CN104284666A - 肠内环境改善剂 - Google Patents

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CN104284666A CN201380021989.8A CN201380021989A CN104284666A CN 104284666 A CN104284666 A CN 104284666A CN 201380021989 A CN201380021989 A CN 201380021989A CN 104284666 A CN104284666 A CN 104284666A
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Abstract

一种肠内环境改善剂，其作为有效成分含有满足以下条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉：(a)根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量为60％以上；(b)分子量峰为6×103以上且4×104以下；(c)分子量分散度为1.5以上且6.0以下；(d)根据差示扫描量热测定法测定的50℃～130℃的糊化焓为10J/g以下。

Description

肠内环境改善剂
技术领域
本发明涉及一种肠内环境改善剂。
背景技术
淀粉通常易消化，但是，也存在难消化性的组份，该组份被称为抗性淀粉(Resistant Starch：RS)。
在非专利文献1中记载有，作为抗性淀粉，将含有高直链玉米淀粉或湿热处理过的高直链玉米淀粉的食物给予猪，则粪便中的双歧杆菌数增加。
另外，在非专利文献2记载有，通过在猪的食物中配合高直链玉米淀粉以及益生菌成分，粪便中的双歧杆菌(ビフィドバクテリア)数增加。
另外，在非专利文献3中，使人摄取抗性淀粉，并检查了菌的变化。该文献记载有，在将摄取含有小麦淀粉的食物的组作为对照时，作为RS4型的化学修饰的淀粉中，在双歧杆菌数的增加上存在显著性差异。另一方面，作为RS2型的高直链玉米淀粉中，在双歧杆菌数上未显示出显著性差异。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2011-84674号公报。
非专利文献
非专利文献1：Anthony R.Bird及其他3人，“Two high-amylose maizestarches with different amounts of resistant starch vary in their effects onfermentation，tissue and digesta mass accretion，and bacterial populations in thelarge bowel of pigs”，British journal of Nutrition，2007，97，134-144；
非专利文献2：Ian Brown及其他5人，“Fecal Numbers of BifidobacteriaAre Higher in Pigs Fed Bifidobacterium longum with a High Amylose CornstarchThan with a Low Amylose Cornstarch”，The Journal of Nutrition 1997，127，1822-1827；
非专利文献3：Ines Martinez及其他4人，“Resistant Starches Types 2and4Have Differential Effects on the Composition of the Fecal Microbiota in HumanSubjects”，Plos one，2010，5(11)，e15046。
发明内容
发明要解决的课题
如上所述，关于双歧杆菌属(ビフィズス菌)的增殖，对于RS是否有效这一点每个文献的报告内容都不相同，因此，并不清楚。
本发明提供一种新型的肠内环境改善剂。
解决课题所用的方法
本发明提供一种肠内环境改善剂，其作为有效成分含有满足以下的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉：
(a)根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量为60％以上；
(b)分子量峰为6×103以上且4×104以下；
(c)分子量分散度为1.5以上且6.0以下；
(d)根据差示扫描量热测定法测定的50℃～130℃的糊化焓为10J/g以下。
另外，本发明提供一种含有所述本发明的肠内环境改善剂的脂质代谢改善剂。
另外，本发明提供一种肠内环境改善剂，其作为有效成分含有满足以下的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉，并且含有不溶性膳食纤维，并且具有脂质代谢改善作用：
(a)根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量为60％以上；
(b)分子量峰为6×103以上且4×104以下；
(c)分子量分散度为1.5以上且6.0以下；
(d)根据差示扫描量热测定法测定的50℃～130℃的糊化焓为10J/g以下。
本发明中，作为有效成分含有满足上述条件(a)至(d)的抗性淀粉含量高的淀粉，因此，能够得到优异的肠内环境改善效果。
另外，这些各构成的任意的组合或者在方法、装置等之间对本发明的表现进行的变化均作为本发明的方案是有效的。
例如，本发明提供一种含有所述本发明的肠内环境改善剂的医药、饮食品或饲料。
另外，本发明提供一种所述本发明的肠内环境改善剂在医药、饮食品或饲料中的应用。
发明效果
本发明能够提供一种新型的肠内环境改善剂。
附图说明
如上所述的目的以及其他目的、特征以及有益效果，可通过如下所述的优选的实施形式、以及所附的附图能够而更加明确化。
图1是显示实施例中的盲肠内容物的pH的测定结果的图。
图2是显示实施例中的盲肠内容物中的短链脂肪酸的测定结果的图。
图3是显示实施例中的盲肠内容物菌落分析结果的图。
图4是显示实施例中的盲肠内容物菌落分析结果的图。
图5是显示实施例中的盲肠内容物菌落分析结果的图。
图6是显示实施例中的盲肠内容物菌落分析结果的图。
图7是显示实施例中的粪便干重的测定结果的图。
图8是显示实施例中的盲肠组织量的测定结果的图。
图9是显示实施例中的血中中性脂肪的测定结果的图。
图10是显示实施例中的血中总胆固醇的测定结果的图。
图11是显示实施例中的试验期间中的总摄食量的图。
图12是显示实施例中的试验期间中体重的推移的图。
具体实施方式
本发明的肠内环境改善剂，作为有效成分含有满足以下的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉：
(a)根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量为60％以上；
(b)分子量峰为6×103以上且4×104以下；
(c)分子量分散度为1.5以上且6.0以下；
(d)根据差示扫描量热测定法测定的50℃～130℃的糊化焓为10J/g以下。
首先，对于上述抗性淀粉含量高的淀粉进行说明。
本发明中所使用的抗性淀粉含量高的淀粉是满足上述条件(a)，该抗性淀粉含量与由迄今为止的制备方法获得的抗性淀粉含量相比显著高。
从进一步提高初期的抗性淀粉含量的观点考虑时，本发明中的抗性淀粉含量高的淀粉的根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量，优选65％以上，进一步优选70％以上。另外，对于本发明中的抗性淀粉含量高的淀粉的抗性淀粉含量的上限并不特别限定，可以是100％以下，例如可以是90％以下。
其中，抗性淀粉含量定义为每试样干重的抗性淀粉重量(w/w)。
另外，通过满足上述条件(b)以及(c)，能够稳定提高淀粉中的抗性淀粉含量。
其中，上述条件(b)是规定了抗性淀粉含量高的淀粉的分子量范围。
通过将分子量峰设为6×103以上且4×104以下，能够稳定地获得抗性淀粉含量超过60％的淀粉。
从更加稳定地获得抗性淀粉含量高的淀粉的观点考虑时，分子量峰例如可以是6.5×103以上，优选8×103以上。另外，从更加确切得到抗性淀粉含量高的淀粉的观点考虑时，分子量峰例如可以是3.6×104以下，优选2.5×104以下，进一步优选1.5×104以下。
接着，上述条件(c)是规定分子量分散度。
条件(c)中的分子量分散度是指，重均分子量Mw相对于数均分子量Mn的比Mw/Mn。通过满足上述条件(c)的构成，能够稳定提高抗性淀粉含量。另外，能够抑制分子量低的组份或分子量高的组份变得过多的现象，因此，能够抑制肠内环境改善剂变得过于粉状化(chalky)或食感变得过硬的现象。
从摄取肠内环境改善剂时的食感良好的观点考虑时，分子量分散度的下限是，1.5以上，优选2.0以上，进一步优选3.0以上。分子量分散度过低的淀粉是，在粉状化等方面上存在食感不良好的情况，因此优选在分子量峰上具有某种程度的宽度。
另一方面，从进一步稳定提高抗性淀粉含量的观点考虑时，分子量分散度的上限是，6.0以下，优选5.5以下，进一步优选5.0以下。
因此，从抗性淀粉比例和食感的均衡性观点考虑时，本发明中的分子量分散度是，1.5以上且6.0以下，优选2.0以上且5.5以下，进一步优选3.0以上且5.0以下。
另外，淀粉的分子量，例如，可以通过凝胶过滤色谱法(GPC)(标准物质：普鲁兰(pullulan；プルラン)换算)进行测定。
接着，对于条件(d)进行说明。
本发明中，满足条件(d)，因此，除了原本的抗性淀粉含量高以外，在实施了加热处理之后仍然可以以高比例含有抗性淀粉。
具体地，以200℃加热20分钟后的抗性淀粉含量，例如可以是60％以上，优选70％以上。
其中，糊化焓是，淀粉被加热变成糊而所需的能量。在淀粉和水共存下被加热时，在某温度淀粉会变成糊。变成该糊时需要能量，因此发生吸热反应。在差示扫描量热测定法(Differential scanning calorimetry：DSC)中，作为峰计测随着温度变化的吸热量，作为糊化焓计测该峰面积。糊化焓，在糊化温度、分子量峰以及分子量分散度接近的淀粉之间，可作为耐热性的指标使用。
根据该DSC测定的吸热峰的面积小，是本发明中的抗性淀粉含量高的淀粉的一个特征，具体地10J/g以下，优选8J/g以下，进一步优选6J/g以下。由此，能够稳定地获得加热处理之后抗性淀粉含量仍然高的肠内环境改善剂。另外，对于糊化焓的下限并不特别限定，例如可以是1J/g以上。
本发明中，因为作为有效成分含有全部满足以上的条件(a)至(d)的抗性淀粉含量高的淀粉，因此，能够获得以高比例含有具有肠内环境改善作用的抗性淀粉并且加热稳定性优异的肠内环境改善剂。
接着，对于上述抗性淀粉含量高的淀粉的制备方法进行说明。本发明中的抗性淀粉含量高的淀粉，例如，可以按照专利文献1所述的方法进行制备。
另外，若本说明书中没有特别记载时，各用语的定义是如下所述。另外，本说明书中，有时将抗性淀粉记载为RS。
浆浓度：淀粉干重量相对于淀粉浆重量的比例(w/w)。
酸当量浓度：酸相对于也包括来自淀粉的水分的反应液中的水的当量浓度。其中，水分是指，水分相对于淀粉湿重量的比例(w/w)。
抗性淀粉含量：抗性淀粉的重量相对于试样干重量的比例(w/w)。
抗性淀粉含量高的淀粉：抗性淀粉含量60％以上的淀粉。
本发明中，上述抗性淀粉含量高的淀粉是，例如，将直链淀粉含量40％以上的直链淀粉含量高的淀粉作为原料，通过在无机酸水溶液中对该原料进行酸处理而获得。
作为原料所使用的直链淀粉含量高的淀粉的来源，可以是玉米、马铃薯、米、小麦、红薯、木薯等，但是从容易获得的观点考虑时，优选高直链玉米淀粉。高直链玉米淀粉是通过育种提高了直链淀粉含量的玉米淀粉，现在能够获得直链淀粉含量是40％以上的玉米淀粉、70％以上的玉米淀粉。从更加稳定地增加抗性淀粉含量高的淀粉中含有的抗性淀粉量的观点考虑时，若淀粉中的直链淀粉含量例如是40％以上时，任意的淀粉均可使用。
在酸处理中，原料的淀粉和干净水投入于反应装置中。或者，将干净水中事先溶解无机酸的酸水和原料投入于反应装置中。从更加稳定地实施酸处理的观点考虑时，优选，反应中的淀粉的全量均匀地分散于水相内的状态、或成为浆化的状态。因此，进行酸处理之后的淀粉浆的浓度调整成例如50重量％以下、优选20重量％以上且40重量％以下的范围。浆浓度过高时，浆粘度上升，存在均匀的浆搅拌变得困难的情况。
作为用于酸处理的酸，具体地可例举：盐酸、硫酸、硝酸等的无机酸，无需考虑种类、纯度等均可使用。
酸处理反应是，通过选择适当的温度、适当的酸浓度进行，致使所获得的酸处理淀粉满足上述条件(a)～(d)。本发明中，例如酸处理时的无机酸浓度、反应温度以及反应时间设定为特定的条件。下面，对于各条件具体说明。
首先，酸处理的时间设定成满足上述条件(a)～(d)，但是，从更加确切抑制反应中的变质的观点考虑时，酸处理所需的时间，例如可以是3天以内，优选2天以内。
另外，对于酸处理中的无机酸浓度以及反应温度，例如以满足下述式(1)为条件。
(5.54×(4.20)(T-40)/10)(-0.879)≤C＜－0.000016×T3+0.00068×T2－0.028×T+4.3      (1)
(其中，上述式(1)中，T：反应温度(℃)、C：无机酸水溶液中的无机酸的当量浓度(N))
无机酸当量浓度以及反应温度均过高时，存在无法充分提高抗性淀粉含量的情况。另一方面，过低时，存在酸处理反应所需的时间过长的情况。
通过以满足上述式(1)为条件，能够有效且稳定地提高抗性淀粉含量。
另外，酸处理中的反应时间，能够根据反应温度以及酸当量浓度的两个因素以下述式(2)根本上决定。
13.0×C(-1.14)×(1/4.2)(T-40)/10≤t≤180×C(-1.58)×(1/4.2)(T-40)/10
                        (2)
(其中，上述式(2)中，T：反应温度(℃)、C：无机酸水溶液中的无机酸的当量浓度(N)、t：反应时间(时间)。)
上述式(2)是通过实验求出的式，该式是基于如下关系的式：酸当量浓度成为2倍时，则获得抗性淀粉含量高的淀粉的最短时间成为1/2.2倍、最长时间成为1/3倍，反应温度提高10℃时，则最短时间、最长时间均成为1/4.2倍。
抗性淀粉含量高的淀粉的制备条件，由反应温度、酸当量浓度以及反应时间的三个因素体现。并且，式(2)中使用的反应温度以及酸当量浓度的上限和下限，由前述的上述式(1)决定。
通过将直链淀粉含量是40％以上的直链淀粉含量高的淀粉(高直链淀粉)作为原料，并在无机酸水溶液中以特定的条件酸处理该原料，能够稳定地获得抗性淀粉含量高的淀粉。
另外，通过将直链淀粉含量是40％以上的直链淀粉含量高的淀粉作为原料进行酸处理，并对于此时的反应温度、酸当量浓度以及反应时间分别设定特定的条件，能够显著地提高抗性淀粉含量。另外，能够高效地增加高直链淀粉的抗性淀粉的绝对量。
由此获得的抗性淀粉含量高的淀粉，抗性淀粉的比例高、抗性淀粉的耐热性优异并且作为肠内环境改善剂是有效的。
下面，对于肠内环境改善剂，更加具体地说明。
(第一实施方式)
本实施方式中的肠内环境改善剂，作为有效成分含有满足上述的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉。
本实施方式中的肠内环境改善剂具有增加肠内的属于双歧杆菌属的细菌的作用。
对于肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉的含量并不特别限定，从有效增加肠内的属于双歧杆菌属的细菌的观点考虑时，例如5重量％以上，优选10重量％以上，进一步优选15重量％以上。另外，对于肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉的含量并不特别限定，是100重量％以下，可以根据剂型进行设定。
对于肠内环境改善剂的剂型并不特别限定，例如可以是，胶囊剂、片剂、颗粒剂、微粒剂(细粒剤)、散剂。
另外，肠内环境改善剂可以作为医药品、医药部外品(准医药品)、食品添加物、饮食品、饲料等使用其本身，可以在这些中配合规定的比例而使用。
对于肠内环境改善剂的配合量并不特别限定，但是，配合于饮食品或饲料时，从有效发挥增加属于双歧杆菌属的细菌的作用观点考虑时，例如可以设定为1重量％以上，优选3重量％以上，进一步优选5重量％以上。另外，从抑制饮食品或饲料本身的风味、食感劣化的观点考虑时，肠内环境改善剂的配合量可以设成例如50重量％以下，优选30重量％以下，进一步优选20重量％以下。
另外，肠内环境改善剂的给药量，例如可以根据肠内环境改善剂的有效成分的含量、患者的年龄、患者的病状或一般状态、给药方法等进行设定。从更加确切地获得增加属于双歧杆菌属的细菌的作用的观点考虑时，对于成人，作为每1kg体重、每日的有效成分，例如可以是50mg以上，优选100mg以上。
另外，对于肠内环境改善剂的给药量的上限并不特别限定，但是，对于成人，作为每1kg体重、每日的有效成分，例如可以是5g以下。
另外，通过本实施方式中的肠内环境改善剂，例如，能够维持正常的摄食量或成长，并且能够获得有机酸量的增加作用或肠内pH的降低作用。
另外，通过本实施方式中的肠内环境改善剂，能够获得选自由如下作用所组成的组中的一种或两种以上的作用：粪便重量的增加作用；肠组织重量的增加作用；以及，血中的总胆固醇降低作用、血中的中性脂肪降低作用、下述式(Ⅰ)所示的动脉硬化指数降低作用等的脂质代谢改善作用。
动脉硬化指数＝((总胆固醇浓度(mg/dl))－(HDL胆固醇浓度(mg/dl)))/(HDL胆固醇浓度(mg/dl))       (Ⅰ)
(第二实施方式)
本实施方式中的肠内环境改善剂，作为有效成分含有满足上述的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉而构成。更加具体地，本实施方式中的肠内环境改善剂，作为有效成分含有满足上述条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉，并且含有上述抗性淀粉含量高的淀粉以外的不溶性膳食纤维。
本实施方式中的肠内环境改善剂，具有脂质代谢改善作用。作为脂质代谢改善作用，具体地可例举：选自于由血中的总胆固醇降低作用、血中的中性脂肪降低作用以及下述式(Ⅰ)所示的动脉硬化指数降低作用所组成的组中的一种或两种以上的作用。
动脉硬化指数＝((总胆固醇浓度(mg/dl))－(HDL胆固醇浓度(mg/dl)))/(HDL胆固醇浓度(mg/dl))     (Ⅰ)
另外，本实施方式中，通过组合使用上述抗性淀粉含量高的淀粉以及不溶性膳食纤维，根据它们的相乘效果能够显著提高脂质代谢改善作用。
膳食纤维分类为不溶性膳食纤维和水溶性膳食纤维、难消化性寡糖、以及抗性淀粉。
作为不溶性膳食纤维，例如，可例举：选自于由纤维素、半纤维素、木质素、壳聚糖、甲壳素、以及羧甲基纤维素、羟丙基纤维素等的纤维素衍生物所组成的组中的一种或两种以上。其中，纤维素是构成植物以及酵母的细胞壁的主成分，易利用，是不溶性膳食纤维的代表性化合物。对于不溶性膳食纤维的来源并不特别限定，可以使用来自植物的不溶性膳食纤维、来自动物的不溶性膳食纤维、来自菌类的不溶性膳食纤维等。
本实施方式中，可以使用一种或组合两种以上不溶性膳食纤维而配合。
对于肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉以及不溶性膳食纤维的含量并不特别限定。肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉的含量，从有效改善脂质代谢的观点考虑时，例如是5重量％以上，优选10重量％以上，进一步优选15重量％以上。另外，对于肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉的含量并不特别限定，是100重量％以下，可以根据剂型进行设定。
另外，本实施方式中，对于不溶性膳食纤维的种类并不特别限定，但是，从容易获得的观点考虑时，例如可例举：选自于纤维素以及其衍生物的一种以上或两种，优选使用纤维素。
配合于肠内环境改善剂的不溶性膳食纤维的配合量，在充分获得上述抗性淀粉含量高的淀粉的效果的范围内可以适宜设定，例如可以设定为5重量％以上。
另外，本实施方式中，通过组合使用上述抗性淀粉含量高的淀粉以及不溶性膳食纤维，根据它们的相乘效果能够显著提高脂质代谢改善作用。
例如，肠内环境改善剂中的上述抗性淀粉含量高的淀粉的配合量可以是5重量％以上且95重量％以下、不溶性膳食纤维的配合量是5重量％以上且95重量％以下，优选上述抗性淀粉含量高的淀粉的配合量是10重量％以上且90重量％以下、不溶性膳食纤维的配合量是10重量％以上且90重量％以下。
对于肠内环境改善剂的剂型并不特别限定，例如，可以是选自于由胶囊剂、片剂、颗粒剂、微粒剂(细粒剤)、散剂中的剂型。
另外，肠内环境改善剂，可以作为医药品、医药部外品(准医药品)、食品添加物、饮食品、饲料等使用其本身，可以在这些中配合规定的比例而使用。
对于肠内环境改善剂的配合量并不特别限定，但是，配合于饮食品或饲料时，从有效发挥脂质代谢改善作用的观点考虑时，例如可以是1重量％以上，优选3重量％以上，进一步优选5重量％以上。另外，从抑制饮食品或饲料本身的风味、食感劣化的观点考虑时，肠内环境改善剂的配合量例如是50重量％以下，优选30重量％以下，进一步优选20重量％以下。
另外，上述抗性淀粉含量高的淀粉和不溶性膳食纤维的配合比，例如是5：95～95：5，优选20：80～80：20，进一步优选30：70～70：30程度。
肠内环境改善剂的给药量，例如可以根据肠内环境改善剂的有效成分的含量、患者的年龄、患者的病状或一般状态、给药方法等进行设定。从更确切获得脂质代谢改善作用的观点考虑时，对于成人，作为每1kg体重、每日的有效成分，例如可以是50mg以上，优选100mg以上。
另外，对于肠内环境改善剂的给药量的上限并不特别限定，但是，对于成人，作为每1kg体重、每日的有效成分，例如可以是5g以下。
另外，通过本实施方式中的肠内环境改善剂，例如，能够维持正常的摄食量或成长，并且能够获得有机酸量的增加作用或肠内pH的降低作用。
另外，通过本实施方式中的肠内环境改善剂，能够获得粪便重量的增加作用、肠组织重量的增加作用等。
实施例
下面虽然示出了本发明的实施例，但本发明的宗旨并非限定于此。
另外，下述中，除特别指出以外，“％”是“重量％”。
(制备例)抗性淀粉含量高的淀粉的制备
按照专利文献1所述的方法，制备满足上述条件(a)～(d)的抗性淀粉含量高的淀粉。
具体地，使用高直链玉米淀粉HS-7classⅦ(J-OIL MILLS公司产品、水分15.0％、直链淀粉含量80％)，调制加入水使相对于浆重量的淀粉干重量成为40％(淀粉干重量(dry starch whight)/浆重量(slurry whight))的浆320g。其中，在悬浮的同时添加调制成2.06N的盐酸水溶液80mL，并调整为50℃。此时，相对于包括淀粉水分的反应水，盐酸的当量浓度成为0.61N。反应24小时后，用3％NaOH中和，进行水洗、脱水、干燥，由此获得酸处理高直链玉米淀粉(抗性淀粉含量高的淀粉)。另外，酸当量浓度是指，相对于最终的反应液中的包括淀粉水分的反应水的酸当量浓度。
所获得的抗性淀粉含量高的淀粉是：
抗性淀粉含量是70.8％(基于AOAC官方方法2002.02的测定法)，
分子量峰是8500，
分子量分散度是4.2，
根据DSC测定的糊化焓是4.0J/g。
其中，分子量分布以及糊化焓的测定分别通过下述方法进行测定。
(分子量分布的测定)
分子量分布(分子量峰以及分子量分散度)的测定，使用了东曹公司(TOSOH CORPORATION)制HPLC装置(泵DP-8020、RI检测器RS-8021、脱气装置SD-8022)。分析条件如下。
色谱柱：TSKgelα－M(7.8mmφ、30cm)(东曹公司(TOSOHCORPORATION)制)2根
流速：0.5ml/分钟(min)
流动相：5mM NaNO3/二甲亚砜：水(9：1)
色谱柱温度：40℃
分析量：0.2mL(试样浓度1.0mg/mL流动相)
对于检测器的数据，使用专用的软件(使用多位(multistation)GPC-8020模型(model)Ⅱ数据収集版本(version)5.70、东曹公司(TOSOHCORPORATION)制)进行收集，并计算分子量峰、分子量分散度。标准曲线是使用分子量已知的普鲁兰(pullulan；プルラン)(昭和电工公司(ShowaDenko K.K.)制、Shodex Standard P-82)进行了制作。
(基于差示扫描量热测定法(DSC)的糊化焓测定)
对于DSC的测定，使用了MAC科技公司(MAC Science Co.,Ltd.)制DSC3100。试样15mg和蒸馏水45μL加入于70μL容量的铝槽中，用盖密闭，在室温放置3小时以上，使吸水。作为参考使用空白槽。升温是从室温至130℃以10℃/分钟(min)的速度进行。将作为通过所获得的DSC图表的吸热峰面积测定的热量的糊化焓，定义为每淀粉干重的糊化热(J/g)。
(实施例1、实施例2、参考例1以及参考例2)
使用大鼠进行了给药试验。实施例1中，给药了含有由制备例获得的抗性淀粉含量高的淀粉以及纤维素构成的肠内环境改善剂的饲料。另外，实施例2中，给药了含有由制备例获得的抗性淀粉含量高的淀粉构成的肠内环境改善剂的饲料。
试验饲料、试验条件、试验方法以及试验结果分别如下。
(试验饲料)
通过表1所示的配合，调制高脂肪、高胆固醇、高蔗糖食物的饲料。各例中使用了如下的高脂肪、高胆固醇、高蔗糖食物。
参考例1：淀粉食物(玉米淀粉10％)
参考例2：纤维素食物(纤维素10％)
实施例1：5％RS食物(抗性淀粉含量高的淀粉5％、纤维素5％)
实施例2：10％RS食物(抗性淀粉含量高的淀粉10％)
表1食物组成(高脂肪、高胆固醇、高蔗糖食物)
表1中所使用的成分如下。
玉米淀粉：普通玉米淀粉Y(regular cornstarch Y：レギュラーコーンスターチY)(株式会社J-OIL MILLS公司制)
抗性淀粉含量高的淀粉：由制备例获得的抗性淀粉含量高的淀粉
纤维素粉末：结晶纤维素(日本クレア(CLEA)株式会社制)
(试验条件)
对于7周龄、雄性的维斯特(Wister)大鼠28只用标准饲料驯化饲育5天之后，基于体重以及血液生化学分组(各组7只)，用各例的食物(表1)饲育5周。
在饲育期间，一周一次计测体重，一周两次计测摄食量。回收饲育期间结束前24小时的粪便，绝食4小时后，醚麻醉下剖腹，进行下腔静脉采血。之后，回收肝脏、盲肠以及精巢周边脂肪，进行盲肠内容物回収和pH测定。
(试验方法)
(盲肠内容物pH)
将盲肠内容物50mg悬浮于水1mL中，用pH计测定pH。
(盲肠内短链脂肪酸)
盲肠内容物0.5g中加入5倍量的95％乙醇，提取脂肪酸之后，使用YMC脂肪酸分析试剂盒(株式会社YMC公司制)进行标记化，并在下述条件下进行HPLC分析。
分析色谱柱：YMC-Pack FA(250×6.0mm ID)(株式会社YMC公司制)
流动相：用0.1N盐酸调制成pH4.5的乙腈/甲醇/水(30/16/54)
流速：1.2mL/分钟(min)
色谱柱温度：40℃
检测：UV400nm的吸収
(盲肠内容物菌落分析)
从各组任意选取两个检测体，利用DNA提取试剂盒(QUIAmp DNA stoolMini Kit，Qiagen公司制)从盲肠内容物中提取DNA。各菌的菌数是利用实时PCR(Realtime PCR)装置LineGene(Bioflux公司制)进行测定，将淀粉添加区的值作为基础，用比较ct法计算各菌的相对值。
下面示出各菌的测定条件。
对于全菌数，使用0.04μg的DNA为模板，使用正义引物(序列号1：5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGT-3')和反义引物(序列号2：5'-GTATTACCGCG-GCTGCTGGCAC-3')进行PCR。反应是，在20μL中，用10μL的SYBR(r)预混合Ex Taq(Premix Ex Taq)(tm：商标)(PerfectReal Time：完美实时)(TAKARABIO公司制)、0.4μM的各引物在如下的PCR程序下进行。1循环：95℃，10秒(sec)、40循环：95℃，20秒(sec)、61℃，31秒(sec)、1循环(解离：Dissociation)：95℃，15秒(sec)、60℃，30秒(sec)、95℃，15秒(sec)。全菌数作为将淀粉添加区为1时的相对值算出。
球形梭菌属组(Clostridium-coccoides group)，使用0.02μg的DNA为模板，使用正义引物(序列号3：5'-AAATGACGGTACCTGACTAA-3')和反义引物(序列号4：5'-CTTTGAGTTTCATTCTTGCGAA-3')进行PCR。反应是，在20μL中，用10μL的SYBR(r)预混合Ex Taq(Premix Ex Taq)(tm：商标)(Perfect Real Time：完美实时)(TAKARABIO公司制)、0.4μM的各引物在如下的PCR程序下进行。1循环：95℃，10秒(sec)、40循环：94℃，20秒(sec)、58℃，20秒(sec)、72℃，30秒(sec)、1循环(解离：Dissociation)：95℃，15秒(sec)、60℃，30秒(sec)、95℃，15秒(sec)。球形梭菌属组(Clostridium-coccoides group)的值，作为将淀粉添加区为1时的相对值算出。
拟杆菌属-普氏菌属组(Bacteroides-Prevotella group)，使用0.02μg的DNA为模板，使用正义引物(序列号5：5'-GGTGTCGGCTTAAGTGCCAT-3')和反义引物(序列号6：5'-CGGA(C/T)GTAAGGGCCGTGC-3')进行PCR。反应是，在20μL中，用10μL的SYBR(r)预混合Ex Taq(Premix Ex Taq)(tm：商标)(Perfect Real Time：完美实时)(TAKARABIO公司制)、0.4μM的各引物在如下的PCR程序下进行。1循环：95℃，10秒(sec)、40循环：95℃，20秒(sec)、58℃，10秒(sec)、72℃，30秒(sec)、1循环(解离：Dissociation)：95℃，15秒(sec)、60℃，30秒(sec)、95℃，15秒(sec)。拟杆菌属-普氏菌属组(Bacteroides-Prevotella group)的值作为将淀粉添加区为1时的相对值算出。
双歧杆菌(Bifidobacterium)，使用0.01μg的DNA为模板，使用正义引物(序列号7：5'-TCGCGTC(C/T)GGTGTGAAAG-3')和反义引物(序列号8：5'-CCACATCCAGC(A/G)TCCAC-3')进行PCR。反应是，在20μL中，用10μL的SYBR(r)预混合Ex Taq(Premix Ex Taq)(tm：商标)(Perfect Real Time：完美实时)(TAKARABIO公司制)、0.4μM的各引物在如下的PCR程序下下进行。1循环：95℃，10秒(sec)、40循环：95℃，20秒(sec)、62℃，20秒(sec)、72℃，30秒(sec)、1循环(解离：Dissociation)：95℃，15秒(sec)、60℃，30秒(sec)、95℃，15秒(sec)。双歧杆菌(Bifidobacterium)的值作为将淀粉添加区为1时的相对值进行计算。
(粪便重量)
采取饲育期间结束前24小时的粪便，冷冻干燥后，测定所获得的粪便的干重。
(盲肠组织量)
从去除的盲肠中取出盲肠内容物。洗净盲肠内部后，计测组织重量。
(血中脂质分析)
通过脂蛋白分析系统LipoSEARCH(Skylight Biotech公司)进行分析。
(统计分析)
数据的统计处理是利用StatView5.0(统计软件)进行，多重比较检验上运用了费舍尔判别分析法(Fisher’s PLSD)。
(试验结果)
(盲肠内容物pH)
图1是显示盲肠内容物的pH的测定结果的图。根据图1可确认，盲肠内容物pH，与参考例1(淀粉添加区)以及参考例2(纤维素添加区)相比，添加了抗性淀粉含量高的淀粉的实施例1以及2显示出显著低的值，在参考例1以及2和实施例1以及2之间分别存在显著性差异。
(盲肠内短链脂肪酸)
图2是显示盲肠内容物中的有机脂肪酸(短链脂肪酸)的测定结果的图。
根据图2可知，实施例2的盲肠内容物的短链脂肪酸在乙酸、丁酸以及丁二酸中均显示出显著高的值。
(盲肠内容物菌落分析)
图3～图6是显示盲肠内容物菌落分析结果的图。
根据图3可知，盲肠内容物中的全菌数，与参考例1相比参考例2显示出显著高的值，实施例1以及2也均显示出高的值。
根据图4可知，盲肠内容物中的双歧杆菌(Bifidobacterium)，参考例2与参考例1相比增加至约56倍。实施例1中进一步增加至270倍，实施例2中增加至620倍。
根据图5可知，对于盲肠内容物中的球形梭菌属组(Clostridium cocoidesgroup)，各例之间未确认到显著的差。
根据图6可知，对于盲肠内容物中的拟杆菌属-普氏菌属组(Bacteroides-Prevotella group)，各例之间未确认到显著的差。
(粪便重量)
图7是显示粪便干重的测定结果的图。根据图7可知，每天的粪便重量，与参考例1相比参考例2、实施例1以及2显示出显著的高的值。
(盲肠组织量)
图8是显示盲肠组织量的测定结果的图。根据图8可确认，盲肠组织重量，与参考例1相比实施例1以及2显示出显著高的值，分别存在显著性差异。实施例1以及2的盲肠组织重量，与参考例2相比也显示出显著的高的值。
(血中脂质分析)
图9是显示血中中性脂肪的测定结果的图。根据图9可知，血中的中性脂肪浓度，与参考例1以及2相比，实施例1以及2显示出显著的低的值。另外，实施例1和参考例1之间存在显著性差异。
图10是显示血中总胆固醇的测定结果的图。根据图10可知，对于血中总胆固醇浓度，参考例1和实施例1、参考例2和实施例1以及实施例2之间存在显著性差异。
另外，表2中示出了胆固醇均衡的测定结果。表2中，动脉硬化指数是根据上述式(Ⅰ)算出。根据表2可知，摄取实施例1以及2的抗性淀粉含量高的淀粉的组中还可确认到胆固醇均衡的改善。
表2
参考例1 参考例2 实施例1 实施例2
动脉硬化指数 0.67 0.65 0.58 0.55
(总摄食量)
图11是显示试验期间中的总摄食量的图。根据图11可确认，经过饲育期间的总摄食量是，实施例2最高，参考例1以及实施例1之间存在显著性差异。经过饲育期间的总摂取卡路里是，实施例1最低，参考例1以及实施例2之间存在显著性差异。
(体重)
图12是显示试验期间中的体重的推移的图。饲育期间中，未发现各大鼠存在异常，顺利地成长。根据图12可确认，体重是，经过试验期间，实施例1存在变低的倾向。饲育第14天时可确认到，实施例1以及参考例2和参考例1之间分别存在显著性差异。
本申请主张2012年4月26日申请的日本专利申请特愿2012-100657为基础的优先权，该申请的公开内容全部援引于本申请。

Claims (12)

1.一种肠内环境改善剂，其作为有效成分含有满足以下的条件(a)、(b)、(c)以及(d)的抗性淀粉含量高的淀粉：
(a)根据AOAC官方方法2002.02的抗性淀粉测定法测定的抗性淀粉含量为60％以上；
(b)分子量峰为6×103以上且4×104以下；
(c)分子量分散度为1.5以上且6.0以下；
(d)根据差示扫描量热测定法测定的50℃～130℃的糊化焓为10J/g以下。
2.如权利要求1所述的肠内环境改善剂，其中，所述抗性淀粉含量高的淀粉，是通过将直链淀粉含量为40％以上的直链淀粉含量高的淀粉作为原料，并且在无机酸水溶液中对该原料进行酸处理而获得。
3.如权利要求1或2所述的肠内环境改善剂，其中，所述肠内环境改善剂具有使肠内的属于双歧杆菌属的细菌增加的作用。
4.如权利要求1～3中任一项所述的肠内环境改善剂，其中，所述肠内环境改善剂具有脂质代谢改善作用。
5.如权利要求4所述的肠内环境改善剂，其中，所述脂质代谢改善作用是血中的总胆固醇降低作用。
6.如权利要求4所述的肠内环境改善剂，其中，所述脂质代谢改善作用是血中的中性脂肪降低作用。
7.如权利要求4所述的肠内环境改善剂，其中，所述脂质代谢改善作用是下述式(Ⅰ)示出的动脉硬化指数的降低作用，
动脉硬化指数＝((总胆固醇浓度(mg/dl))－(HDL胆固醇浓度(mg/dl)))/(HDL胆固醇浓度(mg/dl))(Ⅰ)。
8.如权利要求4～7中任一项所述的肠内环境改善剂，其中，其还含有不溶性膳食纤维。
9.如权利要求8所述的肠内环境改善剂，其中，所述不溶性膳食纤维是纤维素或纤维素的衍生物。
10.如权利要求9所述的肠内环境改善剂，其中，所述不溶性膳食纤维是纤维素。
11.一种饮食品，其含有权利要求1～10中任一项所述的肠内环境改善剂。
12.一种饲料，其含有权利要求1～10中任一项所述的肠内环境改善剂。
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