CN104335897A - 一种组织培养香桃木的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种组织培养香桃木的方法，取香桃木春季萌发的幼条去枝叶，依次接种在腋芽诱导培养基、增殖培养基、不定芽壮苗培养基、生根培养基上，经过芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养、炼苗与移栽步骤组织培养获得香桃木植株。与现有技术相比，本发明在提高香桃木的繁殖速度和苗的整齐度，采用了不同营养组成成分的培养基，进一步提高了香桃木的增殖系数。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及一种组织培养香桃木的方法。
背景技术
香桃木为桃金娘科香桃木属植物，原产地中海沿岸，常绿灌木，叶革质；花白色，雄蕊多数，较长，花型优美，6-7月；植株自然成型，可修剪造型，枝叶茂密，冬季常绿，色彩鲜亮，观赏效果好，初夏观花，生长季观叶，植株耐修剪，且病虫害少，可用做彩篱或片植；叶揉碎后有香味，可用做芳香保健园配置。通过组培技术，可提高繁殖速度和苗的整齐度，但是目前来说，能够很好地进行香桃木组织培养方法的报道尚未见。
申请号为200910049967.8的中国专利公开了一种花叶香桃木的组织培养方法，包括无菌材料的获取、芽分化和增殖、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，通过该方法可以提高花叶香桃木的繁殖速度和苗的整齐度，减少变异，但是，采用该种方法组织培养得到的花叶香桃木，增殖系数没有有效提高，减少了该种植物的使用场合。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种提高了增殖系数的组织培养香桃木的方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种组织培养香桃木的方法，该方法包括以下步骤：
(1)取香桃木春季萌发的幼条去枝叶，冲洗30分钟后用75wt％的乙醇浸泡30s，1wt‰升汞浸泡15min，再利用无菌水冲洗5-6次，吸干表面水份，切成1cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上；
(2)带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上培养1个月，腋芽长至3-4cm，切下小芽放入增殖培养基中进行增殖培养；
(3)腋芽经增殖培养诱导出丛生芽，每丛有2-3株伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛后，转至不定芽壮苗培养基中培养，不定芽20天后长至2-3cm；
(4)将不定芽壮苗培养基中植株转入到生根培养基中诱导生根30天，根系长至1cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，然后取出后洗净根部琼脂，在大棚中炼苗驯化50天后获得的香桃木即可移栽或上盆；
其中，
腋芽诱导培养基的组成成分包括MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L、MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L或MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L；
增殖培养基的组成成分包括MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA2g/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L；
不定芽壮苗培养基的组成成分包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L；
生根培养基的组成成分包括MS+NAA0.1mg/L、MS+NAA0.2mg/L或MS+NAA0.3mg/L。
作为优选的实施方式，腋芽诱导培养基的组成成分优选MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L。
作为优选的实施方式，增殖培养基的组成成分优选MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
作为优选的实施方式，不定芽壮苗培养基的组成成分优选MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
作为优选的实施方式，生根培养基的组成成分优选MS+NAA0.2mg/L。
另外，上述培养基的pH值为5.8，培养基的基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L。
步骤(1)-(4)中进行组织培养的温度为24-26℃，组织培养时的光照强度为80μmol/m2·s。
与现有技术相比，本发明在提高香桃木的繁殖速度和苗的整齐度，采用了不同营养组成成分的培养基，进一步提高了香桃木的增殖系数。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
组织培养香桃木的方法，进行组织培养的温度为24℃，组织培养时的光照强度为80μmol/m2·s。该方法包括以下步骤：
(1)春季取萌发的幼嫩的枝条，去枝叶后用自来水冲洗30分钟后于超净工班工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，切成1cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上，采用的培养基的营养组成成分为MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8；
(2)芽段接种于腋芽诱导培养基上2周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后可见明显的芽分生组织，培养1个月，腋芽可以长到3-4cm长，切下小芽放入增殖培养基中进行增殖培养，本实施例中采用的增殖培养的营养组成成分为MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)在增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛后，转至不定芽壮苗培养基进行壮芽培养，不定芽壮苗培养基的的营养组成成分为MS+6-BA2g/L+NAA0.2mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，不定芽迅速伸长，20天后可以长至2-3cm；
(4)取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，本实施例采用的生根培养基的营养组成成分为MS+NAA0.1mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm，生根率为90％；
(5)生根培养30天根系长至1cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在大棚中炼苗驯化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率为80％，增殖系数跟普通的香桃木相比，能够提高30％，每棵植株上的发芽数平均有30％的提高。
实施例2
组织培养香桃木的方法，进行组织培养的温度为25℃，组织培养时的光照强度为80μmol/m2·s。该方法包括以下步骤：
(1)春季取萌发的幼嫩的枝条，去枝叶后用自来水冲洗30分钟后于超净工班工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，切成1cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上，采用的培养基的营养组成成分为MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8；
(2)芽段接种于腋芽诱导培养基上2周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后可见明显的芽分生组织，培养1个月，腋芽可以长到3-4cm长，切下小芽放入增殖培养基中进行增殖培养，本实施例中采用的增殖培养的营养组成成分为MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)在增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛后，转至不定芽壮苗培养基进行壮芽培养，不定芽壮苗培养基的的营养组成成分为MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，不定芽迅速伸长，20天后可以长至2-3cm；
(4)取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，本实施例采用的生根培养基的营养组成成分为MS+NAA0.2mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm，生根率为90％；
(5)生根培养30天根系长至1cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在大棚中炼苗驯化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率为80％，增殖系数跟普通的香桃木相比，能够提高50％，每棵植株上的发芽数平均有50％的提高。
实施例3
组织培养香桃木的方法，进行组织培养的温度为26℃，组织培养时的光照强度为80μmol/m2·s。该方法包括以下步骤：
(1)春季取萌发的幼嫩的枝条，去枝叶后用自来水冲洗30分钟后于超净工班工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，切成1cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上，采用的培养基的营养组成成分为MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8；
(2)芽段接种于腋芽诱导培养基上2周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后可见明显的芽分生组织，培养1个月，腋芽可以长到3-4cm长，切下小芽放入增殖培养基中进行增殖培养，本实施例中采用的增殖培养的营养组成成分为MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，基部愈伤组织比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；
(3)在增殖培养基上，诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛后，转至不定芽壮苗培养基进行壮芽培养，不定芽壮苗培养基的的营养组成成分为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，不定芽迅速伸长，20天后可以长至2-3cm；
(4)取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，本实施例采用的生根培养基的营养组成成分为MS+NAA0.3mg/L，基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，pH值为5.8，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm，生根率为90％；
(5)生根培养30天根系长至1cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在大棚中炼苗驯化50天后，即可移栽或上盆，移栽成活率为80％，增殖系数跟普通的香桃木相比，能够提高35％，每棵植株上的发芽数平均有35％的提高。
Claims (7)
1.一种组织培养香桃木的方法，该方法包括以下步骤：
(1)取香桃木春季萌发的幼条去枝叶，冲洗30分钟后用75wt％的乙醇浸泡30s，1wt‰升汞浸泡15min，再利用无菌水冲洗5-6次，吸干表面水份，切成1cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上；
(2)带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上培养1个月，腋芽长至3-4cm，切下小芽放入增殖培养基中进行增殖培养；
(3)腋芽经增殖培养诱导出丛生芽，每丛有2-3株伸长，其余处于矮化状态，将其分成小丛后，转至不定芽壮苗培养基中培养，不定芽20天后长至2-3cm；
(4)将不定芽壮苗培养基中植株转入到生根培养基中诱导生根30天，根系长至1cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，然后取出后洗净根部琼脂，在大棚中炼苗驯化50天后获得的香桃木即可移栽或上盆；
其特征在于，
所述的腋芽诱导培养基的组成成分包括MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L、MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L或MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L；
所述的增殖培养基的组成成分包括MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L；
所述的不定芽壮苗培养基的组成成分包括MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L、MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L；
所述的生根培养基的组成成分包括MS+NAA0.1mg/L、MS+NAA0.2mg/L或MS+NAA0.3mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，所述的腋芽诱导培养基的组成成分优选MS+6-BA4mg/L+NAA0.4mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，所述的增殖培养基的组成成分优选MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，所述的不定芽壮苗培养基的组成成分优选MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，所述的生根培养基的组成成分优选MS+NAA0.2mg/L。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，上述培养基的pH值为5.8，培养基的基本成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的一种组织培养香桃木的方法，其特征在于，步骤(1)-(4)中进行组织培养的温度为24-26℃，组织培养时的光照强度为80μmol/m2·s。
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| CN106106192A (zh) * | 2016-08-29 | 2016-11-16 | 李军 | 一种嘉宝果组织培养体系的建立方法 |
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