CN104307040B - 一种组织工程用具控释能力的注射式水凝胶及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医学工程材料领域，具体涉及一种组织工程用具控释能力的注射式水凝胶及其应用，所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶(如式Ⅰ所示)是由两个或多个如式Ⅱ所示的聚合物通过相邻聚合物上的苯酚或苯胺部分之间的脱氢反应彼此键合而成，所述的式Ⅱ所示的聚合物是将肝素和酪胺以并联的方式共同接枝在所述聚合物的骨架上而形成的。该组织工程用具控释能力的注射式水凝胶在注射后原位形成凝胶，具有良好的控释能力，同时还具有良好的生物稳定性与机械强度。
Description
技术领域
本发明属于生物医学工程材料领域，具体涉及一种组织工程用具控释能力的注射式水凝胶及其应用。
背景技术
因外伤、肿瘤切除术后、先天性畸形以及老年化等各种原因引起的软组织缺损不仅影响患者美观，而且影响患者的心理健康，严重者甚至影响机体功能。
近年来，利用组织工程原理以及注射式可降解生物材料为软组织缺损修复提供了一个新思路。可注射式生物材料在注入体内后通过物理或者化学交联的方法都可形成水凝胶状的物质，并且这些材料具有良好的生物相容性，生物可降解性以及能为种子细胞提供良好的空间生存环境。由于水凝胶生物相容性高、水含量高并且对营养物质和代谢产物的透过性优异，可作为用于各种生物医学应用的生物材料(如植入物、药物和细胞递送载体)等。水凝胶可由天然存在的(如胶原、明胶、纤维蛋白原、海藻酸钠、蚕丝蛋白等)或合成的聚合物制备，并能够以化学和物理的三维交联网络的形式形成，其交联方法多种多样，主要有光交联，化学交联以及酶交联等，在这些方法中，酶交联由于其柔和的反应过程受到越来越多的关注，目前已开发的酶触发型水凝胶有：葡聚糖-酪胺、透明质酸-酪胺、明胶-羟基苯丙酸、明胶-酪胺和海藻酸-羟基苯乙酸等。发明专利CN 102573944 A中还公开了一种改进的原位成型水凝胶，该原位成型可注射水凝胶在体内稳定性和机械强度方面更出色，是通过将水溶性聚合物(如PEG)引入作为天然存在的或合成的聚合物骨架与苯酚或苯胺部分之间的接头，改善了该聚合物骨架的溶解度以及凝胶的稳定性和机械强度。
组织工程组织存活的一个关键因素是充分的血管化，但是，利用上述可注射生物材料所形成的组织工程组织长期面临的一个难题是血管化不足，进而导致局部坏死以及注射后移植物容积减少。目前已报导的诱导软组织工程血管化的方法有多种。例如，将人脂肪组织来源的间充质干细胞与血管内皮细胞共同培养取得了一定的效果。但是从临床应用的角度来讲，通过缓释具有促血管生成能力的生长因子如血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)等来再生出血管化的软组织，比起共培养细胞的方法则显得更加简单易行，并且从经济成本上来说更为划算。有研究表明，将含有大量促血管生成因子的脂肪组织提取物与玻尿酸类的水凝胶混合，通过一系列体外及体内试验表明，这种复合物具有较强的促进血管化的作用。但是在这种方法中，含有大量生长因子的脂肪组织提取物与可注射玻尿酸仅仅是通过简单的混合，从这种复合物中所释放出的生长因子无论是时间上还是空间上都无法得到控制，即并不具有缓释生长因子的能力，与其它类水凝胶一样，其释放生长因子的过程是一个被动扩散的方式，因此限制了其应用。大量研究表明，这些具有促血管化效果的生长因子如血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)等只有在释放出足够量以及足够长时间的条件下，才会诱导再生出功能化的血管网络。目前，有研究者通过将包裹有FGF-2的明胶微球与胶原蛋白类的可注射材料相混合，对生长因子的缓释起到了更好的调控作用，这种调控更加有利于再生出血管化的软组织。但胶原蛋白类凝胶的机械性能差，如何改善胶原蛋白类凝胶的机械特性，使其能够对新生的软组织结构进行更好的支撑，至今仍然未被很好的解决。
因此，开发出一种新的能够控释生物学活性物质如促血管化生长因子或药物的可注射生物材料用于软组织再生是非常必要的。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种如式Ⅰ所示的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，该注射式水凝胶具有良好的控释能力，同时还具有良好的生物稳定性与机械强度。
本申请的发明人在研究中发现，将肝素和酪胺以并联的方式一同接枝在天然聚合物如明胶等的骨架上，新合成的聚合物与生物活性物质如生长因子等大分子蛋白质混合后具有控释生长因子的能力，本发明是基于该发现而完成的。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种如式Ⅰ所示的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，由两个或多个如式Ⅱ所示的聚合物通过相邻聚合物上的苯酚或苯胺部分之间的脱氢反应彼此键合而成，所述的式Ⅱ所示的聚合物是将肝素和酪胺以并联的方式共同接枝在所述聚合物的骨架上而形成的：
式Ⅰ
式Ⅱ。
肝素的分子结构中含有很多生长因子结合位点，使其能够和多种生长因子绑定结合，尤其是血管内皮生长因子(VEGF)这一类具有肝素绑定位点的糖蛋白。在合成的式Ⅱ所示的聚合物中，当生长因子与肝素结合后，能够抵御机体的蛋白水解和变性作用，从而使其生物活性得以保存，达到持续释放的目的。而酪胺在式Ⅱ所示的聚合物中所起的作用则是在注射后为交联反应提供酶交联位点。
所述的式Ⅱ所示的聚合物是在过氧化氢和辣根过氧化物酶的作用下在体内原位交联形成式Ⅰ所示的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。如当式Ⅱ所示的聚合物凝胶溶液和过氧化氢(H2O2)以及辣根过氧化物酶(HRP)相混合后，即会发生酶催化反应，从而使这种材料成为一种可注射式的水凝胶，并且这种水凝胶的相关特性如凝胶时间，凝胶强度以及降解速率等也可通过改变H2O2，HRP以及聚合物浓度等得以实现。
在本发明中，所述聚合物的骨架为明胶、壳聚糖、葡聚糖、胶原蛋白、透明质酸、纤维蛋白原和白蛋白中的一种或多种。所述聚合物的骨架优选为明胶，明胶是胶原部分水解的产物，由于其出色的生物可降解性及生物相容性，被广泛应用于医药领域。与胶原蛋白相比，明胶是一类变性的高分子聚合物，做为生物材料，明胶不具有免疫原性，并且不会传播病原体。其机械强度还可以通过改变交联度而得到调控。因此是一种理想的生物工程支架材料。近年来，针对这种明胶类的可注射材料进行了大量研究，其交联方法多种多样，主要有光交联，化学交联以及酶交联等，在这些方法中，酶交联由于其柔和的反应过程受到越来越多的关注，但是单纯的明胶在交联后并不具有缓释生长因子的能力，与其它类水凝胶一样，其释放生长因子的过程是一个被动扩散的方式，因此限制了其应用。但是，如将酪胺和肝素依次连接在明胶的主链上得到式Ⅱ所示的一类聚合物即解决了这一问题，将酪胺和肝素依次连接在明胶的主链上得到的明胶类衍生物既具有控释生长因子的能力，同时又具备可控的水凝胶特性，这归因于肝素和酪胺的结构特点及化学特性。
上述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶与生长因子等大分子蛋白质混合后具有控释生长因子的能力，基于该优点，本发明又提供了一种组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶，由上述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶和具有促血管生成能力的生长因子组成，使得血管能够迅速长入支架材料内部；具有促血管生成能力的生长因子包括如血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)等，优选的，所述具有促血管生成能力的生长因子为血管内皮生长因子，血管内皮生长因子(VEGF)具有肝素绑定位点的糖蛋白。
本发明的另一目的在于提供一种组织工程用具控释能力的注射式水凝胶的制备方法，包括如下进行的步骤：
(1)酪胺的交联
酪胺和所述聚合物的骨架在交联剂的作用下，酪胺上的-NH2与所述聚合物的骨架的-COOH聚合形成聚合物骨架-酪胺复合物；
(2)肝素的交联
在交联剂的作用下，肝素分子链上的-COOH与步骤(1)中所得的聚合物骨架-酪胺复合物中的聚合物骨架上的-NH2聚合形成聚合物骨架-酪胺-肝素复合物；
(3)水凝胶的形成
将步骤(2)中得到的聚合物骨架-酪胺-肝素复合物用去离子水溶解，形成凝胶溶液，依次加入HRP和H2O2反应形成组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
进一步，所述的交联剂为1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)交联剂。
在本发明的一个具体实施方式中，还具体公开了以优选的明胶作为所述聚合物的骨架制备组织工程用具控释能力的注射式水凝胶的方法，具体步骤如下：
(1)酪胺的交联
将明胶加入2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液中，加热使其充分溶解，冷却至室温，加入酪胺，搅拌溶解，并加入交联剂EDC/NHS，室温下充分搅拌反应12-24小时，将反应后的溶液放入截留分子量为10000的透析袋，在去离子水中透析2-3天，透析结束后冻干样品，得到明胶/酪胺复合物；
(2)肝素的交联
将步骤(1)中得到的明胶/酪胺复合物溶于2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液中，加热使其充分溶解，冷却至室温，加入肝素搅拌溶解，加入交联剂EDC/NHS，室温下充分搅拌反应12-24小时，将反应后的溶液放入截留分子量为50000的透析袋，在去离子水中透析40-52h，透析结束后冻干样品，得到泡沫状明胶/酪胺/肝素复合物；
(3)水凝胶的形成
将步骤(2)中得到的明胶/酪胺/肝素复合物用去离子水溶解，形成凝胶溶液，依次加入HRP和H2O2，反应形成组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
上述的制备方法是采用三步交联法，反应式如图1和图2所示，首先利用明胶主链上的羧基(-COOH)和酪胺上的氨基(-NH2)，在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)交联剂的作用下聚合形成明胶/酪胺复合物，第二步，利用肝素分子链上的羧基(-COOH)和明胶主链上的氨基(-NH2)，再次在EDC/NHS的作用下，聚合形成明胶/酪胺/肝素复合物，第三步，在明胶/酪胺/肝素复合物溶液中加入HRP和H2O2，最终形成水凝胶。该方法简单有效，反应温和，不使用有机溶剂和毒性物质，在最后形成水凝胶之前可包埋生长因子等生物活性大分子，缓慢释放并保持其活性。细胞实验和动物实验均证明该方法切实可行。
本发明的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶还可以与某些生物学活性物质或药物结合，可通过在所述凝胶溶液中加入生物学活性物质或药物后，再依次加入HRP和H2O2，反应形成组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，可对结合的生物学活性物质或药物具有缓释作用。
另一方面，本发明还提供了用于组织再生和填充的植入材料，所述植入材料含有本发明所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。植入材料可应用于软骨再生、牙周再生、皮肤再生、心脏组织再生、脊髓再生、颅骨再生和组织填充等等。
另一方面，本发明还提供了组织工程用具控释能力的缓释载体，所述缓释载体可作为递送生物学活性物质或药物的载体，所述载体含有本发明所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。所述生物学活性物质如：成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、骨形态发生蛋白(BMP)、促红细胞生成素(EPO)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)等等。
本发明的有益效果在于：(1)本发明的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，可以在注射后原位形成凝胶，由于肝素的加入，使得该水凝胶可以与生物活性物质如生长因子结合，在体内环境下达到缓慢释放的效果，而且能够保存生物活性物质的活力；(2)该注射式水凝胶具有良好的生物相容性和可降解性，自身不具有免疫原性，不会携带病原体；(3)该注射式水凝胶可控性极佳，具体表现在：凝胶时间可控，凝胶强度可控，孔隙大小可控，降解速率可控；(4)本发明的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶整个合成过程中未使用有机溶剂及有毒物质，交联剂均为零长度交联剂，均可在透析过程中被去除，安全无毒。
附图说明
图1为明胶/酪胺/肝素复合物的合成化学反应式；
图2为组织工程用具控释能力的注射式水凝胶的制备化学反应式；
图3为聚合物(明胶-酪胺-肝素复合物)浓度对水凝胶孔隙的影响；
图4为不同机械强度的水凝胶的外观；
图5催化剂HRP和H2O2浓度对凝胶时间的影响；
图6为聚合物(明胶-酪胺-肝素复合物)浓度对水凝胶降解速度的影响；
图7为VEGF在水凝胶中的释放速率；
图8为组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶(明胶-酪胺-肝素+VEGF)的促血管化效果(鸡胚实验)；
图9为组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶(明胶-酪胺-肝素+VEGF)的促血管化效果(小鼠实验)；
图10为小鼠实验中水凝胶材料的组织学切片，观察新生血管在材料内部的分布情况(黑色箭头所指为新生血管)。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
明胶是胶原部分水解的产物，具有良好的可降解性及生物相容性，与胶原蛋白相比，明胶是一类变性的高分子聚合物，做为生物材料，明胶不具有免疫原性，并且不会传播病原体，其机械强度还可以通过改变交联度而得到调控。以下实施例中，式Ⅱ所示的聚合物以优选的明胶作为所述聚合物的骨架为例，将酪胺和肝素依次连接在明胶的主链上。
实施例1明胶-酪胺-肝素复合物的合成
合成方法的具体步骤如下：
(1)明胶-酪胺复合物的合成
称取4g B型明胶溶于50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)溶液中，加热至60℃使其充分溶解后冷却至室温，称取1g酪胺溶于上述溶液，并加入交联剂(EDC/NHS)室温下充分搅拌反应12-24小时；将反应后的溶液放入截留分子量为10000的透析袋在去离子水中透析2-3天，透析结束后冻干样品，得到明胶-酪胺复合物；
(2)明胶-酪胺-肝素复合物的合成
称取步骤(1)中制备的明胶-酪胺复合物4g溶于50mM 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)溶液中，加热至60℃使其充分溶解后冷却至室温，称取1g肝素钠溶于上述溶液，加入交联剂(EDC/NHS)室温下充分搅拌反应12-24小时；将反应后的溶液放入截留分子量为50000的透析袋在去离子水中透析48h，透析结束后冻干样品，得到泡沫状明胶-酪胺-肝素复合物；
上述合成方法首先利用明胶主链上的羧基(-COOH)和酪胺上的氨基(-NH2)，在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)交联剂的作用下聚合形成明胶-酪胺复合物，再利用肝素分子链上的羧基(-COOH)和明胶主链上的氨基(-NH2)，再次在EDC/NHS的作用下，聚合形成明胶-酪胺-肝素复合物。合成方法的化学反应式如图1所示。
实施例2组织工程用具控释能力的注射式水凝胶的制备
将实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，形成质量分数为2％凝胶溶液，加入1单位/毫升HRP，充分混匀，再加入1mM H2O2，在五分钟内形成水凝胶，制备方法的化学反应式如图2所示，水凝胶可使用注射器注射。
实施例3聚合物(明胶-酪胺-肝素复合物)浓度对水凝胶孔隙的影响
分别取实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，分别形成质量分数为2.5％、5％、7.5％、10％的凝胶溶液，然后分别加入1单位/毫升HRP，充分混匀，再分别加入1mM H2O2，即可形成水凝胶，不同质量分数的凝胶溶液形成的水凝胶孔隙如图3所示。水凝胶的机械强度可以通过改变交联度而得到调控，如图4中给出了不同机械强度的水凝胶的外观。
实施例4催化剂HRP和H2O2浓度对凝胶时间的影响
取实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，形成质量分数为2％的凝胶溶液，然后分别按照0.5单位/毫升HRP、1单位/毫升HRP、2.5单位/毫升HRP和5单位/毫升HRP向凝胶溶液中加入HRP，充分混匀，再分别加入H2O2，H2O2的浓度分别为0.75mM、1mM、1.5mM、2mM、2.5mM、5mM、10mM、25mM，分别记录不同浓度HRP和不同浓度H2O2组合时形成水凝胶的时间，结果如图5所示。
实施例5聚合物(明胶-酪胺-肝素复合物)浓度对水凝胶降解速度的影响
分别取实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，分别形成质量分数为1.5％、2.5％、5％的凝胶溶液，然后分别加入1单位/毫升HRP，充分混匀，再分别加入1mM H2O2，即可形成水凝胶，分别对三种水凝胶在0h、3h、6h、7h和9h的重量称重记数，这三种水凝胶的降解速度如图6所示。
实施例6组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶的制备(明胶-酪胺-肝素+VEGF)
将实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，形成2％凝胶溶液，向凝胶溶液中加入1微克/毫升的血管内皮生长因子VEGF，混合均匀，再加入1单位/毫升HRP，充分混匀，再加入1mMH2O2，在数秒钟至十分钟内形成水凝胶，由于血管内皮生长因子VEGF具有促血管生成能力，从而能再生出血管化的软组织，在本发明中，血管内皮生长因子VEGF与水凝胶中肝素结合后能够抵御机体的蛋白水解和变性作用，从而使其生物活性得以保存，达到持续释放的目的(VEGF在水凝胶中的释放速率如图7所示)，可诱导快速血管化，再生出血管化的软组织。
另取实施例1步骤(1)中的明胶-酪胺复合物按照上述相同的方法制备成水凝胶，以此来作为对比，结果如图7所示。
实施例7组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶(明胶-酪胺-肝素+VEGF)的促血管化效果(鸡胚实验)
将受精鸡蛋置入37.8℃，相对湿度55-65％的孵箱中培养三天，在无菌环境下小心将鸡胚破壳后转入25×100mm组织培养皿中，加入200ul庆大霉素/两性霉素B，继续在37.8℃，相对湿度70-90％的环境下继续培养至第八天。
将实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，形成2.5％凝胶溶液，向凝胶溶液中加入1微克/毫升的血管内皮生长因子VEGF，混合均匀，再加入1单位/毫升HRP，充分混匀，再加入1mM H2O2，在两分钟内形成水凝胶。对照组分别采用明胶-酪胺复合物以及明胶-酪胺-血管内皮生长因子VEGF复合物。将所形成的三种水凝胶块分别转移至第八天的鸡胚绒毛尿囊膜表面，继续培养五天，第十三天时观察不同组别的水凝胶周围新生血管分布情况及数量，结果如图8所示。图中(a)为第八天的鸡胚绒毛尿囊膜的血管分布情况，(b)、(c)、(d)分别为在上述的三种水凝胶周围新生血管分布情况及数量图，明显可以看出，本发明的明胶-酪胺-肝素+VEGF促血管化效果显著优于对照组的明胶-酪胺复合物和明胶-酪胺+VEGF，说明本发明的水凝胶与现有技术相比，其功能具有显著的进步性。
实施例8组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶(明胶-酪胺-肝素+VEGF)的促血管化效果(小鼠实验)
将实施例1中合成的明胶-酪胺-肝素复合物溶于去离子水中，形成2.5％凝胶溶液，向凝胶溶液中加入1微克/毫升的血管内皮生长因子VEGF，混合均匀，再加入1单位/毫升HRP，充分混匀，用微量注射器抽取100ul水凝胶生长因子复合物，再抽取1mM H2O2，在形成水凝胶之前注入六周大小的C57BL/6小鼠皮下。对照组分别采用明胶-酪胺复合物、明胶-酪胺-肝素复合物以及明胶-酪胺-血管内皮生长因子VEGF复合物。两周后切取小鼠皮肤及皮下材料组织，4％多聚甲醛固定，石蜡切片，HE染色观察不同组别的水凝胶内部及周围新生血管分布情况及数量，结果如图9和图10所示，从图中可以看出，明胶-酪胺-肝素复合物的促血管化效果优于明胶-酪胺复合物，明胶-酪胺-肝素+VEGF的效果显著优于明胶-酪胺+VEGF，并且本发明的水凝胶明胶-酪胺-肝素复合物即使不添加VEGF也具有与明胶-酪胺+VEGF相当的促血管化效果，因此，更进一步说明了本发明的水凝胶与现有技术相比具有显著的进步性。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种如式Ⅰ所示的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，由两个或多个如式Ⅱ所示的聚合物通过相邻聚合物上的苯酚或苯胺部分之间的脱氢反应彼此键合而成，其特征在于，所述的式Ⅱ所示的聚合物是将肝素和酪胺以并联的方式共同接枝在所述聚合物的骨架上而形成的：
2.根据权利要求1所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，其特征在于：所述聚合物的骨架为明胶、壳聚糖、葡聚糖、胶原蛋白、透明质酸、纤维蛋白原、白蛋白中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶，其特征在于：所述的式Ⅱ所示的聚合物是在过氧化氢和辣根过氧化物酶的作用下在体内原位交联形成式Ⅰ所示的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
4.一种组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶，其特征在于，由权利要求1-3任一项所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶和具有促血管生成能力的生长因子组成。
5.根据权利要求4所述的一种组织工程用可诱导快速血管化的注射式水凝胶，其特征在于，所述具有促血管生成能力的生长因子为血管内皮生长因子。
6.权利要求1-3任一项所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下进行的步骤：
(1)酪胺的交联
酪胺和所述聚合物的骨架在交联剂的作用下，酪胺上的-NH2与所述聚合物的骨架的-COOH聚合形成聚合物骨架-酪胺复合物；
(2)肝素的交联
在交联剂的作用下，肝素分子链上的-COOH与步骤(1)中所得的聚合物骨架-酪胺复合物中的聚合物骨架上的-NH2聚合形成聚合物骨架-酪胺-肝素复合物；
(3)水凝胶的形成
将步骤(2)中得到的聚合物骨架-酪胺-肝素复合物用去离子水溶解，形成凝胶溶液，依次加入HRP和H2O2反应形成组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述的交联剂为1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联剂。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在所述凝胶溶液中加入生物学活性物质或药物后，再依次加入HRP和H2O2，反应形成组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
9.用于组织再生和填充的植入材料，其特征在于，所述植入材料含有权利要求1-3任一项所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
10.组织工程用具控释能力的缓释载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1-3任一项所述的组织工程用具控释能力的注射式水凝胶。
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| CN1826381A (zh) * | 2003-01-10 | 2006-08-30 | 克利夫兰临床基金会 | 羟基苯交联大分子网络及其应用 |
| WO2011059326A2 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-19 | University Of Twente, Institute For Biomedical Technology And Technical Medicine (Mira) | Hydrogels based on polymers of dextran tyramine and tyramine conjugates of natural polymers |
| CN102573944A (zh) * | 2009-07-02 | 2012-07-11 | 亚洲大学校产学协力团 | 原位成型水凝胶及其生物医学用途 |
| CN102596275A (zh) * | 2009-09-04 | 2012-07-18 | 亚洲大学校产学协力团 | 用于组织粘合剂的原位成型水凝胶及其生物医学用途 |
-
2014
- 2014-07-22 CN CN201410350302.1A patent/CN104307040B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Increased angiogenesis and blood vessel maturation in acellular collagen–heparin scaffolds containing both FGF2 and VEGF;Suzan T.M. Nillesen等人;《Biomaterials》;20070228;第28卷(第6期);摘要，第2.2节，结论部分 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104307040A (zh) | 2015-01-28 |
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