CN104388360A - 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法 - Google Patents

一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104388360A
CN104388360A CN201410719594.1A CN201410719594A CN104388360A CN 104388360 A CN104388360 A CN 104388360A CN 201410719594 A CN201410719594 A CN 201410719594A CN 104388360 A CN104388360 A CN 104388360A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gram
ammonia nitrogen
substratum
water
screening method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410719594.1A
Other languages
English (en)
Inventor
梁晶晶
谢金萍
王娇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
QINGDAO GENYUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY GROUP Co Ltd
Original Assignee
QINGDAO GENYUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY GROUP Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by QINGDAO GENYUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY GROUP Co Ltd filed Critical QINGDAO GENYUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY GROUP Co Ltd
Priority to CN201410719594.1A priority Critical patent/CN104388360A/zh
Publication of CN104388360A publication Critical patent/CN104388360A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

本发明公开了一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，该菌株筛选于青岛胶南市大朱山嘴海域，具有较高的氨氮降解能力，生理生化鉴定为红假单胞菌属（Rhodopseudomonas）光合细菌。本发明还公开了降氨氮海水光合细菌的筛选方法。将该菌株用于水产养殖水质改善及生活污水的处理，针对养殖水体或生活污水氨氮含量高的问题，针对性强，应用成本低。

Description

一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法
技术领域
本发明属于水产养殖技术及生态环境保护技术领域，具体涉及一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法。
背景技术
由于养殖密度的提高及养殖池多年连续的使用，养殖池中大量的残饵、粪便及其它代谢物不断增加，这些物质腐败后产生的氨氮、硫化氢等有害物质直接污染水体及池底，这些有害物质除直接危害养殖对象外，同时也是病原微生物的营养源，使病菌大量繁殖。这是导致养殖对象生长缓慢、饲料系数增高、中毒、发病甚至死亡的重要原因。以往改善水质，主要是依靠换水，但换水只能改善水体而不能改善池底，而且90％以上污染来源于池底，换水也受水源水质情况的限制，在解决水质问题上，效果往往不能令人满意。而光合细菌作为养殖水质净化剂，可以有效克服上述困难。
光合细菌在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源，进行不放氧光合作用的细菌，这与普通细菌的异养生长是不同的，其通过氧化磷酸化途径使有机物氧化，获得生长、发育和繁殖，从而起到净化水质作用，在不同的自然环境下，它能表现出不同的生理生化功能，如固氮、固碳、脱氢、硫化物氧化等。
发明内容
本发明提供了一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，本发明是从自然海洋环境中获取泥水混合样，通过加大培养基中氨氮含量，在厌氧光照环境下通过三次转接富集，淘汰掉多数不能适应环境的细菌，分离出占优势的红色菌落，通过生理生化鉴定为红假单胞菌属光合细菌，养殖水体用量为1.2×107-108CFU/L水体时，48h氨氮降解率为96%，生活污水中用量为108CFU/L-5×107CFU/L水体时，72h氨氮降解率为68%。
为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：
一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，筛选步骤包括：
a、取样：泥水混合样取于青岛胶南市大朱山嘴海域，在低温下带回实验室；
b、富集培养基配制：1000 毫升海水加入：5克NH4Cl、1-5克CH3COONa、0.2克MgSO4·7H2O、0.2克酵母膏、0.1-0.3 克蛋白胨，调pH到7.0，121℃灭菌30min。灭菌后加入： 5%的NaHCO3溶液加20毫升、5%的KH2PO4溶液4毫升；
c、富集：在无菌条件下接种10%泥水混合样于含有b所述培养基的锥形瓶中，用不透气橡胶塞密封，28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，光暗比15h:9h，每天摇动混合一次，培养7天后，取部分富集液按10%转接至新鲜的b培养基中，如上条件中再次富集培养7天。共转接三次获得最终富集液；
d、分离纯化培养基配制：1000 毫升海水加入0.1克NH4Cl，0.3 克CH3COONa，0.02 克MgSO4·7H2O，0.1克酵母膏，18克琼脂，pH值7.0, 121℃灭菌30min。灭菌后加入0.2克 NaHCO3，0.02 克 K2HPO4；
e、分离纯化：在无菌环境下，移取1ml富集液于无菌培养皿中，倾注冷却至50-55℃的d所述培养基，缓慢摇匀，静置凝固。再倾注一层上层培养基进行密封。28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，24h光照培养箱中培养。通过观察，挑取红色单菌落，重复在d所述培养基中进行划线分离，获得一株红假单胞菌属光合细菌。
进一步的，所述步骤e中上层培养基为1000ml蒸馏水中加入18克琼脂、18克褐藻酸钠，121℃灭菌30min，冷却至50-55℃使用。
再进一步的，所述红假单胞菌属光合细菌应用于养殖水体或生活污水中，用量为：养殖水体1.2×107-108CFU/L水体时，48h氨氮降解率为96%，生活污水中108CFU/L-5×107CFU/L水体，72h氨氮降解率为68%。
附图说明
图1：50L规模发酵光合细菌对对虾养殖池塘氨氮的去除效果。
图2：最终富集培养液。
图3：光合细菌菌落。
具体实施方式
本发明结合以下具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1、光合细菌的分离纯化
a、取样：泥水混合样取于青岛胶南市大朱山嘴海域，在低温下带回实验室；
b、富集培养基配制：1000 毫升海水（或者淡水加2%盐）加入：5克NH4Cl、1-5克CH3COONa、0.2克MgSO4·7H2O、0.2克酵母膏、0.1-0.3 克蛋白胨，调pH到7.0，121℃灭菌30min。灭菌后加入： 5%的NaHCO3溶液加20毫升、5%的KH2PO4溶液4毫升。
c、富集：在无菌条件下接种10%泥水混合样于含有b所述培养基的锥形瓶中，用不透气橡胶塞密封，28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，光暗比15h:9h，每天摇动混合一次。培养7天后，取部分富集液按10%转接至新鲜的b培养基中，如上条件中再次富集培养7天。共转接三次获得最终富集液。
d、分离纯化培养基配制：1000 毫升海水（或者淡水加2%盐）加入0.1克NH4Cl，0.3 克CH3COONa，0.02 克MgSO4·7H2O，0.1克酵母膏，18克琼脂，pH值7.0, 121℃灭菌30min。灭菌后加入0.2克 NaHCO3，0.02 克 K2HPO4。
e、分离纯化：在无菌环境下，移取1ml富集液于无菌培养皿中，倾注冷却至50-55℃的d所述培养基，缓慢摇匀，静置凝固。再倾注一层上层培养基进行密封。28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，24h光照培养箱中培养。通过观察，挑取红色单菌落，重复在d所述培养基中进行划线分离，获得一株红假单胞菌属光合细菌。
实施例2、 规模发酵和发酵产物对池塘氨氮的降低情况
将筛选的红假单胞菌属光合细菌采用50L光照发酵罐罐进行规模培养至3×109CFU/L，生产培养基配方为：酵母膏2克/L，硫酸镁0.2克/L，乙酸钠2克/L，NaH2PO40.2克/L，NH4Cl 1克/L，121℃ 30min，灭菌后加NaHCO31克/L。日光灯光照强度为36μE·m-2·s-1，光暗比15h:9h，8h开搅拌机一次，转速80转/min，每次搅拌30min。发酵4天后，测定菌量为8×109CFU/ml。
在青岛胶州李哥庄镇对虾养殖区选取养殖后期（养殖时间为70d）氨氮含量较高的池塘6个，3个池塘投入1000ml上述光合细菌发酵液/亩·米水体，3个池塘不投加作为对照组，采用桑普生化科技有限公司的水博士系列氨氮试剂盒跟踪池塘氨氮含量变化，共跟踪7天，光合细菌组氨氮去除率为79%，显著高于对照组去除率（P≤0.05）。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (3)

1.一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，其特征在于：筛选步骤包括：
a、取样：泥水混合样取于青岛胶南市大朱山嘴海域，在低温下带回实验室；
b、富集培养基配制：1000 毫升海水加入：5克NH4Cl、1-5克CH3COONa、0.2克MgSO4·7H2O、0.2克酵母膏、0.1-0.3 克蛋白胨，调pH到7.0，121℃灭菌30min；
灭菌后加入： 5%的NaHCO3溶液加20毫升、5%的KH2PO4溶液4毫升；
c、富集：在无菌条件下接种10%泥水混合样于含有b所述培养基的锥形瓶中，用不透气橡胶塞密封，28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，光暗比15h:9h，每天摇动混合一次；
培养7天后，取部分富集液按10%转接至新鲜的b培养基中，如上条件中再次富集培养7天；
共转接三次获得最终富集液；
d、分离纯化培养基配制：1000 毫升海水加入0.1克NH4Cl，0.3 克CH3COONa，0.02 克MgSO4·7H2O，0.1克酵母膏，18克琼脂，pH值7.0, 121℃灭菌30min；
灭菌后加入0.2克 NaHCO3，0.02 克 K2HPO4；
e、分离纯化：在无菌环境下，移取1ml富集液于无菌培养皿中，倾注冷却至50-55℃的d所述培养基，缓慢摇匀，静置凝固；
再倾注一层上层培养基进行密封；
28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m-2·s-1，24h光照培养箱中培养，通过观察，挑取红色单菌落，重复在d所述培养基中进行划线分离，获得红假单胞菌属光合细菌。
2.根据权利要求1所述的具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，其特征在于：所述步骤e中上层培养基为1000ml蒸馏水中加入18克琼脂、18克褐藻酸钠，121℃灭菌30min，冷却至50-55℃使用。
3.根据权利要求1所述的具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法，其特征在于：所述红假单胞菌属光合细菌应用于养殖水体或生活污水中，用量为：养殖水体1.2×107-108CFU/L水体时，48h氨氮降解率为96%，生活污水中108CFU/L-5×107CFU/L水体，72h氨氮降解率为68%。
CN201410719594.1A 2014-12-03 2014-12-03 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法 Pending CN104388360A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410719594.1A CN104388360A (zh) 2014-12-03 2014-12-03 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410719594.1A CN104388360A (zh) 2014-12-03 2014-12-03 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104388360A true CN104388360A (zh) 2015-03-04

Family

ID=52606321

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410719594.1A Pending CN104388360A (zh) 2014-12-03 2014-12-03 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104388360A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105543148A (zh) * 2016-02-04 2016-05-04 中国科学院南京地理与湖泊研究所 一种利用蓝藻水华培育红假单胞菌属光合细菌的方法
CN110846246A (zh) * 2019-11-06 2020-02-28 广东省生物资源应用研究所 一种具有氨氮降解功能的细菌初步筛选方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105543148A (zh) * 2016-02-04 2016-05-04 中国科学院南京地理与湖泊研究所 一种利用蓝藻水华培育红假单胞菌属光合细菌的方法
CN105543148B (zh) * 2016-02-04 2019-03-29 中国科学院南京地理与湖泊研究所 一种利用蓝藻水华培育红假单胞菌属光合细菌的方法
CN110846246A (zh) * 2019-11-06 2020-02-28 广东省生物资源应用研究所 一种具有氨氮降解功能的细菌初步筛选方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Removal of nutrients from undiluted anaerobically treated piggery wastewater by improved microalgae
CN101823859B (zh) 轻质生态混凝土砖及其制备方法
CN101607809B (zh) 微生物混凝土砖及其制备方法
Attwood et al. A rapid and specific enrichment procedure for Hyphomicrobium spp.
CN102050523B (zh) 一种微生物对黑臭河道处理及原位生态修复的方法
CN101633894B (zh) 一种纤细裸藻的培养基及其开放式高密度养殖方法
CN101082024A (zh) 参池菌的制备和修复海参养殖池环境的方法
CN104593303B (zh) 一种液态复合微生物菌剂及其生产方法
CN103468621A (zh) 一种净化水体的复合微生物制剂
van der Maarel et al. Dimethylsulfoniopropionate in anoxic intertidal sediments: a precursor of methanogenesis via dimethyl sulfide, methanethiol, and methiolpropionate
Malik A modified method for the cultivation of phototrophic bacteria
CN104651281A (zh) 一种改善水生动物产量和/或质量的光合细菌的制备方法
CN103740615B (zh) 光合细菌sc01及其快速培养方法和应用
CN108220186A (zh) 一种脱氮除藻微生物菌剂及其制备方法
CN105543142B (zh) 一种降低水体cod沼泽红假单胞菌的培养基
CN106148218B (zh) 水产用光合细菌微生态及其应用
CN104388360A (zh) 一种具有降氨氮能力的光合细菌的筛选方法
Toerien et al. Enumeration, isolation and identification of sulphate-reducing bacteria of anaerobic digestion
Prasertsan et al. Isolation, identification and growth conditions of photosynthetic bacteria found in seafood processing wastewater
CN109666611A (zh) 一种水产养殖用光合细菌的制备及纯化方法
CN111378592B (zh) 地衣芽孢杆菌及该菌处理恶臭有机废水净化水体的方法
CN106434424B (zh) 具有污海水脱氮能力的弧菌及其用途
CN1340462A (zh) 利用枯草芽孢杆菌的水产养殖环境生物修复方法
CN108102943A (zh) 一种高效脱氮微生物及其应用
CN114717149A (zh) 一种南海深海鱼源异源食烷菌axmz1及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150304

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication