CN104323047A - 用于提高犊牛免疫机能的乳饲料 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于提高犊牛免疫机能的乳饲料，其原料包括玉米、秸秆、鱼粉、骨粉、碳酸钙、食盐、硫酸铜、亚硒酸钠、啤酒糟和用于提高犊牛免疫机能的中药饲料添加剂。该乳饲料含有的饲料添加剂具有天然无毒、无副作用、不残留、安全等优势，可以显著提高犊牛的免疫机能，促进犊牛的健康生长。

Description

用于提高犊牛免疫机能的乳饲料

技术领域

本发明涉及动物饲料技术领域，尤其涉及一种用于提高犊牛免疫机能的乳饲料。

背景技术

初生犊牛由于得不到初乳或乳量不足，使体内形成抗体的免疫球蛋白来源不足，引起犊牛抗病力降低，从而诱发多种疾病，同时抗生素的大量使用严重危害犊牛健康，不仅没有提高犊牛的成活率，而且使犊牛生长缓慢。半个多世纪以来，抗生素的应用为犊牛健康生长的飞速发展起了极大的推动作用，但其副作用也日益明显。

随着我国集约化养殖业的快速发展，特别是在“回归自然”绿色浪潮的推动下，中草药在畜禽业中的应用越来越普遍。中草药能增强畜禽免疫功能，提高抗病能力已得到广泛证实。中草药是人类最早应用的纯天然物质。经过几千年理论与实践的检验，己经确定中草药对机体毒副作用小,并具有抗病毒、抗菌、抗寄生虫、抗应激、增加维生素和矿物质及增强免疫等作用。为确保奶牛业的健康，快速发展，开发药物残留量少"安全可靠的犊牛中药添加剂具有重要意义。

本发明提供的中草药具有天然无毒、无副作用、不残留、安全等优势，通过制作成饲料添加剂喂食犊牛，可以显著提高犊牛的免疫机能，促进犊牛的健康生长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于提高犊牛免疫机能的乳饲料，其含有的饲料添加剂具有天然无毒、无副作用、不残留、安全等优势，可以显著提高犊牛的免疫机能，促进犊牛的健康生长。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于提高犊牛免疫机能的乳饲料，其原料包括玉米、秸秆、鱼粉、骨粉、碳酸钙、食盐、硫酸铜、亚硒酸钠、啤酒糟和用于提高犊牛免疫机能的中药饲料添加剂。

其中，所述乳饲料中各组成原料的重量分别为玉米4kg~5kg、秸秆5.5kg~6.5kg、鱼粉0.6kg~0.7kg、骨粉0.1kg~0.3kg、碳酸钙0.08kg~0.12kg、食盐0.08kg~0.12kg、硫酸铜0.02kg~0.04kg、亚硒酸钠0.02kg~0.04kg、啤酒糟0.1kg~0.3kg、所述中药饲料添加剂0.75kg~0.85kg。

其中，所述乳饲料中各组成原料的重量分别为玉米4.5kg、秸秆6kg、鱼粉0.65kg、骨粉0.2kg、碳酸钙0.1kg、食盐0.1kg、硫酸铜0.03kg、亚硒酸钠0.03kg、啤酒糟0.2kg、所述中药饲料添加剂0.8kg。

其中，所述中药饲料添加剂的原料包括葫芦巴、女贞子、蒲公英、明党参、黄芪、马尾连、贯筋藤、山矾叶、木蓝、秦艽、地枫皮、蓍草、天竺黄、金荞麦、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实。

其中，所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴20g～30g、女贞子45g～55g、蒲公英25g～35g、明党参15g～25g、黄芪45g～55g、马尾连10g～20g、贯筋藤10g～20g、山矾叶15g～25g、木蓝10g～20g、秦艽20g～30g、地枫皮20g～30g、蓍草15g～25g、天竺黄25g～35g、金荞麦25g～35g、肉苁蓉30g～40g、楮实子30g～40g、南沙参35g～45g和芡实25g～35g。

其中，所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴23g～27g、女贞子48g～52g、蒲公英28g～32g、明党参18g～22g、黄芪48g～52g、马尾连13g～17g、贯筋藤13g～17g、山矾叶18g～22g、木蓝13g～17g、秦艽23g～27g、地枫皮23g～27g、蓍草18g～22g、天竺黄28g～32g、金荞麦28g～32g、肉苁蓉33g～37g、楮实子33g～37g、南沙参38g～42g和芡实28g～32g。

其中，所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴25g、女贞子50g、蒲公英30g、明党参20g、黄芪50g、马尾连15g、贯筋藤15g、山矾叶20g、木蓝15g、秦艽25g、地枫皮25g、蓍草20g、天竺黄30g、金荞麦30g、肉苁蓉35g、楮实子35g、南沙参40g和芡实30g。

本发明还提供了上述乳饲料的制备方法，其包括：

第一步，制备所述中药饲料添加剂；

第二步，将余下组分分别粉碎成粉末状；

第三步，将第一步和第二步得到的物料一起投入搅拌机中，加入适量的水，搅拌均匀后倒入密闭遮光的容器内，发酵6-8天后，即得。

所述第一步进一步具体包括：

a、将女贞子、黄芪、山矾叶、木蓝、蓍草、天竺黄、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实按重量投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍15～30天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间15～25min；

b、将余下组分按重量混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量6～8倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量4～6倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末；

c、将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得中药饲料添加剂。

本发明的有益效果:

    本发明提供的乳饲料含有中药饲料添加剂，具有天然无毒、无副作用、不残留、安全等优势，可以显著提高犊牛的免疫机能，促进犊牛的健康生长。

具体实施方式

本发明提供了一种用于提高犊牛免疫机能的饲料添加剂，其原料包括葫芦巴、女贞子、蒲公英、明党参、黄芪、马尾连、贯筋藤、山矾叶、木蓝、秦艽、地枫皮、蓍草、天竺黄、金荞麦、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实。

进一步优选，所述饲料添加剂仅由上述原料构成。

所述饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴20g～30g、女贞子45g～55g、蒲公英25g～35g、明党参15g～25g、黄芪45g～55g、马尾连10g～20g、贯筋藤10g～20g、山矾叶15g～25g、木蓝10g～20g、秦艽20g～30g、地枫皮20g～30g、蓍草15g～25g、天竺黄25g～35g、金荞麦25g～35g、肉苁蓉30g～40g、楮实子30g～40g、南沙参35g～45g和芡实25g～35g。

进一步优选，所述饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴23g～27g、女贞子48g～52g、蒲公英28g～32g、明党参18g～22g、黄芪48g～52g、马尾连13g～17g、贯筋藤13g～17g、山矾叶18g～22g、木蓝13g～17g、秦艽23g～27g、地枫皮23g～27g、蓍草18g～22g、天竺黄28g～32g、金荞麦28g～32g、肉苁蓉33g～37g、楮实子33g～37g、南沙参38g～42g和芡实28g～32g。

最优选，所述饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴25g、女贞子50g、蒲公英30g、明党参20g、黄芪50g、马尾连15g、贯筋藤15g、山矾叶20g、木蓝15g、秦艽25g、地枫皮25g、蓍草20g、天竺黄30g、金荞麦30g、肉苁蓉35g、楮实子35g、南沙参40g和芡实30g。

各原料药理如下：

葫芦巴：性温，味苦，具有补肾阳，祛寒湿的功效，主治寒疝，腹胁胀满，寒湿脚气，肾虚腰酸，阳痿等证。

女贞子：味甘、苦，微寒，入肝、肾经，有强肝益肾，清热明目的作用，主要用于治疗肝肾阴亏，头目失养之头昏耳鸣，阴虚内热等症状。女贞子能提升白细胞，增强免疫功能的功效，对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌有较强的抑制作用。现代医学研究证明，女贞子内含熊果酸、甘露醇、葡萄糖、脂肪油等，有强心、利尿和保肝作用，能使因化疗引起的白细胞下降数量升高，并对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑制作用。

蒲公英：拉丁名 Taraxaci Herba，味甘、苦，性寒，入肝、胃经，具有清热解毒、消痈散结、清肝明目、利尿通淋的作用，主要用于疮疡肿毒的治疗，对乳痈效果尤其显著，亦可用于肝火上炎之目赤肿痛等症。

明党参：味甘、微苦，性微寒，归肺、脾、肝经，具有润肺化痰，养阴和胃，平肝解毒的功效，用于肺热咳嗽，呕吐反胃，食少口干，目赤眩晕，疔毒疮疡等证。

黄芪：拉丁名astragali radix：味甘、性温，归肺、脾经，有补益脾土，升举阳气，固表止汗，托疮生肌等作用，主要用于治疗脾肺气虚所致之乏力食少便溏，心悸气短，中气下陷之脏器下垂，气不摄血之崩漏便血，久泻脱肛；表虚不固之自汗盗汗；气血不足、阳气衰微之疮疡不起、脓成不溃、溃久不敛；以及气虚失运之水肿，小便不利等证。

马尾连：为毛莨科唐松草属植物金丝马尾连、昭通唐松草、高原唐松草、多叶唐松草的根及根茎，味苦，性寒，归心、肝、大肠经，具有清热燥湿，泻火解毒的功效，主治湿热泄泻，痢疾，黄疸，感冒发热，麻疹，目赤肿痛等证。

贯筋藤：为萝藦科南山藤属植物贯筋藤的全株，味微苦，性平，具有祛风、利湿，淋病，水肿，乳汁不下，外伤骨折等证。

山矾叶：为山矾科山矾属植物山矾的叶，味酸、涩、微甘，性平，具有清热解毒，下气，止血的功效，主治久痢，风火赤眼，扁桃体炎，中耳炎，咳嗽，呕吐，咳血，便血等证。

木蓝：为豆科木蓝属植物木蓝的茎叶，味微苦，性寒，具有清热解毒，凉血止血的功效，主治乙型脑炎，腮腺炎，急性咽喉炎，淋巴结炎，目赤，口疮，丹毒，疥癣，虫蛇咬伤，吐血等证。

秦艽：拉丁名Gentianae Macrophyllae Radix，味辛、苦，性微寒，归胃经、肝经、胆经，具有祛风湿，舒筋络，清虚热的功效，主治风湿痹痛，筋脉拘挛，骨节酸痛，日晡潮热，小儿疳积发热等证。

姜黄：拉丁名curcumae longae rhizoma，味苦、辛，性温，入肝经，具有破血行气，通经止痛的功效，用于胸胁剌痛，闭经，症瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等证。

山大黄：拉丁名Radix et Rhizome Rhei Franzenbachii，为蓼科植物波叶大黄的根及根茎，味苦；性寒，归胃；大肠经，具有泻热解毒；凉血行瘀的功效，主治湿热黄疸；痢疾；经闭腹痛；吐血衄血；跌打瘀痛；痈肿疔毒；口舌糜烂；烧烫伤等证。

地枫皮：拉丁名Magnoliaceae，味微辛、涩，性温，归膀胱、肾经，具有祛风除湿、行气止痛的功效，主治风湿痹痛、气滞腹痛、妇人经期腹痛等证。

蓍草：味辛；苦；性平温，具有祛风止痛；活血解毒的功效，主治感冒发热；头风痛；牙痛；风湿痹痛；血瘀经闭；腹部痞块；跌打损伤；毒蛇咬伤；痈肿疮毒等证。

天竺黄：味甘，性寒，具有清热豁痰，凉心定惊的功效，主治热病神昏谵妄，中风痰迷不语，小儿惊风抽搐，癫痫。 痰热咳嗽等证。

金荞麦：味辛、涩，性凉，归肺、胃、肝经，具有清热解毒；排脓祛瘀、祛风除湿的功效，主治肺痈，肺热咳喘，咽喉肿痛，痢疾，风湿痹证，跌打损伤，痈肿癌等证。

肉苁蓉：为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉和管花肉苁蓉的肉质茎，拉丁名herba cistanches，味甘、咸，性温，入肾，大肠经，有补肾阳、益精血，润肠通便的作用，用于肾阳虚衰，精血不足之阳痿早泄，不孕不育，腰膝酸痛，耳鸣耳聋，尿频尿数，肾虚肠燥及产后血虚、病后津液不足的便秘等证。

楮实子：味甘，性寒，归肝、肾经，具有补肾清肝，明目利尿的功效，主治肝肾不足、腰膝酸软、虚劳骨蒸、头晕目眩、水肿胀满等证。

南沙参：味甘、微苦，性微寒，入肺、胃经，有润肺止咳，养胃生津的作用，主要用于阴虚肺燥、干咳少痰、劳嗽痰血，胃阴不足、口感咽燥、大便秘结、舌红少苔等证，可提高细胞免疫和非特异性免疫力，抑制体液免疫，具有调节免疫平衡的功能。

芡实：味甘，涩，性平。归脾、肾经。具有益肾固精，补脾止泻，祛湿止带的功能，主治梦遗滑精，脾虚泄泻，脾虚白浊，带下等证。

本发明还提供了上述饲料添加剂的制备方法，具体包括：

第一步，将女贞子、黄芪、山矾叶、木蓝、蓍草、天竺黄、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实按重量投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍15～30天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间15～25min；

第二步，将余下组分按重量混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量6～8倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量4～6倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末；

第三步，将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得饲料添加剂。

本发明还提供了一种喂养犊牛的乳饲料，该乳饲料可以用于提高犊牛的免疫机能，其组成原料包括玉米、秸秆、鱼粉、骨粉、碳酸钙、食盐、硫酸铜、亚硒酸钠、啤酒糟、上述的用于提高犊牛免疫机能的中药饲料添加剂。

所述乳饲料仅由上述组成原料构成。

所述乳饲料中各组成原料的重量分别为玉米4kg~5kg、秸秆5.5kg~6.5kg、鱼粉0.6kg~0.7kg、骨粉0.1kg~0.3kg、碳酸钙0.08kg~0.12kg、食盐0.08kg~0.12kg、硫酸铜0.02kg~0.04kg、亚硒酸钠0.02kg~0.04kg、啤酒糟0.1kg~0.3kg、所述中药饲料添加剂0.75kg~0.85kg。

进一步优选，所述乳饲料中各组成原料的重量分别为玉米4.5kg、秸秆6kg、鱼粉0.65kg、骨粉0.2kg、碳酸钙0.1kg、食盐0.1kg、硫酸铜0.03kg、亚硒酸钠0.03kg、啤酒糟0.2kg、所述中药饲料添加剂0.8kg。

本发明还提供了上述乳饲料的制备方法，其包括：

第一步，制备所述中药饲料添加剂；

第二步，将余下组分分别粉碎成粉末状；

第三步，将第一步和第二步得到的物料一起投入搅拌机中，加入适量的水，搅拌均匀后倒入密闭遮光的容器内，发酵6-8天后，即得。

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1 中药饲料添加剂1

将女贞子50g、黄芪50g、山矾叶20g、木蓝15g、蓍草20g、天竺黄30g、肉苁蓉35g、楮实子35g、南沙参40g和芡实30g投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍20天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间25min，将葫芦巴25g、蒲公英30g、明党参20g、马尾连15g、贯筋藤15g、秦艽25g、地枫皮25g、金荞麦30g混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量7倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量5倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末，将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得中药饲料添加剂1。

实施例2 中药饲料添加剂2

将女贞子48g、黄芪48g、山矾叶18g、木蓝13g、蓍草18g、天竺黄28g、肉苁蓉33g、楮实子33g、南沙参38g和芡实28g投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍20天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间25min，将葫芦巴23g、蒲公英28g、明党参18g、马尾连13g、贯筋藤13g、秦艽23g、地枫皮23g、金荞麦28g混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量7倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量5倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末，将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得中药饲料添加剂2。

实施例3 中药饲料添加剂3

将女贞子52g、黄芪52g、山矾叶22g、木蓝17g、蓍草22g、天竺黄32g、肉苁蓉37g、楮实子37g、南沙参42g和芡实32g投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍20天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间25min，将葫芦巴27g、蒲公英32g、明党参22g、马尾连17g、贯筋藤17g、秦艽27g、地枫皮27g、金荞麦32g混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量7倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量5倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末，将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得中药饲料添加剂3。

实施例4 毒理学实验

急性毒性实验

通过小白鼠一次性灌胃给予本发明提供的中药饲料添加剂1，最大灌胃容量0.6ml/10g，剂量190g(生药)/kg，连续观察7天，未发现任何毒性反应，因浓度和剂量无法增加，故未能测出该药的LD ₅₀ 。 最大耐受量测定：以最高浓度，最大灌胃容量，小白鼠灌胃给药3次，间隔5小时，然后连续观察7天，无一例死亡。

长期毒性实验

本试验用Wistar大鼠，经口服(灌胃)给予本实施例1中的中药饲料添加剂1，生药量73.6g·kg^-1(体重)。将该中药饲料添加剂1溶解在水中，连续灌胃给药12周，可逆性观察2周。实验结果表明，经给药期及停药后可逆性观察，受试动物一般状态良好，给药期间四组大鼠食量和体重增长基本一致；血常规及血液生化检测均表明该制剂对受试动物造血系统、肝功能、肾功能均无不良影响；肉眼及镜下病理学检查未见与毒性有关的病理变化；停药后无继发性毒性反应发生。

累计毒性实验

本发明提供的中药饲料添加剂1溶解在水中，对小鼠按8.69、23.17和51.33g生药/kg连续用药15周及停药3周后，结果表明：本发明中药制剂对大鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，用药15周及停药3周后，大鼠各脏器均无明显改变。说明本发明中药饲料添加剂1对大鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，应用安全。

实施例5 饲料1

将玉米4.5kg、秸秆6kg、鱼粉0.65kg、骨粉0.2kg、碳酸钙0.1kg、食盐0.1kg、硫酸铜0.03kg、亚硒酸钠0.03kg、啤酒糟0.2kg分别粉碎成粉末，将这些粉末与实施例1制备的中药饲料添加剂0.8kg一起投入搅拌机中，加入1L水，搅拌均匀后倒入密闭遮光的容器内，发酵8天后，即得饲料1。

比较例1 饲料2

将玉米4.5kg、秸秆6kg、鱼粉0.65kg、骨粉0.2kg、碳酸钙0.1kg、食盐0.1kg、硫酸铜0.03kg、亚硒酸钠0.03kg、啤酒糟0.2kg分别粉碎成粉末，将这些粉末投入搅拌机中，加入1L水，搅拌均匀后倒入密闭遮光的容器内，发酵8天后，即得饲料2。

实施例6 饲养试验

试验饲料

实施例5制备的饲料1和比较例1制备的饲料2。

试验动物

3-5 日龄新生健康奶犊牛 200头。

试验试剂

抗凝剂，HEPES缓冲液，PBS缓冲液，PHA溶液，犊牛血清，RPMI-1640培养液，Hank’s液，0.2％美兰溶液，肝素钠，柠檬酸钠液，青霉素100μg/mL和链霉素100μg/mL（双抗），碳酸氢钠，蒸馏水，去离子水，酵母干粉等。

试验方法

将200头健康新出生的犊牛随机分为2组，分别为试验组和对照组，试验组喂食本发明实施例5制备的饲料1，对照组喂食本发明比较例1制备的饲料2，同时两组不予断奶，吮乳 150 d。两组连续喂食3个月，分别在第30天、第60天、第70天颈静脉采血，进行红细胞C3b受体花环形成试验、T淋巴细胞E~玫瑰花环试验及淋巴细胞转化率的测定。分离血清置-80℃冻存，用以检测免疫球蛋白含量。

红细胞C3b受体花环形成试验

红细胞悬液制备

无菌采集犊牛颈静脉抗凝血，用PBS洗涤3次(每次以1500r/min离心10min)，最后将红细胞用生理盐水配成1%悬液备用。

致敏酵母悬液制备

取酵母干粉适量，用PBS缓冲液洗涤3次，煮沸20min，洗涤2次，配成3%悬液。取悬液0.04mL加于0.5mL离心管中，再加等量小鼠血清，混匀，37℃放置30min。取出后用PBS洗一次，恢复原体积备用。

检测方法

在装有致敏酵母细胞的离心管中加入浅的红细胞悬液，轻轻混匀，37℃水浴30min。取出后以800r/min离心5min，小心弃上清，留下少许液体，立即沿管壁加入一滴0.25%戊二醛，轻轻转动离心管，小心混匀，固定2～3min。取一滴悬液推片，吹干，甲醇固定，瑞氏染色5min，油镜检查。

结果判定

以一个红细胞黏附2个或2个以上酵母细胞为1个花环，计数200个红细胞，计算出花环率。

T淋巴细胞E～玫瑰花环形成试验

绵羊红细胞（SRBC）悬液的制备

无菌颈静脉采取绵羊血，置于阿氏液中，吸取红细胞，用3～5倍量的Hank’s配成1%红细胞悬液。

淋巴细胞悬液的制备

取灭菌试管，加入肝素，从待检动物采血5~10mL，摇动混匀后静置1h，另取离心管或小试管，加淋巴细胞分层液1.5～2mL，吸取富含白细胞的血浆约1mL，沿管壁徐徐重叠于分层液上，以2000r/min离心20min，离心完毕后，乳白色细胞层即为淋巴细胞，粒细胞及红细胞沉于管底。将淋巴细胞移入加有3～5mLHank’s液的小试管中，以1500r/min离心10min，弃去上清液，轻轻使细胞悬浮，再用Hank’s液离心洗涤，重复3次，最后弃去上清液。用含10%小牛血清的Hank’s液稀释淋巴细胞，使细胞数为5×10⁶/mL，即制成淋巴细胞悬液。

制片观察、计算E～玫瑰花环形成率

用毛细吸管吸去部分上清液，轻轻混匀细胞。取1滴细胞悬液放置清洁玻片上，加1滴0.2％美兰溶液，盖上盖玻片，用高倍显微镜观察，可见淋巴细胞呈蓝色或淡蓝色，周围围绕SRBC.(无色)形成花环，吸附3个及3个以上SRBC的淋巴细胞为阳性花环细胞。

E～玫瑰花环形成率＝形成花环细胞数/（形成花环细胞数＋未形成花环细胞数）×100％

淋巴细胞转化率的测定

操作方法

细胞培养液的配制：用滤器过滤RPMI-1640，取4 0 m L ， 加10mL灭活的小牛血清 ， 加入双抗5000IU，混合后用7.5%碳酸氢钠调节pH值至7.2，于4℃保存待用。取肝素抗凝血，分别加入两支盛有3mL培养液的小瓶中，一瓶加入3mL，置于37℃作用30min，使红细胞裂解，再离心取沉淀做成涂片，染色，镜检。

淋巴细胞转化率的判定

计数200个淋巴细胞，在油镜下观察转化的个数。判定标准见《医学免疫学实验技术》。

淋巴细胞转化率＝[转化的淋巴细胞数/（转化的＋未转化的淋巴细胞数）]×100％。

结果

中药饲料添加剂对犊牛血清中免疫球蛋白IgG含量的影响/mg·mL^-1，结果见表1。

表1 犊牛血清中免疫球蛋白IgG含量的影响

从表1可以看出，喂食30日，试验组的IgG含量明显提高，且提高量显著高于对照组，P<0.05，喂食60日和喂食90日，试验组的IgG含量更加高，且显著高于对照组，P<0.01。

中药饲料添加剂对犊牛血清中免疫球蛋白IgA含量的影响/mg·100mL^-1，结果见表2。

表2 犊牛血清中免疫球蛋白IgA含量的影响

从表2可以看出，喂食30日，试验组的IgA含量明显提高，且提高量显著高于对照组，P<0.05，喂食60日和喂食90日，试验组的IgA含量更加高，且显著高于对照组，P<0.01。

中药饲料添加剂对犊牛血清中免疫球蛋白IgM含量的影响/mg·100mL^-1，结果见表3。

表3 犊牛血清中免疫球蛋白IgM含量的影响

从表3可以看出，喂食30日，试验组的IgM含量明显提高，喂食60日和喂食90日，试验组的IgM含量较为稳定，对对照组随着喂养时间的延长，IgM含量逐渐减少，试验组的IgM值显著高于对照组，P<0.01。

红细胞C3b受体花环形成率的影响，结果见表4。

表4 红细胞C3b受体花环形成率的影响

    从表4可以看出，采用本发明提供的中药饲料添加剂喂食，可以显著提高犊牛的红细胞C3b受体花环率，p<0.05。

E~玫瑰花环形成百分率的影响，结果见表5。

表5 E~玫瑰花环形成百分率的影响

从表5可以看出，试验组的E~玫瑰花环形成百分率显著高于对照组，p<0.01。

淋巴细胞转化率的影响，结果见表6。

表6  淋巴细胞转化率的影响

    从表6可以看出，采用本发明提供的中药饲料添加剂可以显著提高犊牛的淋巴细胞转化率，与对照组相比，差异显著，p<0.01。

细胞免疫是T细胞介导的一种重要免疫反应。T淋巴细胞转化和E～玫瑰花环形成试验是测定机体细胞免疫功能的重要指标。通过红细胞C3b受体花环形成率、E～玫瑰花环形成率和淋巴细胞转化率来探讨犊牛机体免疫情况，结果表明，本发明提供的中药饲料添加剂对犊牛E～玫瑰花环和淋巴细胞的形成率有明显的促进作用，可明显提高犊牛的细胞免疫水平。

 所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (9)

1.一种用于提高犊牛免疫机能的乳饲料，其特征在于：原料包括玉米、秸秆、鱼粉、骨粉、碳酸钙、食盐、硫酸铜、亚硒酸钠、啤酒糟和用于提高犊牛免疫机能的中药饲料添加剂。

2.如权利要求1所述的乳饲料，其特征在于：各组成原料的重量分别为玉米4kg~5kg、秸秆5.5kg~6.5kg、鱼粉0.6kg~0.7kg、骨粉0.1kg~0.3kg、碳酸钙0.08kg~0.12kg、食盐0.08kg~0.12kg、硫酸铜0.02kg~0.04kg、亚硒酸钠0.02kg~0.04kg、啤酒糟0.1kg~0.3kg、所述中药饲料添加剂0.75kg~0.85kg。

3.如权利要求1或2所述的乳饲料，其特征在于：各组成原料的重量分别为玉米4.5kg、秸秆6kg、鱼粉0.65kg、骨粉0.2kg、碳酸钙0.1kg、食盐0.1kg、硫酸铜0.03kg、亚硒酸钠0.03kg、啤酒糟0.2kg、所述中药饲料添加剂0.8kg。

4.如权利要求1至3所述的乳饲料，其特征在于：所述中药饲料添加剂的原料包括葫芦巴、女贞子、蒲公英、明党参、黄芪、马尾连、贯筋藤、山矾叶、木蓝、秦艽、地枫皮、蓍草、天竺黄、金荞麦、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实。

5.如权利要求1至4所述的乳饲料，其特征在于：所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴20g～30g、女贞子45g～55g、蒲公英25g～35g、明党参15g～25g、黄芪45g～55g、马尾连10g～20g、贯筋藤10g～20g、山矾叶15g～25g、木蓝10g～20g、秦艽20g～30g、地枫皮20g～30g、蓍草15g～25g、天竺黄25g～35g、金荞麦25g～35g、肉苁蓉30g～40g、楮实子30g～40g、南沙参35g～45g和芡实25g～35g。

6.如权利要求1至5所述的乳饲料，其特征在于：所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴23g～27g、女贞子48g～52g、蒲公英28g～32g、明党参18g～22g、黄芪48g～52g、马尾连13g～17g、贯筋藤13g～17g、山矾叶18g～22g、木蓝13g～17g、秦艽23g～27g、地枫皮23g～27g、蓍草18g～22g、天竺黄28g～32g、金荞麦28g～32g、肉苁蓉33g～37g、楮实子33g～37g、南沙参38g～42g和芡实28g～32g。

7.如权利要求1至6所述的乳饲料，其特征在于：所述中药饲料添加剂中各原料的重量分别为葫芦巴25g、女贞子50g、蒲公英30g、明党参20g、黄芪50g、马尾连15g、贯筋藤15g、山矾叶20g、木蓝15g、秦艽25g、地枫皮25g、蓍草20g、天竺黄30g、金荞麦30g、肉苁蓉35g、楮实子35g、南沙参40g和芡实30g。

8.权利要求1至7所述乳饲料的制备方法，其特征在于，包括：

第一步，制备所述中药饲料添加剂；

第二步，将余下组分分别粉碎成粉末状；

第三步，将第一步和第二步得到的物料一起投入搅拌机中，加入适量的水，搅拌均匀后倒入密闭遮光的容器内，发酵6-8天后，即得。

9.权利要求1至7所述乳饲料的制备方法，其特征在于：

所述第一步进一步具体包括，

a、将女贞子、黄芪、山矾叶、木蓝、蓍草、天竺黄、肉苁蓉、楮实子、南沙参和芡实按重量投入粉碎机粉碎成细粉，放入耐酸碱浸渍锅，在常温下，与60℃白酒一起渍15～30天，白酒的添加量没过细粉，将浸渍好的液体及药渣进行压榨过滤，分离后取滤液，滤渣备用；静置然后去上清液，留下的液体放入烘箱烘干，制成第一粉末，在烘箱干燥的温度为105℃,干燥时间15～25min；

b、将余下组分按重量混合，加水煎煮两次，第1次加相对于混合物质量6～8倍量水，煎煮2小时，第2次加相对于混合物质量4～6倍量水，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml约含1g药材的清膏，加入盐酸调pH为1，边加边搅拌，静置，沉淀物抽滤至干，取出沉淀物干燥，粉碎，获得第二粉末；

c、将第一粉末和第二粉末混合，加入相对于混合粉末质量2倍量的淀粉，获得中药饲料添加剂。