CN104304694A - 桃蛀螟人工饲料、制备方法及继代饲养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桃蛀螟人工饲料、制备方法及继代饲养方法，属于昆虫饲料及饲养技术领域。本发明解决了以下三个方面的问题：(1)实现桃蛀螟完整生活史的室内人工的继代饲养；(2)在实现室内人工饲养的前提下，通过不断优化饲料配方和改进饲养操作，解决饲养种群的衰退问题；(3)获得桃蛀螟室内人工继代饲养的专用优良饲料配方，满足敏感种群选育及其他各类试验对桃蛀螟成虫和各龄幼虫标准化健康虫源的需要。

Description

桃蛀螟人工饲料、制备方法及继代饲养方法

技术领域

本发明涉及一种桃蛀螟人工饲料，以及该人工饲料的制备方法，同时还涉及一种桃蛀螟继代饲养方法，属于昆虫饲料及饲养技术领域。

背景技术

桃蛀螟(Conogethes punctiferalis)，隶属鳞翅目(Lepidoptera)草螟科(Crambidae)，别名豹纹斑螟、桃蠹螟、桃实螟蛾等，幼虫俗称蛀心虫。寄主植物逾100余种，为世界性害虫。80年代以前，国内外对桃蛀螟的研究报道较少，至90年代后期才逐渐增多。桃蛀螟果树上为害尤为严重，严重时造成“十果九蛀”，近年来也成为一些玉米产区主要害虫之一，因此对桃蛀螟开展更加深入和全方位的研究迫在眉睫。

解决桃蛀螟的室内人工继代饲养问题，是更好的开展其生物学、生理生化、生态学、农药筛选生物防治等领域研究的基础课题之一。目前，对桃蛀螟的室内人工饲养方法可概括为两类，一类是在室内用养虫笼直接用桃蛀螟的寄主植物活体或采摘的新鲜叶片、果实实现饲养，该方法是最为传统的饲养方法，具有简单、成本低、易于操作的优点。但是存在以下问题：(1)受寄主植物生长季节限制，难以实现周年饲养；(2)存活率较低，难以短时间内获得大量实验虫源；(3)幼虫虫态难以控制，整齐性差；(4)受环境影响较大，饲养效果难以预料。另一类则是通过人工饲料来实现，如Honda等人报道的桃蛀螟的人工饲养方案，其中饲料配方包括：150g饲料粉(含玉米、小麦、稻麸、维生素和微量物质)、50g大豆粉、50g干木屑、30g琼脂粉和700mL水，同时采用蘸有6～8％蔗糖水的棉球作为成虫产卵的补充营养。该方法实现了桃蛀螟室内采用人工饲料方法的多代饲养，是一种报道较早、使用较为普遍的方法。在此基础上，后人对人工饲料配方又进行了一些改进，如中国专利(申请号：201310445207.5)公开了一种桃蛀螟人工饲料配方，以质量份计，由板栗粉40份、玉米粉90份、桃粉10份、大豆粉30份、啤酒酵母粉30份、多维葡萄糖10份、酪蛋白10份、胆固醇0.1份、抗坏血酸2份、红霉素3份、琼脂粉10份、尼泊金甲酯1份、对羟基苯甲酸甲酯2份和水700份组成，该饲料能够提高桃蛀螟的存活率和繁殖力，降低饲养成本，但是未解决饲养种群存活率低、种群衰退、继代性差等问题，难以实现室内人工方法的长时间继代饲养，无法满足一些实验如对桃蛀螟连续多代的抗性选育实验的需求。因此，研究和改进桃蛀螟人工饲养技术，具有非常重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种桃蛀螟人工饲料。

同时，本发明提供一种桃蛀螟人工饲料的制备方法。

最后，本发明提供一种桃蛀螟继代饲养方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种桃蛀螟人工饲料，主要由以下质量份数的组分组成：麦胚粉40～60份，大豆粉20～40份，玉米苗干粉15～30份，板栗干粉15～30份，酵母提取物10～25份，山梨酸钾0.5～1份，对羟基苯甲酸乙酯0.5～2份，维生素C 1～4份，玉米胚芽油1～3份，海藻糖0.3～1份。

具体的，桃蛀螟人工饲料，还包括以下质量份数的组分：琼脂粉10～20份，水400～600份。

优选的，桃蛀螟人工饲料，由以下质量份数的组分组成：麦胚粉50份，大豆粉30份，玉米苗干粉20份，板栗干粉20份，酵母提取物15份，山梨酸钾0.7份，对羟基苯甲酸乙酯1份，维生素C 2份，玉米胚芽油1.3份，海藻糖0.5份，琼脂粉15份，水500份。

所述麦胚粉可以采用市售商品，也可采用如下方法制备：(1)取适量小麦，洗净，(室温条件下)培养至露白(胚根伸长，露出白芽)；(2)将露白籽粒(于恒温干燥箱中)杀青(105℃下杀青0.5小时)，再烘干(80℃下)至恒重；(3)将烘干的籽粒磨碎，过筛(100目)，即得麦胚粉。

所述大豆粉可以采用市售商品，也可采用如下方法制备：取适量大豆，洗净，粉碎，过筛(100目)后，于灭菌锅中高温蒸制(121℃下蒸30分钟)，晾干(室温下)，即得大豆粉。

所述玉米苗干粉的制备方法为：(1)取适量玉米，洗净，(室温条件下)培养至三叶期(植株第三片叶露出叶心2～3cm)；(2)将玉米苗(于恒温干燥箱中)杀青(105℃下杀青0.5小时)，再烘干(80℃下)至恒重；(3)将烘干的玉米苗粉碎，过筛(100目)，即得玉米苗干粉。

所述板栗干粉可以采用市售商品，也可采用如下方法制备：取适量板栗坚果，去皮，粉碎，过筛(100目)，即得板栗干粉。

所述酵母提取物可以采用市售商品，如生工生物工程(上海)股份有限公司，BBI(G0961)。

一种桃蛀螟人工饲料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按照质量份数准确取各组分，将麦胚粉、大豆粉、玉米苗干粉、板栗干粉与酵母提取物混合均匀，得混合物A备用；

(2)将琼脂粉溶于水中，得溶液B备用；

(3)将混合物A和溶液B灭菌，再混合均匀，加入玉米胚芽油和海藻糖；待温度降至70℃以下，再加入山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯和维生素C，搅拌均匀，即得。

所述步骤(1)、(2)中由于麦胚粉、大豆粉、玉米苗干粉、板栗干粉含有较多的支链淀粉和直链淀粉，淀粉类物质与琼脂溶液混合后，在高温高压时会产生较严重的糊化和膨胀现象，故不易混合灭菌。

所述步骤(3)中玉米胚芽油可以不灭菌，海藻糖灭菌后有效成分会改变。

一种桃蛀螟继代饲养方法，包括以下步骤：

(1)幼虫饲养及蛹的收集：将桃蛀螟幼虫接入盛装有人工饲料的容器中，置于温度25～30℃，相对湿度65～75％，光周期L:D＝(12～14):(10～12)，光照强度4000～5000Lux条件下饲养，收集虫蛹；

(2)成虫羽化：将雌、雄虫蛹混合，加入补充营养液，待成虫产卵后收集虫卵；

(3)卵的孵化：将虫卵置于温度25～30℃，相对湿度65～75％，光周期L:D＝(12～14):(10～12)，光照强度4000～5000Lux条件下孵化，收集幼虫，继代饲养。

所述步骤(2)中补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜4～6％，海藻糖1～3％，维生素C 0.1～1％，余量为水。

优选的，补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜5％，海藻糖2％，维生素C 0.5％，余量为水。

本发明的有益效果：

本发明在桃蛀螟人工饲料中添加酵母提取物，除提供营养外，还有利于保持桃蛀螟连续室内继代饲养过程中肠道益生菌的活性，对获得健康幼虫和防止种群衰退起着积极作用。由于天然饲料和人工配方饲料在营养成分上不可能达到完全一致，为此在饲料中加入海藻糖，能有效降低幼虫死亡率(尤其是低龄幼虫)，提高桃蛀螟在室内人工继代饲养过程中的抗逆性和耐受性，为获得健康虫源和实现室内连续多代饲养提供保障。同时，饲料配方中玉米胚芽油能防止饲料过快干燥，板栗干粉则兼顾了桃蛀螟在食性上的偏好。

本发明在桃蛀螟成虫产卵过程中添加的补充营养液除含有蜂蜜外，还添加有一定比例的海藻糖(国际权威的《自然》杂志曾发表对海藻糖的评价：“对许多生命体而言，海藻糖的有与无，意味着生存或者死亡”。)，海藻糖能够提高桃蛀螟的耐受性和新陈代谢活力，有效降低桃蛀螟产卵期的死亡率，延长寿命，提高成虫产卵率。

本发明解决了以下三个方面的问题：(1)实现桃蛀螟完整生活史的室内人工的继代饲养；(2)在实现室内人工饲养的前提下，通过不断优化饲料配方和改进饲养操作，解决饲养种群的衰退问题；(3)获得桃蛀螟室内人工继代饲养的专用优良饲料配方，满足敏感种群选育及其他各类试验对桃蛀螟成虫和各龄幼虫标准化健康虫源的需要。

具体实施方式

下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

实施例1

本实施例中桃蛀螟人工饲料，由以下组分组成：麦胚粉50g，大豆粉30g，玉米苗干粉20g，板栗干粉20g，酵母提取物15g，山梨酸钾0.7g，对羟基苯甲酸乙酯1g，维生素C2g，玉米胚芽油1.3g，海藻糖0.5g，琼脂粉15g，蒸馏水500mL。

所述麦胚粉的制备方法为：(1)取适量小麦，洗净，室温条件下培养至露白(胚根伸长，露出白芽)；(2)将露白籽粒于恒温干燥箱中105℃下杀青0.5小时，再在80℃条件下烘干至恒重；(3)将烘干的籽粒磨碎，过100目筛，即得麦胚粉。

所述大豆粉的制备方法为：取适量大豆，洗净，粉碎，过100目筛后，于灭菌锅中121℃条件下蒸30分钟，室温晾干，即得大豆粉。

所述玉米苗干粉的制备方法为：(1)取适量玉米，洗净，室温条件下培养至三叶期(植株第三片叶露出叶心2.5cm)；(2)将玉米苗于恒温干燥箱中105℃下杀青0.5小时，再在80℃条件下烘干至恒重；(3)将烘干的玉米苗粉碎，过100目筛，即得玉米苗干粉。

所述板栗干粉的制备方法为：取适量板栗坚果，去皮，粉碎，过100目筛，即得板栗干粉。

所述酵母提取物购自生工生物工程(上海)股份有限公司，BBI(G0961)。

本实施例中桃蛀螟人工饲料的制备方法，包括以下步骤：

(1)按照质量准确取各组分，将麦胚粉、大豆粉、玉米苗干粉、板栗干粉、酵母提取物装入500mL烧杯中，混合均匀得混合物A；

(2)将琼脂粉加入三角瓶中，再加入蒸馏水，混合均匀得溶液B；

(3)将混合物A和溶液B置于灭菌锅中，在121℃条件下高压蒸汽灭菌20分钟；

(4)灭菌后，迅速将混合物A和溶液B搅拌混匀，加入玉米胚芽油和海藻糖；

(5)待温度降至65℃时，依次加入山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯和维生素C，搅拌混匀；

(6)将配制好的饲料倒入直径150mm的培养皿中(或保鲜盒)，室温冷却凝固后，用保鲜膜密封，储存于4℃冰箱中备用。

本实施例中桃蛀螟继代饲养方法，包括以下步骤：

(1)饲养虫源

从洛阳市郊区桃园采集被桃柱螟为害的烂果，在室内将桃柱螟挑出并接入上述配制好的人工饲料中直至化蛹，成虫羽化后产的卵作为虫源；

(2)卵的孵化

将附着有桃蛀螟虫卵的纱布放入保鲜袋中，置于温度27℃、相对湿度70％、光周期L:D＝14:10、光照强度4800Lux条件下的人工智能气候培养箱中，待其孵化成幼虫，统计孵化率；

(3)幼虫的饲养

将桃蛀螟幼虫转接入装有人工饲料的指形管(规格：7.5cm×1.5cm)中，每管接2头幼虫(1～2头均可)，消毒棉塞封口，置于温度27℃、相对湿度70％、光周期L:D＝14:10、光照强度4800Lux条件下饲养，直至化蛹(幼虫陆续在指形管中结茧化蛹)，统计幼虫存活率；

(4)蛹的收集

待蛹呈现深红色时，将蛹剥出，收集在保鲜盒内(由于大量的老熟幼虫化蛹的时间不可能完全同步，为了获得标准化虫源，可将较早成熟的蛹剥出后放入4℃冰箱中暂存，最多不超过一星期，待全部幼虫化蛹后，再将收集的蛹同时从冰箱中取出，进入下一环节进行羽化)；

(5)成虫羽化

将收集的虫蛹按照雌雄比1:1混合，每30头(25～35头均可)一组放入2000mL大烧杯中，烧杯口用纱布封严(可作为成虫产卵的附着介质)，同时烧杯内每天放入蘸有补充营养液的棉球(作为成虫的补充营养)，待成虫产卵后收集虫卵；

补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜5％，海藻糖2％，维生素C 0.5％，余量为水；

(6)连续饲养21代，抽取第1代、第4代、第8代、第12代、第16代、第20代对比测定主要生命参数指标，结果见下表1。

表1 桃蛀螟不同代别主要生命参数指标对比(采用新复极差法多重比较)

注：表中数据为平均值±标准误，同行数据后标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

从表1可以看出，经过连续的多代人工继代饲养，桃蛀螟的主要生命参数指标在不同代别之间无显著差异，种群发育良好，没有出现种群衰退。说明本发明从根本上解决了桃蛀螟的室内人工继代饲养问题，可以为其敏感系培育、药效试验和发育生物学等诸多方面的实验提供标准化虫源。

实施例2

本实施例中桃蛀螟人工饲料，由以下组分组成：麦胚粉40g，大豆粉40g，玉米苗干粉15g，板栗干粉30g，酵母提取物10g，山梨酸钾0.5g，对羟基苯甲酸乙酯0.5g，维生素C 1g，玉米胚芽油1g，海藻糖1g，琼脂粉10g，蒸馏水400mL。

所述麦胚粉、大豆粉、板栗干粉为市售商品，玉米苗干粉的制备同实施例1，酵母提取物同实施例1。

本实施例中桃蛀螟人工饲料的制备方法同实施例1。

本实施例中桃蛀螟继代饲养方法，包括以下步骤：

(1)卵的孵化

将附着有桃蛀螟虫卵的纱布放入保鲜袋中，置于温度28℃、相对湿度65％、光周期L:D＝12:12、光照强度4000Lux条件下的人工智能气候培养箱中，待其孵化成幼虫，统计孵化率；

(2)幼虫的饲养

将桃蛀螟幼虫转接入装有人工饲料的指形管(规格：7.5cm×1.5cm)中，每管接2头幼虫，消毒棉塞封口，饲养条件同步骤(1)，直至化蛹；

(3)蛹的收集

待蛹呈现深红色时，将蛹剥出，收集在保鲜盒内；

(4)成虫羽化

将收集的虫蛹按照雌雄比1:1混合，每30头一组放入2000mL大烧杯中，烧杯口用纱布封严，同时烧杯内每天放入蘸有补充营养液的棉球(补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜4％，海藻糖3％，维生素C 0.1％，余量为水)，待成虫产卵后收集虫卵，连续饲养21代。

实施例3

本实施例中桃蛀螟人工饲料，由以下组分组成：麦胚粉60g，大豆粉20g，玉米苗干粉30g，板栗干粉15g，酵母提取物25g，山梨酸钾1g，对羟基苯甲酸乙酯2g，维生素C 4g，玉米胚芽油3g，海藻糖0.3g，琼脂粉20g，蒸馏水600mL。

所述麦胚粉、大豆粉、板栗干粉、玉米苗干粉的制备同实施例1，酵母提取物同实施例1。

本实施例中桃蛀螟人工饲料的制备方法同实施例1。

本实施例中桃蛀螟继代饲养方法，包括以下步骤：

(1)卵的孵化

将附着有桃蛀螟虫卵的纱布放入保鲜袋中，置于温度26℃、相对湿度75％、光周期L:D＝13:11、光照强度5000Lux条件下的人工智能气候培养箱中，待其孵化成幼虫，统计孵化率；

(2)幼虫的饲养

将桃蛀螟幼虫转接入装有人工饲料的指形管(规格：7.5cm×1.5cm)中，每管接2头幼虫，消毒棉塞封口，饲养条件同步骤(1)，直至化蛹；

(3)蛹的收集

待蛹呈现深红色时，将蛹剥出，收集在保鲜盒内；

(4)成虫羽化

将收集的虫蛹按照雌雄比1:1混合，每30头一组放入2000mL大烧杯中，烧杯口用纱布封严，同时烧杯内每天放入蘸有补充营养液的棉球(补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜6％，海藻糖1％，维生素C 1％，余量为水)，待成虫产卵后收集虫卵，连续饲养21代。

Claims (10)

1.一种桃蛀螟人工饲料，其特征在于：主要由以下质量份数的组分组成：麦胚粉40～60份，大豆粉20～40份，玉米苗干粉15～30份，板栗干粉15～30份，酵母提取物10～25份，山梨酸钾0.5～1份，对羟基苯甲酸乙酯0.5～2份，维生素C 1～4份，玉米胚芽油1～3份，海藻糖0.3～1份。

2.根据权利要求1所述的桃蛀螟人工饲料，其特征在于：还包括以下质量份数的组分：琼脂粉10～20份，水400～600份。

3.根据权利要求2所述的桃蛀螟人工饲料，其特征在于：由以下质量份数的组分组成：麦胚粉50份，大豆粉30份，玉米苗干粉20份，板栗干粉20份，酵母提取物15份，山梨酸钾0.7份，对羟基苯甲酸乙酯1份，维生素C 2份，玉米胚芽油1.3份，海藻糖0.5份，琼脂粉15份，水500份。

4.根据权利要求1～3任一项所述的桃蛀螟人工饲料，其特征在于：所述麦胚粉的制备方法为：(1)取适量小麦，洗净，培养至露白；(2)将露白籽粒杀青，再烘干至恒重；(3)将烘干的籽粒磨碎，过筛，即得麦胚粉。

5.根据权利要求1～3任一项所述的桃蛀螟人工饲料，其特征在于：所述大豆粉的制备方法为：取适量大豆，洗净，粉碎，过筛后，于灭菌锅中高温蒸制，晾干，即得大豆粉。

6.根据权利要求1～3任一项所述的桃蛀螟人工饲料，其特征在于：所述玉米苗干粉的制备方法为：(1)取适量玉米，洗净，培养至三叶期；(2)将玉米苗杀青，再烘干至恒重；(3)将烘干的玉米苗粉碎，过筛，即得玉米苗干粉。

7.一种如权利要求2或3所述的桃蛀螟人工饲料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)按照质量份数准确取各组分，将麦胚粉、大豆粉、玉米苗干粉、板栗干粉与酵母提取物混合均匀，得混合物A备用；

(2)将琼脂粉溶于水中，得溶液B备用；

(3)将混合物A和溶液B灭菌，再混合均匀，加入玉米胚芽油和海藻糖；待温度降至70℃以下，再加入山梨酸钾、对羟基苯甲酸乙酯和维生素C，搅拌均匀，即得。

8.一种采用如权利要求1～3任一项所述人工饲料的桃蛀螟继代饲养方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)幼虫饲养及蛹的收集：将桃蛀螟幼虫接入盛装有人工饲料的容器中，置于温度25～30℃，相对湿度65～75％，光周期L:D＝(12～14):(10～12)，光照强度4000～5000Lux条件下饲养，收集虫蛹；

(2)成虫羽化：将雌、雄虫蛹混合，加入补充营养液，待成虫产卵后收集虫卵；

(3)卵的孵化：将虫卵孵化，孵化条件同步骤(1)中饲养条件，收集幼虫，继代饲养。

9.根据权利要求8所述的桃蛀螟继代饲养方法，其特征在于：所述步骤(2)中补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜4～6％，海藻糖1～3％，维生素C 0.1～1％，余量为水。

10.根据权利要求9所述的桃蛀螟继代饲养方法，其特征在于：所述补充营养液由以下质量百分含量的组分组成：蜂蜜5％，海藻糖2％，维生素C 0.5％，余量为水。