CN104267009B - 六色实时荧光定量pcr分析仪 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种六色实时荧光定量PCR分析仪，包括光源激发部（A）和光探测器部（C），其特征在于，光源激发部（A）具有六个独立的光源激发通道，光探测器部（C）具有六个独立的探测通道，光源激发部（A）和光探测器部（C）呈一定角度。光路系统采用固定光路，滤光片叠加实现波长范围选择，通过改变滤光片波长，可以改变每个通道波长范围来实现不同波长的六色实时荧光定量PCR分析仪。

Description

六色实时荧光定量PCR分析仪

技术领域

本发明涉及一种PCR分析仪，更加具体地，涉及一种六色实时荧光定量PCR分析仪。

背景技术

对于许多研究、医疗和工业应用来说，核酸扩增反应都是至关重要的。这些反应用于临床和生物学研究、传染性疾病的检测和监测、突变的检测、癌症标志物的检测、环境监测、遗传鉴定、生物防御应用中的病原体检测等等。特别地，聚合酶链式反应(PCR)已经在所有这些领域中应用，包括应用于病毒和细菌检测、病毒负荷监测、稀有和/或难以培养的病原体的检测、生物恐怖威胁的快速检测、癌症患者中最少量残留疾病的检测、食物病原体试验、血液供给筛选等等。关于PCR，如此广泛应用的主要原因是由于它的速度和容易使用(典型地使用标准化试剂盒和相对简单且低成本的器具在数小时内进行)、它的灵敏度(经常可以检测到样品中几十个拷贝的靶序列)、以及它的鲁棒性(可以容易地分析低质量样品或保存的样品，例如法医样品或固定的组织样品)。

而实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面可以在每次PCR循环收集数据，建立实时扩增曲线，准确地确定域值循环数(CT值)，计算起始DNA拷贝数，做到了真正意义上的DNA定量。图1为现有技术US6369893B1中公开的一种光学测试系统，包含多个热交换模块37，它由样品杯2、热交换模块37、风扇42、电路板54、计算机等构成。其中热交换模块37具有一对相对放置热板34A、34B，在热板34A、34B中插入样品杯2并对样品杯中的混合物进行加热和/或冷却。模块37还具有光源激发部A和光探测器部C，它们对着混合物定位从而可进行光学观测。样品杯2具有反应腔10，用来保持反应混合物，样品杯2被设计成能够最佳地将热量传递到反应混合物以及从反应混合物传递出热量，并且有效光学观察反应混合物。样品杯2做成薄片状有利于最佳的热量传递，因为提供了很大的用于热量传导以及用于接触热板的表面。另外，样品杯2的壁在反应腔10处具有光学窗口，这样整个反应混合物能够被光学观测。

其中的光学激发部46中仅包括了四个LED光源100A-100D，颜色分别为绿色、绿色、蓝色及绿色。但是，目前PCR反应体系中的荧光基团发出的荧光信号很微弱，采用上述光学组件很难对微弱荧光实现精确检测。

现有技术中光源100A-100D，颜色分别为绿色、绿色、蓝色及绿色，在实际使用中会出现如道间干扰等问题，即很难同时找到激发波长同时满足这4个光源的PCR试剂。同时四通道的PCR分析仪无法匹配高于四重的PCR试剂。而随着分子生物学技术的发展，以及实际生产生活中对六重PCR的客观需要，使得目前的四色PCR仪无法满足上述更高的要求。

发明内容

为了克服上述现有技术中的四通道PCR分析仪的缺点，本申请提供了一种六色实时荧光定量PCR分析仪，包括光源激发部和光探测器部。

光源激发部具有六个独立的光源激发通道，光探测器部具有六个独立的探测通道，光源激发部和光探测器部呈一定角度。光源激发部具有腔室，该腔室包括光源盖、光源盒及光源套，所述光源盖和光源盒是互补的并能组合起来的，且能紧紧固定住光源套。光源激发部的光源盒具有壁，其将腔室分隔成六个独立的光源激发通道。光源盒包括光学窗口，六个独立的光源激发通道中分别具有六个光源，用来发出光束穿过光学窗口进入装有反应物的反应腔中。六个光源中的每个光源包括一对定向的LED，其中第一光源是一对紫色的LED、第二光源是一对蓝色的LED、第三光源是一对绿色的LED、第四光源是一对琥珀色的LED、第五光源是一对红色的LED和第六光源也是一对红色的LED。腔室中用于过滤由六个光源所产生的激发光束的一系列的滤光片，其中，设在第一光源激发通道中的第一光源滤光片组设为选择紫色光通过，设在第二光源激发通道中的第二光源滤光片组设为选择蓝色光通过，设在第三光源激发通道中的第三光源滤光片组设为选择绿色光通过，设在第四光源激发通道中的第四光源滤光片组设为选择琥珀色光通过，设在第五光源激发通道中的第五光源滤光片组设为选择红色光通过，设在第六光源激发通道中的第六光源滤光片设为选择红色光通过，第六光源激发通道中还有一反光镜。第一光源滤光片组中的第一光源滤光片选择通过的波长范围为375-405nm、第二光源滤光片组中的第一光源滤光片选择通过的波长范围为450-495nm、第三光源滤光片组中的第一光源滤光片选择通过的波长范围为500-550nm、第四光源滤光片组中的第一光源滤光片选择通过的波长范围为555-590nm、第五光源滤光片组中的第一光源滤光片选择通过的波长范围为630-650nm、第六光源滤光片选择通过的波长范围为630-650nm。腔室还具有第一光源滤光片组中的第二光源滤光片、第二光源滤光片组中的第二光源滤光片、第三光源滤光片组中的第二光源滤光片、第四光源滤光片组中的第二光源滤光片、第五光源滤光片组中的第二光源滤光片，均为半透半反滤光片，来分别消除被第一至第五光源滤光片组中被第一光源滤光片选择通过的波长范围之外的杂峰。每个光源激发通道中都有一个光源透镜，其位于各光源激发通道中波段选通滤光片之后、半透半反滤光片及反光镜之前，用来使得通过第一光源滤光片之后的光束变成平行。光源盒的壁上具有多个插槽，用于插入并紧紧保持波段选通滤光片、半透半反滤光片及反光镜。光源盒的光学窗口中设有柱形透镜，用来将光源激发部发出的平行光束聚焦在样品杯B反应腔的壁上。

光探测器部具有腔室，该腔室包括探测器盖、探测器盒及探测器电路板。探测器盖和探测器盒是互补的并能组合起来的。光探测器部的探测器盒具有壁，其将腔室分隔成六个独立的探测通道。探测器盒具有第二光学窗口，六个独立的探测通道中分别具有六个探测器。设在第一探测通道中的第二滤光片、设在第二探测通道中的第二滤光片、设在第三探测通道中的第二滤光片、设在第四探测通道中的第二滤光片、设在第五探测通道中的第二滤光片、设在第六探测通道中的第二滤光片，都分别由一对滤光片组成且为波段选通滤光片。第一探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为420-480nm、第二探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为510-535 nm、第三探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为565-590 nm、第四探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为606-650 nm、第五探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为665-685 nm、第六探测通道中的第二滤光片选择通过的波长范围为700nm以上。腔室还具有设在第二探测通道中的第三滤光片、第三探测通道中的第三滤光片、第四探测通道中的第三滤光片、第五探测通道中的第三滤光片、第六探测通道中的第三滤光片，它们均为半透半反滤光片，来分别消除第二至第六探测通道中波段选通滤光片选择通过的波长范围之外的杂峰。腔室还具有设在第一探测通道中的第一滤光片、第二探测通道中的第一滤光片、第三探测通道中的第一滤光片、第四探测通道中的第一滤光片、第五探测通道中的第一滤光片、第六探测通道中的第一滤光片，它们均为有色玻璃滤光片。每个探测通道中都有一个聚光透镜，其位于各探测通道中波段选通滤光片之后、有色玻璃滤光片之前，用来使得通过第一光源滤光片的光束成平行。探测器盒的壁上具有多个插槽，用于插入并紧紧保持有色玻璃滤光片、波段选通滤光片、半透半反滤光片及反光镜。探测器盒的第二光学窗口中设有柱形透镜，用来将样品杯反应腔内体系中的荧光基团发出的光变成平行光。

六色实时荧光定量PCR分析仪的优点是：

1. 小体积，在狭小的空间实现了6路光路。

2. 光路系统采用了固定式光路，所有的光学元器件均通过模具固定，通过一次装配后不需要其余的调整，可用于车载、便携、野外等检测场合。

3.激发光源采用高效的LED冷光源，实现了低功耗的光源系统，降低了整机功耗。

4.六路光路系统通过LED冷光源本身的光谱叠加对应光路通道中的滤光片实现了激发光源光路系统，同时对应的六路检测器及对应光路通道中的滤光片实现了荧光接收光路系统，使用和对光路波长的改进中可通过更改滤光片的参数以及光源参数实现不同波长范围的六色实时荧光定量PCR分析仪。

附图说明

图1为现有技术中的热交换模块；

图2为本发明六通道实时荧光定量PCR分析仪中的六色光学组件结构示意图；

图3为本发明光源激发部的平面示意图；

图4为本发明光源激发部的分解图；

图5为本发明光源出口到样品杯边界示意图；

图6为本发明样品杯边界发出荧光到探测器入口示意图；

图7为本发明光探测器部的平面示意图；

图8为本发明光探测器部的分解图。

具体实施方式

参见图2，申请人设计了一种六通道实时荧光定量PCR分析仪，其中的六色光学组件由光源激发部A和光探测器部C部组成。光源激发部A产生激发样品体系中的荧光基团发光的光源，光探测器部C用于检测样品体系中的荧光基团被激发后所发射出的荧光。基于荧光检测的原理，光源激发部A和光探测器部C这两部分不能在正对的位置，一般是呈一定角度，最佳角度为90°，该角度确保了通过壁31进入的激发辐射光通过壁32离开的最少。同时，90°角使得最大量的射出发射光，如荧光，通过壁32能够被聚集。

图3为光源激发部A的平面示意图，图4为光源激发部A的分解图。如图3、4所示，光源激发部A具有腔室1，用于容纳光源激发部A的各种元件。在本实施方式中，腔室1包括三个部分：光源盖11、光源盒12及光源套13。光源盖11和光源盒12是互补的并能组合起来的，且能紧紧固定住光源套13。

如图4所示，光源盒12优选包括壁16，其将腔室1分隔成六个独立的光源激发通道以减少不同光源激发通道之间的潜在干扰。

光源盒12包括光学窗口15，其中放入柱形透镜T2用来聚焦光源的激发光束进入反应腔13。光源激发部A的六个独立的光源激发通道中分别具有六个光源L1、L2、L3、L4、L5、L6，用来发出激发光束，穿过窗口15而进入装有反应物的反应腔3中。一般来说，每个光源可以是激光、灯泡或者LED。在优选的实施方式中，每个光源包括一对定向的LED。

六个光源L1、L2、L3、L4、L5、L6优选为：第一光源激发通道中的第一光源L1是一对紫色的LED、第二光源激发通道中的第二光源L2是一对蓝色的LED、第三光源激发通道中的第三光源L3是一对绿色的LED、第四光源激发通道中的第四光源L4是一对琥珀色的LED、第五光源激发通道中的第五光源L5是一对红色的LED和第六光源激发通道中的第六光源L6也是一对红色的LED。这些LED连接到电源上，并且安装在光学电路板14上，该光学电路板14附在光源套13的后部这样所有的LED就紧固在腔室中。光学电路板14连接到热交换模块的主PC板上。

光源激发部A进一步包括设置在腔室1中用于过滤由LED光源所产生的激发光束的一系列的滤光片，如图6所示，设在第一光源激发通道中的第一光源滤光片组L11、L12设为选择紫色光通过，设在第二光源激发通道中的第二光源滤光片组L21、L22设为选择蓝色光通过，设在第三光源激发通道中的第三光源滤光片组L31、L32设为选择绿色光通过，设在第四光源激发通道中的第四光源滤光片组L41、L42、L43设为选择琥珀色光通过，设在第五光源激发通道中的第五光源滤光片组L51、L52设为选择红色光通过，设在第六光源激发通道中的第六光源滤光片L61设为选择红色光通过，第六光源激发通道中还有一反光镜M62。

其中，L11、L21、L31、L41、L51、L61为波段选通滤光片，即选择能够通过该滤光片的波长范围，L11、L21、L31、L41、L51、L61都分别由一对滤光片组成，其中第一光源滤光片组中的第一光源滤光片L11选择通过的波长范围为375-405nm、第二光源滤光片组中的第一光源滤光片L21选择通过的波长范围为450-495nm、第三光源滤光片组中的第一光源滤光片L31选择通过的波长范围为500-550nm、第四光源滤光片组中的第一光源滤光片L41选择通过的波长范围为555-590nm、第五光源滤光片组中的第一光源滤光片L51选择通过的波长范围为630-650nm、第六光源滤光片L61选择通过的波长范围为630-650nm。

由于受波段选通滤光片的滤光原理所限，有可能在选择的波段之外，还有其他杂峰通过，所以腔室1还具有第一光源滤光片组中的第二光源滤光片L21、第二光源滤光片组中的第二光源滤光片L22、第三光源滤光片组中的第二光源滤光片L32、第四光源滤光片组中的第二光源滤光片L42、L43、第五光源滤光片组中的第二光源滤光片L52均为半透半反滤光片，来分别消除被第一至第五光源激发通道中被第一光源滤光片L11、L21、L31、L41、L51选择通过的波长范围之外的杂峰。M62为反射镜片，将第六光源经滤光片L61后的光反射到L52。

每个光源激发通道中都有一个光源透镜T1，其位于每一对波段选通滤光片L11、L21、L31、L41、L51、L61之后、半透半反滤光片L12、L22、L32、L42、L43、L52及反光镜M62之前，作用是使得通过波段选通滤光片L11、L21、L31、L41、L51、L61之后的光束变成平行。

六种光源LED所发出的有一定发散角的光，经过波段选通滤光片L11、L21、L31、L41、L51、L61滤光之后，经过光源透镜T1，变成平行光。光束再经过半透半反滤光片L12、L22、L32 、L42、L43 、L52、 M62消杂峰，最终从柱形透镜T2射出光源激发部A。

光源盒12的光学窗口15中设有柱形透镜T2，用来将光源激发部A发出的平行光束聚焦在样品杯B反应腔3的壁31上。壁31有一定的曲率，形成一个透镜，将聚焦的光转换成平行光，透射进样品杯B反应腔3内的PCR体系中，激发荧光基团发光（参见图5）。PCR体系中的荧光基团所发出的荧光在经过样品杯B反应腔3的有曲率的另一侧壁32，投射到光探测器部C的入射柱形透镜T2上（参见图6）。

壁16上优选具有多个插槽，用于插入并紧紧保持上述波段选通滤光片L11、L21、L31、L41、L51、L61和半透半反滤光片L12、L22、L32、L42、L43、L52、反光镜M62及光源透镜T1。

图7为光探测器部C的平面示意图，图8为光探测器部C的分解图。如图7、8所示，光探测器部C具有腔室2，用于容纳光探测器部C的各种元件。在本实施方式中，腔室2包括探测器盖21、探测器盒22及探测器电路板23。探测器盖21和探测器盒22是互补的并能组合起来的。

如图8所示，探测器盒22优选包括壁25，其将腔室2分隔成六个独立的探测通道以减少不同探测通道之间的潜在干扰。

探测器盒22包括第二光学窗口24，其中放入柱形透镜T2用来将从反应腔3投射到其上的光束变成平行光。腔室2的六个独立的探测通道分部具有六个探测器D1、D2、D3、D4、D5、D6，用来探测从反应腔3中发出并穿过第二光学窗口24的光束。一般来说，每个探测器可以是光电倍增管、CCD、SMOS探测器、光电二极管或者其它使用电晶体的探测器。在优选的实施方式中，每个探测器是PIN光电二极管。六个探测器D1、D2、D3、D4、D5、D6安装在探测器电路板23上，该探测器电路板23附在探测器盒22的下部这样所有的探测器就紧固在腔室2中。测器电路板23连接到热交换模块的主PC板上。

腔室2的六个独立的探测通道进一步包括设置在其中用于将来自反应腔3的光束分隔成不同的发射波长范围，并引导每个波长范围内的光束分别进入一个探测器的一组滤光片。

如图8所示，探测器盒22优选包括壁25，其将腔室分隔成六个独立的探测通道，每个探测器设置在通道的末端。

D11、D12，M62为投射到第一探测通道探测器D1上光束通过的滤光片和反光镜；D21、D22、D23为投射到第二探测通道探测器D2上光束通过的滤光片；D31、D32、D33、D34为投射到第三探测通道探测器D3上光束通过的滤光片；D41、D42、D43为投射到第四探测通道探测器D4上光束通过的滤光片；D51、D52、D53为投射到第五通道探测器D5上光束通过的滤光片；D61、D62、D63为投射到第六探测通道探测器D6上光束通过的滤光片。

其中，D11、D21、D31、D41、D51、D61为有色玻璃滤光片；D12、D22、D32、D42、D52、D62为波段选通滤光片，都分别由一对滤光片组成，其中第一探测通道中的第二滤光片D12选择通过的波长范围为420-480nm、第二探测通道中的第二滤光片D22选择通过的波长范围为510-535 nm、第三探测通道中的第二滤光片D32选择通过的波长范围为565-590 nm、第四探测通道中的第二滤光片D42选择通过的波长范围为606-650 nm、第五探测通道中的第二滤光片D52选择通过的波长范围为665-685 nm、第六探测通道中的第二滤光片D62选择通过的波长范围为700nm以上。。

但是由于干涉滤光片的滤光原理所限，有可能在选同波段之外，还有其他杂峰通过，所以需要用D23、D33、D34、D43、D53、D63滤光片作为半透半反滤光片，以消除第二至第六探测通道中波段选通滤光片D22、D32、D42、D52、D62选择通过的波长范围之外的杂峰。T2、T3分别为柱形透镜和聚光透镜。M62为反射镜片，将第六光源经滤光片L61后的光反射到L52。

探测器盒22的壁25上具有多个插槽，用于插入并紧紧保持有色玻璃滤光片D11、D21、D31、D41、D51、D61、波段选通滤光片D12、D22、D32、D42、D52、D62、半透半反滤光片D23、D33、D34、D43、D53、D63、反光镜M62及聚光透镜T3。

样品杯B反应腔3内体系中的荧光基团发出的光投射到光探测器部C的柱形透镜T2上，经过柱形透镜T2将光束变成平行光，光束先经过半透半反滤光片D23、D33、D34、D43、D53、D63将有效透过波段范围进行初步限制后，再穿过波段选通滤光片D12、D22、D32、D42、D52、D62进行最后的波段选通。目标波段范围内的光束经过聚光透镜T3汇聚后，穿过有色玻璃滤光片D11、D21、D31、D41、D51、D61并最终分别投射到检测器D1-D6上，经过光电转换，最终测量出荧光基团所发出的光能量的强弱，并依此计算PCR体系内的DNA模板浓度。

上述六色实时荧光定量PCR仪实现了六通道荧光的同时测量，采用固定光学器件，可通过更改光学器件参数的方式实现不同波长范围的六色实时荧光定量PCR仪，配合软件操作软件算出PCR体系内的DNA模板浓度。

Claims (10)

1.一种六色实时荧光定量PCR分析仪，包括光源激发部(A)，样品杯(B)和光探测器部(C)，其特征在于，光源激发部(A)具有六个独立的光源激发通道，和，光学窗口(15)；六个所述光源激发通道发出的光线经过光学窗口(15)聚焦照射在样品杯(B)反应腔(3)的侧壁(31)上；所述光探测器部(C)具有六个独立的，并且，与光源激发部(A)的六个光源激发通道一一对应的探测通道；样品杯(B)中的荧光基团发出的荧光经过样品杯(B)反应腔(3)的另一侧壁(32)投射到光探测器部(C)的光学窗口(24)中，并经过光学窗口(24)照与光源激发通道对应的探测通道；光源激发部(A)和光探测器部(C)呈一定角度；侧壁(31)和侧壁(32)为具有曲率的透镜面；侧壁(31)用于将从光学窗口(15)出射的聚焦光转换成平行光；侧壁(32)用于将从样品杯(B)中出射的光投射在光学窗口(24)；

光源激发部(A)具有腔室(1)，该腔室(1)包括光源盖(11)、光源盒(12)及光源套(13)，所述光源盖(11)和光源盒(12)是互补的并能组合起来的，且能紧紧固定住光源套(13)；

光源激发部(A)的光源盒(12)具有壁(16)，其将腔室(1)分隔成六个独立的光源激发通道；

光源盒(12)包括光学窗口(15)，六个独立的光源激发通道中分别具有六个光源(L1、L2、L3、L4、L5、L6)，用来发出光束穿过光学窗口(15)进入装有反应物的反应腔(3)中；

六个光源(L1、L2、L3、L4、L5、L6)中的每个光源包括一对定向的LED，其中第一光源(L1)是一对紫色的LED、第二光源(L2)是一对蓝色的LED、第三光源(L3)是一对绿色的LED、第四光源(L4)是一对琥珀色的LED、第五光源(L5)是一对红色的LED和第六光源(L6)也是一对红色的LED；

光源激发部(A)包括设置在腔室(1)中用于过滤由六个光源所产生的激发光束的一系列的滤光片，其中，设在第一光源激发通道中的第一光源滤光片组(L11、L12)设为选择紫色光通过，设在第二光源激发通道中的第二光源滤光片组(L21、L22)设为选择蓝色光通过，设在第三光源激发通道中的第三光源滤光片组(L31、L32)设为选择绿色光通过，设在第四光源激发通道中的第四光源滤光片组(L41、L42、L43)设为选择琥珀色光通过，设在第五光源激发通道中的第五光源滤光片组(L51、L52)设为选择红色光通过，设在第六光源激发通道中的第六光源滤光片(L61)设为选择红色光通过，第六光源激发通道中还有一反光镜(M62)；

第一光源滤光片组中的第一光源滤光片(L11)、第二光源滤光片组中的第一光源滤光片(L21)、第三光源滤光片组中的第一光源滤光片(L31)、第四光源滤光片组中的第一光源滤光片(L41)、第五光源滤光片组中的第一光源滤光片(L51)、第六光源滤光片(L61)都分别由一对滤光片组成，且为波段选通滤光片；

第一光源滤光片组中的第一光源滤光片(L11)选择通过的波长范围为375-405nm、第二光源滤光片组中的第一光源滤光片(L21)选择通过的波长范围为450-495nm、第三光源滤光片组中的第一光源滤光片(L31)选择通过的波长范围为500-550nm、第四光源滤光片组中的第一光源滤光片(L41)选择通过的波长范围为555-590nm、第五光源滤光片组中的第一光源滤光片(L51)选择通过的波长范围为630-650nm、第六光源滤光片(L61)选择通过的波长范围为630-650nm；

光探测器部(C)具有腔室(2)，该腔室(2)包括探测器盖(21)、探测器盒(22)及探测器电路板(23)，探测器盖(21)和探测器盒(22)是互补的并能组合起来的；

光探测器部(C)的探测器盒(22)具有壁(25)，其将腔室(2)分隔成六个独立的探测通道；

探测器盒(22)具有第二光学窗口(24)，六个独立的探测通道中分别具有六个探测器(D1、D2、D3、D4、D5、D6)；

设在第一探测通道中的第二滤光片(D12)、设在第二探测通道中的第二滤光片(D22)、设在第三探测通道中的第二滤光片(D32)、设在第四探测通道中的第二滤光片(D42)、设在第五探测通道中的第二滤光片(D52)、设在第六探测通道中的第二滤光片(D62)，都分别由一对滤光片组成且为波段选通滤光片；

第一探测通道中的第二滤光片(D12)选择通过的波长范围为420-480nm、第二探测通道中的第二滤光片(D22)选择通过的波长范围为510-535nm、第三探测通道中的第二滤光片(D32)选择通过的波长范围为565-590nm、第四探测通道中的第二滤光片(D42)选择通过的波长范围为606-650nm、第五探测通道中的第二滤光片(D52)选择通过的波长范围为665-685nm、第六探测通道中的第二滤光片(D62)选择通过的波长范围为700nm以上。

2.根据权利要求1所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，腔室(1)还具有第一光源滤光片组中的第二光源滤光片(L21)、第二光源滤光片组中的第二光源滤光片(L22)、第三光源滤光片组中的第二光源滤光片(L32)、第四光源滤光片组中的第二光源滤光片(L42、L43)、第五光源滤光片组中的第二光源滤光片(L52)，均为半透半反滤光片，来分别消除被第一至第五光源滤光片组中被第一光源滤光片(L11、L21、L31、L41、L51)选择通过的波长范围之外的杂峰。

3.根据权利要求2所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，每个光源激发通道中都有一个光源透镜(T1)，其位于各光源激发通道中波段选通滤光片(L11、L21、L31、L41、L51、L61)之后、半透半反滤光片(L12、L22、L32、L42、L52)及反光镜(M62)之前，用来使得通过第一光源滤光片(L11、L21、L31、L41、L51、L61)之后的光束变成平行。

4.根据权利要求3所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，光源盒(12)的壁(16)上具有多个插槽，用于插入并紧紧保持波段选通滤光片(L11、L21、L31、L41、L51、L61)、半透半反滤光片(L12、L22、L32、L42、L43、L52)、反光镜(M62)及光源透镜(T1)。

5.根据权利要求4所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，光源盒(12)的光学窗口(15)中设有柱形透镜(T2)，用来将光源激发部(A)发出的平行光束聚焦在样品杯(B) 反应腔(3)的壁(31)上。

6.根据权利要求5所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，腔室(2)还具有设在第二探测通道中的第三滤光片(D23)、第三探测通道中的第三滤光片(D33、D34)、第四探测通道中的第三滤光片(D43)、第五探测通道中的第三滤光片(D53)、第六探测通道中的第三滤光片(D63)，它们均为半透半反滤光片，来分别消除第二至第六探测通道中波段选通滤光片(D22、D32、D42、D52、D62)选择通过的波长范围之外的杂峰。

7.根据权利要求6所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，腔室(2)还具有设在第一探测通道中的第一滤光片(D11)、第二探测通道中的第一滤光片(D21)、第三探测通道中的第一滤光片(D31)、第四探测通道中的第一滤光片(D41)、第五探测通道中的第一滤光片(D51)、第六探测通道中的第一滤光片(D61)，它们均为有色玻璃滤光片。

8.根据权利要求7所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，每个探测通道中都有一个聚光透镜(T3)，其位于各探测通道中波段选通滤光片(D12、D22、D32、D42、D52、D62)之后、有色玻璃滤光片(D11、D21、D31、D41、D41、D51)之前，用来使得通过第一光源滤光片(L11、L21、L31、L41、L51、L61)的光束成平行。

9.根据权利要求8所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，探测器盒(22)的壁(25)上具有多个插槽，用于插入并紧紧保持有色玻璃滤光片(D11、D21、D31、D41、D51、D61)、波段选通滤光片(D12、D22、D32、D42、D52、D62)、半透半反滤光片(D23、D33、D34、D43、D53、D63)、反光镜(M62)及聚光透镜(T3)。

10.根据权利要求9所述的六色实时荧光定量PCR分析仪，其特征在于，探测器盒(22)的第二光学窗口(24)中设有柱形透镜(T2)，用来将样品杯(B)反应腔(3)内体系中的荧光基团发出的光变成平行光。