CN104371021A - 一种七肽复合水凝胶微球的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,包括:(1)将七肽7AAP溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇七肽复合水凝胶微球,磷钨酸POM溶于蒸馏水中;(2)室温下取1-10ml POM水溶液加入到10-50μl 7AAP溶液中,稍微震荡,静置陈化2-12h,得到七肽复合水凝胶微球。本发明的操作简便、反应条件温和,所使用的原材料无毒无污染,具有优良的生物相容性;所得到的7AAP/POM复合水凝胶微球,粒径较均一,形态较规整,同时还具有很好的温度敏感性。
Description
技术领域
本发明属于多肽自组装领域,特别涉及一种七肽复合水凝胶微球的制备方法。
背景技术
多肽是生物体内固有的大分子,具有良好的生物可降解性和生物相容性。多肽自组装是指在适当条件下氨基酸残基之间通过非共价键相互作用自发组合形成的一类结构明确、构造稳定、具有某种理化性能的分子聚集体或超分子结构。自从1992年,美国麻省理工学院的张曙光偶然从酵母蛋白中发现了能够自组装的离子短肽(由8~16个氨基酸构成)以来,一系列的可自组装的离子短肽被发现或者被设计出来,得到了各种各样的自组装结构,包括纤维、膜和水凝胶等。多肽或短肽自组装成的纳米材料在生物医学工程中具有广泛的潜在应用,包括作为创伤修复的支架、组织工程支架、药物释放载体等。
七肽7AAP是一种新型多肽,其序列为Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe,分子结构见图1,它对抑制生物体合成黑色素起着关键作用。7AAP分子中含有游离的氨基,故在酸性条件下带正电,POM是一种常用的生化试剂,被应用于沉淀蛋白质、植物碱和某些氨基酸,它在水溶液中带负电。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,该方法操作简单、反应条件温和,所使用的原材料无毒无污染,生物相容性好,并且复合胶体微球具有很好的温度敏感性。
本发明的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,包括:
(1)将七肽7AAP溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇七肽复合水凝胶微球,磷钨酸POM溶于蒸馏水中;
(2)室温下取1-10ml POM水溶液加入到10-50μl7AAP溶液中,稍微震荡,静置陈化2-12h,得到七肽复合水凝胶微球。
步骤(1)中所述的七肽序列为Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe。
步骤(1)中所述的POM结构为Keggin-type结构。
步骤(2)中所述的POM水溶液的浓度为0.025×10-3-0.8×10-3g/ml,7AAP溶液的浓度为0.03-0.48g/ml。
步骤(2)中所述的POM水溶液的pH范围为1-7。
步骤(2)中静置陈化容器为5.0ml的EP管。.
本发明中改变复合水凝胶微球制备过程中的各种参数,可以制得不同粒径的复合水凝胶微球。
本发明的复合水凝胶微球粒径较均一,形态较规整,同时还具有很好的温度敏感性。而且可以通过改变复合水凝胶微球制备过程中的各种参数控制复合水凝胶微球的粒径。相信该复合水凝胶微球通过进一步包裹壳体将成功应用于载体药物释放等生物医学领域。
有益效果
(1)本发明的操作简便、反应条件温和,所使用的原材料无毒无污染,具有优良的生物相容性;
(2)本发明所得到的复合水凝胶微球分散性好,粒径较均一,形态较规整,同时还具有很好的温度敏感性的优点。
(3)本发明制备复合水凝胶微球的方法,可以对微球的粒径进行有效的控制。
附图说明
图1为七肽7AAP的结构式;
图2为7AAP与POM在不同pH条件下自组装得到的复合水凝胶微球的SEM图:(a)pH=3;(b)pH=4;(c)pH=5;(d)pH=6;
图3为7AAP(a)、POM(b)还有7AAP/POM(c)复合水凝胶微球的红外光谱图;
图4为不同pH条件下7AAP与POM自组装反应液的浊度曲线图;
图5为pH=3时制备的7AAP/POM复合水凝胶微球在不同温度下的浊度变化曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(1)配制7AAP溶液:将0.010g7AAP在室温下溶解于盛有100μl1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇的EP管中,超声60s;
(2)配制POM溶液;将0.0065g POM溶解于盛有50mL蒸馏水的EP管中,超声60s;调节pH至1;
(3)制备7AAP/POM复合水凝胶微球:用移液枪吸取1.0mL POM溶液加入盛有10.0μl7AAP溶液的EP管中,用手稍微震荡,静置陈化2h即得到7AAP/POM复合水凝胶微球。
实施例2
(1)配制7AAP溶液:将0.010g7AAP在室温下溶解于盛有100μl1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇的EP管中,超声60s;
(2)配制POM溶液;将0.0065gPOM溶解于盛有50ml蒸馏水的EP管中,超声60s;调节pH至4;
(3)制备7AAP/POM复合水凝胶微球:用移液枪吸取5mlPOM溶液加入盛有10.0μl7AAP溶液的EP管中,用手稍微震荡,静置陈化6h即得到7AAP/POM复合水凝胶微球。
实施例3
(1)配制7AAP溶液:将0.010g7AAP在室温下溶解于盛有100μl1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇的EP管中,超声60s;
(2)配制POM溶液;将0.0065g POM溶解于盛有50mL蒸馏水的EP管中,超声60s;调节pH至5;
(3)制备7AAP/POM复合水凝胶微球:用移液枪吸取1.0ml POM溶液加入盛有20.0μl7AAP溶液的EP管中,用手稍微震荡,静置陈化2h即得到7AAP/POM复合水凝胶微球。
实施例4
(1)配制7AAP溶液:将0.010g7AAP在室温下溶解于盛有100μl1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇的EP管中,超声60s;
(2)配制POM溶液;将0.0065g POM溶解于盛有50ml蒸馏水的EP管中,超声60s;调节pH至7;
(3)制备7AAP/POM复合水凝胶微球:用移液枪吸取10ml POM溶液加入盛有50.0μl7AAP溶液的EP管中,用手稍微震荡,静置陈化12h即得到7AAP/POM复合水凝胶微球。
Claims (6)
1.一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,包括:
(1)将七肽7AAP溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇七肽复合水凝胶微球,磷钨酸POM溶于蒸馏水中;
(2)室温下取1-10ml POM水溶液加入到10-50μl 7AAP溶液中,稍微震荡,静置陈化2-12h,得到七肽复合水凝胶微球。
2.根据权利要求1所述的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的七肽序列为Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe。
3.根据权利要求1所述的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的POM结构为Keggin-type结构。
4.根据权利要求1所述的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述的POM水溶液的浓度为0.025×10-3-0.8×10-3g/ml,7AAP溶液的浓度为0.03-0.48g/ml。
5.根据权利要求1所述的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,其特征在于:步骤(2)中所述的POM水溶液的pH范围为1-7。
6.根据权利要求1所述的一种七肽复合水凝胶微球的制备方法,其特征在于:步骤(2)中静置陈化容器为5.0ml的EP管。
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