗，特征对比清晰，荧光染色后保存时间长，阳性率高、不易漏检等优点。本发明对抗酸杆菌的鉴别诊断和治疗具有重要意义。

（四）      具体实施方式

荧光抗酸染色液的配置：

A液的配制之

实施例一：

将0.5克金胺O加入到130ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70℃加热溶解的苯酚50ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌1h；

实施例二：

将1.3克金胺O加入到50ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70℃加热溶解的苯酚130ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌1h；

实施例三：

将1.2克金胺O加入到100ml 95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70℃加热溶解的苯酚100ml，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌1h；

B液的配置之

实施例一：

先在容量瓶中加入20ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至1000ml后搅拌均匀；

实施例二：

先在容量瓶中加入30ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至1000ml后搅拌均匀；

实施例三：

先在容量瓶中加入100ml37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至1000ml后搅拌均匀；

C液至配置之

实施例一：

先将2克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌1h。

实施例二：

先将10克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌1h。

实施例三：

先将7克高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌1h。

利用上述配置的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法如下：

1）将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加上述配置好的任一种A液3-4滴，室温染色12-17min，最好是15min或加热4-7min，最好是5min；

2）冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液；

3）加上述配置好的任一种B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；

4）水洗，冲去脱色液,如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；

5）加上述配置好的任一种C液1-2滴，复染2-4min；水洗，干燥后在暗室镜检。

除说明书所述技术特征外，其余技术特征均为本领域技术人员已知技术。

Claims (6)

1.一种荧光抗酸染色液，其特征是，

包括A液：每1000ml溶液中包含下列组分：

金胺O 0.5-1.3g，95%乙醇 50-130ml，苯酚50-130ml，余量为水；

其配置方法为：将金胺O加入到95%乙醇中，不断搅拌充分溶解；将60-70℃加热溶解的苯酚，溶于少量水中；两者混匀后用水定容至1000ml，并搅拌1h；

B液：为由37%盐酸20-100ml、95%乙醇900-980ml组成的混合溶液，其配置方法为：先加入37%盐酸，再加入部分95%乙醇，搅拌均匀后用余量95%乙醇定容至1000ml后搅拌均匀；

C液：每1000ml溶液中，高锰酸钾2-10g，余量为水，其配置方法为：先将高锰酸钾溶入部分水，搅拌均匀后再用水定容至1000ml，并搅拌1h。

2.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，所述A液：每1000ml溶液中包含下列组分：金胺O 1.2g，95%乙醇 100ml，苯酚100ml，余量为水。

3.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，所述B液的组成成分为：37%盐酸30ml、95%乙醇970ml。

4.根据权利要求1所述的荧光抗酸染色液，其特征是，每1000ml溶液中，高锰酸钾7g，余量为水。

5.使用权利要求1至4任一项所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤 ：

1）将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色12-17min或加热4-7min；

2）冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液；

3）加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；

4）水洗，冲去脱色液,如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；

5）加C液1-2滴，复染2-4min；水洗，干燥后在暗室镜检。

6.根据权利要求5所述的荧光抗酸染色液检测抗酸杆菌的方法，其特征是，包括以下步骤 ：

1）将结核菌标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，经火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室温染色15min或加热5min；

2）冷却后，再用流动水自玻片一端轻缓冲洗去除染色液；

3）加B液数滴于载玻片，轻轻摇动载玻片，脱色2-3min或至无色，然后再用水缓慢冲洗；

4）水洗，冲去脱色液,如果标本表面还可以看到残存红色，再添加B液至完全脱掉红色为止；

5）加C液1-2滴，复染2-4min；水洗，干燥后在暗室镜检。