CN104286419A - 一种新型饲料添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猪用的新型饲料添加剂，所述该添加剂由复方中草药、复合微生态制剂、丁酸钠三种主要成分组成，其中复方中草药、复合微生态制剂、丁酸钠按照重量比1∶1-2∶2-3混合制成本发明的新型饲料添加剂。本发明相比现有技术的优点在于：该新型饲料添加剂将复合微生态制剂、化学药物、复方中草药科学配伍，各组分相辅相成，充分发挥了三者的协同作用，调节猪的肠道微生态环境，有效减少猪的肠道疾病，提高猪的生长性能及免疫力，改善养殖环境，促进养猪业健康可持续发展。

Description

一种新型饲料添加剂

技术领域

本发明涉及饲料添加剂和微生态制剂领域，尤其涉及的是一种基于复合微生态制剂配伍丁酸钠及复方中草药的新型饲料添加剂。

背景技术

近几年来，随着饲用抗生素添加剂在畜禽养殖业中的广泛使用，它的弊端也日益凸显，例如抗生素滥用导致动物肠道正常菌群失调，大量耐药性菌株产生；对动物机体产生毒副作用；危害公共卫生安全；降低畜禽产品在市场上的竞争力；影响畜牧业的健康发展和食品安全等突出问题。因此，许多国家相继禁止或限制抗生素在饲料中的应用，鉴于当前形势，国内外的诸多研究人员开始致力于开发通过调整动物胃肠道平衡和功能以达到促进生长和维持动物健康水平等为目的的非抗生素饲料添加剂，微生态制剂及中草药等因其具有促生长、无毒、无副作用、无残留等特点而引起了各国的广泛关注和重视，使用的种类越来越多，其应用于动物生产的良好效果己被大量试验和生产实践所证实。

微生态制剂是在微生态学理论的指导下，调整微生态环境，保持微生态平衡，提高宿主健康水平或促进有益菌生长及其代谢产物产生的一类制剂。根据定义，微生态制剂包括了益生菌、益生元和合生元三个概念。近年来，国内外研制出多种益生菌制剂，其指导思想是用人或动物正常生理菌群的成员，经过选种和人工繁殖，通过各种途径制成活菌制剂，然后再以投入方式使其回到原环境，发挥自然的生理作用。益生菌在使用中还可产生蛋白酶、淀粉酶等活性物质，具有促进肠道消化、抑制病原菌、增强机体免疫力等多种作用，因此在短时间内已得到广泛应用。微生态制剂仍处在发展的初期，一般微生态制剂产品均使用单一益生菌，仅仅提倡增强机体自身免疫力的功能与传统抗生素添加剂结合的实例较少。

发明内容

针对现有技术中微生物制剂发展初期品种单一、与其他领域交叉结合应用实例较少的不足，本发明提供一种将复合微生态制剂、丁酸钠、复方中草药原料筛选后，科学配伍制备成新型饲料添加剂，部分替代、甚至完全替代饲用抗生素，主要用于不同日龄猪的促生长、提高免疫力，减少猪群疾病特别是肠道疾病的发生率，满足养猪业健康可持续发展的需要。

本发明选用的原料包括枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌，所选三株菌活菌总数均不低于1×10⁹cfu/g，均为市售品；选用的党参和黄芪以生药计算，均为市售品；选用的丁酸钠为市售品，浓度不低于98％。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的新型饲料添加剂由复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠组成，复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠按照质量比1∶1-2∶2-3混合制成本发明的新型饲料添加剂。其中复方中草药包括黄芪和党参，按照质量比例为1∶1混合制备复方中草药；复合微生态制剂包括枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和酿酒酵母菌，其中，三种菌株的细菌数的比例优选为1∶2-3∶1-2；最优选为1∶2∶2。其中，上述原料菌株的优选比例经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选、并按照比较三株菌混合培养产蛋白酶及淀粉酶量的方法筛选确定。

优选地，复方中草药、复合微生态制剂、丁酸钠按照重量份数1∶2∶3混合制成本发明的新型饲料添加剂。其中黄芪和党参按照重量份数比例1∶1制备复方中草药；复合微生态制剂包括枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌，其最优菌株经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选；其最优细菌数比例经过比较三株菌混合培养产蛋白酶及淀粉酶量的方法筛选，本发明细菌数比例为1∶2∶2，三株细菌菌粉按照筛选的最优菌株及最优细菌数比例混合，即为所述的复合微生态制剂。

所述一种(猪用)新型饲料添加剂的制备方法，该方法为将复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠按比例混合制成所述添加剂。

其中，复合微生态制剂的菌株的比例筛选方法按以下步骤进行：

(1)枯草芽孢杆菌经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到LB培养基中，震荡培养12±2小时，获得枯草芽孢杆菌培养液；

(2)干酪乳杆菌经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到MRS培养基中，厌氧静置培养24±2小时，获得干酪乳杆菌培养液；

(3)将步骤(1)、(2)的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌在细菌数比例1～4∶1～4的范围内选取不同比例的复合配比，分别测定不同配比下混合液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，其中蛋白酶的测定采用考马斯亮蓝法，淀粉酶的测定采用碘-淀粉比色法(结果如图4、图5所示)，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例(筛选的最佳复合比例为1∶2～3)，将震荡后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌按细菌数比例1∶2～3混合，获得混合液，将混合液接种到LB液体培养基中，37±1℃下220rpm继续震荡培养14±2h，获得枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；

(4)酿酒酵母菌经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到YPD培养基中，静置培养28±2小时，获得酿酒酵母菌培养液；

(5)将步骤(3)制得的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌最佳细菌数比例混合培养液与步骤(4)的酿酒酵母菌培养液进行不同比例的复合配比，所述复合配比的比例范围为：枯草芽孢杆菌：酿酒酵母菌的细菌数比例为1∶1～4的范围内选取测定不同复合配比下混合菌液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，方法同(3)所述(结果见图6、图7)，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例(最佳复合比例为：枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌的细菌数比例1∶2～3∶1～2)。

复合微生态制剂的制备方法：按照上述步骤筛选的最优菌株及最优细菌数比例1∶2～3∶1～2将三株细菌菌粉混合，即为所述的复合微生态制剂。

其中，复方中草药的制备方法为：将黄芪和党参按照重量份数比例1∶1分别粉碎过40目筛，充分混匀后在40-50℃下炒制1-2h，加入混合物2倍体积的50wt％乙醇60℃煎煮1-2h，随后烘干至水分低于10％，粉碎过60目筛后得到复方中草药成品。

本发明产品在猪饲料中的添加量为1500-2000g/吨。

有益效果

本发明相比现有技术具有以下优点：

芽孢杆菌是一种好氧、无害、能产生芽孢、耐酸碱、耐高温和挤压的益生菌。该菌在动物肠道酸性环境中具有高度的稳定性，能够促进猪的肠道有益菌的生长，拮抗肠道内的有害菌，增强机体免疫力，提高抗病能力，另外，它还能分泌较强活性的蛋白酶及淀粉酶，提高猪的生长性能，促进饲料营养物质的消化。目前报道较多的芽孢杆菌菌种有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌及东洋芽孢杆菌等。

乳酸菌是一种可以分解糖类并产生乳酸的益生菌。在猪体内通过生物拮抗作用降低pH值，阻止和抑制致病菌的侵入和定植；降解氨、吲哚、粪臭素等有害物质，维持肠道中正常的生态平衡；增强体液免疫和细胞免疫。目前应用的乳酸菌主要是来源于乳酸杆菌属、乳酸链球菌属和双歧杆菌属的近30种微生物，我国农业部允许用作饲料添加剂的乳酸菌有：干酪乳杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸片球菌、嗜酸乳杆菌以及乳酸肠球菌等。

酵母菌是一种真菌类的益生菌。其有细胞核、细胞膜、细胞壁、线粒体等细胞器及相同的酵素和代谢途经。酵母菌无毒害作用，有氧或者无氧都能生存，其作为饲料添加剂主要具有平衡机体、合理分配营养、提高动物抗应激能力三大功效。目前常用的饲用酵母菌包括酿酒酵母菌、产朊假丝酵母菌等。

复合微生态制剂选择枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌这三株益生菌，按照耐猪胆盐、耐酸筛选后最优菌株后，按照产蛋白酶及淀粉酶高的标准筛选最优配伍比例，发挥了三者的功效优势，弥补了单一菌株的缺陷和劣势，达到1+1+1＞3的使用效果，其定植于猪的肠道后可释放蛋白酶及淀粉酶等活性物质，达到有益菌与生物酶的有效组合，使各种有益菌的优良性能得到充分发挥；对猪的生产性能、免疫性能、肠道pH、肠道微生物等方面都有改善，有利于促进猪的生长，提高免疫力，增加饲料的消化率。

党参是桔梗科植物党参、素花党参、或川党参等的干燥根；味甘，性平；有补中益气、养血生津的功效，主要用于脾肺气虚，食少倦怠，气血不足，内热消渴等。黄芪，又名绵芪；多年生草本；其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗应激和广泛抗菌的功效。常与党参同用治疗气虚、肠阻、免疫力下降及细菌感染等。

丁酸钠作为去乙酰化酶抑制剂，能够提高组蛋白乙酰化水平，已广泛用于猪的饲料添加剂，其功能包括促进猪胃肠道内有益菌的生长、同时抑制有害菌生长、使胃肠道微生态处于正平衡；为猪肠道宿主细胞提供快速能量来源；促进胃肠道上皮及免疫细胞的增殖和成熟；提高猪生长性能；减少猪群腹泻和死亡；促进猪非特异性免疫系统和特异性免疫系统功能；对幼猪具有很强的诱食性。

本发明中所述的终产品一种猪用新型饲料添加剂选择微生态制剂、化学药物及复方中草药科学配伍，协同改善猪的肠道微生态环境、提高饲料转化率、提升猪的免疫力、降低猪群疾病特别是肠道疾病的发生率，减少饲用抗生素在饲料中的应用，同时有利于净化栏舍卫生、保护和改善猪的栏舍及周边的生态环境。该添加剂所选的原料具有安全、营养、毒副作用小等特点，在猪饲料中的应用对于养猪业的健康可持续发展有一定的实际意义。

附图说明

图1为枯草芽孢杆菌生长曲线图；

图2为干酪乳杆菌生长曲线图；

图3为酿酒酵母菌生长曲线图；

图4为枯草芽孢杆菌与干酪乳杆菌不同复合配比下产蛋白酶活性；

图5为枯草芽孢杆菌与干酪乳杆菌不同复合配比下产淀粉酶酶活性；

图6为枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和酿酒酵母菌不同复合配比下产蛋白酶活性；

图7为枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和酿酒酵母菌不同复合配比下产淀粉酶活性。

具体实施方式

以下实施方式仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述技术领域的普通技术人员依据本发明的公开内容，均可实现本发明的目的。

下面结合附图1～7对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，所述的复合微生态制剂菌株选择及最优菌株筛选、三种主要成分配伍比例的改进和制备方法的变化都应视为本发明的范围内，本发明的范围和实质由权利要求来限定，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

培养基配制

LB培养基：包括10.0g/L的胰蛋白胨，5.0g/L的酵母浸粉和10.0g/L氯化钠，25℃下调节pH值至7.0±0.1，121℃下灭菌15min。

MRS培养基：包括10.0g/L的蛋白胨，8.0g/L的牛肉粉，4.0g/L的酵母粉，20.0g/L的葡萄糖，2.0g/L的磷酸氢二钾，2.0g/L的柠檬酸氢二胺，5.0g/L的乙酸钠，0.2g/L的硫酸镁，0.04g/L的硫酸锰和1.0g/L的吐温-80，25℃下调节pH值至5.7±0.2，118℃下灭菌15min。

YPD培养基：包括10g/L的酵母粉，20g/L的蛋白胨B和20g/L的D-无水葡萄糖，115℃下灭菌15min。

以上培养基中加入2g/L的琼脂，配制成固体培养基。

实施例1

1、复合微生态制剂的筛选以及制备方法

(1)枯草芽孢杆菌的筛选

无菌条件下，将多株市售的枯草芽孢杆菌(朝阳华星生物工程有限公司：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选获得最优菌株，分别接种到50mL的LB液体培养基中，37±1℃下，220rpm震荡培养，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h，在吸光度600nm下测定OD值，得到枯草芽孢杆菌的的生长曲线，结果如图1所示，取指数生长后期至稳定期后期的枯草芽孢杆菌，分别接种到LB培养基中，37±1℃下220rpm震荡培养12±2h；

(2)干酪乳杆菌的培养

无菌条件下，将多株市售的干酪乳杆菌(朝阳华星生物工程有限公司：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选获得最优菌株，在MRS固体培养基上涂布，37℃下静置厌氧培养20h，挑取单菌落获得干酪乳杆菌，接种到100mL的MRS液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h，在吸光度600nm下测定OD值，得到干酪乳杆菌的的生长曲线，所述生长曲线如图2所示，取指数生长后期至稳定期后期的干酪乳杆菌菌液，接种到MRS培养基中，37℃厌氧静置培养24h，获得干酪乳杆菌培养液；

(3)将步骤(1)、(2)震荡培养后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌按细菌数比例1～4∶1～4进行不同比例的复合配比，测定不同配比下混合液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，如图4、5所示，其中蛋白酶的测定采用考马斯亮蓝法，淀粉酶的测定采用碘-淀粉比色法，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例为1∶2；将混合液接种到LB液体培养基中，37±1℃下220rpm继续震荡培养14，获得枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；

(4)酿酒酵母菌的培养

无菌条件下，将多株市售的酿酒酵母菌(安琪酵母股份有限公司：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选获得最优菌株，在YPD固体培养基上涂布，37℃下静置培养28h，挑取单菌落，在YPD固体培养基上进一步划线纯化，37℃培养28h后，挑取单菌落，经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选获得后的酿酒酵母菌，接种到100mL的YPD液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h、24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h，在吸光度600nm下测定OD值，得到酿酒酵母菌的的生长曲线，所述生长曲线如图3所示，取指数生长后期至稳定期后期的酿酒酵母菌菌液，接种到YPD培养基中，37℃静置培养28h，获得酿酒酵母菌培养液；

(5)将步骤(3)制得的优选枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液与步骤(4)的酿酒酵母菌培养液进行不同比例的复合配比，所述复合配比的比例范围为：枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌的细菌数比例1∶2∶1～4，测定不同复合配比下混合菌液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，如图6、7所示，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例为1∶2∶2。

复合微生态制剂的制备方法：按照上述步骤筛选的最优菌株及最优细菌数比例(1∶2∶2)将三株细菌菌粉混合，即为所述的复合微生态制剂。

2、复方中草药的制备

将黄芪和党参按重量份数1∶1分别粉碎过40目筛，充分混匀后在40-50℃下炒制2h，加入混合物2倍体积的50wt％乙醇60℃煎煮1h后烘干，水分要低于10％，粉碎过60目筛后得到复方中草药成品。

3、新型饲料添加剂的制备

将上述的复方中草药成品、复合微生态制剂、丁酸钠(质量浓度不低于98％)按照重量份数1∶2∶3混合后制成本发明产品。

实施例2

本实施例中，制备方法与实施例1相同，包括以下步骤：

1、复合微生态制剂的筛选及制备方法

(1)枯草芽孢杆菌的筛选

将枯草芽孢杆菌(北京昕地美饲料科技有限公司：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，分别接种到50mL的LB液体培养基中，37±1℃下，220rpm震荡培养，取指数生长后期至稳定期后期的枯草芽孢杆菌，分别接种到LB培养基中，37±1℃下220rpm震荡培养12h；

(2)干酪乳杆菌的培养

将干酪乳杆菌(北京昕地美饲料科技有限公司：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到100mL的MRS液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，取指数生长后期至稳定期后期的干酪乳杆菌菌液，接种到MRS培养基中，37℃厌氧静置培养24h，获得干酪乳杆菌培养液；

(3)将步骤(1)、(2)震荡培养后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌按细菌数比例1～4∶1～4进行不同比例的复合配比，测定不同配比下混合液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，产蛋白酶、产淀粉酶含量较多的最佳复合比例为1∶3；将混合液接种到LB液体培养基中，37±1℃下220rpm继续震荡培养16h，获得枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；

(4)酿酒酵母菌的培养

将酿酒酵母菌(福邦品牌：活菌总数2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到100mL的YPD液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，酿酒酵母菌在24～48h时处于指数生长后期至稳定期后期，取指数生长后期至稳定期后期的酿酒酵母菌菌液，接种到YPD培养基中，37℃静置培养28h，获得酿酒酵母菌培养液；

(5)将步骤(3)制得的优选枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液与步骤(4)的酿酒酵母菌培养液进行不同比例的复合配比，所述复合配比的比例范围为：枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌的细菌数比例1∶3∶1～4，测定不同复合配比下混合菌液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例为：1∶3∶2。

复合微生态制剂的制备方法：按照上述步骤筛选的最优菌株及最优细菌数比例(1∶3∶2)将三株细菌菌粉混合，即为所述的复合微生态制剂。

2、复方中草药的制备

将黄芪和党参按重量1∶1分别粉碎过40目筛，充分混匀后在40-50℃下炒制1h，加入混合物2倍体积的50wt％乙醇60℃煎煮1h后烘干，水分要低于10％，粉碎过60目筛后得到复方中草药成品。

3、新型饲料添加剂的制备

将上述的复方中草药成品、复合微生态制剂、丁酸钠(质量浓度不低于98％)按照重量份数1∶2∶2混合后制成本发明产品。

实施例3

本实施例中，制备方法与实施例1相同，包括以下步骤：

1、复合微生态制剂的筛选及制备方法

(1)枯草芽孢杆菌的筛选

将枯草芽孢杆菌(北京昕地美饲料科技有限公司：2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，分别接种到50mL的LB液体培养基中，37±1℃下，220rpm震荡培养，取指数生长后期至稳定期后期的枯草芽孢杆菌和，分别接种到LB培养基中，37±1℃下220rpm震荡培养14h；

(2)干酪乳杆菌的培养

将干酪乳杆菌(朝阳华星生物工程有限公司：2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到100mL的MRS液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，取指数生长后期至稳定期后期的干酪乳杆菌菌液，接种到MRS培养基中，37℃厌氧静置培养24h，获得干酪乳杆菌培养液；

(3)将步骤(1)、(2)震荡培养后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌按细菌数比例1～4∶1～4进行不同比例的复合配比，测定不同配比下混合液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，产蛋白酶、产淀粉酶含量较多的最佳复合比例为1∶2；将混合液接种到LB液体培养基中，37±1℃下220rpm继续震荡培养14h，获得枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；

(4)酿酒酵母菌的培养

将酿酒酵母菌(安琪酵母股份有限公司：2×10¹⁰cfu/g)经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到100mL的YPD液体培养基中，37℃下厌氧静置培养，酿酒酵母菌在24～48h时处于指数生长后期至稳定期后期，取指数生长后期至稳定期后期的酿酒酵母菌菌液，接种到YPD培养基中，37℃静置培养28h，获得酿酒酵母菌培养液；

(5)将步骤(3)制得的优选枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液与步骤(4)的酿酒酵母菌培养液进行不同比例的复合配比，所述复合配比的比例范围为：枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌的细菌数比例1∶2∶1～4，测定不同复合配比下混合菌液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，筛选出产蛋白酶、产淀粉酶含量高的最佳复合比例为：1∶2∶2

复合微生态制剂的制备方法：按照上述步骤筛选的最优菌株及最优细菌数比例(1∶2∶2)将三株细菌菌粉混合，即为所述的复合微生态制剂。

2、复方中草药的制备

将黄芪和党参按重量1∶1分别粉碎过40目筛，充分混匀后在40-50℃下炒制2h，加入混合物2倍体积的50％乙醇60℃煎煮2h后烘干，水分要低于10％，粉碎过60目筛后得到复方中草药成品。

3、新型饲料添加剂的制备

将上述的复方中草药成品、复合微生态制剂、丁酸钠(质量浓度不低于98％)按照重量份数1∶1∶2混合后制成本发明产品。

试验例1

本试验例中，将实施例1～3制备获得的新型饲料添加剂进行不同的添加剂量分别饲喂210头平均体重8.5kg断奶仔猪，随机分成7个饲料添加组，6个试验组和1个对照组，每个处理组设3个重复(栏)，每个重复(栏)10头，试验动物分组情况见表1

表1试验用仔猪分组及新型饲料添加剂添加情况

(1)试验方法

预饲期10d，饲喂基础饲料，正式试验期对照组与试验组除饲喂的饲料不同之外，其他管理条件及饲喂人员一致，猪只自由采食、自由饮水，按正常状况免疫与驱虫，正式试验时间为30d。试验开始后，每天早上对猪只进行空腹称重，每天观察各猪只的采食量和健康状况，计算平均日增重、日采食量、料肉比。记录各猪只的腹泻发生率及死亡率。各实验组数据进行差异比较，用P表示，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

(2)结果与分析

表2仔猪生长状况汇总表

项目	A组	B组	C组	D组	E组	F组	G组
								平均始重(kg)	8.5	8.48	8.52	8.58	8.62	8.48	8.43
平均末重(kg)	18.62	22.44	23.43	21.34	22.23	20.23	20.98
								平均日增重(g/d·头)	337	465	497	425	453	391	418
平均日采食量(g/d·头)	594	702	735	676	707	641	660
								平均料肉比	1.76	1.51	1.48	1.59	1.56	1.64	1.58

由上表可知，与对照组相比，用本发明的饲料添加剂后，平均日增重(n＝30)、平均日采食量(n＝30)明显升高，差异极显著(P＜0.01)；平均料肉比(n＝30)明显下降，差异显著(P＜0.05)。

表3仔猪腹泻发生率及死亡率汇总表

由上表可知，与对照组相比，用本发明的饲料添加剂后，腹泻发生率及死亡率明显下降，差异显著(P＜0.05)。

试验结果表明：本发明的新型饲料添加剂可明显提高仔猪日采食量和日增重，同时在降低仔猪的腹泻发病率和提高存活率方面与对照组相比差异显著。本产品作为绿色产品，属于绿色饲料领域，能有效降低猪的料肉比、提高猪的免疫力，替代或部分替代饲用抗生素在猪养殖中的应用，对养猪业健康可持续发展有一定的实际意义，具有广阔的市场前景。

Claims (10)

1.一种新型饲料添加剂，其特征在于，所述添加剂由复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠组成，其中复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠的质量比为1∶1-2∶2-3。

2.根据权利要求1所述的新型饲料添加剂，其特征在于，所述复方中草药的原料为黄芪和党参，质量比为黄芪∶党参＝1∶1。

3.根据权利要求1所述的新型饲料添加剂，其特征在于，所述复合微生态制剂包括枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和酿酒酵母菌。

4.根据权利要求1或3所述的新型饲料添加剂，其特征在于，所述复合微生态制剂中原料细菌数的比例为枯草芽孢杆菌：干酪乳杆菌：酿酒酵母菌＝1∶2-3∶1-2；优选为1∶2∶2。

5.根据权利要求3或4权利要求所述的新型饲料添加剂，其特征在于，所述复合微生态制剂的各原料的活菌总数均不低于1×10⁹cfu/g。

6.根据上述任一权利要求所述的新型饲料添加剂的制备方法，其特征在于该方法为将复方中草药、复合微生态制剂和丁酸钠按比例混合制成所述添加剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述复方中草药的制备方法为选择重量比为1∶1的黄芪和党参，分别粉碎过40目筛，充分混匀后在40-50℃下炒制1-2h，加入混合物2倍体积的50wt％乙醇60℃煎煮2-4h，烘干至水分低于10％，粉碎后过60目筛，得到所述复方中草药成品。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述复合微生态制剂的制备方法为将枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌和酿酒酵母菌按照细菌数比例混合。

9.根据权利要求6或8所述的制备方法，其特征在于，所述复合微生态制剂的原料菌株的混合比例的筛选确定方法为：

(1)枯草芽孢杆菌，经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到LB培养基中，震荡培养12±2小时；

(2)干酪乳杆菌，经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到MRS培养基中，厌氧静置培养24±2小时，获得干酪乳杆菌培养液；

(3)将步骤(1)、(2)震荡培养后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌在细菌数比例1-4∶1-4范围内选取不同比例、分别混合后接种到多个LB液体培养基中震荡培养14±2小时；获得枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；测定不同配比下混合培养液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，其中蛋白酶的测定采用考马斯亮蓝法，淀粉酶的测定采用碘-淀粉比色法，确定最佳细菌数比例；将震荡后的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌按确定的最佳细菌数比例混合，获得混合液，将混合液接种到LB液体培养基中，37±1℃下220rpm继续震荡培养14±2h，获得最佳枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液；

(4)酿酒酵母菌，经过耐0.3％猪胆盐、耐PH＝3酸筛选最优菌株后，接种到YPD培养基中，静置培养28±2小时，获得酿酒酵母菌培养液；

(5)将步骤(3)制得的最佳细菌数比例的枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌混合培养液与步骤(4)的酿酒酵母菌培养液在枯草芽孢杆菌：酿酒酵母菌的细菌数比例1∶1-4范围内，选取不同比例分别混合后震荡培养14±2小时，获得枯草芽孢杆菌、干酪乳杆菌及酿酒酵母菌混合培养液，测定不同配比下混合液产蛋白酶、产淀粉酶的含量，方法同(3)所述，确定最优细菌数比例。

10.根据上述任一权利要求所述的新型饲料添加剂，其特征在于，在猪饲料中的添加量为1500-2000g/吨。