CN104262246B - 一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl 抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl 抑制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种5‑苯基烟酰胺类Bcr‑Abl抑制剂及其制备方法和应用，该化合物的结构式为其中，R1为吗啉基、环丙基胺基、二异丙基胺基、二乙胺基、异丙基胺基或N,N‑二甲基乙二胺基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为叔胺、卤素。该系列抑制剂在体外对ABL1激酶有一定的抑制作用，且能够抑制肿瘤细胞K562的增殖，可用于抗肿瘤药物的制备，尤其是CML(慢性粒细胞性白血病)药物。本发明提供的5‑苯基烟酰胺类Bcr‑Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗肿瘤的化合物，特别涉及一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
慢性髓细胞性白血病(CML)是一种发生于造血干细胞的血液系统性克隆增生性疾病，也是最常见的一种白血病。在西方国家，CML约占成人白血病的15-20％，在各年龄段均可发病，以中老年病例为常见。CML是由t(9；22)(q34；q11)染色体易位形成的断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因过度表达的Bcr-Abl蛋白引起的。目前，出现了多种针对BCR-ABL为靶标的小分子抑制剂，但都存在耐药性问题，因此Bcr-Abl突变耐药性是该研究领域的一大难题，随之新型Bcr-Abl抑制剂的研究和开发就成为药学领域的热点之一。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂，具有如下结构式：
其中，R1为叔胺基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为叔胺基或卤素。
所述的R1为吗啉基、环丙基胺基、二异丙基胺基、二乙胺基、异丙基胺基或N,N-二甲基乙二胺基团。
所述的R2为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的间位；
所述的R2为双取代基时，两个取代基相同或不同，取代位置相邻或相间。
一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)5-溴烟酸和不同的胺通过酰氯反应得到不同的5-溴烟酰胺类化合物；
2)不同的5-溴烟酰胺类化合物和对羧基苯硼酸通过SUZUKI偶联反应得到不同的4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸；
3)含取代基的苯甲酰哌嗪的制备：含不同取代基的苯甲酸和特戊酰氯反应生成混合酸酐中间体，再和哌嗪反应得到含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
4)不同的4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸与含不同取代基的苯甲酰哌嗪通过混合酸酐方法得到5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述步骤1)的具体操作为：将5-溴烟酸溶于无水氯化亚砜中，进行回流反应，反应完后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯；将不同的胺溶于无水二氯甲烷中；在冰浴条件下，滴加5-溴烟酰氯的无水二氯甲烷溶液；滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，用二氯甲烷萃取，洗涤，然后有机相用无水硫酸钠干燥；再经柱色谱分离，得到5-溴烟酰胺类化合物；
所述步骤2)的具体操作为：将5-溴烟酰胺类化合物、对羧基苯硼酸、四三苯基膦钯及碳酸铯溶于乙腈和水的混合溶液中，升温至90℃反应48小时，反应完后抽滤，滤液冷却至室温后用盐酸调节pH至析出固体，过滤，得4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸。
所述步骤3)的具体操作为：将含不同取代基的苯甲酸溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺和特戊酰氯，在室温下搅拌至澄清，然后反应4小时，得混合酸酐中间体；反应完后，一次性加入哌嗪的无水乙醇溶液，在室温下反应过夜，反应结束后，加浓盐酸，然后用二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷相，水相用氢氧化钠调至碱性，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，得含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
所述步骤4)的具体操作为：将4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸和4-甲基 吗啉依次加入到无水二氯甲烷中，在冰浴条件下，向其中滴加氯甲酸异丁酯的二氯甲烷溶液，在0℃下反应30～40min；反应完后，在冰浴条件下，滴加含不同取代基的苯甲酰哌嗪和4-甲基吗啉的二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，反应结束后，加入二氯甲烷稀释，洗涤，然后有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化，得5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格式反应制备格式试剂，格式试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸酯，对甲基苯硼酸酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
对羧基苯硼酸的制备步骤具体为：将Mg条和碘加入反应瓶中，氮气保护，加热条件下加入对甲溴苯的无水THF溶液，回流反应，反应完后冷却至室温，将反应装置转移到低温反应仪中，加入硼酸三甲酯的无水THF溶液，室温反应，之后加入HCl溶液进行水解，反应完全后，旋除THF，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液旋除溶剂，无水乙醇重结晶得对甲基苯硼酸；将对甲基苯硼酸在冰浴条件下溶于1mol/L的NaOH溶液中，之后滴加到KMnO4、四丁基溴化铵的水溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，加入少量乙醇淬灭，然后抽滤，滤液用浓盐酸调节pH值至析出固体，得对羧基苯硼酸。
所述的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂在制备Bcr-Abl抑制剂药物中的应用。
所述的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物为治疗白血病的药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂，是新型的具有抗Bcr-Abl激酶活性的化合物，在体外对Bcr-Abl激酶具有良好的抑制活性。Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物， 促使CML成熟粒细胞无限增生。Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。实验结果表明本发明所制备的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂能够有效地抑制Bcr-Abl的活性并抑制肿瘤细胞的生长和增殖，说明所制备的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂可用于制备Bcr-Abl抑制剂药物和抗肿瘤药物。
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
附图说明
图1为5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的合成路线图；
其中化合物1为对溴甲苯，化合物2为对溴甲苯的格式试剂，化合物3为对甲基苯硼酸；化合物为4为对羧基苯硼酸，化合物5为5-溴烟酸，化合物6为5-溴烟酰氯，化合物7为不同5-溴烟酰胺类化合物，化合物8为不同的4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸，化合物9为不同取代基的苯甲酸，化合物10为不同取代基的苯甲酸特戊酸酐中间体，化合物11为不同取代基的苯甲酰哌嗪，化合物Y1-Y21为目标化合物即5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂。
图中标注的具体为：
(a).Mg,I2,THF,回流,N2；(b)B(OMe)3,THF,-20℃；(c).NaOH(1M),KMnO4,TBAB,H2O；(d)SOCl2,回流,4h；(e)various amine,DCM,0℃→r.t.；(f)Pd(Pph3)4,Cs2CO3,CH3CN/H2O(V:V＝3:2),90℃；(g)pivaloyl chloride,TEA,DCM,r.t.30min；(h)ethanol,r.t.；(i)ClCOO-iBu,NMM,DCM,0℃；Mono-acylated piperazine,NMM,DCM,0℃→r.t.
具体实施方式
本发明提供一种具抗肿瘤活性的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂，这类抑制剂在体外体现出Bcr-Abl激酶抑制活性，能够应用于抗肿瘤药物的制备。
下面结合附图和实施例对本发明做详细的说明，所述是对本发明的解释而 不是限定。
本发明提供的具有抗肿瘤活性的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂，其化学结构式为：
其中，R1为叔胺基团，R2为单取代基或双取代基，取代基为叔胺基或卤素。
进一步的，所述的R1为吗啉基、环丙基胺基、二异丙基胺基、二乙胺基、异丙基胺基或N,N-二甲基乙二胺基团。
所述的R2为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的间位；
所述的R2为双取代基时，两个取代基相同或不同，取代位置相邻或相间。
下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实例来详细说明5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法和活性筛选。
实施例1
在5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的结构式中，R1为吗啉基，R2为间三氟甲基，通过以下步骤制备：
1)对羧基苯硼酸(化合物4)的制备
在250ml的双颈瓶中加入处理过的Mg条(2.15g，90mmol)，2粒碘，氮气保护，抽真空3次。加热条件下用注射器缓慢加入化合物对甲溴苯(化合物1,60mmol)的无水THF溶液，反应引发后处于回流状态，继续加入剩余溶液，加完后回流反应5小时，得到对溴甲苯的格式试剂(化合物2)，冷却至室温后，将反应装置转移到低温反应仪中，温度调节至-20℃，5分钟后用注射器加入硼酸三甲酯(9.36g，90mmol)的无水THF溶液，加完后室温反应3小时，之后加入100ml 2mol/L的HCl溶液进行水解反应，TLC检测反应。反应完全后，减压旋除THF，水相用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用水，饱和食盐水洗至 中性，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压旋除溶剂，无水乙醇重结晶得对甲基苯硼酸(化合物3)4.66g，产率57％。
将对甲基苯硼酸(化合物3，4.66g，34.26mmol)在冰浴条件下溶于1mol/L的NaOH溶液(103ml)。待溶解后，在冰浴条件下，将上述溶液滴加到KMnO4(16.24g，102.79mmol)、四丁基溴化铵(0.34g)的水(340ml)溶液中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入少量乙醇淬灭，抽滤，滤液用浓盐酸调至pH＝2，析出固体，得对羧基苯硼酸(化合物4)5.69g。
2)4-[(5-溴吡啶-3-基)羰基]吗啉(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol)中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下，将上述5-溴烟酰氯溶液滴加到吗啉(4.7ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)，得产品6.03g，产率90％。
3)4-[(5-溴吡啶-3-基)羰基]吗啉(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-[5-(吗啉-4-基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，4-[(5-溴吡啶-3-基)羰基]吗啉(化合物7，4.06g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-[5-(吗啉-4-基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)3.56g，产率76％。
4)间三氟甲基苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-[3-(三氟 甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11)
将间三氟甲基苯甲酸(20mmol，3.80g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11)4.13g，产率80％。
5)4-[5-(吗啉-4-基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)和1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y3
在100ml反应瓶中，将4-[5-(吗啉-4-基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8，1.24g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应30分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基](化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物Y30.42g，产率19％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 179-181℃,EI-MS(m/z):552([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.02(s,1H),8.65(s,1H),8.18(s,1H),7.89(d,J＝8.1Hz,2H),7.85(s,1H),7.80(s,1H),7.79–7.68(m,2H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),3.54(m,16H).
实施例2
该抑制剂的结构式中，R1为环丙基胺基，R2为3,4-二氟，通过以下步骤制备：
步骤1)与实施例1中步骤相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2)5-溴-N-环丙基烟酰胺(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol)中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下，将酰氯溶液滴加到环丙胺(3.77ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)，得产品5.54g，产率93％。
3)5-溴-N-环丙基烟酰胺(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{5-[(环丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，5-溴-N-环丙基烟酰胺(化合物7，3.62g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{5-[(环丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8) 3.39g，产率80％。
4)3,4-二氟苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪(化合物11)
将3,4-二氟苯甲酸(20mmol，3.16g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪(化合物11)2.71g，产率60％。
5)4-{5-[(环丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)和1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y5
在100ml反应瓶中，将4-{5-[(环丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8，1.13g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应40分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪(化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物Y50.58g，产率30％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 221-222℃,EI-MS(m/z):490([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.98(s,1H),8.75(d,J＝3.1Hz,1H),8.45(s,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,2H),7.59(d,J＝7.6Hz,4H),7.39–7.28(m,1H),3.44-3.66(m,8H),1.21(s,1H),0.75(d,J＝6.3Hz,2H),0.61(d,J＝4.0Hz,2H).
实施例3
该抑制剂的结构式中，R1为二异丙基胺基，R2为间二甲氨基，通过以下步骤制备：
步骤1)与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2)5-溴-N,N-二异丙基烟酰胺(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol)中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下，将酰氯溶液滴加到二异丙基胺(7.66ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：3)，得产品6.2g，产率88％。
3)5-溴-N,N-二异丙基烟酰胺(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{5-[(二异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，5-溴-N,N-二异丙基烟酰胺(化合物7，4.27g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{5-[(二异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)3.43g，产率70％。
4)间二甲氨基苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到N,N-二甲基-4-(哌嗪-1-基羰基)苯胺(化合物11)
将间二甲氨基苯甲酸(20mmol，3.30g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得N,N-二甲基-4-(哌嗪-1-基羰基)苯胺(化合物11)3.73g，产率80％。
5)4-{5-[(二异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)和N,N-二甲基-4-(哌嗪-1-基羰基)苯胺(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y8
在100ml反应瓶中，将4-{5-[(二异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8，1.30g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应35分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将N,N-二甲基-4-(哌嗪-1-基羰基)苯胺(化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入 二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物Y80.47g，产率22％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 197-199℃,EI-MS(m/z):541([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.99(s,1H),8.54(d,J＝1.7Hz,1H),8.06(s,1H),7.89(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),6.79(d,J＝7.6Hz,1H),6.69(s,1H),6.66(d,J＝7.3Hz,1H),3.79–3.37(m,10H),2.92(s,6H),1.47(s,6H),1.16(s,6H).
实施例4
该抑制剂的结构式中，R1为二乙胺基，R2为4-氯-3-三氟甲基，通过以下步骤制备：
步骤1)与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2)5-溴-N,N-二乙基烟酰胺(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol)中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下，将酰氯溶液滴加到二乙胺(5.6ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱 分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)，得产品4.82g，产率76％。
3)5-溴-N,N-二乙基烟酰胺(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{5-[(二乙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，5-溴-N,N-二乙基烟酰胺(化合物7，3.85g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{5-[(二乙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)3.58g，产率80％。
4)4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11)
将4-氯-3-三氟甲基苯甲酸(20mmol，4.49g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物10)4.68g，产率80％。
5)4-{5-[(二乙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)和1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y13
在100ml反应瓶中，将4-{5-[(二乙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8，1.19g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应30分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-[4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪(化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:5)，得目标化合物Y130.62g，产率27％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 149-151℃,EI-MS(m/z):572([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.01(s,1H),8.59(d,J＝1.8Hz,1H),8.13(d,J＝1.6Hz,1H),7.91(s,2H),7.89(s,1H),7.81(dd,J＝25.5,7.8Hz,2H),7.57(d,J＝7.9Hz,2H),3.43-3.68(m,8H),3.49(d,J＝6.5Hz,2H),3.24(d,J＝6.5Hz,2H),1.19(s,3H),1.09(s,3H).
实施例5
该抑制剂的结构式中，R1为异丙基胺基，R2为2,4-二氯，通过以下步骤制备：
步骤1)与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2)5-溴-N-异丙基烟酰胺(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol)中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下， 将酰氯溶液滴加到异丙胺(4.63ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：5)，得产品4.92g，产率82％。
3)5-溴-N-异丙基烟酰胺(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-{5-[(异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，5-溴-N-异丙基烟酰胺(化合物7，3.64g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-{5-[(异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)3.37g，产率79％。
4)2,4-二氯苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)
将2,4-二氯苯甲酸(20mmol，3.82g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，得1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)4.35g，产率83％。
5)4-{5-[(异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物8)和1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y18
在100ml反应瓶中，将4-{5-[(异丙基氨基)羰基]吡啶-3-基}苯甲酸(化合物 8，1.14g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应30分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物Y180.54g，产率26％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 225-227℃,EI-MS(m/z):524([M]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.00(d,J＝1.7Hz,1H),8.54(d,J＝7.6Hz,1H),8.48(s,1H),7.90(d,J＝6.4Hz,2H),7.75(s,1H),7.60(d,J＝7.7Hz,2H),7.58–7.51(m,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),4.15(dd,J＝13.6,6.8Hz,1H),3.26-3.73(m,8H),1.22(s,3H),1.20(s,3H).
实施例6
该抑制剂的结构式中，R1为N,N二甲基乙二胺，R2为2,4-二氯，通过以下步骤制备：
步骤1)与实施例1中步骤1)相同，即由对溴甲苯(化合物1)制备对羧基苯硼酸(化合物4)。
2)5-溴-N-[2-(二甲基氨基)乙基]烟酰胺(化合物7)的制备
在氮气保护下，将20ml氯化亚砜滴加到5-溴烟酸(化合物5，5.0g，24.7mmol) 中，滴加完后，回流至澄清，反应2小时，反应结束后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯(化合物6)；
将5-溴烟酰氯(化合物6)溶解到无水二氯甲烷(30ml)中，在冰浴条件下，将酰氯溶液滴加到N,N二甲基乙二胺(5.97ml，54.4mmol)的无水二氯甲烷(50ml)溶液中，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，加入碳酸钾溶液(2M)20ml，用二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥。再经柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：7)，得产品4.83g，产率72％。
3)5-溴-N-[2-(二甲基氨基)乙基]烟酰胺(化合物7)和对羧基苯硼酸(化合物4)通过SUZUKI偶联反应得到4-[5-({[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)
在250ml反应瓶中，加入对羧基苯硼酸(化合物4，2.49g，15mmol)，5-溴-N-[2-(二甲基氨基)乙基]烟酰胺(化合物7，4.08g，15mmol)，四三苯基膦钯(0.9g，0.75mmol)，无水碳酸铯(19.5g，60mmol)，之后加入乙腈/水(V:V＝3:2)160ml。N2保护，油浴升至90℃反应48h。反应结束后，趁热抽滤，滤液用6mol/L盐酸调至pH＝4，析出固体，抽滤，滤饼为4-[5-({[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)3.10g，产率66％。
4)2,4-二氯苯甲酸(化合物9)和哌嗪通过混合酸酐法得到1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)
将2,4-二氯苯甲酸(20mmol，3.82g)溶于80ml无水二氯甲烷中，加入三乙胺(4.6ml，30mmol)和特戊酰氯(2.42ml，20mmol)，室温搅拌至澄清，反应4小时，得到混合酸酐中间体(化合物10)。
反应完后，将哌嗪(3.44g，40mmol)的无水乙醇(80ml)溶液一次性加入，室温反应过夜。反应结束后，加浓盐酸4ml，用二氯甲烷(30ml×2)萃取，弃去二氯甲烷相。水相用氢氧化钠8g调至pH为碱性，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，得1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)4.35g， 产率83％。
5)4-[5-({[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8)和1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11)通过混合酸酐法得到目标化合物Y21
在100ml反应瓶中，将4-[5-({[2-(二甲基氨基)乙基]氨基}羰基)吡啶-3-基]苯甲酸(化合物8，1.25g，4.0mmol)、4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)依次加入到15ml无水二氯甲烷中。在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯(0.8ml，6mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中，在0℃下反应30分钟。
反应完后，在冰浴条件下，将1-(2,4-二氯苯甲酰基)哌嗪(化合物11，6mmol)和4-甲基吗啉(1.3ml，12mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)加入到上述反应体系中。滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜。反应结束后，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗(10mL×2)，饱和碳酸钠溶液洗(10mL×3)，饱和氯化钠溶液洗(10mL)。有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:3)，得目标化合物Y210.51g，产率23％。
所得化合物的结构如下所示：
其理化性质为：Mp 114-116℃,EI-MS(m/z):554.10([M+1]+)。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.01(d,J＝1.6Hz,1H),8.76(d,J＝5.1Hz,1H),8.49(s,1H),7.90(d,J＝6.3Hz,2H),7.75(s,1H),7.60(d,J＝7.7Hz,2H),7.58–7.52(m,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),3.57-3.73(m,8H),3.26(s,4H),2.22(s,6H).
下面测定本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制活性。
测定方法具体如下：
激酶ABL1和底物Abltide购自Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GlobTMKinase Assays检测试剂盒检测目标化合物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。
将ATP(1mM)用buffer(2×)(Tris 80mM,MgCl220mM,BSA 0.2mg/mL,DTT2mM)稀释80倍配制成ATP(125μM)的buffer(2×)溶液；将125μM的ATP溶液和Abltide溶液体积1:1混合配制成ATP(62.5μM)-Abltide(0.5μg/μl)的混合溶液备用；ABL1激酶溶液用buffer(1×)(Tris 40mM,MgCl210mM,BSA0.1mg/mL,DTT 1mM)稀释100倍配制成ABL1(10ng/μl)的buffer(1×)溶液备用；
将目标化合物(Y1～Y21)和阳性对照药(Imatinib)用buffer(1×)分别配制成1.5×10-5mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-7mol/L，1.5×10-8，1.5×10-9，1.5×10-10mol/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加入2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL样品溶液，2μL酶溶液；空白孔加3μL缓冲液和2μLATP-Abltide的混合溶液；对照孔加2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL缓冲液，2μL酶溶液，加毕，30℃下孵育60min；加入ADP-Glo试剂5μL，在25℃下孵育40min；加入Kinase detection试剂，再在25℃下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发光值，计算化合物对ABL1的抑制率和IC50。
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的结构如下：
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制活性结果，如表1所示：
表1抑制剂对Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制活性结果(IC50)
结果显示5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl激酶具有较强的抑制活性，Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生，Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。
下面测定本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的生长抑制活性。
采用MTT法检验5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的生长抑制活性：
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂具有抗肿瘤作用，对肿瘤细胞有体外抑制增殖活性，在人白血病细胞(K562细胞)中具有抑制肿瘤细胞的增殖活性，可以用于对白血病的治疗。
取对数生长期的人白血病细胞(K562细胞)，用RPMI1640培养基稀释成104个/mL的细胞溶液，平行接种于96孔培养板中(2000个/孔)，每孔接种体积为200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养12h；
每孔加入不同浓度的待测化合物20μL，使孔中化合物的终浓度为：1.5×10-7mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-5mol/L，1.5×10-4mol/L，每个浓度设3个复孔，阴性对照加细胞不加化合物，设6个复孔，尼罗替尼为阳性对照，继续培养48h；
每孔加入MTT(5mg/mL)10μL，使孔中MTT的终浓度0.5mg/mL，37℃培养箱孵育4h，小心吸弃上清，每孔加DMSO150μL，振荡15min，酶联免疫检测仪测量各孔490nm处的紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑 制率求出IC50值；
细胞抑制率的计算公式为：
抑制率％＝(对照孔平均OD值-用药组平均OD值)/对照孔平均OD值×100％
检测结果显示：与阴性对照组相比，5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对上述肿瘤细胞具有不同程度的体外抑制作用。
本发明提供的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的肿瘤细胞抑制结果见表2。
表2抑制剂对K562的抑制活性结果IC50(μM)
结果显示本发明所制备的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂能够抑制肿瘤细胞的生长，说明5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的增殖抑制效果良好，可应用于抗肿瘤药物的制备。
Claims (4)
1.一种5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)5-溴烟酸和含有不同取代基的胺通过酰胺反应得到5-溴烟酰胺类化合物；
2)5-溴烟酰胺类化合物和对羧基苯硼酸通过SUZUKI偶联反应得到4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸类化合物；
3)含取代基的苯甲酰哌嗪的制备：含不同取代基的苯甲酸和特戊酰氯反应生成混合酸酐中间体，再和哌嗪反应得到含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
4)4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸类化合物与含不同取代基的苯甲酰哌嗪通过混合酸酐方法得到5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂，制得的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的结构式为：
其中，R1为R2为3-N(CH3)2、3,4-二氟、3-CF3、2,4-二氯或3-CF3-4-Cl。
2.根据权利要求1所述的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的具体操作为：将5-溴烟酸溶于无水氯化亚砜中，进行回流反应，反应完后，减压旋除氯化亚砜，得到5-溴烟酰氯；将含有不同取代基的胺溶于无水二氯甲烷中；在冰浴条件下，滴加5-溴烟酰氯的无水二氯甲烷溶液；滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜；反应结束后，用二氯甲烷萃取，洗涤，然后有机相用无水硫酸钠干燥；再经柱色谱分离，得到5-溴烟酰胺类化合物；
所述步骤2)的具体操作为：将5-溴烟酰胺类化合物、对羧基苯硼酸、四三苯基膦钯及碳酸铯溶于乙腈和水的混合溶液中，升温至90℃反应48小时，反应完后抽滤，滤液冷却至室温后用盐酸调节pH至析出固体，过滤，得4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸类化合物。
3.根据权利要求1所述的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的具体操作为：将含不同取代基的苯甲酸溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺和特戊酰氯，在室温下搅拌至澄清，然后反应4小时，得混合酸酐中间体；反应完后，一次性加入哌嗪的无水乙醇溶液，在室温下反应过夜，反应结束后，加浓盐酸，然后用二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷相，水相用氢氧化钠调至碱性，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥有机相，得含不同取代基的苯甲酰哌嗪；
所述步骤4)的具体操作为：将4-[5-(胺基羰基)吡啶-3-基]苯甲酸类化合物和4-甲基吗啉依次加入到无水二氯甲烷中，在冰浴条件下，向其中滴加氯甲酸异丁酯的二氯甲烷溶液，在0℃下反应30～40min；反应完后，在冰浴条件下，滴加含不同取代基的苯甲酰哌嗪和4-甲基吗啉的二氯甲烷溶液，滴加完后，撤去冰浴，升至室温反应过夜，反应结束后，加入二氯甲烷稀释，洗涤，然后有机相用无水硫酸铵干燥，再经柱色谱分离纯化，得5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂。
4.根据权利要求1所述的5-苯基烟酰胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格氏反应制备格氏试剂，格氏试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸酯，对甲基苯硼酸酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
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