CN104274351A - 黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物及其应用 - Google Patents

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李慧
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Abstract

本发明提供了一种沙生植物混合物及其应用，所述沙生植物混合物为黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物，这两种提取物的混合物具有良好的美白、保湿、防晒、抗衰老的功效，可用于化妆品、保健食品和医药领域。

Description

黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物及其应用
技术领域
本发明属于天然产物化学领域，尤其涉及一种黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物及其应用。
背景技术
严重干旱，自然条件极为恶劣的沙漠中，还生长着1000种左右的野生植物，其中包括不少经济价值较高的商用木材、药用植物、纤维植物等。以下就是沙生植物中的几种。
黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)分布于高山沙林、盐化沙地、河湖沿岸、干河床、荒漠河岸林中，为我国西部特有的沙漠药用植物品种。在我国宁夏贺兰山、青海东部、新疆北部、内蒙古西部、陕西北部、甘肃和西藏等地皆有零星分布。它生长在人类无法生存的荒山野铃、河床沙滩，拥有着极强的生命力。黑果枸杞味甘、性平，经科学检测，其钙、铁、尼克酸含量分别为红果枸杞的2.3、4.6、16.7倍，尤其是原花青素(OPC)超过蓝莓(黑果枸杞含OPC3690mg/100g；蓝莓含OPC330～3380mg/100g)。这是迄今为止发现OPC含量最高的天然野生果实，也是最有效的天然抗氧化剂，其功效是Vc的20倍、VE的50倍，具有超强的增强免疫力、延缓衰老的滋补作用。
黑醋栗又名黑加仑、黑豆果，学名黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)，为虎耳草目，茶藨子科小型灌木，其成熟果实为黑色小浆果，内富含VC、花青素，可以食用，也可以加工成果汁，果酱等食品。德国斯塔勒试验证明，服用黑加仑果汁可使婴儿迅速提高抵抗力和免疫力。中国预防医学科学院也证实，少年儿童经常饮用可减少牙龈出血，促进身体成长；中老年人常饮可软化血管、降低血脂、减缓衰老、增强抗病能力。因此黑加仑饮料被列为世界三大保健饮料之一。黑加仑是抗氧化剂的极好的原料。相关研究表明，抗氧化剂能很好的预防多种疾病，如心脏病和癌症，此外，抗氧化剂还可以延缓衰老、保护视力和神经系统。等量黑加仑含有的VC是橘子的4倍。黑加仑还富含VB6、VE、胡萝卜素、铜和可溶解纤维。黑加仑中还含有大量的以可提取消炎药的作用为著称的花色素甙。花色素甙是一种植物色素使黑加仑呈现深黑色，颜色越深的黑加仑果实中包含的花色素甙的数量就越多，可提取的消炎药成分越高。黑加仑包含大量的类黄酮(即维他命P)。若将这种元素与VC同时服用可以促进人体对VC的吸收和VC作用的发挥。类黄酮可帮助保持增强身体器官连接性的胶原质。人体不能自身生成类黄酮但这种元素对人体健康十分重要。类黄酮对伤疼十分有效，是瘀伤后恢复的必要元素。它们能有效地延长血流时间降低血清浓度。类黄酮和VC都能保护毛细血管的结构，帮助防治视力的进一步弱化，维护新陈代谢以及抗病毒。类黄酮和VC还能降低体内的胆固醇含量防治并治疗白内障。此外，对口腔溃疡的症状也有明显的减轻作用。
但是，目前尚未见有关于沙生植物，尤其是黑果枸杞、黑加仑和黑番茄在美容护肤方面的研究和应用。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种沙生植物提取物，旨在将沙生植物中提取物应用于化妆品、保健品或医药中，尤其优选用于护肤制剂中，以起到美容护肤的作用。
本发明的目的是这样实现的：
一种沙生植物混合物，具体为黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物。
其中，混合物中黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的重量比为1-10∶1-10，优选1-10∶1-5。
所述黑果枸杞提取物和黑加仑提取物通过分别将黑果枸杞和黑加仑原料浸渍有机溶剂并提取后进行过滤、减压及浓缩后获得，再将这两种提取物按一定比例混合，分别进行抗衰老作用、美白作用、防晒作用和保湿作用的实验研究。
所述有机溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的有机溶剂，例如：水、甲酰胺、二甲基甲酰胺、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺、三乙胺、三丁胺、三辛胺、乙酸、三氟乙酸、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇、醋酸纤维、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇和乙醚等，中的一种或几种，其中优选乙醇水溶液。
在以乙醇水溶液为有机溶剂时，乙醇的浓度选用30-90％，优选50-90％。
根据试验可知，黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物在美白、保湿、防晒、抗衰老方面都具有很好的功效。
黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。
附图说明
图1是本发明实施例提供的黑果枸杞提取物和黑加仑的提取物的混合物(10∶1)的紫外吸收测试图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：沙生植物提取物的制备
黑果枸杞果实干燥粉碎后的粉末50g，室温下以70％乙醇500ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，滤液合并，减压回收溶剂至干，得黑果枸杞提取物。
黑加仑果实干燥粉碎后的粉末50g，室温下以70％乙醇500ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，滤液合并，减压回收溶剂至干，得黑加仑提取物。
取黑果枸杞提取物和黑加仑提取物，分别按照重量比例10∶1、5∶1、1∶1、1∶5和1∶10进行配比混合，配制成溶液，用于相应功效测试。
实施例2：沙生植物提取物组合的抗衰老作用研究
1)、自由基清除作用研究
原理：根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除情况，从而判断样品是否具有抗氧化能力。
试验方法：将不同稀释度、不同配比的待测样品溶液2ml加入试管中，再加入2ml76μmol/L DPPH乙醇溶液，混匀，室温下避光在黑暗处反应30min。在525nm处测定吸光度。每个浓度重复三次，取平均值作为拟合数据，以保证实验结果的准确性。
清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：2ml水或二甲亚砜(DMSO)加2mlDPPH溶液的吸光度；
T：2ml样品液加2mlDPPH溶液的吸光度；
C0：2ml水或二甲亚砜(DMSO)加2ml95％乙醇的吸光度；
C：2ml样品液加2ml95％乙醇的吸光度。
按照上面公式计算清除率。试验结果如表1所示：
表1
序号 样品 浓度(ug/ml) 清除率(％)
1 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 5 3.5
2 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 10 25.8
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 25 50.7
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 50 70.2
5 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 50 57.2
6 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 50 57.8
7 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 50 20.1
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 50 21.9
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合对自由基均具有一定的清除自由基的作用。
2)、弹性蛋白酶抑制作用研究
试验方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.，2009，4，127-129)中的方法进行，步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mm反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(PH＝8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液，测定吸光度，通过与对照组的比较得到样品组的相对抑制率。试验结果见表2：
表2
序号 样品 浓度(ug/ml) 抑制率(％)
1 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 100 2.9
2 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 5.8
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 250 10.7
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 500 58.7
5 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 500 40.5
6 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 500 20.7
7 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 500 5.8
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 500 3.2
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合对弹性蛋白酶均具有一定的抑制作用。
3)、成纤维细胞增殖作用研究
试验方法：将制备好的细胞悬液接种于96孔板内，待细胞贴壁后，除空白对照组外，其他组每孔加入20ul相应浓度的样品，置于孵箱中培养24h，然后加入MTT液20ul，继续在孵箱中培养4h。取出酶标板后，吸去每孔内的培养液，加二甲亚砜混合均匀。用酶联免疫检测仪测定光密度(570nm)，通过与对照组的比较得到样品组的相对增殖率。试验结果见表3：
表3
序号 样品 浓度(ug/ml) 增殖率(％)
1 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 100 12.9
2 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 15.9
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 250 20.8
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 500 47.2
5 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 500 20.9
6 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 500 18.7
7 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 500 15.3
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 500 10.8
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合对成纤维细胞均具有一定的增殖作用。
实施例3：沙生植物提取物组合的美白作用研究
1)、酪氨酸酶抑制作用研究
试验方法：在样品管和样品对照管中各加入1ml不同浓度的样品溶液，阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液代替。在样品管和阳性对照管中加入0.5ml酪氨酸酶溶液(酶活单位125u/ml)，样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液(pH＝6.8)代替，振摇所有试管，使样品和酪氨酸酶充分混匀，37℃水槽孵育10分钟，加入2ml的0.03wt％酪氨酸溶液，反应10分钟，即刻在475nm处测定吸光度。
抑制率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T0：样品溶剂对照；T：样品对照；C：阳性对照；C0：阳性对照溶剂对照。
试验结果如表4所示：
表4
序号 样品 浓度(ug/ml) 抑制率(％)
1 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 100 10.3
2 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 12.8
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 250 29.1
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 500 53.7
5 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 500 41.8
6 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 500 35.1
7 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 500 10.8
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 500 5.3
9 熊果苷(对照) 500 48.7
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合对酪氨酸酶均具有一定的抑制作用。
2)、对黑色素抑制作用研究
采用Hosoi等改良方法测定提取物对对黑色素抑制作用。B16黑色素细胞以1×105密度培养在96孔板中，经24h后换液，添加不同浓度的药物，72h后，经PBS洗涤两次，样品经空气干燥，溶于200μl1N NAOH(含1％DMSO)，经加热80℃至1h后冷却，选择475nm波长在酶联免疫检测仪上读取吸光度值。
黑色素含量抑制率＝[1-(药物孔吸光度值/药物孔细胞密度)(对照孔吸光度值／照孔细胞密度)]×100％，试验结果见表5：
表5
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合对B16细胞黑色素增殖均具有一定的抑制作用。
实施例4：沙生植物提取物组合的防晒作用研究
1)、UV防护作用研究
取黑果枸杞提取物和黑加仑的提取物的混合物(10∶1)以70％的乙醇稀释至25ml后，用紫外分光光度计在200-400nm做UV扫描，扫描结果如图1所示。用紫外分光光度计感测得到在长波紫外线(UVA，320-400nm)和中波紫外线(UVB，290-320nm)区间值。由图可见，上述两种沙生植物提取物的混合物具有紫外线吸收效果，即具有UVA和UVB防护作用。
2)、UV对成纤维细胞增殖作用试验
原理：皮肤光老化主要由日光中的中波紫外线(UVB，290-320nm)和长波紫外线(UVA，320-400nm)共同引起，紫外线对人皮肤的老化有明显促进作用。UVA或UVB照射会引起成纤维细胞的损伤死亡，对皮肤造成伤害，导致光老化。通过UV照射实验来确定提取物活性成份是否对UV照射的细胞具有保护作用、抵御光老化作用。
测试方法：黑果枸杞提取物和黑加仑的提取物的混合物加入PBS缓冲液进行稀释，配成1/10浓度(v/v)进行抽滤，然后取0.1ml加9.9ml无菌PBS缓冲液，最后稀释成1/1000的浓度(v/v)。以正常DMEM液培养的皮肤成纤维细胞(Fb)为对照组，以正常DMEM液培养后用UVA或UVB照射的Fb细胞为模型组，以含1/1000浓度的实施例提取物和DMEM液共培养并经UVA或UVB照射的Fb细胞为加药组。紫外线处理后24h，酶标仪测定各孔的吸光度(OD值)，细胞增殖率为各处理组OD值占阴性对照组OD值的百分率。试验结果见表6(UVA照射)和表7(UVB照射)：
表6
序号 样品 浓度(ug/ml) 增殖率(％)
1 对照组 500 98.7±6.5
2 模型组 500 68.2±5.8
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 100 22.0±3.9
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 29.8±2.7
5 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 250 42.8±5.5
6 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 500 79.8±8.6
7 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 500 52.3±5.0
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 500 32.1±3.8
9 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 500 30.3±2.9
10 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 500 22.1±5.0
表7
序号 样品 浓度(ug/ml) 增殖率(％)
1 对照组 500 98.6±9.2
2 模型组 500 78.8±8.9
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 100 50.7±6.3
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 57.9±4.7
5 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 250 72.8±3.4
6 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 500 85.9±8.4
7 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 500 70.2±7.7
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 500 62.1±6.0
9 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 500 60.3±2.8
10 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 500 52.1±3.9
如表6和表7所示，黑果枸杞提取物和黑加仑提取物不同比例下的混合对皮肤细胞恢复的增值率均具有促进作用，因此，黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物对人皮肤因UVA和UVB照射引起的光老化有一定的抑制作用。
实施例5：沙生植物提取物的保湿作用研究
1)、保湿功能试验
将黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物配成1％(w/v)浓度，甘油配成5％(w/v)浓度的水溶液，选用同一规格的表面皿，在上面贴一层医用透气胶带，室温条件下(24℃)吸取200μL，均匀涂敷在透气胶带上，然后将其放入醋酸钾饱和溶液的干燥器内(相对湿度约为50％)，放置5小时后分别称重，计算保湿率。试验结果如表8所示：
表8
序号 样品 浓度(ug/ml) 保湿率(％)
1 甘油(5％，对照) -- 5.9±1.2
2 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 1.0±0.3
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 400 1.2±0.4
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 800 3.8±1.1
5 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 1000 6.3±2.0
6 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 1000 5.0±0.8
7 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 1000 4.3±1.2
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 1000 2.1±0.7
9 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 1000 1.3±0.4
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合均具有一定的保湿作用。
2)、防止角质细胞失水的体外试验
原理：在表皮细胞处于干燥环境下，考察提取物活性成份帮助细胞抵御干燥，维持细胞原有形态的能力。
测试方法：取各提取物0.1ml，加MEM培养液9.9ml，抽滤，配制成1％的浓度，同法，配制1％甘油作为阳性对照。选择人表皮角质细胞Hacat为实验细胞，以正常MEM液培养的细胞为空白对照组，以含1％浓度甘油的MEM液培养的细胞为阳性对照组，以含1％浓度的实施例提取物的MEM液培养的细胞为加药组，孵育24h后，依次吸干每孔液体，置于显微镜下观察角质细胞从正常到干燥(状态明显变化)所经历的时间。试验结果见表9：
表9
序号 样品 浓度(ug/ml) 维持时间(s)
1 空白对照 -- 705±12
2 1％甘油(对照) -- 790±85
3 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 200 489±74
4 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 400 502±55
5 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 800 690±84
6 黑果枸杞+黑加仑(10∶1) 1000 811±73
7 黑果枸杞+黑加仑(5∶1) 1000 790±88
8 黑果枸杞+黑加仑(1∶1) 1000 771±20
9 黑果枸杞+黑加仑(1∶5) 1000 514±70
10 黑果枸杞+黑加仑(1∶10) 1000 490±53
由上表可见，上述沙生植物提取物不同比例下的混合可以帮助人表皮角质细胞抵御干燥，即具有保湿作用。
通过以上各种试验，可见黑果枸杞、黑加仑这两种沙生植物提取物的混合物具有较好的美白、保湿、抗衰老等美容护肤的功效。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种沙生植物混合物，其特征在于，为黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的混合物。
2.如权利要求1所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述混合物中黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的重量比为1-10∶1-10。
3.如权利要求2所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述黑果枸杞提取物和黑加仑提取物的重量比为1-10∶1-5。
4.如权利要求1所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述沙生植物混合物按以下方法制备：分别将黑果枸杞和黑加仑原料浸渍有机溶剂并提取后进行过滤、减压及浓缩后获取黑果枸杞提取物和黑加仑提取物，再将这两种提取物按一定比例混合。
5.如权利要求1-4任一所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述沙生植物混合物具有抗氧化作用。
6.如权利要求1-4任一所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述沙生植物混合物具有美白作用。
7.如权利要求1-4任一所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述沙生植物混合物具有防晒作用。
8.如权利要求1-4任一所述的沙生植物混合物，其特征在于，所述沙生植物混合物具有保湿作用。
9.如权利要求1-8任一所述的沙生植物混合物在化妆品、保健品或医药中的应用。
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