CN104273094A - 粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法，包括SOX10基因缺失片段的检测，突变群体的扩繁，母本纯系的选育以及配套系的建立的步骤。本发明针对粉壳蛋鸡配套系的羽色自别问题,对配套系父本和母本蛋鸡进行SOX10基因的片段缺失检测和选育。此片段的缺失会抑制显性白基因I的作用，使得父本洛岛红公鸡的金色羽基因s得以表现，从而实现羽色自别。本发明所培育的配套系后代可以通过羽色自别雌雄，准确率高，操作方便。

Description

粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法
技术领域
本发明涉及分子生物学及遗传育种领域，具体地说，涉及粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法。
背景技术
鸡的羽色和鸡蛋的颜色与鸡蛋和鸡肉的质量没有的直接关系，但由于人们受到传统习惯的影响，对鸡的羽色和鸡蛋的颜色却有着特殊的偏好。对于家禽生产者来说，需要培育出符合市场需要的产品。产粉壳鸡蛋的红羽鸡在中国大部分地区有着广泛的市场。蛋鸡区别于肉鸡，不论父母代还是商品代都需要对刚孵化的雏鸡进行雌雄鉴别，并根据各自的生产用途分别处理，以降低饲养成本，提高经济效益。雏鸡雌雄鉴别的方法很多，总的来说可以分为两类，一类是根据雌雄鸡生殖器官结构的不同，通过对生殖突起或性腺的直接观察来鉴别，如翻肛法等；另一类是应用伴性遗传原理，使用特定的品种或品系进行杂交，直接从杂交后代雏鸡绒毛的不同颜色或不同的长羽速度来鉴别，也就是所谓的羽色自别和羽速自别。目前，国内外主要褐壳蛋鸡基本都实现了雏鸡的羽色自别，白壳蛋鸡和粉壳蛋鸡大都是通过快慢羽自别雌雄。目前粉壳蛋鸡不能进行羽色自别的主要原因是配套系中白来航蛋鸡中带有纯合显性白羽基因I，与有色鸡杂交后后代雏鸡遗传母本的显性白基因I，其抑制了金羽基因s和其他羽色基因的表达,羽毛颜色呈现白色或近似白色。因此，利用白来航蛋鸡羽色基因的变异培育羽色自别的粉壳蛋鸡配套系，对中国蛋鸡的生产具有重要的意义。生产实践中发现，白来航母鸡与红羽公鸡的杂交后，后代中会出现比例极小的红羽鸡，且均为母鸡，研究证实，此现象是由白来航母鸡1号染色体SOX10基因上游14kb处的一个8.3kb的片段缺失所导致。此片段的缺失会抑制显性白基因I的作用，使得后代可以表现出有色羽基因。
发明内容
本发明的目的是解决粉壳蛋鸡配套系的羽色自别问题，提供一种粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法。
为了实现本发明目的，本发明的一种粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法，包括SOX10基因缺失片段的检测，突变群体的扩繁，母本纯系的选育以及配套系的建立的步骤。
1)SOX10基因缺失片段的检测：对白来航母鸡与洛岛红公鸡的杂交后代进行羽色观察，对后代母雏全为红羽或有部分红羽的母鸡及其半同胞的公鸡进行PCR检测，具体方法如下：采集待测鸡的血液并提取DNA，根据SOX10基因缺失片段设计三条引物，包括引物1、引物2和引物3(图1)，它们的核苷酸序列分别如Seq ID No.1-3所示，采用引物1、2和引物1、3两个组合对待测DNA进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果只出现引物1、2对应的扩增条带584bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合未缺失型，如果只出现引物1、3对应的扩增条带879bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合缺失型，如果出现584bp和879bp两条带，则判定待测鸡为SOX10基因杂合缺失型；
2)突变群体的扩繁：对上述杂交后代中SOX10基因纯合缺失型个体以及部分杂合缺失型个体进行扩繁；
3)母本纯系的选育：对步骤2)扩繁所得的后代进行SOX10基因缺失片段的检测，保留所有SOX10基因纯合缺失型个体并在此基础上进行纯系的选育；
4)粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的建立：使步骤3)所得的母本纯系与洛岛红父本进行杂交，后代母雏均为红羽，公雏均为白羽，即得到粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系。
其中，所述SOX10基因缺失片段是指位于白来航母鸡1号染色体SOX10基因(GenBank登录号：395573)上游14kb处的一个8.3kb的片段缺失。
步骤1)中进行PCR扩增所采用的反应体系以20μl计为：
模板DNA                           1.5μl
10mM dNTPs                        0.4μl
10μM引物1                        0.4μl
10μM引物2或3                     0.4μl
5U/μl Taq DNA聚合酶              0.4μl
10×PCR反应缓冲液(含Mg2+)           2μl
ddH2O                            补足至20μl
PCR反应条件为：95℃5分钟；95℃30秒，63℃30秒，72℃1分钟，共34个循环；72℃10分钟。
本发明利用白来航母鸡羽色基因的变异，成功建立了一种可以实现后代羽色自别雌雄的粉壳蛋鸡配套系的培育方法。
本发明具有以下优点：
(一)本发明所培育的配套系商品代母鸡为产粉壳蛋的红羽鸡，符合我国市场需求，应用前景广阔。而一般的粉壳蛋鸡配套系其母鸡为白羽，不符合我国的市场需求。
(二)本发明所培育的配套系后代可以通过羽色自别雌雄，准确率高，操作方便。
(三)本发明采用PCR技术进行基因检测的方法对母本纯系进行选育，方便快捷，培育周期短。
附图说明
图1为本发明SOX10基因上游缺失片段检测引物示意图，图中显示了SOX10基因上游14kb处的序列情况，其中连续的N代表省略序列，灰色阴影部分为缺失序列，使用加粗、斜体下划线和下划线标注的序列分别为引物1、引物2和引物3对应于基因的序列，引物1、2组合的产物长度为584bp，仅在序列无缺失的情况下可以扩增，引物1、3组合的产物长度为879bp，仅在序列有缺失的情况下可以扩增。
图2为本发明基因缺失检测部分电泳胶图，图中顶部数字为检测样品的编号，胶图上部为血样DNA，中部为引物1、2组合的扩增产物，下部为引物1、3组合的扩增产物，图中底部为基因缺失的判型，空心圆圈表示纯合缺失，实心圆圈表示不缺失，半实心圆圈表示杂合缺失。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular cloning:a laboratory manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法
本实施例以位于河北省的某蛋种鸡繁育厂为实例，来具体阐述本发明的方法：
1、SOX10基因缺失片段的检测：选择3000只突变群体的白来航母鸡与洛岛红公鸡进行杂交后，每只母鸡收集15枚种蛋进行孵化，对后代雏鸡进行羽色观察。共选出后代母雏全为红羽(3只以上)的母鸡60只，部分红羽(3只以上)的母鸡400只。对这些母鸡及其半同胞的公鸡(356只)进行基因型的测定。测定采用PCR检测法，具体方法如下：采集待测鸡的血液0.5ml并提取DNA；根据SOX10基因缺失片段设计三条引物，包括引物1、引物2和引物3(图1)，它们的核苷酸序列分别如Seq ID No.1-3所示。采用引物1、2和引物1、3两个组合对待测DNA进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果只出现引物1、2对应的扩增条带584bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合未缺失型，如果只出现引物1、3对应的扩增条带879bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合缺失型，如果出现584bp和879bp两条带，则判定待测鸡为SOX10基因杂合缺失型。
PCR反应体系以20μl计为：
模板DNA                          1.5μl
10mM dNTPs                       0.4μl
10μM引物1                       0.4μl
10μM引物2或3                    0.4μl
5U/μl Taq DNA聚合酶             0.4μl
10×PCR反应缓冲液(含Mg2+)          2μl
ddH2O                           补足至20μl
PCR反应条件为：95℃5分钟；95℃30秒，63℃30秒，72℃1分钟，共34个循环；72℃10分钟。
检测发现，母鸡共有35个纯合缺失个体，其余为杂合缺失，公鸡共有40个纯合缺失个体，163个杂合缺失个体，其余为不缺失个体。部分凝胶电泳检测结果见图2。
2、突变群体的扩繁：选留上一步检测所得的全部35纯合缺失母鸡，465只杂合缺失母鸡以及40只纯合缺失公鸡和10只杂合缺失公鸡进行扩繁。一只公鸡与10只母鸡组成一个家系，共建立50个家系。
3、母本纯系的选育：对上一步组建的50个家系的后代进行SOX10基因缺失的检测，保留所有纯合缺失个体并在此基础上进行纯系的选育。最终获得规模为1万只左右的的母本纯系。
4、配套系的建立：用上一步所得的母本纯系与洛岛红父本进行杂交，后代母雏均带红羽，公雏均为白羽。即得到粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
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Claims (3)

1.粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)SOX10基因缺失片段的检测：对白来航母鸡与洛岛红公鸡的杂交后代进行羽色观察，对后代母雏全为红羽或有部分红羽的母鸡及其半同胞的公鸡进行PCR检测，具体方法如下：采集待测鸡的血液并提取DNA，根据SOX10基因缺失片段设计三条引物，包括引物1、引物2和引物3，它们的核苷酸序列分别如Seq ID No.1-3所示，采用引物1、2和引物1、3两个组合对待测DNA进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果只出现引物1、2对应的扩增条带584bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合未缺失型，如果只出现引物1、3对应的扩增条带879bp，判定待测鸡为SOX10基因纯合缺失型，如果出现584bp和879bp两条带，则判定待测鸡为SOX10基因杂合缺失型；
2)突变群体的扩繁：对上述杂交后代中SOX10基因纯合缺失型个体以及部分杂合缺失型个体进行扩繁；
3)母本纯系的选育：对步骤2)扩繁所得的后代进行SOX10基因缺失片段的检测，保留所有SOX10基因纯合缺失型个体并在此基础上进行纯系的选育；
4)粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系的建立：使步骤3)所得的母本纯系与洛岛红父本进行杂交，后代母雏均为红羽，公雏均为白羽，即得到粉壳蛋鸡羽色自别雌雄配套系；
其中，所述SOX10基因缺失片段是指位于白来航母鸡1号染色体SOX10基因上游14kb处的一个8.3kb的片段缺失。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中进行PCR扩增所采用的反应体系以20μl计为：
模板DNA                         1.5μl
10mM dNTPs                      0.4μl
10μM引物1                         0.4μl
10μM引物2或3                      0.4μl
5U/μl Taq DNA聚合酶               0.4μl
10×PCR反应缓冲液                  2μl
ddH2O                             补足至20μl。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中进行PCR扩增所采用的反应条件为：95℃5分钟；95℃30秒，63℃30秒，72℃1分钟，共34个循环；72℃10分钟。
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