CN104276892B - 一种毛竹笋富硒专用液态肥及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种毛竹笋富硒专用液态肥及其制备方法,所述液态肥包括硝酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硼酸、EDTAZnNa2、EDTAMnNa2、NaFeEDTA、硅酸钠、钼酸铵、5‑硝基愈创木酚钠、十二烷基苯磺酸钠、苯甲酸钠以及富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源;该硒源是将富硒酵母制成种子后,在含有无机硒的培养基中发酵增殖培养,灭活并分解而成。所述制备方法是将各有效成分按一定顺序溶解,调节pH值,定容而成。本发明毛竹笋富硒专用液态肥具有营养元素全面、配方合理、安全、肥料利用率高、施肥方便、不污染环境等优点,有机态硒源的使用,提高了硒元素的利用效率,增加了竹笋硒含量,同时保证肥料使用和富硒毛竹笋食用的安全。
Description
技术领域
本发明涉及复合肥料及其制备方法,具体涉及一种毛竹笋富硒专用液态肥及其制备方法。
背景技术
硒是一种人体必需的微量元素,广泛存在于人体内脏之中,对人类健康具有无法取代的重要作用。食用富硒食品是一种安全、经济和高效的人体补硒途径。而我国南方大部分地区属于硒缺乏地区,部分地区属硒严重缺乏地区,且大部分缺硒地区的居民缺乏补硒意识和途径。同时,我国长江以南的大部分地区有毛竹分布,且绝大部分毛竹产区居民有食用毛竹笋的传统习惯,因此,开发富硒毛竹笋可极大程度上解决我国南方缺硒地区居民的补硒问题。竹笋富硒是通过竹林吸收富硒肥中的硒,利用竹林自身的生物合成能力在竹笋体内合成安全且容易被人体吸收的有机硒。食用富硒竹笋不仅可以降低血压、血脂,改善人体生理功能,还可以满足人体对硒的需要,从而起到预防心脑血管疾病、提高人体免疫力、延年益寿的作用。
富硒的途径主要有土壤施肥、叶面施肥,针对竹类植物还可采用竹腔注射施肥,竹腔注射施肥具有施肥利用率高、不污染环境等优点。国内关于竹类植物富硒的报道不多,其中主要为利用富硒有机或无机固态肥对竹类植物进行富硒研究,硒源主要为亚硒酸钠或硒酸钠等无机硒,而添加无机硒的固态肥在土壤施肥后,会对施肥土壤和附近水源、水体造成点源污染,一次大面积施肥或多次施肥后,会在土壤和水体中聚集,浓度过高则会危害附近动植物的安全。目前关于液态富硒肥的专利主要集中在多效多元复合叶面硒肥、缓释叶面肥、氨基酸态硒肥、果树富硒输液肥以及胡萝卜、金银花、绿茶等经济植物专用液态肥,其中,元素配比与毛竹笋对液态肥的需求存在较大差异,无法直接转用于毛竹笋。而且,在液态肥制备过程中,主要是将各种营养元素放入反应釜或其他设备、容器中搅拌制得,在储藏一段时间后存在出现沉淀的问题。利用液态肥进行竹腔注射施肥的报道主要集中在毛竹、雷竹等重要的笋用竹种,但硒源也多为亚硒酸钠、硒酸钠等无机态硒及矿渣或稀土,相对于有机态硒源,具有毒性大且利用效率低等缺点,不仅农业生产成本高,且易造成环境污染。孟勇等发表的《毛竹竹腔富硒施肥对竹笋品质的影响》中,富硒肥采用无机态的硒源,施肥后虽未影响毛竹正常生长,但在施肥后存在施肥处竹腔壁变为褐色的现象。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,提供一种营养元素全面、配方合理,能提高毛竹笋硒含量,利用效率高,保证毛竹笋食用安全性的毛竹笋富硒专用液态肥。
本发明进一步要解决的技术问题是,提供一种配制方便、快捷,能长时间储藏不沉淀的毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法。
本发明解决技术问题所采用的技术方案如下:
一种毛竹笋富硒专用液态肥,各有效成分的配比为:硝酸钾20~60 g/L,磷酸二氢钾50~95 g/L,磷酸氢二钾3~8 g/L,硼酸20~35 g/L,EDTAZnNa2
20~35
g/L,EDTAMnNa2 10~25 g/L,NaFeEDTA 10~25 g/L,硅酸钠5~8 g/L,钼酸铵5~8 g/L,5-硝基愈创木酚钠0.6~1.2g/L,十二烷基苯磺酸钠5~10 g/L、苯甲酸钠1~7 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.5~0.8g/L;所述有机、无机混合态硒源,主要成分为分子量170~240的氨基酸结合态硒和亚硒酸钠,其中,氨基酸结合态硒占60~75 wt%,主要包括硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸等。
进一步,一种毛竹笋富硒专用液态肥,各有效成分的配比为:硝酸钾30~50g/L,磷酸二氢钾65~80 g/L,磷酸氢二钾5~6 g/L,硼酸25~30 g/L,EDTAZnNa2
25~30 g/L,EDTAMnNa2 16~20 g/L,NaFeEDTA 16~20 g/L,硅酸钠6~7 g/L,钼酸铵6~7 g/L,5-硝基愈创木酚钠0.8~1 g/L,十二烷基苯磺酸钠7~8 g/L、苯甲酸钠3~5 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.6~0.72 g/L。
进一步,所述的有机、无机混合态硒源,其制备步骤如下:
(1)富硒酵母种子培养:配制活化培养基,称取相当于活化培养基质量3~8%的干酵母加入活化培养基中混匀,在通风发酵罐中进行活化培养,得富硒酵母种子;
(2)富硒酵母增殖培养:配制含硒发酵培养基,将步骤(1)所得富硒酵母种子加入发酵培养基中混匀,在通风发酵罐中进行发酵培养,得发酵液;
(3)发酵液中蛋白质的水解:将步骤(2)所得发酵液加热灭活酵母菌,在通风发酵罐中通风搅拌,清除发酵液中的乙醇,冷却至室温后,加入蛋白酶进行发酵,最后灭酶,得最终发酵液;
(4)发酵液浓缩:将步骤(3)所得最终发酵液过滤,浓缩,即得有机、无机混合态硒源发酵液。
所述有机、无机混合态硒源发酵液中硒元素含量根据GB5009.93-2010《食品安全国家标准——食品中硒的测定》的方法进行检测。
步骤(1)中,选用的干酵母菌株为市售酒曲酵母、啤酒酵母、红酵母或假丝酵母,容易培养,繁殖速度快且自身合成的硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸、硒代胱氨酸含量较高,可以达到生产氨基酸态有机硒的目的。
进一步,步骤(1)中,所述活化培养的温度为25~28℃,搅拌转速为180~360r/min,通气比为0.8~1.6,活化培养时间为36~48h。
进一步,步骤(2)中,所述发酵的温度为25~28℃,搅拌转速为180~360r/min,通气比为1.2~1.8,发酵培养时间为36~48h。
进一步,步骤(1)中,所述活化培养基有效组分包括:碳源、氮源及其它营养成分,其中,碳源含量为60~210g/L,氮源含量为20~40g/L,其它营养成分为3~3.7g/L;所述其它营养成分可以是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钙、硫酸镁、硫酸铁、维生素A族、维生素B族或维生素C族中的一种或几种;培养基pH值控制在 5.0~6.0之间,高压灭菌,然后冷却至室温。
所述碳源可以是马铃薯粉、蔗糖、麦芽糖或葡萄糖中的一种或几种,所述氮源可以是大豆粉、酵母粉、蛋白粉、蛋白胨、碳酸铵或氯化铵中的一种或几种。
进一步,步骤(2)中,所述含硒发酵培养基有效组分包括:碳源、氮源、硒源及其它营养成分,其中,碳源含量为60~200g/L,氮源含量为20~50g/L,硒源含量为200~300mg/L,其它营养成分含量为3.5~5g/L;所述其他营养成分可以是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钙、硫酸镁、硫酸铁、维生素A族、维生素B族或维生素C族中的一种或几种;培养基pH值控制在 5.0~6.0之间,高压灭菌,然后冷却至室温。
所述碳源可以是马铃薯粉、蔗糖、麦芽糖或葡萄糖中的一种或几种,所述氮源可以是大豆粉、酵母粉、蛋白粉、蛋白胨、碳酸铵或氯化铵中的一种或几种,所述硒源可以是亚硒酸钠、硒酸钠或硒酸铵中的一种或几种。
进一步,步骤(3)中,所述加热灭活的温度为60~70℃,时间为20~30 min;所述通风搅拌的时间为30~60min,搅拌转速为180~360r/min,通气比为0.6~0.8;所述蛋白酶的添加量为30~50U/g发酵液,蛋白酶可以是市售外切蛋白酶、复合蛋白酶或蛋白酶K产品;所述发酵的温度为37~60℃,发酵时间为3~5天;所述灭酶采用微波灭酶,功率密度为2~4W/g,灭酶时间为5~10min。加入蛋白酶的原因是分解蛋白质为小分子氨基酸,以利于毛竹吸收。
进一步,步骤(4)中,所述过滤先用15~30目网筛进行粗过滤,然后用孔径为120~180微米的过滤器或滤纸过滤,再于滤渣中加入相当于滤液体积30~50%的无菌水,重复所述过滤步骤1~2次;所述浓缩是指将所得滤液合并,于60~70℃下浓缩至滤液体积的5~10%。过滤可以滤掉未被利用的马铃薯粉、豆粉以及灭活酵母菌分解后的残渣等大颗粒物质。
有机态硒源制备主要利用酵母菌在增殖过程中可以将无机物转变为有机物的原理。酵母菌在增殖生长过程中需要利用碳源、氮源、其他有机物及无机营养元素等,其中,也包括硫元素和硒元素,由于硫元素和硒元素处于元素周期表中同一族,其功能接近,酵母菌在合成氨基酸特别是蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸时会将硒元素代替硫元素结合到合成的氨基酸中,从而形成硒代氨基酸,也就是有机态的氨基酸。在酵母菌繁殖过程中氨基酸又会被合成多肽、蛋白质以及各种酶等物质,因此在酵母菌增殖培养结束后需要将酵母菌灭活,然后利用蛋白酶将发酵液中的蛋白质分解为氨基酸,以利于毛竹吸收。
本发明进一步解决技术问题所采用的技术方案如下:一种毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法,包括以下步骤:
(1)将硝酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾溶于有机、无机混合态硒源发酵液中,调节pH值至5.0~6.0之间;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅酸钠、苯甲酸钠、硼酸、钼酸铵,调节pH值至5.2~5.6之间;
(3)向步骤(2)所得溶液中加入EDTAZnNa2,EDTAMnNa2,NaFeEDTA,调节pH值至4.8~5.6之间;
(4)加入5-硝基愈创木酚钠、十二烷基苯磺酸钠,用去离子水定容,得到毛竹笋富硒专用液态肥。
进一步,步骤(1)~(3)中,所述pH值优选用1~6mol/L的盐酸调节。
由于活化培养基和发酵培养基中都加入了磷酸二氢钾和磷酸氢二钾,它们最终会转移到有机、无机混合态硒源发酵液中,因此,为了保证配制的毛竹笋富硒专用液态肥中磷酸二氢钾和磷酸氢二钾含量在本发明设计的质量范围内,在配制液态肥时加入的磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的量需要减去上述培养基中所使用的量。
本发明毛竹笋富硒专用液态肥是利用毛竹腔壁可吸收矿质元素和生物小分子的特点,在毛竹笋富硒专用液态肥中加入植物细胞赋活素(5-硝基愈创木酚钠)和阴离子表面活性剂(十二烷基苯磺酸钠)以活化毛竹腔壁细胞,促进毛竹腔壁细胞的新陈代谢,提高毛竹腔壁对本发明毛竹笋富硒专用液态肥的吸收效率,施用本发明液态肥后,在土壤硒背景值相同的情况下,竹笋中全硒含量比未施用本发明液态肥相比提高5.6~8.3%;磷酸二氢钾、磷酸氢二钾的加入可长期有效稳定液态肥pH值,防止有效成分的分解、沉淀;EDTA螯合的正价态微量元素化合物以及易溶于水的硅酸钠、硼酸、钼酸铵等负价态微量元素化合物作为毛竹笋富硒专用液态肥的主要成分,可以为竹林有效补充微量元素,有利于竹林的正常生长;苯甲酸钠在液态肥中作为防腐剂,防止有机硒被微生物分解和转化。本发明中的硒源采用在富硒酵母扩繁过程中加入无机硒化合物,利用酵母代谢、繁殖将无机硒转化为有机硒,最后将酵母灭活分解制得有机、无机混合态硒,其硒源中含有氨基酸结合态的有机硒,仅含有少量未被酵母利用的无机硒化物,这有别于现有技术中所惯用的仅含有简单无机态硒的硒源;按照本发明方法制备的毛竹笋富硒专用液态肥在毛竹林中进行竹腔注射施肥,可进一步提高毛竹笋中硒含量。通过施用本发明所制得的毛竹笋富硒专用液态肥2~3L/公顷,毛竹林竹笋中硒含量可提高0.0292~0.0394 mg硒/kg竹笋,且竹笋中的硒90%以上为有机态硒。肥料中的有机硒通过主动运输被毛竹吸收后,在毛竹体内通过转氨基、脱氨基、脱羧作用、三羧酸循环、糖酵解和其他代谢途径转变为毛竹自身需要的氨基酸、有机酸、糖等有机产物;无机硒通过主动或被动运输进入毛竹体内,在叶片或根系等器官中参与氨基酸、糖、核酸的合成,转变为有机结合态硒。由于在碱性条件甚至pH值升高到6.5以上时钼酸根、硒酸根等会与Fe、Mn等金属元素产生沉淀,因此,本发明液态肥中的各组分按照一定的步骤和顺序进行添加,调节pH值和选择络合态的金属元素均是为了保证不产生沉淀。本发明所述的毛竹富硒专用液态肥既可满足竹林养分需求又可提高竹笋硒含量、改善竹笋品质,具有营养元素全面、配方合理、肥料利用率高、施肥方便、不污染环境等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例
1
1、本发明毛竹笋富硒专用液态肥实施例:
各有效成分的配比为:硝酸钾50 g/L,磷酸二氢钾79.75 g/L(包括培养基中添加的磷酸二氢钾),磷酸氢二钾6 g/L,硼酸30 g/L,EDTAZnNa2 30
g/L,EDTAMnNa2 20 g/L,NaFeEDTA 20 g/L,硅酸钠7 g/L,钼酸铵7 g/L,5-硝基愈创木酚钠1 g/L,十二烷基苯磺酸钠8 g/L、苯甲酸钠5 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.62 g/L;所述有机、无机混合态硒源,主要成分为分子量170~240的氨基酸结合态硒和亚硒酸钠,其中,氨基酸结合态硒占71.5 wt%。
其中,硒源的制备方法如下:
配制活化培养基1L:将马铃薯粉180g、酵母粉 15g,大豆粉25g加水煮沸并冷却后,加葡萄糖 30g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁0.5g、硫酸铁0.1g,加水定容至1L,调节pH至6.0,于0.1MPa、121℃下高压灭菌20 min,冷却至室温,加入维生素B1 0.1mg、维生素B2 0.1mg、维生素C 0.5mg,培养基质量为1200g。
配制含硒发酵培养基10L:将马铃薯粉1500g、酵母粉 200g,大豆粉 300g加水煮沸并冷却后,加葡萄糖 400g,磷酸二氢钾30g、硫酸镁10g、硫酸铁1g,加水定容至10L,调节pH至6.0,于0.1MPa、121℃下高压灭菌20 min,冷却至室温,加入维生素B1 1mg、维生素B2 1mg、维生素C 5mg、硒酸钠2g。
(1)富硒酵母种子培养:称取36g干酒曲酵母(安琪公司,SAP物料号:84000000),加入活化培养基中混匀,在通风发酵罐中进行活化培养,控制温度25℃,搅拌转速360r/min,通气比1.6,活化培养36h,得富硒酵母种子;
(2)富硒酵母增殖培养:将步骤(1)所得富硒酵母种子加入发酵培养基中混匀,在通风发酵罐中进行发酵培养,控制温度在25℃,搅拌转速360r/min,通气比1.8,发酵培养36h,得发酵液11.5kg;
(3)发酵液中蛋白质水解:将步骤(2)所得发酵液加热至60℃,灭活30min,在通风发酵罐中搅拌60min,搅拌转速360r/min,通气比0.8;冷却至室温后,加入蛋白酶K(GenView公司,proteinase K)3.45×105U,于60℃下发酵3天,最后微波灭酶,功率密度4W/g,时间5min,得最终发酵液;
(4)发酵液浓缩:将步骤(3)所得最终发酵液先用30目的网筛粗过滤,然后采用孔径为120微米过滤器过滤,得9.5L滤液,滤渣中加入3L冷却无菌水,重复过滤1次,合并得12L滤液,在60℃下低温浓缩至600mL,得到有机、无机混合态硒源发酵液。
根据食品安全国家标准GB5009.93-2010《食品中硒的测定》的方法检测有机、无机混合态硒源发酵液中硒元素含量为1.37mg/mL,其中,无机硒含量0.39 mg/mL,有机态硒含量为0.98 mg/mL。
2、本发明制备1L毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法实施例:
量取硒元素含量为1.37mg/mL的上述有机、无机混合态硒源发酵液450mL。
(1)将50g硝酸钾、55g磷酸二氢钾、6g磷酸氢二钾溶于450mL有机、无机混合态硒源发酵液中,用1mol/L的稀盐酸调节pH值至5.0;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入7g硅酸钠、5g苯甲酸钠、30g硼酸、7g钼酸铵,用1mol/L的稀盐酸调节pH值至5.2;
(3)向步骤(2)所得溶液中逐步加入30g EDTAZnNa2,20g EDTAMnNa2,20g NaFeEDTA,并用1mol/L的稀盐酸调节pH值至4.8;
(4)加入1g 5-硝基愈创木酚钠、8g十二烷基苯磺酸钠,用去离子水定容至1L,得到毛竹笋富硒专用液态肥。
实施例
2
1、本发明毛竹笋富硒专用液态肥实施例:
各有效成分的配比为:硝酸钾30 g/L,磷酸二氢钾65.03 g/L(包括培养基中添加的磷酸二氢钾),磷酸氢二钾5.5 g/L,硼酸30 g/L,EDTAZnNa2 30
g/L,EDTAMnNa2 20 g/L,NaFeEDTA 20 g/L,硅酸钠7 g/L,钼酸铵7 g/L,5-硝基愈创木酚钠1 g/L,十二烷基苯磺酸钠8 g/L、苯甲酸钠3 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.7 g/L;所述有机、无机混合态硒源,主要成分为分子量170~240的氨基酸结合态硒和亚硒酸钠,其中,氨基酸结合态硒占71.3 wt%。
其中,硒源的制备方法如下:
配制活化培养基5 L:将麦芽糖150g、酵母粉 100g,蛋白胨75g加水煮沸并冷却后加入葡萄糖 150g,磷酸二氢钾15g、硫酸镁1.5g、硫酸铁0.5g,加水定容至5L,调节pH至5.5,于0.1MPa、121℃下高压灭菌30 min,冷却至室温,加入维生素B1 0.5mg、维生素B2 0.5mg、维生素C 2.5mg,培养基质量为5.3kg。
配制含硒发酵培养基50L:将麦芽糖1500g、酵母粉 1250g,蛋白胨500 g加水煮沸并冷却后,加葡萄糖 1500g,磷酸钙200g、硫酸镁40 g,亚硒酸钠15g,加水定容至50L,调节pH至5.5,于0.1Mpa、121℃下高压灭菌20 min,冷却至室温,加入维生素B1 5mg、维生素B2 5mg、维生素C 25mg。
(1)富硒酵母种子培养:称取265g高活性啤酒干酵母(安琪公司,SAP物料号:80000005),加入活化培养基中混匀,在通风发酵罐中进行活化培养,控制温度26℃,搅拌转速180r/min,通气比0.8,活化培养48h,得富硒酵母种子;
(2)富硒酵母增殖培养:将步骤(1)所得富硒酵母种子加入发酵培养基中混匀,在通风发酵罐中进行发酵培养,控制温度在26℃,搅拌转速180r/min,通气比1.2,发酵培养48h,得发酵液57kg;
(3)发酵液中蛋白质水解:将步骤(2)所得发酵液加热至70℃,灭活20min,在通风发酵罐中搅拌30min,搅拌转速180r/min,通气比0.6;冷却至室温后,加入食品级外切蛋白酶(杰能科公司,型号Protex 51FP)2.85×106U,于45℃下发酵4天,最后微波灭酶,功率密度3W/g,时间8min,得最终发酵液;
(4)发酵液浓缩:将步骤(3)所得最终发酵液,混匀,先用16目的网筛粗过滤,然后采用孔径为150微米过滤器过滤,得50L滤液,滤渣中加入20L冷却无菌水,重复过滤2次,合并得89L滤液,在65℃低温浓缩至4.5L,得到有机、无机混合态硒源发酵液。
根据食品安全国家标准GB5009.93-2010《食品中硒的测定》的方法检测有机、无机混合态硒源发酵液中硒元素含量为1.43mg/mL,其中,无机硒含量0.41 mg/mL,有机态硒含量为1.02 mg/mL。
2、本发明制备5L毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法实施例:
量取硒元素含量为1.43mg/mL的上述有机、无机混合态硒源发酵液2.45L。
(1)将150g硝酸钾、317g磷酸二氢钾、27.5g磷酸氢二钾溶于2.45L有机、无机混合态硒源发酵液中,用3mol/L的稀盐酸调节pH值至5.5;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入35g硅酸钠、15g苯甲酸钠、150g硼酸、35g钼酸铵,用3mol/L的稀盐酸调节pH值至5.4;
(3)向步骤(2)所得溶液中逐步加入150g EDTAZnNa2,100g EDTAMnNa2,100g NaFeEDTA,并用3mol/L的稀盐酸调节pH值在5.2;
(4)加入5g 5-硝基愈创木酚钠、40g十二烷基苯磺酸钠,用去离子水定容至5L,得到毛竹笋富硒专用液态肥。
实施例
3
1、本发明毛竹笋富硒专用液态肥实施例:
各有效成分的配比为:硝酸钾40 g/L,磷酸二氢钾70.26 g/L(包括培养基中添加的磷酸二氢钾),磷酸氢二钾5.5 g/L,硼酸28 g/L,EDTAZnNa2 27 g/L,EDTAMnNa2 18 g/L,NaFeEDTA 18 g/L,硅酸钠6.5 g/L,钼酸铵6.5 g/L,5-硝基愈创木酚钠0.9 g/L,十二烷基苯磺酸钠7.5 g/L、苯甲酸钠4 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.71 g/L;所述有机、无机混合态硒源,主要成分为分子量170~240的氨基酸结合态硒和亚硒酸钠,其中,氨基酸结合态硒占61.2 wt%。
其中,硒源的制备方法如下:
配制活化培养基10L:将马铃薯粉1200g、酵母粉 100g,蛋白粉100g加水煮沸并冷却后,加蔗糖 300g,磷酸二氢钾30g,加水定容至10L,调节pH至5.0,于0.1Mpa、121℃下高压灭菌20 min,冷却至室温,培养基质量为11.7kg。
配制含硒发酵培养基100L:将马铃薯粉12kg、酵母粉 1kg,蛋白粉 1kg加水煮沸并冷却后,加蔗糖3kg,磷酸二氢钾300g、硫酸镁50g,加水定容至100L,调节pH至5.0,于0.1Mpa、121℃下高压灭菌20 min,冷却至室温,加入维生素B1 10mg、维生素B2 10mg、维生素C 50mg、亚硒酸钠30g。
(1)富硒酵母种子培养:称取936g干酒曲酵母(安琪公司,SAP物料号:84000000),加入活化培养基中混匀,在通风发酵罐中进行活化培养,控制温度28℃,搅拌转速240r/min,通气比1.2,活化培养42h,得富硒酵母种子;
(2)富硒酵母增殖培养:将步骤(1)所得富硒酵母种子加入发酵培养基中混匀,在通风发酵罐中进行发酵培养,控制温度在28℃,搅拌转速270r/min,通气比1.5,发酵培养42h,得发酵液115kg;
(3)发酵液中蛋白质水解:将步骤(2)所得发酵液加热至65℃,灭活25min,在通风发酵罐中搅拌45min,搅拌转速240r/min,通气比0.7;冷却至室温后,加入食品级外切蛋白酶(杰能科公司,型号Protex 51FP)5.75×106U发酵液,于37℃下发酵5天,最后微波灭酶,功率密度3W/g,时间10min,得最终发酵液;
(4)发酵液浓缩:将步骤(3)所得最终发酵液先用30目的网筛粗过滤,然后采用孔径为180微米过滤器过滤,得102L滤液,滤渣中加入31L冷却无菌水,重复过滤2次,合并得158L滤液,在70℃低温浓缩至15L,得到有机、无机混合态硒源发酵液。
根据食品安全国家标准GB5009.93-2010《食品中硒的测定》的方法检测有机、无机混合态硒源发酵液中硒元素含量为0.85mg/mL,其中,无机硒含量0.33 mg/mL,有机态硒含量为0.52 mg/mL。
2、本发明制备10L毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法实施例:
量取硒元素含量为0.85mg/mL的上述有机、无机混合态硒源发酵液8.3L。
(1)将400g硝酸钾、520g磷酸二氢钾、55g磷酸氢二钾溶于8.3L有机、无机混合态硒源发酵液中,用6mol/L的盐酸调节pH值至6.0;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入65g硅酸钠、40g苯甲酸钠、280g硼酸、65g钼酸铵,用6mol/L的盐酸的稀盐酸调节pH值至5.6;
(3)向步骤(2)所得溶液中逐步加入270g EDTAZnNa2,180g EDTAMnNa2,180g NaFeEDTA,并用6mol/L的盐酸调节pH值至5.6;
(4)加入9 g 5-硝基愈创木酚钠、75 g十二烷基苯磺酸钠,用去离子水定容至10L,得到毛竹笋富硒专用液态肥。
选定一片立地条件和竹林结构一致的毛竹林,设置4个样地,样地间隔20m,其中一个不施用任何肥料,其余的在11~12月份用竹腔注射的方式分别施灌实施例1~3的毛竹笋富硒专用液态肥。在翌年4月份采挖各样地健壮竹笋作为检测样品,对竹笋中硒及有机硒含量进行分析,如表1所示。
表1 施灌实施例1~3的毛竹笋富硒专用液态肥后竹笋中硒及有机硒含量分析
项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 未施肥 |
竹笋硒含量(mg/kg) | 0.0459 | 0.0561 | 0.0513 | 0.0167 |
竹笋有机硒含量(mg/kg) | 0.0423 | 0.0516 | 0.0462 | 0.0153 |
由表1可知,采用本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥进行富硒施肥的毛竹林,其竹笋硒含量比未富硒竹林竹笋提高0.0292~0.0394mg/kg,其中有机硒含量提高0.0270~0.0363mg/kg,说明施用本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥后,竹笋硒含量增加显著。施用本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥,竹笋硒含量仍处于国家食品安全标准对蔬菜中硒含量限量(0.1 mg/kg)范围之内,说明施用本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥所生产的富硒竹笋可安全食用。综上所述,可证明本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥安全、有效。
另外,本发明所述毛竹笋富硒专用液态肥配制后常温避光保存1年未见明显沉淀。
Claims (10)
1. 一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:各有效成分的配比为:硝酸钾20~60 g/L,磷酸二氢钾50~95
g/L,磷酸氢二钾3~8 g/L,硼酸20~35 g/L,EDTAZnNa2
20~35 g/L,EDTAMnNa2
10~25 g/L,NaFeEDTA 10~25 g/L,硅酸钠5~8 g/L,钼酸铵5~8 g/L,5-硝基愈创木酚钠0.6~1.2g/L,十二烷基苯磺酸钠5~10 g/L、苯甲酸钠1~7 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.5~0.8g/L;所述有机、无机混合态硒源,主要成分为分子量170~240的氨基酸结合态硒和亚硒酸钠,其中,氨基酸结合态硒占60~75 wt%。
2.根据权利要求1所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:各有效成分的配比为:硝酸钾30~50g/L,磷酸二氢钾65~80 g/L,磷酸氢二钾5~6 g/L,硼酸25~30 g/L,EDTAZnNa2 25~30 g/L,EDTAMnNa2 16~20 g/L,NaFeEDTA 16~20
g/L,硅酸钠6~7 g/L,钼酸铵6~7 g/L,5-硝基愈创木酚钠0.8~1 g/L,十二烷基苯磺酸钠7~8 g/L、苯甲酸钠3~5 g/L以及利用富硒酵母制得的有机、无机混合态硒源0.6~0.72 g/L。
3.根据权利要求1或2所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:所述的有机、无机混合态硒源,其制备步骤如下:
(1)富硒酵母种子培养:配制活化培养基,称取相当于活化培养基质量3~8%的干酵母加入活化培养基中混匀,在通风发酵罐中进行活化培养,得富硒酵母种子;
(2)富硒酵母增殖培养:配制含硒发酵培养基,将步骤(1)所得富硒酵母种子加入发酵培养基中混匀,在通风发酵罐中进行发酵培养,得发酵液;
(3)发酵液中蛋白质的水解:将步骤(2)所得发酵液加热灭活酵母菌,在通风发酵罐中通风搅拌,冷却至室温后,加入蛋白酶进行发酵,最后灭酶,得最终发酵液;
(4)发酵液浓缩:将步骤(3)所得最终发酵液过滤,浓缩,即得有机、无机混合态硒源发酵液。
4.根据权利要求3所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(1)中,所述活化培养的温度为25~28℃,搅拌转速为180~360r/min,通气比为0.8~1.6,活化培养时间为36~48h。
5.根据权利要求3或4所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(2)中,所述发酵的温度为25~28℃,搅拌转速为180~360r/min,通气比为1.2~1.8,发酵培养时间为36~48h。
6.根据权利要求3或4所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(1)中,所述活化培养基有效组分包括:碳源、氮源及其它营养成分,其中,碳源含量为60~210g/L,氮源含量为20~40g/L,其它营养成分为3~3.7g/L;所述其它营养成分是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钙、硫酸镁、硫酸铁、维生素A族、维生素B族或维生素C族中的一种或几种;培养基pH值控制在 5.0~6.0之间,高压灭菌,然后冷却至室温。
7.根据权利要求3或4所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(2)中,所述含硒发酵培养基有效组分包括:碳源、氮源、硒源及其它营养成分,其中,碳源含量为60~200g/L,氮源含量为20~50g/L,硒源含量为200~300mg/L,其它营养成分含量为3.5~5g/L;所述其他营养成分是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钙、硫酸镁、硫酸铁、维生素A族、维生素B族或维生素C族中的一种或几种;培养基pH值控制在 5.0~6.0之间,高压灭菌,然后冷却至室温。
8.根据权利要求3或4所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(3)中,所述加热灭活的温度为60~70℃,时间为20~30 min;所述通风搅拌的时间为30~60min,搅拌转速为180~360r/min,通气比为0.6~0.8;所述蛋白酶的添加量为30~50U/g发酵液;所述发酵的温度为37~60℃,发酵时间为3~5天;所述灭酶采用微波灭酶,功率密度为2~4W/g,灭酶时间为5~10min。
9.根据权利要求3或4所述一种毛竹笋富硒专用液态肥,其特征在于:步骤(4)中,所述过滤先用15~30目网筛进行粗过滤,然后用孔径为120~180微米的过滤器或滤纸过滤,再于滤渣中加入相当于滤液体积30~50%的无菌水,重复所述过滤步骤1~2次;所述浓缩是指将所得滤液合并,于60~70℃下浓缩至滤液体积的5~10%。
10.如权利要求1~9中任一项所述毛竹笋富硒专用液态肥的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将硝酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾溶于有机、无机混合态硒源发酵液中,调节pH值至5.0~6.0之间;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅酸钠、苯甲酸钠、硼酸、钼酸铵,调节pH值至5.2~5.6之间;
(3)向步骤(2)所得溶液中加入EDTAZnNa2,EDTAMnNa2,NaFeEDTA,调节pH值至4.8~5.6之间;
(4)加入5-硝基愈创木酚钠、十二烷基苯磺酸钠,用去离子水定容,得到毛竹笋富硒专用液态肥。
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