CN103638471B

CN103638471B - 用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂

Info

Publication number: CN103638471B
Application number: CN201310692046.XA
Authority: CN
Inventors: 王春元; 崔亮亮; 张瑞丽
Original assignee: QINGDAO BAIHUIZHIYE BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: Qingdao wisdom Agriculture Technology Service Co., Ltd.
Priority date: 2013-12-17
Filing date: 2013-12-17
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2033-12-17
Also published as: CN103638471A

Abstract

本发明提供了一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂，其原料药包括黄芪、白术、当归、枸杞子、山麦冬、石斛、大枣、桑白皮、鸡血藤、姜黄、侧柏叶、栀子、鱼腥草、青蒿、三楞草、山柰、八宝茶、小茴香、肉豆蔻、核桃仁、莱菔子和苏木。该免疫制剂具有资源丰富、低毒、经济、环保等优点，能够提高饲料转化率、增强免疫力、预防疾病。

Description

用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂

技术领域

本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂。

背景技术

在现代集约化养猪生产中广泛采用早期断奶技术，仔猪离开母猪后，在饲养环境和营养突然改变，重新合群、建立新的等级秩序等不良因素的作用下，容易发生以生长缓慢和腹泻为主要特征的仔猪早期断奶应激综合症。由于这种疾病具有较高的发生率和死亡率，给养猪业带来了重大损失。

目前，在畜牧业生产中普遍采用在饲料中添加抗生素、激素、化学合成药物等来防治畜禽腹泻，长期使用这些物质，不仅易引起病原微生物产生耐药性、动物免疫力下降和产品品质下降等问题，并可造成畜产品及环境中的有害残留增加，严重威胁着人类健康。

中草药因其具有资源丰富、低毒、经济、环保等优点，并且能够促进畜禽生长、提高饲料转化率、增强免疫力、预防疾病、缓解应激、提高生长性能，而越来越受到人们的重视。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于提高仔猪免疫机能的中药免疫制剂，其具有资源丰富、低毒、经济、环保等优点，能够提高饲料转化率、增强免疫力、预防疾病。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂，其原料药包括黄芪、白术、当归、枸杞子、山麦冬、石斛、大枣、桑白皮、鸡血藤、姜黄、侧柏叶、栀子、鱼腥草、青蒿、三楞草、山柰、八宝茶、小茴香、肉豆蔻、核桃仁、莱菔子和苏木。

其中，所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪75g~85g、白术35g~45g、当归30g~40g、枸杞子45g~55g、山麦冬25g~35g、石斛30g~40g、大枣25g~35g、桑白皮30g~40g、鸡血藤25g~35g、姜黄30g~40g、侧柏叶25g~35g、栀子30g~40g、鱼腥草20g~30g、青蒿30g~40g、三楞草25g~35g、山柰30g~40g、八宝茶20g~30g、小茴香15g~25g、肉豆蔻10g~20g、核桃仁20g~30g、莱菔子35g~45g和苏木20g~30g。

其中，所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g~85g、白术40g~45g、当归35g~40g、枸杞子50g~55g、山麦冬30g~35g、石斛35g~40g、大枣30g~35g、桑白皮30g~35g、鸡血藤25g~30g、姜黄30g~35g、侧柏叶25g~30g、栀子30g~35g、鱼腥草20g~25g、青蒿30g~35g、三楞草25g~30g、山柰30g~35g、八宝茶20g~25g、小茴香15g~20g、肉豆蔻10g~15g、核桃仁20g~25g、莱菔子35g~40g和苏木20g~25g。

其中，所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g、白术40g、当归35g、枸杞子50g、山麦冬30g、石斛35g、大枣30g、桑白皮35g、鸡血藤30g、姜黄35g、侧柏叶30g、栀子35g、鱼腥草25g、青蒿35g、三楞草30g、山柰35g、八宝茶25g、小茴香20g、肉豆蔻15g、核桃仁25g、莱菔子40g和苏木25g。

本发明还提供了上述中药免疫制剂的制备方法，具体为：

第一步，将各原料药组分分别进行粉碎处理，得到粗粉末，将各个粗粉末混合，获得混合物；

第二步，将第一步获得的混合物进行第一次水煎煮处理，煎煮时间为2～4小时，优选为3小时，所加入的水的量与混合物的质量之比为6～10:1，煎煮液过滤，获得第一次煎煮液；

第三步，将第一次煎煮液过滤后的药渣进行第二次煎煮处理，煎煮时间为2～4小时，优选为3小时，所加入的水的量与第一步获得的混合物的质量之比为6～10:1，煎煮液过滤，获得第二次煎煮液；

第四步，合并第一次煎煮液和第二次煎煮液，浓缩，获得混合物清膏，清膏的相对密度为1.10～1.20(70℃)；

第五步，在混合物清膏中加入醇浓度为95%的乙醇，获得含醇清膏，所加入的乙醇量与清膏之间的质量比为2:1～3:1；

第六步，将含醇清膏在室温下静置12～24h，取上清液，将清膏残渣进行过滤处理，过滤的液体与上清液合并，减压浓缩并干燥，获得干膏，粉碎成粉末，加入相对于该粉末质量1/10的淀粉，混合搅拌均匀，获得免疫制剂。

本发明还提供了一种用于提高仔猪免疫机能的饲料，其原料包括：玉米、豆粕、鱼粉、磷酸氢钙、食盐、用于提高仔猪免疫机能的中药免疫制剂和维生素预混料。

其中，所述饲料中各原料的重量份分别为玉米60重量份~70重量份、豆粕20重量份~30重量份、鱼粉5重量份~10重量份、磷酸氢钙2重量份~5重量份、食盐0.5重量份~1.5重量份、用于提高仔猪免疫机能的中药免疫制剂10重量份~15重量份、维生素预混料1重量份~3重量份。

进一步优选，所述饲料中各原料的重量份分别为玉米65重量份、豆粕25重量份、鱼粉8重量份、磷酸氢钙3重量份、食盐1重量份、用于提高仔猪免疫机能的中药免疫制剂12重量份、维生素预混料2重量份。

本发明还提供了上述饲料的制备方法，具体为将饲料中的各添加原料粉碎，混合搅拌均匀，获得饲料。

本发明的有益效果:

本发明提供的中药免疫制剂具有资源丰富、低毒、经济、环保等优点，其能够提高饲料转化率、增强免疫力、预防疾病。

具体实施方式

本发明提供了一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂，其原料药包括黄芪、白术、当归、枸杞子、山麦冬、石斛、大枣、桑白皮、鸡血藤、姜黄、侧柏叶、栀子、鱼腥草、青蒿、三楞草、山柰、八宝茶、小茴香、肉豆蔻、核桃仁、莱菔子和苏木。

进一步，所述免疫制剂仅由上述原料药构成。

所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪75g~85g、白术35g~45g、当归30g~40g、枸杞子45g~55g、山麦冬25g~35g、石斛30g~40g、大枣25g~35g、桑白皮30g~40g、鸡血藤25g~35g、姜黄30g~40g、侧柏叶25g~35g、栀子30g~40g、鱼腥草20g~30g、青蒿30g~40g、三楞草25g~35g、山柰30g~40g、八宝茶20g~30g、小茴香15g~25g、肉豆蔻10g~20g、核桃仁20g~30g、莱菔子35g~45g和苏木20g~30g。

进一步，所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g~85g、白术40g~45g、当归35g~40g、枸杞子50g~55g、山麦冬30g~35g、石斛35g~40g、大枣30g~35g、桑白皮30g~35g、鸡血藤25g~30g、姜黄30g~35g、侧柏叶25g~30g、栀子30g~35g、鱼腥草20g~25g、青蒿30g~35g、三楞草25g~30g、山柰30g~35g、八宝茶20g~25g、小茴香15g~20g、肉豆蔻10g~15g、核桃仁20g~25g、莱菔子35g~40g和苏木20g~25g。

最优选，所述中药免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g、白术40g、当归35g、枸杞子50g、山麦冬30g、石斛35g、大枣30g、桑白皮35g、鸡血藤30g、姜黄35g、侧柏叶30g、栀子35g、鱼腥草25g、青蒿35g、三楞草30g、山柰35g、八宝茶25g、小茴香20g、肉豆蔻15g、核桃仁25g、莱菔子40g和苏木25g。

方中，各原料药的药理如下：

黄芪：拉丁名astragali radix，味甘，性温，入脾、肺经，有补益脾肺，升举阳气、固表止汗，托疮生肌等功效，主要用于脾肺气虚所致之乏力食少便溏，心悸气短，中气下陷之脏器下垂，气不摄血之崩漏便血，久泻脱肛；表虚不固之自汗盗汗，气血不足等证。

白术：拉丁名atractylodis macrocephalae rhizoma，味甘、苦，性温，入脾、胃经，有补脾利气，燥湿利水，固表止汗，运脾润燥的作用，主要用于脾失健运、气不化水所致之痞满腹泻，痰饮水肿；中气不足之心烦懒言，崩中漏下，久痢脱肛；脾虚气弱之奏里不固、虚汗自汗等证。

当归：拉丁名angelicae sinensis radix，味甘、辛、苦，性温，入肝、心、脾经，有补血活血，调经止疼，润肠通便的作用。主要用于治疗心血不足之头目昏眩，倦怠乏力，心悸气短，及其他血虚证；血海空虚，冲任虚寒或淤血阻滞之月经不调，量少衍期等症状。

枸杞子：拉丁名lycii fructus，味甘，性平，归肝经、肾经、肺经，其具有滋补肝肾，益精养血，明目消翳，润肺止咳的作用。主治肾虚骨痿，阳痿遗精，久不生育，早老早衰，须发早白，血虚萎黄，产后乳少，目暗不明，内外障眼，内热消渴，劳热骨蒸，虚痨咳嗽，干咳少痰等病证。

山麦冬：拉丁名liriopes radix，味甘、微苦，性微寒，归心、肺、胃经，具有养阴生津，润肺清心的功效，用于肺燥干咳，虚劳咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，肠燥便秘等证。

石斛：拉丁名 Dendrobii Caulis，性微寒，味甘，归胃、肾经，具有益胃生津，滋阴清热的功效，主治阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明等证。

大枣：拉丁名jujubae fructus，味甘，性温，入脾、胃经，具有补气健脾、养血安神、调和营卫、缓和药性的作用，用于脾胃虚弱，体倦乏力，食少便溏，气血不足，头痛发热，汗出热风等证。

桑白皮：拉丁名Mori Cortex，味甘，性寒，入肺经，具有泻肺平喘，利水消肿的功效，用于肺热咳喘，面目浮肿，小便不利等症。

鸡血藤：拉丁名spatholobi caulis，味苦、甘，性温，归肝、肾经，具有扩张血管，补血活血，调经，舒筋活络的功效，主治血虚有淤之月经不调，四肢疼痛不仁，腰膝酸软、疼痛等证。

姜黄：拉丁名curcumae longae rhizoma，味苦、辛，性温，入肝经，具有破血行气，通经止痛的功效，用于胸胁剌痛，闭经，症瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等证。

侧柏叶：拉丁名Platycladi Cacumen，味苦、涩，性寒，归肺、肝、脾经，具有凉血止血，化痰止咳，生发乌发的功效，主治吐血，咳血，便血，崩漏带下，肺热咳喘，血热脱发，须发早白等证。

栀子：拉丁名gardeniae fructus，味苦，性寒，入心、肺、三焦，有除烦泻火、疏肝解郁、清热利湿、凉血止血的作用，主要用于温热病热郁胸脘之心烦不安、烦扰不宁；肝郁不舒或肝经有热之头晕目眩，胸胁疼痛，目赤咽干；湿热黄疸；气滞血瘀之脘腹胀痛等症状。

鱼腥草：拉丁名houttuyniae herba，味辛，性微寒，入肺、膀胱经，具有清热解毒，排脓消痈，利尿通淋的功效，用于肺痈吐脓，痰热咳喘，热毒血痢，湿热淋证，热毒疮痈，蛇虫要上等证。

青蒿：拉丁名Artemisiae Annuae Herba，味苦，辛，性寒，归肝、胆经，具有清透虚热，凉血除蒸，除蒸，截疟的功效，主治暑邪发热，阴虚发热，夜热早凉，骨蒸劳热，疟疾寒热，湿热黄疸等证。

三楞草：味苦；辛；性凉，肝；肺经，具有行气开郁；祛风止痒；宽胞利痰的功效，主治胸闷不舒；风疹瘙痒；痈伴随肿毒等证。

山柰：拉丁名kaempferiae rhizoma，性温，味辛，归胃经，具有温中，消食，止痛的功效，主治心腹冷痛，停食不化，跌打损伤，牙痛，饮食不消等证。

八宝茶：味苦、辛，性微寒，具有祛瘀调经，通络止痛的功效，主治月经不调、产后腹痛、跌打肿痛、半身不遂等证。

小茴香：拉丁名foeniculi fructus，味辛，性温，入肾、膀胱、胃经，具有开胃进食，理气散寒，有助阳道的作用。主治中焦有寒，食欲减退，恶心呕吐，腹部冷痛；疝气疼痛，睾丸肿痛；脾胃气滞，脘腹胀满作痛等证。

肉豆蔻：拉丁名myristicae semen，味辛，苦，性温，归脾，胃，大肠经，具有温中涩肠，行气消食的功效，用于虚泻；冷痢；脘腹胀痛；食少呕吐；宿食不消等证。

核桃仁：拉丁名juglandis semen，味甘，性温，入肾、肺、大肠经，具有补肾益精，温肺定喘，润肠通便的作用，用于肾气亏虚之腰痛腿软，头晕乏力，尿频遗精，消渴，肺肾两虚之咳喘，老年人气虚及产后血亏津少而致的肠燥便秘，跌打损伤，疮疡痈肿等证。

莱菔子：拉丁名raphani semen，性平，味辛、甘，归肺、脾、胃经，具有消食除胀，降气化痰的功效，主治饮食停滞、脘腹胀痛、大便秘结、积滞泻痢、痰壅喘咳等证。

苏木：拉丁名sappan lignum，味甘、咸，性平，入心、肝、大肠经，具有活血祛瘀，消肿止痛的作用，用于血淤闭经，痛经，产后瘀滞腹痛，跌打损伤，骨折痈肿疮毒等证。

本发明还提供了上述中药免疫制剂的制备方法，具体为：

本发明还提供了一种用于提高仔猪免疫机能的饲料，其原料包括

所述饲料中各原料的重量份分别为玉米60重量份~70重量份、豆粕20重量份~30重量份、鱼粉5重量份~10重量份、磷酸氢钙2重量份~5重量份、食盐0.5重量份~1.5重量份、用于提高仔猪免疫机能的中药免疫制剂10重量份~15重量份、维生素预混料1重量份~3重量份。

所述维生素预混料为，每kg含有维生素A4500万IU，维生素D₃1600万IU，维生素E100000mg，维生素K₃10000mg，维生素VB₁8000mg，维生素B₂30000mg，维生素B₁₂120mg，维生素B₆1100mg，生物素500mg，泛酸钙80000mg，叶酸6000mg，烟酰胺150000mg，为亨懋多维-101(潍坊亨懋动物保健品有限公司提供)。

以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1 中药免疫制剂1 (740)

将黄芪80g、白术40g、当归35g、枸杞子50g、山麦冬30g、石斛35g、大枣30g、桑白皮35g、鸡血藤30g、姜黄35g、侧柏叶30g、栀子35g、鱼腥草25g、青蒿35g、三楞草30g、山柰35g、八宝茶25g、小茴香20g、肉豆蔻15g、核桃仁25g、莱菔子40g和苏木25g分别进行粉碎处理，得到粗粉末，将各个粗粉末混合，获得混合物，将获得的混合物进行第一次水煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量6kg，煎煮液过滤，获得第一次煎煮液；，将第一次煎煮液过滤后的药渣进行第二次煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量为6kg，煎煮液过滤，获得第二次煎煮液，合并第一次煎煮液和第二次煎煮液，浓缩，获得混合物清膏，清膏的相对密度为1.15(70℃)，在混合物清膏中加入醇浓度为95%的乙醇，获得含醇清膏，所加入的乙醇量与清膏之间的质量比为2:1，将含醇清膏在室温下静置24h，取上清液，将清膏残渣进行过滤处理，过滤的液体与上清液合并，减压浓缩并干燥，获得干膏，粉碎成粉末，加入相对于该粉末质量1/10的淀粉，混合搅拌均匀，获得免疫制剂1。

实施例2 中药免疫制剂2

将黄芪80g、白术40g、当归35g、枸杞子50g、山麦冬30g、石斛35g、大枣30g、桑白皮30g、鸡血藤25g、姜黄30g、侧柏叶25g、栀子30g、鱼腥草20g、青蒿30g、三楞草25g、山柰30g、八宝茶20g、小茴香15g、肉豆蔻10g、核桃仁20g、莱菔子35g和苏木20g分别进行粉碎处理，得到粗粉末，将各个粗粉末混合，获得混合物，将获得的混合物进行第一次水煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量5.5kg，煎煮液过滤，获得第一次煎煮液；，将第一次煎煮液过滤后的药渣进行第二次煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量为5.5kg，煎煮液过滤，获得第二次煎煮液，合并第一次煎煮液和第二次煎煮液，浓缩，获得混合物清膏，清膏的相对密度为1.15(70℃)，在混合物清膏中加入醇浓度为95%的乙醇，获得含醇清膏，所加入的乙醇量与清膏之间的质量比为2:1，将含醇清膏在室温下静置24h，取上清液，将清膏残渣进行过滤处理，过滤的液体与上清液合并，减压浓缩并干燥，获得干膏，粉碎成粉末，加入相对于该粉末质量1/10的淀粉，混合搅拌均匀，获得免疫制剂2。

实施例3 中药免疫制剂3

将黄芪85g、白术45g、当归40g、枸杞子55g、山麦冬35g、石斛40g、大枣35g、桑白皮35g、鸡血藤30g、姜黄35g、侧柏叶30g、栀子35g、鱼腥草25g、青蒿35g、三楞草30g、山柰35g、八宝茶25g、小茴香20g、肉豆蔻15g、核桃仁25g、莱菔子40g和苏木25g分别进行粉碎处理，得到粗粉末，将各个粗粉末混合，获得混合物，将获得的混合物进行第一次水煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量6.5kg，煎煮液过滤，获得第一次煎煮液；，将第一次煎煮液过滤后的药渣进行第二次煎煮处理，煎煮时间为3小时，所加入的水的量为6.5kg，煎煮液过滤，获得第二次煎煮液，合并第一次煎煮液和第二次煎煮液，浓缩，获得混合物清膏，清膏的相对密度为1.15(70℃)，在混合物清膏中加入醇浓度为95%的乙醇，获得含醇清膏，所加入的乙醇量与清膏之间的质量比为2:1，将含醇清膏在室温下静置24h，取上清液，将清膏残渣进行过滤处理，过滤的液体与上清液合并，减压浓缩并干燥，获得干膏，粉碎成粉末，加入相对于该粉末质量1/10的淀粉，混合搅拌均匀，获得免疫制剂3。

实施例4 急性毒性实验和长期毒性实验

急性毒性实验

按照急性毒性试验要求进行预试，发现受试药物无法测出LD₅₀。故进行一日内最大给药量试验。取上述小鼠40只，禁食不禁水12小时后，按体重随机分为给药组和水对照组，每组20只，给药组给含实施例1制备的中药免疫制剂的生药量2.4g/ml浓度的药液0.4ml/10g，灌胃一天2次，使一日内给药剂量达合生药量192.0g/kg，水对照组给同等体积的水。各组动物给药后，每盒5只，正常饲养，密切观察，均连续观察七天，记录可能出现的毒性反应和死亡情况，给药后，小鼠外观毛色光亮，行为活动正常，无异常病理性神经反射出现，七天中进食良好，末见其它异常表现，体重变化与水对照组相比无明显差异且无一动物死亡，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，无明显的出血、组织变性、坏死等大体病理改变。

长期毒性实验

实验共设2组：本发明中药免疫制剂组(给药量分别为 51.6g原生药/kg)和空白对照组，对9周龄大白鼠连续180 天灌服，在给药90天、180天及停药30天后，分别处死大鼠，检查各组动物血液学指标[红细胞(RBC)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞比积(HCT)、血小板(PLT)、平均血小板体积(MPV)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、淋巴细胞百分率(LPR)、中性粒细胞百分率(GPR)、中值细胞百分率(MPR)、红细胞分布宽度(RDWR)、红细胞分布宽度数(RDWA)、网织红细胞百分率(RET)、凝积血酶原时间(PT)]；血液生化学指标[谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、总胆固醇(CHOL)、甘油三脂(TG)、谷氨酰胺氨基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、血清钾离子(K+)、血清钠离子(Na⁺)、血清氯离子(Cl^-)]。对所有动物心、肝、脾、肺、肾、脑、子宫、卵巢、胸腺、肾上腺进行肉眼观察，并称重计算脏器指数；同时对空白对照组和中药免疫制剂组动物心、肝、脾、肺、肾、脑(大脑、小脑、脑干)、垂体、视神经、坐骨神经、脊髓(颈段、胸段、腰段)、子宫、卵巢、乳腺、甲状腺、胸腺、胰腺、肾上腺、唾液腺(颌下腺)、食道、胃、十二指肠、回、结肠、膀胱、淋巴结(颌下淋巴结、肠系膜淋巴结)、气管、主动脉进行病理形态学检查。

结果显示：各给药组动物在不同给药周期，以上指标与对照组比较，均无异常发现，血液学和生化学指标均在正常值范围内。

结果表明本发明中药组合物长期大剂量使用是安全的。

实施例5 饲料的制备

将玉米65kg、豆粕25 kg、鱼粉8 kg、磷酸氢钙3 kg、食盐1 kg、实施例1制备的免疫制剂12 kg、维生素预混料亨懋多维-101(潍坊亨懋动物保健品有限公司提供)2kg粉碎，混合搅拌均匀，获得饲料。

实施例6 免疫实验

饲料喂食方法

饲料连续饲喂 1周，停3 d，再服，30 d为一阶段。

主要试剂

血清免疫球蛋白试剂为德灵公司进口原装试剂; 肝素钠、RMP I - 1640 培养液、96 孔平底细胞培养板、Hanks液、PHA、MTT、DMSO 溶液；猪瘟活疫苗 (诸稳康)，福州大北农生物技术有限公司生产；伪狂犬病活疫苗,哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

动物试验设计

试验动物为同一保育舍的杜长大三元断奶仔猪，出生日龄前后不超过 4 d，平均为 30～35 日龄，初始体重相近，组间差异不显著。在同一保育舍内随机分成 2组，对照组120头，饲喂基础日粮 (加常规抗生素和化学药物) ;试验组150头，饲喂实施例4制备的饲料。疫苗注射时间：试验后第 2天注射伪狂犬活疫苗，试验 1周后猪瘟疫苗首免，5周后猪瘟疫苗二免，两组注射疫苗条件完全一致。

饲养管理

猪舍、饲养条件、卫生环境、饲料品质及其他饲养管理等均相同 ,自由采食和饮水。

血样采集

血样采集采取三次采血的方式，即试验前、试验一个阶段后、试验两个阶段后。清晨空腹，分别从两组活体采血，每组随机 10 头，静脉采血，每头猪无菌采集 10 mL 血液。分装在 3个离心试管中，其中 2管静置 1 h后, 3 000 r/m in离心，取上层血清分装于 eppendorf管中，保存备用 , 1管 (加 1%肝素钠抗凝 )立即送实验室测定。

检测项目和方法

血清免疫球蛋白的测定

血清免疫球蛋白( IgG、IgM、IgA )的水平，均使用德灵全自动特定蛋白分析仪 (BNP)，采用终点散射比浊法测定。

淋巴细胞转化率的测定

采用比色法(MTT法)检测淋巴细胞转化功能。MTT法是一种较新的检验淋巴细胞功能的方法。取抗凝血 3mL，等量 Hank’s液稀释，加于 3 mL 淋巴细胞分离液上层，2 000 r/m in离心 10 min，吸取淋巴细胞层，移入无菌离心管，适量 Hank’s液洗涤 2 次，2000r/m in离心 10 m in，然后将细胞悬浮于 RMP I - 1640完全培养液中 (含 100 ml/L小牛血清) , 6 g/L台盼蓝拒染，活细胞计数 ( > 95% ) ,调整细胞浓度为5×10⁶个/mL。稀释的细胞悬液在 96 孔细胞培养板上培养 , 每孔加50μL , 对照组加 50μL RMP I-1640完全培养液 , 每孔并加入浓度为 20μg/mL ConA，每组设 5个重复，置 5% CO₂、37℃培养，培养 72 h。培养结束前 3 h，加入 10 g/L MTT 10μL，继续培养。培养结束后，室温下 2 000 r/m in离心10 m in,倾去上清液，加入 150μL DMSO 溶液，使紫色结晶完全溶解后，用酶标仪在 570 nm 波长下检测各孔 OD值。按下列公式计算淋巴细胞转化率：淋巴细胞转化率 ( % ) = (试验组 OD 值-对照组OD 值 ) /对照组 OD 值×100%。

猪瘟抗体水平的测定

分别在试验前、1个阶段后 (猪瘟活疫苗首免 3周后) 、2个阶段后 (猪瘟活疫苗二免 3周后) 3次采血，保存备用血清，采用猪瘟抗体 EL ISA检测试验的方法。具体检测方法按试剂盒 (CSFV - E2 - Ab)说明书测定 ,用酶标仪在 450nm波长处读取吸光值 (OD) ,阻断率 (PI) = [ 1 - (样品 OD值/阴性对照平均OD值) ] ×100。猪瘟抗体检测结果判定标准: P I≥40判为合格。

伪狂犬抗体水平的测定

分别在试验前、1个阶段后 (伪狂犬病活疫苗首免 4周后 ) 、2个阶段后 (伪狂犬病活疫苗首免 8周后 ) 3次采血，保存备用血清，采用猪伪狂犬抗体 EL ISA 检测试验的方法。具体检测方法按试剂盒 ( PRV - gB - Ab)说明书测定 , 用酶标仪在 450 nm 波长处读取吸光值(OD)，阻断率 (PI) = [ 1 - (样品 OD值/阴性对照平均 OD 值) ]×100, P I≥40判为合格。

数据处理

采用统计学软件 SPASS 17.0 基础统计 ,数据以平均值±标准差 (XD )表示，差异显著性检验采用单因素方差分析。

结果

中药免疫制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响，结果如表 1所示。

表1中药免疫制剂对断奶仔猪血清免疫球蛋白的影响 (单位: g/L)

项目	组别	1个阶段	2个阶段
				IgG	对照组	3.751 ±0.505	3.744 ±0.638
	中药组	4.178 ±0.377	5.305 ±0.705
				IgM	对照组	0.825 ±0.076	1.043 ±0.121
	中药组	0.872 ±0.059	1.173 ±0.088
				IgA	对照组	0.205 ±0.031	0.225 ±0.023
	中药组	0.219 ±0.026	0.273 ±0.059

由表 1可见 , 1个阶段后，在 IgM、IgA 水平上 ,中药组与对照组相比差异不显著 ( P > 0. 05)，而在IgG水平上，中药组比对照组提高 11. 38% ( P <0. 05) ; 2个阶段后，在 IgM水平上,中药组比对照组提高 12. 46% ( P < 0. 05)，在 IgG、IgA 水平上，中药组比对照组分别提高 41. 69%和 21. 33% ( P <0. 01) 。试验结果表明，中药免疫制剂能显著改善机体的体液免疫功能，增强机体免疫力。

　中药免疫制剂对断奶仔猪淋巴细胞转化率的影响，结果如表 2所示。

表 2　中药免疫制剂对断奶仔猪淋巴细胞转化率的影响 (单位: % )

组别	1个阶段	2个阶段
			对照组	/	1.33 ±0.25
中药组	/	1.54 ±0.32

由表2可见，2个阶段后 ,中药组比对照组提高了15. 79% ( P < 0. 05) 。结果表明，2个阶段后，中药免疫制剂可显著改善断奶仔猪的淋巴细胞转化率，能显著提高机体的特异性细胞免疫功能。

中草免疫制剂对断奶仔猪抗体水平的影响，结果见表3。

表3 中草免疫制剂对猪瘟抗体水平的影响

　由表 3可见，试验前对照组和中药组两组猪的猪瘟抗体合格率和阻断率无差异 ( P > 0. 05)，抗体水平基本一致；一个阶段后，中药组合格率比对照组提高了20%，阻断率改善 3. 86% ( P > 0. 05 ) ; 2个阶段后 ,中药组合格率比对照组提高了 20%，阻断率改善 28. 02% ( P < 0. 01)。

中草免疫制剂对猪伪狂犬抗体水平的影响，结果见表4。

表4 中草免疫制剂对猪伪狂犬抗体水平的影响

由表 4可见，试验前对照组和中药组两组猪伪狂犬抗体合格率和阻断率无显著差异 ( P > 0. 05) ，抗体水平基本一致；一个阶段后，中药组合格率比对照组提高了 20% , 阻断率改善 11. 94% ( P <0. 05) ; 2个阶段后,中药组合格率比对照组提高了30%，阻断率改善 24. 83% ( P < 0. 01) 。

试验结果表明，1个阶段后，猪瘟抗体水平和猪伪狂犬抗体水平，中药组合格率比对照组都提高20% ,阻断率分别改善 3. 86%和 11. 94% ; 2个阶段后 ,中药组合格率比对照组分别提高 20%和30%，阻断率分别改善 28. 02%和 24. 83%，表现为差异极显著 ( P < 0. 01) 。说明中草免疫制剂能显著提高仔猪的免疫应答反应，提高疫苗的免疫效力，并可延长抗体的存留时间，保护仔猪健康生长

所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂，其特征在于：原料药由黄芪、白术、当归、枸杞子、山麦冬、石斛、大枣、桑白皮、鸡血藤、姜黄、侧柏叶、栀子、鱼腥草、青蒿、三楞草、山柰、八宝茶、小茴香、肉豆蔻、核桃仁、莱菔子和苏木构成；所述免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪75g~85g、白术35g~45g、当归30g~40g、枸杞子45g~55g、山麦冬25g~35g、石斛30g~40g、大枣25g~35g、桑白皮30g~40g、鸡血藤25g~35g、姜黄30g~40g、侧柏叶25g~35g、栀子30g~40g、鱼腥草20g~30g、青蒿30g~40g、三楞草25g~35g、山柰30g~40g、八宝茶20g~30g、小茴香15g~25g、肉豆蔻10g~20g、核桃仁20g~30g、莱菔子35g~45g和苏木20g~30g。

2.如权利要求1所述的免疫制剂，其特征在于：所述免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g~85g、白术40g~45g、当归35g~40g、枸杞子50g~55g、山麦冬30g~35g、石斛35g~40g、大枣30g~35g、桑白皮30g~35g、鸡血藤25g~30g、姜黄30g~35g、侧柏叶25g~30g、栀子30g~35g、鱼腥草20g~25g、青蒿30g~35g、三楞草25g~30g、山柰30g~35g、八宝茶20g~25g、小茴香15g~20g、肉豆蔻10g~15g、核桃仁20g~25g、莱菔子35g~40g和苏木20g~25g。

3.如权利要求1或2所述的免疫制剂，其特征在于：所述免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪80g、白术40g、当归35g、枸杞子50g、山麦冬30g、石斛35g、大枣30g、桑白皮35g、鸡血藤30g、姜黄35g、侧柏叶30g、栀子35g、鱼腥草25g、青蒿35g、三楞草30g、山柰35g、八宝茶25g、小茴香20g、肉豆蔻15g、核桃仁25g、莱菔子40g和苏木25g。

4.权利要求1至3任一项所述免疫制剂的制备方法，其特征在于：

第二步，将第一步获得的混合物进行第一次水煎煮处理，煎煮时间为2～4小时，所加入的水的量与混合物的质量之比为6～10:1，煎煮液过滤，获得第一次煎煮液；

第三步，将第一次煎煮液过滤后的药渣进行第二次煎煮处理，煎煮时间为2～4小时，所加入的水的量与第一步获得的混合物的质量之比为6～10:1，煎煮液过滤，获得第二次煎煮液；

第四步，合并第一次煎煮液和第二次煎煮液，浓缩，获得混合物清膏，清膏在70℃的相对密度为1.10～1.20；

5.一种用于提高仔猪免疫机能的免疫制剂，其特征在于：原料药由黄芪、白术、当归、枸杞子、山麦冬、石斛、大枣、桑白皮、鸡血藤、姜黄、侧柏叶、栀子、鱼腥草、青蒿、三楞草、山柰、八宝茶、小茴香、肉豆蔻、核桃仁、莱菔子和苏木构成；

所述免疫制剂中各原料药的重量份分别为黄芪75g~85g、白术35g~45g、当归30g~40g、枸杞子45g~55g、山麦冬25g~35g、石斛30g~40g、大枣25g~35g、桑白皮30g~40g、鸡血藤25g~35g、姜黄30g~40g、侧柏叶25g~35g、栀子30g~40g、鱼腥草20g~30g、青蒿30g~40g、三楞草25g~35g、山柰30g~40g、八宝茶20g~30g、小茴香15g~25g、肉豆蔻10g~20g、核桃仁20g~30g、莱菔子35g~45g和苏木20g~30g，

所述中药免疫制剂的制备方法包括，