CN104387447A - 一种基于dc细胞的乙肝病毒t表位肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及蛋白质工程、基因工程和生物医药领域，具体涉及一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽。本发明采用的技术方案是：一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于：所述基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽由9个氨基酸残基组成，其氨基酸序列为：QLFHLCLII。本发明以碱性氨基酸为骨架，采取固相合成技术，同步在该骨架上同时合成相同的预设氨基酸序列，并以乙肝病毒为设计靶标，并采用合成技术生产基于DC细胞的乙肝病毒特异性表位肽；通过DC细胞体外负载该表位肽，并将成熟的DC细胞输注特定人群体内，特异性的产生针对乙肝病毒感染所带来的危害，尤其是针对慢性乙肝的所产生的清除体内病毒和改善临床症状的作用。

Description

一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽

本申请是申请日为2011年3月25日、申请号为201110073862.3、发明名称为《一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽》的分案申请。

技术领域

本发明涉及蛋白质工程、基因工程和生物医药领域，具体涉及一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽。

背景技术

全世界有超过4亿人感染乙型肝炎病毒，每年有1百万人死于感染综合症，包括肝硬化、肝细胞癌或者其他并发症。现有技术大多采用中药或者西药治疗乙肝，虽然有一定疗效，但是不能根治乙肝或其他并发症，尤其不能有效阻断因乙型肝炎病毒感染所造成的肝脏纤维化和硬化、阻断乙肝病毒通过胎盘传染给胎儿、阻断乙肝病毒通过乳汁传染给母乳喂养的新生儿。

肽合成技术目前在国内外有一些机构都有开展，组织相容性复合体（MHC）I类限制性细胞毒性T细胞（CTL）在控制胞内病原体和肿瘤细胞生长中起极为重要的作用。通过蛋白质基本性质分析，疏水性分析，跨膜区预测，信号肽预测，亚细胞定位预测，抗原性位点预测，可以对基因编码蛋白的性质作出初步判断和预测。尤其通过疏水性分析和跨膜区预测可以预测基因是否为膜蛋白。将该212个氨基酸与NCBI数据库中的蛋白片段进行Blast,结果显示100条肽与目标肽有同源性，其中16条同源性100%，84条为99%，而这100条肽均为HBV的precore/core蛋白。利用CLC Protein Workbench软件对该212个氨基酸的分析，可以得到该蛋白质片段的一般生物学特性。

细胞免疫反应在免疫应答过程中起着关键的作用。当外源性抗原被抗原呈递细胞捕获后，蛋白质抗原在内吞系统被降解成多肽片段，其中的免疫原性多肽即T细胞表位与MHC I类分子结合，被转运至APC表面供T细胞受体识别，从而激发细胞免疫应答，发挥免疫调节作用，对其氨基酸序列特征的了解将有助于亚单位疫苗分子的设计与研制以及增加对免疫系统的更进一步理解。因此，对T细胞表位的预测以及在此基础上进行结构改造具有重要的理论价值和实际意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种能有效治疗乙肝及其各种并发症，阻断阻断乙肝病毒通过胎盘传染给胎儿、阻断乙肝病毒通过乳汁传染给母乳喂养的新生儿的一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽及其类似物。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于：所述基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽由9个氨基酸残基组成，其氨基酸序列为：QLFHLCLII（谷氨酰胺-亮氨酸-苯丙氨酸-组氨酸-亮氨酸-半胱氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-异亮氨酸）。选择乙型肝炎病毒核心蛋白作为目的抗原。

相对于现有技术，本发明以碱性氨基酸为骨架，采取固相合成技术，同步在该骨架上同时合成相同的预设氨基酸序列，并以乙肝病毒为设计靶标，并采用合成技术生产基于DC细胞的乙肝病毒特异性表位肽；通过DC细胞体外负载该表位肽，并将成熟的DC细胞输注特定人群体内，特异性的产生针对乙肝病毒感染所带来的危害，尤其是针对慢性乙肝的所产生的清除体内病毒和改善临床症状的作用；阻断因乙型肝炎病毒感染所造成的肝脏纤维化和硬化；阻断乙肝病毒通过胎盘传染给胎儿；阻断乙肝病毒通过乳汁传染给母乳喂养的新生儿。 

附图说明

图1是表位肽的质谱图，

图2是九肽中各位点氨基酸残基结合HLA-A2分子优先顺序，

图3是九肽中与结合或不结合有关的氨基酸残基，

图4是多项式系数表（HLA-A2），

图5是患者数据表，

图6是患者数据表，

图7是慢性乙肝患者单核细胞的表型，

图8是培养天数，

图9是肽冲击后树突状细胞形态的改变（A-F），G为阴性对照，

图10是患者治疗效果表，

图11是治疗48周血浆HBV DNA的水平，

图12是治疗48周血浆ALT的水平。

具体实施方式

本发明所述的基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽，其氨基酸序列为：QLFHLCLII，分子量为1150。

表位肽采用标准Fmoc方案进行合成，经HPLC纯化后，其纯度大于98%，参见图1，质谱分析并证实其分子量符合理论值。

 本发明基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽的合成方法为：

一、表位肽的设计和筛选

1、乙型肝炎病毒抗原

乙型病毒抗原的核心抗原为乙肝病毒在体内引起CTL反应的主要抗原，核苷酸序列为639bp,编码蛋白为212氨基酸,MQLFHLCLIISCSCPTVQASKLCLGWLWGMDIDPYKEFGASVELLSFLPSDFFPSIRDLLDTASALYREALESPEHCSPHHTALRQAILCWGELMNLATWVGSNLEDPASRELVVSYVNVNMGLKIRQLLWFHISCLTFGRETVLEYLVSFGVWIRTPPAYRPPNAPILSTLPETTVVRRRGRSPRRRTPSPRRRRSQSPRRRRSQSRESQC.Genebank[DQ448622];来源于中国人群genotype B,血清学分型adw2。.

 2、同源性分析

将该212个氨基酸与NCBI数据库中的蛋白片段进行Blast,以确定该段蛋白质的特异性。

3、HBV核心抗原的一般特性预测

应用软件CLC Protein Workbench3版本和Signal P3.0软件对HBV核心抗原的编码蛋白质进行预测，包括疏水性、亲水性、抗原

性、跨膜结构域、等电点及信号肽潜在切割位点。

4、利用SYFPEITHI进行CTL表位初步预测

5、PREDEPP方案预测

6、基序法

（1）不同的MHCI类对所结合的肽的组成有不同的要求，但其中起主要作用进而对肽链与MHCI类分子的结合有重要影响的是肽链的两个主要锚点残基，他们在多肽与MHCI类分子的高亲和力结合中是必需的。对于HLA-A2，九肽的两个锚点分别位于肽链的第2位氨基酸残基和羧基末端（第9位氨基酸残基）；且第2位氨基酸残基应是亮氨酸（L）或蛋氨酸（M），第9位氨基酸残基应是缬氨酸（V）、异亮胺酸（I）或L。参见图2，符合这些条件的多肽与HLA-A2限制性CTL表位的可能性较大。

 （2）二级锚点残基的作用除了两个主要锚点残基的必需因素外，多肽链中的其他氨基酸残基对多肽与HLA-A2分子的高或中等亲和力结合也有不可忽视的影响。参见图3，在九肽其他位置上，不同氨基酸残基对多肽与HLA-A2分子的结合有着不同的影响，有的氨基酸残基有利于结合，而有的则不利于结合。理想的与HLA-A2结合的CTL表位（即有高的或中等亲和力）应不包含不利于结合的氨基酸残基，或有利于结合的残基多于不利于结合的残基。

7、多项式方案预测表位肽

多项式方案是指当某残基R出现在某肽的第I位时，不考虑其他肽序列的情况下，该残基对于整个肽与MHCI类分子的结合自由能提供了一常量Ri，用在第I位为残基R的大量多肽的IC₅₀的负log10值的平均值来估计此常量。IC₅₀被定义为待测肽将对照肽-MHC复合物中50%的对照肽置换下来的浓度。20种氨基酸残基分别在1-9位的Ri值列于图4给定某一九肽，将其所有氨基酸残基对应的Ri值相加，选择分值大于选定阈值的抗原肽为可能的后选肽。参见图4，本发明选择22 。

二、表位肽的鉴定、修饰及合成

从软件预测的5条CTL表位肽中寻找到具有较高的抗原结合性能，并将其用B细胞表位，Th表位和棕榈酰基团修饰，Fmoc方案合成，为进一步探讨外源性小分子表位肽进入细胞激发MHC1类反应奠定基础。多肽的固相化学合成主要有两种策略：Boc固相合成策略和Fmoc固相合成策略。在Boc法中氨基酸的α-氨基的保护基团选择弱酸敏感基团，侧链活性基团的保护基团选用强酸敏感基团。Fmoc法中氨基酸的α-氨基的保护基团选择弱碱敏感基团，侧链活性基的保护基团选用弱酸敏感基团。

1、抗原肽的Fmoc法固相合成与标记（按照抗原肽的序列从羧端向氨端依次合成）。

（1）第一个氨基酸与树脂的连接：将2-Chlorotrityl Chloride Resin树脂1g置于干燥洁净的肽合成柱中，加入8mlDCM，溶胀5min，真空吸弃溶剂。分别取2 mmol Fmoc氨基酸和5 mmol DIEA，溶于8 ml DCM，并加入于树脂中，室温轻轻摇动反应60 min。真空吸弃溶剂。用10 ml DMF洗涤树脂2次，每次2 min。加入10 ml DCM/MeOH/DIEA(80:15:5)，轻轻摇动反应10min，真空吸弃溶剂。重复一次。用10 ml DMF洗涤树脂3次，每次2 min。真空吸弃溶剂，N₂吹干。

（2）第一个氨基酸与树脂的偶联率测定：精确称取2mg干燥的Fmoc氨基酸-树脂置于比色杯中，加入3ml 20％哌啶／DMF，轻轻摇动反应10min，用20％哌啶／DMF作为空白对照调零，紫外分光光度计测定样品的290nm光吸收值。重复测定2次，取平均值。偶联率通过以下公式计算：

偶联率(mmol/g)=(Abs样品)／(样品重量mg×1.75）……公式（1）

（3）Fmoc基团的脱保护：向树脂中加入10 ml脱保护（DEBLOCK）试剂（25％哌啶／DMF），混匀，室温轻轻摇动反应5 min。弃溶剂，用10 mlDMF洗涤树脂3次，每次2 min。用6 ml异丙醇洗涤树脂3次，每次5 min。用6 ml己烷洗涤树脂3次，每次5 min。真空吸弃溶剂。取少量树脂样品，用茚三酮显色法(Kaiser法)快速测定树脂上的游离氨基含量：将树脂2 ml用乙醇洗涤3次，分别加入2滴5％茚三酮、80％苯酚和KCN（2 ml 0.001MKCN:98 ml哌啶），充分混匀,120℃加热6 min,判断Fmoc基团的去保护反应程度。

（4）第二个氨基酸的偶联反应：第二个氨基酸的连接采用原位活化法，取2 mmol的Fmoc氨基酸、4.0mmol的TBTU和4.0mmol的HOBT，加入最少量的DMF溶解后加入5 mmol的DIEA，充分混匀后，加于脱Fmoc基团的树脂中。室温轻轻摇动反应60 min。真空吸弃溶剂。用5 ml甲醇洗涤树脂3次，每次5 min。用10 ml DMF洗涤树脂3次，每次2 min。真空吸弃溶剂。取少量树脂样品进行茚三酮显色分析。测定偶联率。

 （5）肽链的延伸反应：用10 ml DEBLOCK试剂脱去上一个氨基酸N端的Fmoc保护基团，10 ml DMF洗涤树脂3次，真空吸弃溶剂。取少量树脂样品进行茚三酮显色分析。按照（3）方法偶联下一个氨基酸。重复进行Fmoc保护基团脱保护和氨基酸偶联反应，直至偶联得到所需多肽链。

（6）肽链的侧链去保护及从树脂上的切割：将已合成好全部氨基酸序列的树脂，用10 ml DMF洗涤后再用6 ml异丙醇洗涤树脂3次，每次5 min。用6 ml己烷洗涤树脂3次，每次5 min。真空吸弃溶剂后N₂吹干，放入裂解容器中。1g树脂加入25 ml切割试剂（TFA:硫代苯甲醚:水：苯酚：EDT=82.5:5:5:5:2.5 v/v），室温切割反应2 h，不时摇动混匀，反应后的混合液经玻璃滤器过滤树脂，收集切割反应混合液，用TFA洗涤树脂3次。将反应混合液转移于一圆底烧瓶中，用等体积预冷的乙醚洗涤4次，收集沉淀。干燥后即得到合成抗原肽粗品。

（7）合成抗原肽的脱盐：将抗原肽粗品加蒸馏水溶解。称取AmershamG-25凝胶15 g，溶胀后装柱，装好后的柱子先用50ml蒸馏水平衡，平衡好后，每次上样3-5 ml，用蒸馏水进行洗脱，紫外分光光度仪检测220 nm处紫外吸收，按峰收集抗原肽。

（8）HPLC纯化抗原肽：使用waters公司的waters4000制备型HPLC高效色谱仪分离纯化抗原肽。色谱柱为径向加压色谱柱（25×100，15μm，DELTA PAK C18填料），洗脱系统为：A液：5%乙腈溶液(含0.1%TFA）；B液：95%乙腈溶液(含0.08%TFA）。手动进样，每次进样1 ml，流速4 ml/min，线性梯度，45min内，B液从5%升到50%，然后5 min内升到95%B液做最后洗脱。220 nm处检测紫外吸收，按峰收集组分，用于质谱检测。将分子量检测正确的组分收集，真空冻干，成为需要的纯品，备用。

（9）质谱鉴定抗原肽：采用激光解析质谱鉴定抗原肽，数据分析软件为G2025A Software A.02.01，方法严格按照操作手册进行，检测合成抗原肽的分子量。

2、表位肽的修饰

在T细胞表位的N-末端加上糖分子、脂肽或棕榈酰基可以增加小分子肽在细胞膜上的定位、跨膜及穿透能力。而辅助性T细胞表位或B细胞表位有助于增强T细胞表位的生物学功能，为了寻找到最佳的T细胞表位通过外源性途径引发CTL反应的能力，我们选择了Th、B及棕榈酰丝氨酸三种修饰基团以协同、偶联和-AAA-柔性连接的多种方案进行T细胞表位肽的修饰。

3、表位肽的合成

再次按照肽合成的步骤合成上述9条肽，合成肽为冻干粉，100mg/条。合成抗原肽均经HPLC纯化（纯度＞98%）,同时行质谱测序。冻干多肽放置于-20℃保存。

三、治疗慢性乙肝患者的效果

负载抗原的自体树突状细胞（抗原呈递细胞）（ADCs）已经用于免疫治疗。我们采用ADCs治疗了380例慢性乙肝患者，在治疗48周后对每例患者的病毒学、生物化学指标和血清学反应进行了评估，报告显示：治疗结束后46.36%的HBeAg阴性患者和3.13%的HBeAg阳性患者HBV- DNA定量检测结果为阴性；HBeAg阴性患者(P=0.007)和HBeAg阳性患者(P=0.003)谷丙转氨酶全转为正常。结果提示：ADC疫苗对慢性乙肝患者免疫功能的重建，病毒学、生化及血清学指标的改善是极有效的。

1、患者情况

  本发明中的380例患者，其中185例HBeAg阳性，195例HBeAg阴性，没有人在本发明之前6个月进行抗病毒或免疫调节药物治疗。患者数据见图5 和图6。

参见图6，有185例HBeAg阳性，195例HBeAg阴性的患者。185例HBeAg阳性的患者：其中160例HBV-DNA≥1000 copies/mL（73例ALT≥40 IU，87例ALT<40 IU），20例HBV-DNA<1000 copies/mL（22例ALT≥40 IU，3例ALT<40 IU）。195例HBeAg阴性的患者：其中其中110例HBV-DNA≥1000 copies/mL（43例ALT≥40 IU，67例ALT<40 IU），85例HBV-DNA<1000 copies/mL（55例ALT≥40 IU，28例ALT<40 IU）。

2、CD14+的选择和DC的增殖

参见图7，采用白细胞分离法分离出患者外周血单核细胞，CD14+细胞选择的纯度达到93%（91–95%的范围）(图7b1–b3). 在经过GM-CSF和 IL-4处理后，细胞变成明显的树突状，在第10天，大部分细胞表达辅刺激分子标记CD86、CD40、CD80和 HLA-DR、MHC-I分子(图7，c1–c5)。参见图8，对新鲜的DC细胞和解冻的未成熟细胞进行检测，标志物的表达差异不显著。辅刺激分子标记CD86、CD40、CD80和 HLA-DR、HLA –I的水平在10天内均增加了，但是，所有的分子标记物的水平在第11天，即用肽冲击过后的12小时内快速降低。

 培养天数

参见图8， 第十一天，阴性质控保持低值。 在第9天，细胞变形，分子标记CD14快速减少，其它的分子标记如：CD40,CD80,CD86,HLA-I,HLA-Dr在前9天处于增加状态，但是在第10天，第11天肽冲击过后开始减少。

参见图8，我们用FITC对肽标记，进行细胞定位，采用共聚焦显微法以确定DC细胞对HBV肽吸收情况。分析显示：30分钟内肽就会被DC细胞吸收。最初，在细胞体会看到荧光，细胞核看不到荧光；2小时后，肽会经由胞体扩散到树突；12小时后，在树突和胞体检测到荧光会逐渐消退。在细胞核没有观察到荧光。

参见图9，肽冲击后树突状细胞形态的改变（A-F），G为阴性对照。A-F分别为用肽冲击30分钟,1小时,2小时,4小时,6小时和12小时树突状细胞形态的改变。

3、血清学反应

185例HBeAg阳性的患者中，在治疗24周时， 22.16%(41/185)例HBeAg转阴，16.21%(30/185)发生了血清学转换（产生HBeAb）；治疗48周时，29.73%(55/185)例HBeAg转阴，21.62%(40/185) 发生了血清学转换（产生HBeAb）。

195例HBeAg阴性的患者中，在治疗24周时，8.21%(16/195)例HBsAg转阴，HBsAg血清学转化率（HBsAg转阴或出现HbsAb）为1.03%(2/195)；治疗48周时，10.26%(20/195) 例HBsAg转阴，HBsAg血清学转化率（HBsAg转阴或出现HbsAb）为2.56%(5/195) (Table 2)。

4、病毒学反应

HBeAg阳性的患者，在治疗24周时，实时荧光定量PCR检测HBV-DNA水平平均下降0.62 log copies/mL，8.13%(13/160)的患者HBV-DNA未被检出，但这些患者治疗前HBV-DNA均为阴性；在治疗48周时，HBV-DNA水平平均下降0.88 log copies/mL，3.13%(5/160)的患者HBV-DNA未被检出。在治疗24周时，20%(32/160)的患者HBV-DNA水平下降了2log10，在治疗48周时，44.38%(71/160) 的患者HBV-DNA水平下降了2 log10。

参见图11，HBeAg阴性的患者，在治疗24周时，HBV-DNA水平下降了3.24 log copies/mL，64.55%(71/110) 的患者HBV-DNA未被检出；在治疗48周时，HBV-DNA水平下降了3.24 log copies/mL，50%(55/110) 的患者HBV-DNA未被检出。由此显示：HBeAg阴性的患者比HBeAg阳性的患者HBV-DNA水平下降的更大更迅速。

 治疗的周数

参见图11，治疗48周血浆HBV DNA的水平。检测下限为1000copies/ml。

生化指标的转化

参见图12，本发明中195例ALT水平高于40 IU/mL患者，在治疗48周时，92例患者(50.26%)其ALT恢复正常；185例ALT水平低于40 IU/mL患者，在治疗8周时，有7例高于正常值，之后12周没有经过任何治疗，其ALT水平又恢复正常。在治疗期间，195例患者中有33例 (16.92%)ALT正常的患者ALT出现一过性升高，至治疗结束又恢复正常。

参见图10，在治疗48周后，HBeAg阴性患者(P=0.007)和HBeAg阳性患者(P=0.003)ALT趋于正常，疗效显著，有69%HBeAg阴性患者ALT恢复正常，30.5% HBeAg阳性患者ALT恢复正常。

治疗的周数

参见图12，通过48周的治疗，血浆ALT的水平。检测最低下限为40 IU/L。

联合反应

在治疗48周时，185例HBeAg阳性患者中有25例(13.51%)达到完全反应（CR）：HBV-DNA 呈阴性，ALT正常，HBeAg出现血清学转化。135例(72.97%)患者达到部分反应(PR)：HBV-DNA 呈阴性，ALT正常，HBeAg未出现血清学转化。25例(13.51%)患者无应答（没有达到以上标准）。此外，76例(47.51%)患者出现了病毒学应答，55例(29.73%) 出现HBeAg血清学转化，29例(30.5%)出现生化应答。

参见图10，195例HBeAg阴性的患者，105例(53.85%)出现CR，53例(27.18%)出现PR，37例(18.97%)无应答。此外，37例(18.97%)患者出现病毒学应答，20例(10.26%)患者出现HBsAg血清学转化，69例(69%)出现生化应答,。

380例患者中有110例是首次治疗（其中：85例HBeAg阴性，25例HBeAg阳性），270例患者以前接受过别的治疗（其中：115例HBeAg阴性，155例HBeAg阳性）。

耐药性分析

患者在治疗48周时进行基因突变分析，发现没有新的点突变发生。

安全性、副作用和药物不良反应

对所有登记的患者监护期间没有发现任何的过敏现象，没有观察到皮疹或呼吸困难，10例患者出现低烧，但都能在24小时内自愈。

统计分析显示：HBeAg阳性的患者在DC疫苗治疗期间病毒的清除在统计学上不显著(P=0.273)，HBeAg阴性的患者统计学上疗效显著(P=0.001)。HBeAg阴性的患者HBV-DNA水平下降了3.24 log copies/mL（病毒指数快速下降，而HBeAg阳性的患者HBV-DNA仅仅下降了0.88 log copies/mL）。对于HBeAg阴性的患者，在治疗24周后，48周时，HBV-DNA的阴转率达50%；而HBeAg阴性的患者在采用IFN-α治疗6个月时，HBV-DNA的阴转率为37%，而这样的阴转率的维持仅为24%；采用阿德福韦酯治疗1年后，HBV-DNA的阴转率为28%。陈等报道，HBeAg阳性的患者，在治疗前后，HBV-DNA下降1.771±2.39copies。与目前的药物治疗相比，DC疫苗在降病毒载量更快速、稳定和持久。虽然HBeAg阳性和阴性的患者病毒清除率有所不同，但是，DC疫苗会触发一种强大的CD8+CTL（HBeAg阳性和阴性的患者）。HBeAg阳性的患者，体内病毒的复制会影响DC疫苗清除病毒的效果，呈现低反应状态。因此，为了增强DC疫苗治疗的效果，HBeAg阳性的患者最好结合其他的抗病毒药物治疗。本发明中HBeAg阴性的患者，其中58例DNA>104 copies/mL，52例DNA在103–104 copies/mL，剩余的85例DNA<103/mL。所有DNA<103/mLHBsAg阴性或者有HBsAb的患者都属于的“免疫控制”状态。20例HBV-DNA<1000/mL的  HBeAg阴性或HBeAb阴性的患者有20%出现抗体。55例HBeAg阴性或HBeAb阳性HBV-DNA >1000 copies /mL的患者，有45.45%(15/55) 出现了生化应答，45.45%(15/55)有病毒学应答，27.27%(9/55)出现完全应答。

HBeAg血清学转化是抑制HBV复制的一个重要指标。本发明中的380例患者，在治疗48周后，HBeAg的消失和发生血清学转化率的比例分别为29.73%(55/185)和21.62%(40/185)，有10例患者HBeAg消失HBeAb出现。 采用DC疫苗治疗，HBeAg的转化率高于其他药物治疗：IFN-α（25%）、拉米夫定(16%)和阿德福韦酯(12%)。HBeAg阴性的患者HBsAg的转阴率为10.26%(20/195)，而IFN-α治疗仅为7.8%。HBsAg的血清转化（HBsAg消失，HbsAb出现）为2.56%(5/195)。以上数据提示：经过特定的活化肽刺激的DC疫苗可以通过激发CD4+的T细胞活化患者的体液免疫、重建机体免疫功能。

对于HBeAg阴性的患者，本发明有一重大突破。我们对195例HBeAg阴性的患者进行评估，在48周研究结束后临床疗效显著(P=0.001)。我们资料表明：基于靶向性自体细胞疫苗对于HBeAg阴性的患者疗效显著。我们采用流式细胞术评估了28例HBeAg阳性患者的CD3+、CD4+、和 CD8+的水平（这些患者的HBV-DNA水平均在105-108 copies/mL ，ALT水平在80-200IU/L ），在经过2个月的DC疫苗治疗之后，CD8+细胞的数量至少增加了10%，差异显著(P<0.05)，CD3+和CD4+细胞差异不显著(P>0.05)。

Claims (1)

1.一种基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽，其特征在于：所述基于DC细胞的乙肝病毒T表位肽由9个氨基酸残基组成，其氨基酸序列为：QLFHLCLII。