CN104254531B

CN104254531B - 环状二氨基嘧啶衍生物

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Publication number: CN104254531B
Application number: CN201280070330.7A
Authority: CN
Inventors: H.余; L.C.德塞尔姆
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2012-02-21
Filing date: 2012-12-18
Publication date: 2017-05-03
Anticipated expiration: 2032-12-18
Also published as: CA2865040C; EP2817306A1; ES2552518T3; WO2013126132A1; US20150025066A1; AR090103A1; US9073944B2; JP6059260B2; JP2015508099A; AU2012370450B2; EP2817306B1; IL233986A; CN104254531A; AU2012370450A1; CA2865040A1

Abstract

式I化合物其中A、L₁、L₂、X和Y具有在权利要求1中指出的含义，为Syk的抑制剂且尤其可用于治疗类风湿性关节炎。

Description

环状二氨基嘧啶衍生物

发明背景

本发明的目的在于发现具有有价值性质的新颖化合物，特别是可用于制备药物的那些化合物。

本发明涉及化合物及化合物在抑制、调节和/或调制由激酶、特别是酪氨酸激酶引起的信号转导中的用途，另外涉及包含这些化合物的药物组合物和所述化合物用于治疗激酶诱导的疾病的用途。

因为蛋白质激酶调节包括新陈代谢、细胞增殖、细胞分化和细胞存活的几乎每个细胞过程，所以它们对于对各种疾病状态的治疗干预是有吸引力的靶标。例如，蛋白质激酶在其中起关键作用的细胞周期控制和血管生成是与诸如但不限于癌症、发炎疾病、异常血管生成和与其有关的疾病、动脉粥样硬化、黄斑变性、糖尿病、肥胖症和疼痛的许多疾病病况相关的细胞过程。

在激活肥大细胞之后的信号途径中的关键事件之一是激活酪氨酸激酶Syk。肥大细胞在哮喘和过敏性病症中通过释放促炎性介质和细胞因子而起到关键作用。IgE的高亲和性受体FcεRJ的抗原介导的聚集引起肥大细胞激活。这触发一系列信号转导事件，引起包括组胺、蛋白酶、白细胞三烯和细胞因子等介质的释放。这些介质引起血管通透性增加、粘液产生、支气管收缩、组织退化和炎症，因此在哮喘和过敏性病症的病因学和症状中起关键作用。Syk激酶充当引起介质释放的所有后续信号转导的重要引发剂。Syk激酶在信号转导路径中的关键作用通过由含有Syk激酶的SH2结构域的蛋白质完全抑制介质释放来证明，该蛋白质起Syk激酶的抑制剂的作用(J. A.Taylor等，Molec. and Cell Biol, 15: 4149-4157 (1995)。

Syk (脾-酪氨酸-激酶)是属于包含ZAP70、Pyk2、AbI、Tie2、KDR和HER等的细胞内酪氨酸激酶亚家族的72kDa非受体酪氨酸激酶。Syk为FcR (FcγRI、II、III，FcεRI、FcαR)和BCR信号转导的主要调节剂且在整个造血系统中表达以及在成纤维细胞、破骨细胞、肝细胞、上皮和神经元细胞中表达。除了C端激酶结构域之外，SYK还展示出两个SH2结构域和超过10个自磷酸化位点¹。

借助于它的两个SH2结构域，SYK被特异性募集到磷酸化的ITAM (在免疫受体中存在的基于免疫受体酪氨酸的激活基序，诸如FcγRI、IIA、IIIA、FcαR、FcεRI和BCR，由单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞和B细胞表达)，且特别介导由那些受体在肥大细胞、B细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜伊红粒细胞、NK细胞、DC细胞血小板和破骨细胞中的激活触发的免疫受体信号转导^1,2。

在BCR交联后，在Igα/Igβ的胞质尾的ITAM基序处的酪氨酸残基通过Src-家族激酶Lyn磷酸化，产生SYK的对接位点，因此SYK被募集到BCR免疫复合物。SYK随后通过Src-家族激酶Lyn磷酸化并激活。在激活时，SYK将适体蛋白质BLNK磷酸化，允许其与BTK和PLCγ₂经由它们的相应SH2域相互作用。SYK磷酸化且因此激活的BTK将进而磷酸化并激活PLCγ₂，引起IP₃形成、Ca²⁺活动化、PKC和MAPK激活和继起的NFAT、AP-1和NFκB转录因子激活，引起激活和表面标志物表达、细胞因子释放、B细胞的存活和增殖³。在肥大细胞中，过敏原激活的FcεRI通过LYN和FYN磷酸化并募集SYK，SYK进而通过LYN磷酸化并进一步自磷酸化，变得完全激活。激活的SYK使两种适体分子NTAL和LAT磷酸化，产生用于含SH2的蛋白质(诸如PLCγ₁、vav和PI3K的p85调节亚基)的更多对接位点，引起肥大细胞脱粒和细胞因子产生⁴。在肥大细胞的信号转导中Syk的关键作用通过可重现地观察到不能脱粒的来自人类供体的10-15%的嗜碱性细胞(循环肥大细胞)具有减少量的Syk蛋白质来证实^5,6。另外，破骨细胞的骨再吸收活性需要SYK。在通过αvβ3整合素剌激破骨细胞后，SYK很可能由c-Src以DAP-12/FcγRII依赖机制而变得磷酸化，引起SPL-76和Vav3磷酸化和随后的细胞骨架再组织。缺乏SYK的破骨细胞是没有活性的且显示缺陷性细胞骨架再组织。与此相关，缺乏SYK的胚胎显示缺陷性的骨骼质量^7,8。

在淋巴结中的B细胞的BCR-介导激活以及在关节中的树突细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞的FcR-介导激活是在类风湿关节炎(RA)期间发生的细胞病理-生理机制的主要组分。此外，破骨细胞的激活导致骨骼和软骨破坏，这是该病理的标志⁹。SYK信号转导因此将在外周和炎症部位处两者的关节炎的发展期间起关键作用¹⁰。实际上，由Rigel研发的可口服利用的Syk抑制剂R406诱发临床评分显著改善且显著降低RA的鼠科模型中血清细胞因子浓度以及骨侵蚀^11,12。此外，该抑制剂在人类中的RA II期研究中已经显示出功效(ACR评分改善)和良好的耐受性^13,14,15。

在SLE中，B细胞基本上经由产生自身抗体而促成病理发生，引起免疫复合物形成、剌激Fc受体且最终引起炎症的过度和慢性激活。在SLE的鼠科模型中，用Syk抑制剂治疗引起类别切换的生发中心、缘区、重新形成且卵泡的B细胞的数量减少，且因此产生疾病减轻效果¹⁸。

虽然TCR信号通过在胸腺细胞和天然T细胞中的细胞内酪氨酸激酶ZAP-70传输，但多个研究指出分化的效应T细胞，诸如在多发性硬化(MS)或系统性红斑狼疮(SLE)的病理生理学中包括的那些，显示TCRzeta链的下调和TCR/CD3链及其与FcRγ的相互作用的伴随上调。那些研究显示在效应细胞中的TCR/CD3/FcRγ复合物募集并激活Syk酪氨酸激酶，而非ZAP-70酪氨酸激酶。在TCR信号转导中该生理转换专一发生在效应器中，而不是在天然或记忆T细胞中发生^16,17,18。随后，并不令人惊奇地，已经显示SYK抑制剂延迟疾病进展并改善SLE的鼠科模型的存活率^{17,18,19,20,21}。

SYK抑制剂还可发现在哮喘、过敏症、多发性硬化及其他疾病如血小板减少性紫癜和T或B细胞淋巴瘤中的用途^{1,10,14,22-35}。

用Syk抑制剂治疗疾病前期的NZB/W小鼠防止肾病发展，其通过肾小球硬化、管状损伤、蛋白尿和BUN水平降低证明¹⁸。

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除了肥大细胞之外，Syk还在包括B细胞的其它造血细胞中表达，其中认为其在转导将不成熟的B细胞转变成成熟的再循环B细胞所需要的信号中起重要作用(M. Turner等，Immunology Today, 21: 148 (2000))。据报道B细胞在某些炎性病况诸如狼疮(O. T.Chan等，Immunological Rev, 169: 107-121 (1999))和类风湿性关节炎(A. Gause等，Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001))中起重要作用。

还报道了Syk是在引起神经毒素产物产生的β-淀粉样蛋白和朊病毒原纤维中的信号级联的要素(C. K. Combs等，J. Neuroscl, 19: 928-939 (1999))。另外，Syk抑制剂阻断这些神经毒素产物的产生。因此，呋喃并吡啶衍生物可潜在地用于治疗阿尔茨海默氏病和相关神经炎性疾病。另一报告(Y. Kuno等，Blood, 97, 1050-1055 (2001))证明Syk在恶性进展中起重要作用。发现TEL-Syk融合蛋白转变造血细胞，这暗示着其在造血恶性肿瘤的发病机理中的作用。因此，呋喃并吡啶衍生物可用于治疗某些类型的癌症。

在血液学恶性肿瘤中包括的其它蛋白质酪氨酸激酶包括ABL (ABLl)、ARG(ABL2)、PDGFβR、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFRl、FGFR3、FLT3和FRK。

Janus激酶(JAK)是由JAKl、JAK2、JAK3和TYK2组成的酪氨酸激酶家族。JAK在细胞因子信号转导中起关键作用。JAK激酶家族的下游底物包括信号转导及转录激活因子(STAT)蛋白质。JAK/STAT信号转导已经涉及调解许多异常免疫反应诸如过敏症、哮喘、自体免疫疾病如移植(同种异体移植)排斥、类风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化和多发性硬化以及实体和血液恶性肿瘤如白血病和淋巴瘤(JAK/STAT途径的医药干预的综述，参见Frank, MoI. Med. 5, 432:456 (1999)和Seidel等，Oncogene 19, 2645-2656 (2000))。JAK2是在脊髓增生病(MPD)的治疗中具有强烈可能性的历经验证的靶标，脊髓增生病包括真性红细胞增多症(PV)、特发性血小板增多症、慢性特发性骨髓纤维化、具有骨髓纤维化的骨髓组织转化、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓单核细胞性白血病、慢性嗜酸细胞性白血病、嗜酸性白细胞增多综合征和全身性肥大细胞病。

Fms样酪氨酸激酶3 (FLT3)，亦称作FLK-2 (胎肝激酶2)和STK-I(干细胞激酶1)，在造血干细胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受体激酶在正常造血细胞、胎盘、生殖腺和脑中表达。然而，该酶以非常高的水平在大于80%的骨髓性患者的细胞和部分急性淋巴母细胞性白血病细胞中表达。另外，该酶还可在来自患有处于成淋巴细胞危象的慢性骨髓性白血病的患者的细胞上见到。据报道FLT3激酶在30%的急性骨髓性白血病(AML)中以及在急性淋巴母细胞性白血病(ALL)亚组中突变(Gilliland等，Blood 100, 1532-1542 (2002)；Stirewalt等，Nat. Rev. Cancer, 3, 650-665 (2003))。在FLT3中最常见的激活突变是在膜旁区域内的内部串联重复，而在激酶结构域中的点突变、插入或删除是不太常见的。这些突变体FLT3激酶中的一些是组成性活性的。FLT3突变与预后差有关(Malempati等，Blood,104, 11 (2004))。已经在研发超过十几个已知的FLT3抑制剂，且一些已经显示出对AML有前途的临床效果(Levis等，Int. J. Hematol, 52, 100-107 (2005))。

已经报道一些小分子FLT3抑制剂有效诱发具有FLT3激活突变的细胞系中的细胞凋亡并有效延长在它们的骨髓细胞中表达突变体FLT3的小鼠的存活(Levis等，Blood, 99,3885-3891 (2002)；Kelly等，Cancer Cell, 1, 421-432 (2002)；Weisberg等，CancerCell, 1, 433-443 (2002)；Yee等，Blood, 100, 2941-2949 (2002))。

具体地讲，本发明涉及化合物和化合物在其中抑制、调节和/或调制由Syk引起的信号转导起作用中的用途。

因此，特别地抑制、调节和/或调制由酪氨酸激酶、特别是Syk引起的信号转导的小化合物的合成是合乎需要的，并且是本发明的一个目标。

此外，本发明的目的在于合成用于预防和治疗类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮喘、过敏性鼻炎、ITP、多发性硬化、白血病、乳腺癌和恶性黑素瘤的新化合物。我们惊奇地确认呋喃并吡啶选择性地抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或抑制这些激酶的选择。

此外，式I化合物抑制丝氨酸激酶GCN2。

实体肿瘤的癌症治疗的许多策略集中在尽可能地手术除去肿瘤块且随后通过放射疗法或用细胞毒素剂或更特异性靶向癌症细胞途径的抑制剂的化学疗法根除任何残留的肿瘤细胞。然而，所述方法的成功是有限的且常常不能持久。这主要是由于所述细胞毒素剂的窄治疗窗(特异性和副作用)和癌症细胞适应由细胞毒素或其他抑制剂施加的选择压力的能力。对初始治疗获得抗性的少量肿瘤(干)细胞的存活可足以播种肿瘤的再生长。这些复发在多数情况下比初始肿瘤更难以治疗。因此，更成功地靶向肿瘤细胞可能需要同时靶向肿瘤细胞的多个存活和逃避机制(Muller & Prendegast 2007)。

恶性肿瘤的发展伴随着细胞生理学的主要参与。在该过程期间，癌症细胞获得多种品质，这些品质是无限增殖化或对生长抑制信号不敏感的基础。另外，肿瘤细胞还改进与微环境及其之外的相互作用。后一区域包括使肿瘤细胞从免疫监视逃脱的策略(Muller &Prendegast 2007)。如由[Dunn等2004]综述，该免疫监视限制恶性肿瘤生长，但也提供触发逃避免疫反应的机制进化的选择压力。基本上已经屡次观察到T细胞免疫性的摘除足以增加肿瘤发病率[Shankaran等，2001]，且认为免疫逃避影响肿瘤休眠(相对于进展)，促进浸入和转移且消极地影响治疗反应。数个机制研究发现免疫逃避与在肿瘤微环境内的新陈代谢改变具有重要界面。此时，在介导对抗原的免疫耐受性方面的重要作用已经与分别通过酶吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)和精氨酸酶I (ARG)进行的必需氨基酸色氨酸和精氨酸的分解代谢相关联(Bronte和Zanovello, 2005；Muller等，2005b；Muller和Prendergast,2007；Munn和Mellor, 2007；Popovic等，2007)。

IDO是催化色氨酸降解成犬尿氨酸的单链氧化还原酶。IDO不负责分解代谢过量的饮食色氨酸，而是调制在局部环境中的色氨酸水平。在癌症患者中的色氨酸分解代谢升高表明色氨酸或分解代谢物的显著改变的血清浓度，且这与通常在肿瘤和引流淋巴结中升高的IDO相互关联。根据多个公开，IDO过度表达与癌症的预后差相关联[Okamoto等，2005；Brandacher等，2006]。

T细胞似乎优先对IDO激活敏感，因此当色氨酸缺乏时，它们不能分开且结果不能变得被对其呈现的抗原激活。Munn和Mellor及其同事揭露IDO通过抑制T细胞激活且通过对肿瘤抗原产生周边耐受性来调制免疫性(Mellor和Munn，2004)。这些机制涵盖将肿瘤细胞募集的免疫细胞破坏到其直接微环境中或肿瘤-引流淋巴结中。此时，由抗原呈递细胞清除的肿瘤抗原交叉呈递到适应性免疫系统。除了直接产生耐受之外，成熟DC具有扩展调节T细胞(Treg)的能力[Moser 2003]。

除色氨酸分解代谢外，精氨酸的转化率在肿瘤条件的微环境中增加，且许多报道指出对于在肿瘤生长和发展期间精氨酸的激活的作用。在肿瘤侵润的骨髓细胞中，精氨酸通过精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)转化成脲和鸟氨酸，且通过可诱导形式的氧化氮合酶(NOS2)氧化成瓜氨酸和氧化氮(NO)。

增加的ARG活性在患有结肠癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌的患者中屡次观察到[Cederbaum 2004]，其与在前列腺癌中发现的ARG和NOS的过度表达相互关联[Keskinege等，2001；Aaltoma等，2001；Wang等，2003]。已经显示在侵润巨噬细胞中的ARG活性损害抗原特异性T细胞反应和CD3受体的表达。此外，在肿瘤关联的骨髓细胞中ARG和NOS的累积活性可对抗原特异性T淋巴细胞产生抑制信号，这最后引起细胞凋亡[Bronte，2003 a; 2003b]。

IDO和ARG相关机制两者在检测各自氨基酸浓度的耗尽浓度的时间点合并。在氨基酸剥夺期间，称为一般性控制非不可抑制2 (general control nonderepressible 2(GCN2))的eIF2激酶EIF2AK4与细胞内聚积的脱酰化tRNA相互作用。因此，推测GCN2自自抑制构象变为活性构象，且由自磷酸化进一步激活。然后，唯一已知的底物蛋白eIF2a变成磷酸化，且因此翻译起始复合物受到抑制[Harding等，2000]。这减少了一般性Cap依赖性翻译起始且由此减少相应蛋白质产生。另一方面，这主要通过Cap非依赖性起始经由激活转录因子4 (ATF4)诱发应激相关靶基因的特异性表达。通过表达相应的应激反应蛋白质如在氨基酸代谢中的酶，细胞试图补偿特定的细胞应激[Wek等，2006]。如果该应激持续，则该途径将切换到经由转录促细胞凋亡转录因子、CCAAT/增强子-结合蛋白同源蛋白质(CHOP)而促进细胞死亡[Oyadomari 2004]。已经显示，色氨酸缺乏触发在改变eIF2a磷酸化的T细胞中的GCN2依赖性应激信号转导途径，和导致细胞生长停止的翻译起始(Munn等，2005)。Sharma等[2007]公开了成熟Treg的直接IDO诱发的且GCN2依赖的激活。类似地，Fallarino等[2006]发现CD4+CD25-细胞经GCN2依赖性转化成CD25+FoxP3+ Treg，生成IL-10和TGF。Rodriguez等[2007]确定经由色氨酸或精氨酸消耗的GCN2途径的激活连同TCR信号转导导致CD3链下调、细胞周期停止和无反应性。

重要地，GCN2途径不仅对于肿瘤免疫逃避是重要的，而且在直接调制肿瘤存活率方面起活性作用。Ye等[2010]发现上述转录因子ATF4在人类实体肿瘤中过度表达，暗示着在肿瘤进展中的重要功能。氨基酸和葡萄糖剥夺是在实体肿瘤中见到的典型应激且激活GCN2途径以上调与氨基酸合成和传输有关的ATF4靶基因。与正常组织相比较，在人类和小鼠肿瘤中观察到GCN2激活/过度表达和增加的磷酸-eIF2a，且ATF4或GCN2表达的废除显著地抑制体内肿瘤生长。推断GCN2-eIF2a-ATF4途径是维持在肿瘤细胞中的新陈代谢动态平衡的关键。

本发明的生物学全面干扰ARG/IDO途径，其对通过适应机制制动肿瘤免疫逃避具有吸引力。GCN2功能的干扰在此特别重要，因为其是两种途径IDO和ARG的交合点，并且其提供直接妨碍肿瘤新陈代谢的另外机会。

已经将数个途径抑制剂视为免疫调制剂。这些抑制剂主要解决IDO或ARG蛋白质的酶促功能(Muller和Scherle，2006)。精氨酸酶抑制剂N-羟基-nor-L-Arg的施用阻断在小鼠中s.c. 3LL肺癌的生长[Rodriguez 2004]。已经报道NO供体阿司匹林(aspirin)如NCX4016 (2-(乙酰氧基)苯甲酸3-(硝基氧基甲基)苯酯)干扰骨髓细胞的抑制酶促活性。口服施用NO阿司匹林使荷瘤宿主的免疫状况正常化，增加肿瘤-抗原-特异性T淋巴细胞的数目和功能并增强由癌症接种引发的抗癌免疫性的预防和治疗功效(DeSanto 2005)。

在癌症背景和其他设置中，底物类似物1-甲基-色氨酸(1MT)和相关分子已经广泛用于靶向IDO。Friberg等(2002)和Uyttenhove等(2003)的研究证明1MT可限制过度表达IDO的肿瘤的生长。然而，在数种肿瘤模型中，1MT不能引起肿瘤退化，这暗示着当将IDO抑制用作单一疗法时仅有适度的抗癌功效。相比之下，1MT和多种细胞毒素化疗剂的组合治疗引起已建立的MMTV-neu/HER2肿瘤的退化，所述肿瘤响应任何单药剂疗法差[Muller等，2005a]。在治疗之前来自小鼠的CD4+或CD8+T细胞的免疫消耗废除了在该模型中观察到的组合功效，证实对1MT经由激活T细胞介导的抗癌免疫性间接起作用的期望。IDO靶向对1MT作用是必不可少的重要证据通过1MT在遗传缺乏IDO的小鼠中缺乏抗癌活性的证明来提供[Hou等，2007]。GCN2的抑制作用将使得能够组合氨基酸缺乏诱发的免疫编辑的两个途径分支，且将降低对于肿瘤的选择以绕过任一分支的抑制作用。此外，如上详述，GCN2抑制作用提供干扰肿瘤新陈代谢的机会，同时可增强单一疗法或与其它抗癌方法的组合疗法的功效。

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本发明特别涉及抑制、调节和/或调制由Syk引起的信号转导的式I化合物，包含这些化合物的组合物及其用于治疗Syk诱发的疾病和症状(complaint)的方法。

所述式I化合物另外可用于分离和研究Syk的活性或表达。另外，它们特别适合用于与Syk活性失调或紊乱有关的疾病的诊断方法。

宿主或患者可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别为人类；啮齿动物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型具有实验研究的意义，提供治疗人类疾病的模型。

特定细胞对于用根据本发明的化合物治疗的敏感性可通过体外试验测定。通常，将细胞的培养物与以各种浓度的根据本发明的化合物混合足以允许活性剂(例如抗IgM)诱发细胞反应(例如表面标志物的表达)的一段时间，通常约1小时-1周。体外试验可使用来自血液或来自活检样品的培养细胞进行。所表达的表面标志物的量通过流式细胞术使用识别该标志物的特异性抗体来评价。

剂量根据所使用的具体化合物、具体疾病、患者状况等而不同。治疗剂量典型地足以显著减少目标组织中不想要的细胞群体，同时维持患者的成活力。该治疗通常持续到出现显著的减少，例如细胞负荷减少至少约50%，且可持续到在体内基本上不再检出不想要的细胞。

对于细胞转导途径的确认和在各种信号转导途径之间的相互作用的检测，多个科学家已经研发了合适的模型或模型系统，例如细胞培养模型(例如，Khwaja等，EMBO, 1997,16, 2783-93)和转基因动物模型(例如，White等，Oncogene, 2001, 20, 7064-7072)。为了测定信号转导级联的某些阶段，可利用相互作用化合物以调制信号(例如，Stephens等，Biochemical J., 2000, 351, 95-105)。根据本发明的化合物也可用作用于试验在动物和/或细胞培养模型中或在本申请中提到的临床疾病中的激酶依赖性信号转导途径的试剂。

激酶活性的测量是本领域技术人员所公知的技术。用于使用底物如组蛋白(例如Alessi等，FEBS Alessi等，FEBS Lett. 1996, 399, 3，第333-338页)或碱性髓磷脂蛋白质测定激酶活性的通用试验系统描述在文献中(例如，Campos-González, R.和Glenney,Jr., J.R. 1992, J. Biol. Chem. 267，第14535页)。

对于激酶抑制剂的确认，可利用各种测定系统。在闪烁迫近测定(Sorg等，J. of.Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19)和flashplate测定中，测量用γATP使作为底物的蛋白质或肽的放射性磷酸化。在抑制化合物存在下，可检测到放射性信号减小或检测不到。另外，均匀时间分辨荧光共振能量传递(HTR-FRET)和荧光极化(FP)技术适合作为测定方法(Sills等，J. of Biomolecular Screening, 2002, 191-214)。

其他非放射性ELISA测定方法使用特异性磷酸-抗体(磷酸-AB)。该磷酸-AB仅结合磷酸化底物。该结合可通过化学发光使用第二过氧化物酶-缀合的抗-绵羊抗体检测(Ross等，2002, Biochem. J.)。

现有技术

其它大环嘧啶衍生物在WO 2010/028116 A1中公开为极光(aurora)激酶抑制剂。

发明概述

本发明涉及式I的化合物及其药学上有用的溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物

其中：

表示亚苯基或2,3-二氢-吲哚-1,6-二基，其各自未被取代或被OA单取代，

X表示Hal，

Y表示具有1、2、3或4个C原子的烷基，

L₁表示(CH₂)_nNR¹CO、(CH₂)_n、NH(CH₂)_n、OCH₂CHOH、NHCO(CH₂)_n、CO(CH₂)_nNR¹、CONR²、(CH₂)_nCONR¹、O(CH₂)_pCONR¹、NR¹CONR³CHR⁴CONR¹、SO₂NR¹(CH₂)_pCONR¹或O(CH₂)_pNR¹CO，

L₂表示O(CH₂)_p、(CH₂)_nNR¹CO、O(CH₂)_pNR¹CO、CHR⁵NR¹CO或CHR³NR⁴CO，

R¹表示H或甲基，

R²表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基、2,3-二氢-吡唑基、1,2-二氢-吡啶基或四氢吡喃基，其各自未被取代或被A和/或=O单取代或二取代，

R³和R⁴一起表示具有2、3或4个CH₂基团的亚烷基链，

R⁵表示A或苄基，

A表示具有1-10个C原子的非支链或支链的烷基，其中1-7个H原子可被F置换和/或其中一个或两个不相邻的CH和/或CH₂基团可被O或N置换，

Hal表示F、Cl、Br或I，

n表示0、1、2、3或4，

p表示1、2、3或4。

本发明还涉及这些化合物的光学活性形式(立体异构体)、对映异构体、外消旋物、非对映异构体和水合物及溶剂合物。

此外，本发明涉及式I化合物的药学上可接受的衍生物。

术语化合物的溶剂合物用以指内收惰性溶剂分子到化合物上，其由于它们的相互吸引力而形成。溶剂合物例如为单或二水合物或醇化物。

术语药学上可接受的衍生物用以指例如根据本发明的化合物的盐以及所谓的前药化合物。

如在本文中所用且除非另有陈述，术语“前药”是指式I化合物的衍生物，其在生物条件下(体外或体内)可水解、氧化或另外反应以提供活性化合物，特别是式I化合物。前药的实例包括但不限于包括可生物水解部分的式I化合物的衍生物和代谢物，所述可生物水解部分例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。在某些实施方案中，具有羧基官能团的化合物的前药为羧酸的低碳烷基酯。所述羧酸酯适宜通过使在分子上存在的任何羧酸部分酯化而形成。前药典型地使用众所周知的方法来制备，例如伯格药物化学和药物发现(Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery)，第6版(Donald J. Abraham编，2001年，Wiley)和前药的设计和应用(Design and Application of Prodrugs)(H.Bundgaard编，1985年，Harwood Academic Publishers Gmfh)中描述的那些方法。

表述“有效量”表示在组织、系统、动物或人类中引起例如由研究人员或医师所探求或希望的生物学或医学反应的药物或药学活性成分的量。

另外，表述“治疗有效量”表示与没有接收该量的相应受试者相比较具有以下结果的量：

治疗改善、痊愈、预防或消除疾病、综合征、病况、症状、病症或副作用或者还有降低疾病、症状或病症的进展。

表述“治疗有效量”还涵盖有效增加正常生理功能的量。

本发明还涉及所述式I化合物的混合物例如两种非对映异构体的混合物(例如以比率1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000)的用途。

这些是特别优选的立体异构化合物的混合物。

“互变异构体”是指彼此处于平衡的化合物的异构形式。所述异构形式的浓度将取决于化合物所存在的环境且可视例如该化合物是固体还是在有机或水溶液中而不同。

本发明涉及式I化合物及其盐和制备所述式I化合物及其药学上有用的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体的方法，其特征在于使式II化合物环化，

其中：

、L₁、L₂、X和Y具有在权利要求1中指出的含义，

和/或

使所述式I的碱或酸转化成其盐中的一种。

在上文和下文中，除非另外明确陈述，否则基团、L₁、L₂、X和Y具有对于所述式I指出的含义。

A表示烷基，其为非支链(直链)或支链的，且具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个C原子。A优选表示甲基，另外表示乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，另外还表示戊基、1-、2-或3-甲基丁基、1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-、2-、3-或4-甲基戊基、1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基、1-或2-乙基丁基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基，另外优选表示例如三氟甲基。

A非常特别地优选表示具有1、2、3、4、5或6个C原子的烷基，优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、三氟甲基、五氟乙基或1,1,1-三氟乙基。

此外，A例如表示CH₂OCH₃、CH₂CH₂OH、OCH₂CH₂NH₂、CH₂NHCH₂或NHCH₂CH₃。

优选表示1,3-或1,4-亚苯基或2,3-二氢-吲哚-1,6-二基，其各自未被取代或被OA单取代。

Y特别优选表示甲基。

R²特别优选表示哌啶基或吡咯烷基，其各自未被取代或被A单取代。

Hal优选表示F、Cl或Br，但也表示I，特别优选表示F或Cl。

贯穿本发明，出现不止一次的所有基团可相同或不同，即彼此独立。

所述式I化合物可具有一个或多个手性中心且因此可以各种立体异构形式出现。所述式I涵盖所有这些形式。

所述式I化合物以及用于其制备的起始材料另外通过本身已知的方法制备，如在文献中所述(例如在权威书籍中，诸如Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie[Methods of Organic Chemistry], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart)，确切地说，在此也可以使用在此没有更详细提到的本身已知的变体。

所述式II的起始化合物是已知的。然而，如果它们是新颖的，则它们可通过本身已知的方法制备。

所述式I化合物可优选通过使所述式II化合物环化来获得。

根据所使用的条件，反应时间为几分钟至14天，反应温度为约30℃-140℃，通常为0-100℃，特别为约60℃-约90℃。

合适的惰性溶剂的实例有烃，诸如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯化烃，诸如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，诸如乙醚、二异丙醚、四氢呋喃(THF)或二噁烷；二醇醚，诸如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚(二甘醇二甲醚)；酮，诸如丙酮或丁酮；酰胺，诸如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，诸如乙腈；亚砜，诸如二甲基亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，诸如甲酸或乙酸；硝基化合物，诸如硝基甲烷或硝基苯；酯，诸如乙酸乙酯；或所述溶剂的混合物。

特别优选乙腈、二甲基甲酰胺、三氟乙酸和/或其混合物。

药学上的盐及其它形式

根据本发明的所述化合物可以其最终非盐形式使用。另一方面，本发明还涵盖以其药学上可接受的盐的形式的这些化合物的用途，所述药学上可接受的盐可通过本领域已知的方法得自各种有机和无机的酸和碱。所述式I化合物的药学上可接受的盐形式大部分通过常规方法制备。如果所述式I化合物含有羧基，则其合适盐中的一种可通过使所述化合物与合适的碱反应得到相应的碱加成盐来形成。所述碱例如为碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，诸如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱，诸如哌啶、二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。同样包括所述式I化合物的铝盐。在所述式I的某些化合物的情况下，酸加成盐可通过用以下药学上可接受的有机和无机酸处理这些化合物来形成：例如卤化氢，诸如氯化氢、溴化氢或碘化氢；其它无机酸及其相应盐，诸如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等；和烷基和单芳基磺酸盐，诸如乙烷磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；及其它有机酸及其相应盐，诸如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。因此，所述式I化合物的药学上可接受的酸加成盐包括以下：乙酸盐、已二酸盐、海藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)(苯磺酸盐(besylate))、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、二氢磷酸盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、半乳糖二酸盐(由粘酸得到)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲烷磺酸盐、甲基苯甲酸盐、单氢磷酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这不代表限制。

另外，根据本发明的化合物的碱式盐包括铝、铵、钙、铜、铁(III)、铁(II)、锂、镁、锰(III)、锰(II)、钾、钠及锌盐，但这并非意欲代表限制。在上述盐之中，优选铵、碱金属钠和钾盐及碱土金属钙和镁盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的所述式I化合物的盐包括以下的盐：伯、仲和叔胺；被取代的胺，还包括天然存在的被取代的胺；环胺；和碱离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯普鲁卡因、胆碱、N,N-二苄基乙二胺(苄星青霉素)、二环己胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、利多卡因(lidocaine)、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羟甲基)甲胺(缓血酸胺)，但这并非意欲代表限制。

含有碱性含氮基团的本发明化合物可使用例如以下试剂季胺化：(C₁-C₄)烷基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二(C₁-C₄)烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二戊酯；(C₁₀-C₁₈)烷基卤化物，例如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆寇基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；和芳基(C₁-C₄)烷基卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴。根据本发明的水溶性和油溶性化合物两者都可使用所述盐制备。

优选的上述药学上的盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和缓血酸胺，但这并非意欲代表限制。

特别优选盐酸盐、二盐酸盐、氢溴酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、硫酸盐和琥珀酸盐。

所述式I碱性化合物的酸加成盐通过使游离碱形式与足够量的所要酸接触，促使以常规形式形成所述盐来制备。所述游离碱可通过使所述盐形式与碱接触并以常规方式分离所述游离碱而再生。所述游离碱形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离碱形式一致。

如所提到的，所述式I化合物的药学上可接受的碱加成盐用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成。优选的金属有钠、钾、镁和钙。优选的有机胺有N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普鲁卡因。

根据本发明的酸性化合物的碱加成盐通过使所述游离酸形式与足够量的所需要的碱接触，促使以常规方式形成所述盐来制备。所述游离酸可通过使所述盐形式与酸接触并以常规方式分离所述游离酸而再生。所述游离酸形式在某方面关于某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性而与其相应盐形式不同；然而，对于本发明的目的，所述盐在其它方面与其相应游离酸形式一致。

如果根据本发明的化合物含有多于一个能够形成该类型的药学上可接受的盐的基团，本发明则还涵盖多重盐。典型的多重盐形式例如包括酒石酸氢盐、二乙酸盐、富马酸氢盐、二甲葡胺、磷酸氢盐、二钠和三盐酸盐，但这并非意欲代表限制。

关于上文所述，可见在本上下文中的表述“药学上可接受的盐”用以指活性成分，其包含以其盐中的一种的形式的式I化合物，特别是如果与活性成分的游离形式或先前使用的活性成分的任何其它盐形式相比较，该盐形式赋予活性成分改善的药代动力学性质。所述活性成分的药学上可接受的盐形式还可首次提供给该活性成分先前没有的所要的药代动力学性质，且关于其在体内的治疗功效，甚至可以对该活性成分的药效学具有有利的影响。

同位素

另外预期式I化合物包括其同位素标记形式。除了所述化合物的一个或多个原子已经被具有与通常自然存在的原子的原子质量和质量数不同的原子质量或质量数的一个或多个原子置换的事实之外，式I化合物的同位素标记形式与该化合物相同。易于购得且可通过众所周知的方法掺入所述式I化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。含有一个或多个上述同位素和/或其它原子的其它同位素的式I化合物、其前药或任一个的药学上可接受的盐意指为本发明的一部分。式I的同位素标记化合物可以许多有益的方式使用。例如，已经掺入例如放射性同位素如³H或¹⁴C的式I的同位素标记化合物适合用于药物和/或底物组织分布测定。这些放射性同位素，即氚(³H)和碳-14(¹⁴C)由于制备简单和可检测性优异而特别优选。将重同位素如氘(²H)掺入式I化合物由于该同位素标记化合物的较高新陈代谢稳定性而具有治疗优势。较高的新陈代谢稳定性直接转变为体内半寿期增加或剂量降低，其在大多数情况下将代表本发明的优选实施方案。式I的同位素标记化合物通常可通过进行在本文中的合成方案和相关描述、实施例部分和制备部分中公开的程序用易于得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物来制备。

氘(²H)出于通过初级动力学同位素效应处理化合物的氧化新陈代谢的目的也可掺入式I的化合物中。所述初级动力学同位素效应是由同位素核的交换引起的化学反应的速率的改变，其依次由在该同位素交换之后共价键形成所必需的基态能量的改变引起。重同位素的交换通常引起化学键的基态能量降低且因此引起速率限制性键断裂的速率降低。如果键断裂在沿多产物反应的坐标的鞍点区域中或该区域附近发生，则产物分布比会明显地改变。为解释目的：如果氘在不可交换的位置键合到碳原子，则k_M/k_D = 2-7的率差是典型的。如果该率差成功地施用到对氧化敏感的式I化合物，则该化合物在体内的概况可剧烈改变并产生改善的药代动力学性质。

在发现和研发治疗剂时，本领域技术人员试图优化药代动力学参数，同时保持合乎需要的体外性质。假定具有差的药代动力学概况的许多化合物对氧化新陈代谢敏感是合理的。目前可用的体外肝微粒体测定提供关于该类型的氧化新陈代谢过程的有价值的信息，这进而容许合理地设计经由抵抗所述氧化新陈代谢而具有改善的稳定性的式I的氘化化合物。由此获得在式I化合物的药代动力学概况方面的显著改善，且所述改善可根据体内半寿期(t/2)、在最大治疗效应下的浓度(C_max)、在剂量响应曲线下的面积(AUC)和F的增加；及根据清除率、剂量和材料成本的降低来定量地表述。

以下意欲对上文进行说明：将具有多个氧化新陈代谢攻击的潜在位点如苄型氢原子和键合到氮原子的氢原子的式I化合物制备为一系列类似物，其中各种组合的氢原子由氘原子置换，以使得这些氢原子中的一些、大多数和全部被氘原子置换。半寿期测定能够实现有利且精确的测定改进对氧化新陈代谢的抵抗性的改善程度。以此方式，确定母体化合物的半寿期可由于该类型的氘-氢交换而延长到高达100%。

在式I化合物中的氘-氢交换还可用以实现起始化合物的代谢物谱的有利改进，以减少或消除不想要的毒性代谢物。例如，如果毒性代谢物经由氧化碳-氢(C-H)键断裂产生，则可合理地假设氘化类似物将大大减少或消除不必要代谢物的产生，即使特定的氧化不是一个速度确定步骤。在现有技术水平上关于氘-氢交换的另外信息可在例如以下文献中见到：Hanzlik等，J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990；Reider等，J. Org. Chem. 52,3326-3334, 1987；Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985；Gillette等，Biochemistry33(10) 2927-2937, 1994；和Jarman等，Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993。

本发明另外涉及药物，所述药物包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的衍生物、溶剂合物及立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及任选的赋形剂和/或助剂。

药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式施用。所述单位可根据所治疗的病况、施用方法及患者的年龄、体重和病况而包含例如0.5mg-1g、优选1mg-700mg、特别优选5mg-100mg的本发明的化合物，或者药物制剂可以包含预定量的活性成分/剂量单位的剂量单位形式施用。优选的剂量单位制剂为包含如上指出的日剂量或份剂量的那些或其相应分数的活性成分。另外，该类型的药物制剂可使用在制药领域中通常已知的方法制备。

药物制剂可适合经由任何需要的合适方法，例如经口(包括颊或舌下)、直肠、鼻、局部(包括颊、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内)方法施用。所述制剂可使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与赋形剂或助剂组合来制备。

适合口服的药物制剂可作为独立单位如胶囊或片剂；粉剂或颗粒剂；在水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或泡沫食品；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂来施用。

因此，例如，在以片剂或胶囊形式口服的情况下，可将活性成分组分与经口、无毒且药学上可接受的惰性赋形剂如乙醇、甘油、水等组合。粉剂通过将化合物粉碎成合适的小尺寸并将其与以类似方式粉碎的药用赋形剂如可食用的碳水化合物如淀粉或甘露糖醇混合来制备。同样可存在矫味剂、防腐剂、分散剂和染料。

胶囊通过制备如上所述的粉末混合物并用其填充成型的明胶壳来生成。在填充操作之前可将诸如以固体形式的高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或聚乙二醇等的助流剂和润滑剂加到所述粉末混合物中。同样可加入诸如琼脂、碳酸钙或碳酸钠等的崩解剂或增溶剂以改善服用胶囊之后的药物利用度。

另外，如果需要或必需，则同样可将合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料掺入所述混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制造的甜味剂、天然和合成橡胶如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。所述崩解剂包括(而不受此限制)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。所述片剂通过例如制备粉末混合物、造粒或压干所述混合物、加入润滑剂和崩解剂并压制全部混合物以给出片剂来配制。粉末混合物通过混合以合适方式粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质和任选粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；溶解延缓剂如石蜡；吸收加速剂如季盐；和/或吸收剂如膨润土、高岭土或磷酸二钙来制备。所述粉末混合物可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚胶浆或纤维素或聚合物材料的溶液将其润湿并挤压穿过筛网来造粒。作为造粒的替代，可使所述粉末混合物穿过制片机，给出不均匀形状的结块，将其破碎以形成颗粒剂。所述颗粒剂可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油润滑以免粘住片剂铸模模具。随后将润滑的混合物压制以给出片剂。根据本发明的化合物也可与自由流动的惰性赋形剂组合且随后直接压制给出片剂而不进行造粒或压干步骤。可存在由虫胶封闭层、糖或聚合物材料的层和石蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可将染料加到这些涂层中以能够区分开不同的剂量单位。

口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以剂量单位形式制备，以使得给定的量包含预定量的所述化合物。糖浆可通过将所述混合物溶解于具有合适矫味剂的水溶液中来制备，而酏剂使用无毒醇媒剂制备。混悬剂可通过将所述化合物分散在无毒媒剂中来配制。同样可加入增溶剂和乳化剂，诸如乙氧化异十八醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚；防腐剂；调味添加剂，诸如薄荷油；或天然甜味剂或糖精；或其他人工甜味剂等。

如果需要，可将用于口服的剂量单位制剂封装在微囊中。所述制剂还可以延迟释放或阻释方式来制备，例如通过将微粒材料涂布或包埋在聚合物、蜡等中。

式I化合物及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物还可以脂质体传送系统如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体的形式施用。脂质体可由各种磷脂诸如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。

式I化合物及其盐、溶剂合物和生理学功能衍生物还可使用单克隆抗体作为化合物分子与其偶联的单独的载体来递送。所述化合物也可偶联到作为靶向药物载体的可溶性聚合物。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺基苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺基苯酚或被棕榈酰基取代的聚环氧乙烷聚赖氨酸。所述化合物可另外偶联到一类可生物降解的聚合物，所述可生物降解的聚合物适合用于实现药物的受控释放，例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲的嵌段共聚物。

适合经皮施用的药物制剂可作为独立膏剂施用以便与受体的表皮扩展地紧密接触。因此，例如，活性成分可通过离子电渗从膏剂中递送，如在Pharmaceutical Research,3(6), 318 (1986)的一般术语中所述。

可将适合局部施用的药物化合物配制为软膏、乳膏、混悬剂、洗液、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷剂、气溶胶或油剂。

为了治疗眼睛或其它外部组织如口和皮肤，所述制剂优选施用为局部软膏或乳膏。在产生软膏的制剂的情况下，活性成分可与石蜡或水混溶的膏基一起使用。或者，活性成分可用水包油膏基或油包水基质一起配制以产生乳膏。

适合局部施用到眼睛的药物制剂包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适载体、特别是水性性溶剂中。

适合在口中局部施用的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。

适合直肠施用的药物制剂可以栓剂或灌肠剂的形式施用。

其中载体物质为固体的适合经鼻施用的药物制剂包括具有例如在20-500微米范围内的粒度的粗粉剂，其以采用嗅剂的方式，即通过从保持靠近鼻的含有粉剂的容器经鼻道迅速吸入来施用。用于作为具有液体作为载体物质的鼻喷剂或滴鼻剂施用的合适制剂包括在水或油中的活性成分溶液。

适合通过吸入施用的药物制剂包括细微粒粉尘或烟雾，其可通过各种类型的具有气溶胶的加压分配器、喷雾器或吹入器产生。

适合阴道施用的药物制剂可作为子宫托、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂施用。

适合肠胃外施用的药物制剂包括水性和非水性无菌注射液，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，借助于所述无菌注射液使所述制剂与欲治疗的受体的血液等渗；和水性和非水性无菌混悬液，其可包含悬浮介质和增稠剂。所述制剂可在单剂量或多剂量容器如密封安瓿和小瓶中施用并以冷冻干燥(冻干)状态储存，以使得仅需要紧接在使用之前加入无菌载液，例如用于注射目的的水。根据该配方制备的注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。

不用说，关于特定制剂类型，除了以上特定提到的成分之外，所述制剂还可包含本领域中常用的其他试剂；因此，例如，适合口服的制剂可包含矫味剂。

式I化合物的治疗有效量取决于许多因素，例如包括动物的年龄和体重、需要治疗的精确病况及其严重性、制剂的性质和施用方法，且其最终由治疗医师或兽医确定。然而，根据本发明的化合物的有效量通常在0.1-100mg/kg受体(哺乳动物)体重/日的范围内且特定典型地在1-10mg/kg体重/日的范围内。因此，对于体重为70kg的成年哺乳动物每日的实际量通常为70-700mg，其中该量可以每日单一剂量或通常以每日一系列多份剂量(诸如2、3、4、5或6份)施用，以使得日总剂量相同。盐或溶剂合物或其生理学功能衍生物的有效量可确定为本发明的化合物的有效量本身的分数。可以假定类似的剂量适合用于治疗上述其他病况。

所公开的式I化合物可与其它已知治疗剂组合施用，所述其它治疗剂包括用于治疗RA (类风湿性关节炎)的药剂。如在此使用，术语“用于治疗RA的药剂”涉及为治疗RA的目的施用到患有RA的患者的任何药剂。

以下药剂优选(但并非排他地)与式I化合物组合：

1. NSAID (非类固醇抗炎药)和镇痛药

2. 糖皮质激素(低口服剂量)

3. 常规疾病改进的抗风湿药(DMARD)

- 甲氨喋呤(Methotrexate)

- 来氟米特(Leflunomide)

- 柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)

- 羟基氯喹(Hydroxycloroquine)

- 硫唑嘌呤(Azathioprine)

- 环孢素(Ciclosporin)

- 米诺环素(Minocycline)

- 金(Gold)

4. 生物反应调节剂(BRM)-->在炎性过程中涉及的靶标分子/免疫细胞，且包括以下药剂：

- TNF抑制剂

- 依那西普(etanercept)(Enbrel)

- 英利昔单抗(infliximab)( Remicade)

- 阿达木单抗(adalimumab)(Humira)

- B细胞导向疗法

- 利妥昔单抗(rituximab)(Rituxan)

- T细胞/B细胞共激活信号抑制剂

- 阿巴西普(abatacept)(Orencia)

- L-1受体拮抗剂

- 阿那白滞素(anakinra)(Kineret)

该类型的组合疗法可借助于同时、连续或单独分配该治疗的单独组分来实现。该类型的组合产物采用根据本发明的化合物。

本发明另外涉及药物，其包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及至少一种另外的药物活性成分。

本发明另外涉及药物组合物，其包含权利要求1的式I化合物和生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明还涉及由以下单独包装组成的套盒(试剂盒)：

(a) 有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

和

(b) 有效量的其它药物活性成分。

所述套盒包含合适的容器，诸如箱、单个瓶、袋或安瓿。所述套盒例如可包括单独的安瓿，其各自含有有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

和有效量的以溶解或冻干形式的其它药物活性成分。

本文使用的“治疗”是指完全或部分地减轻与疾病或病症相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防处于发展该疾病或病症的危险之中的受试者的疾病或病症。

结合式(I)化合物的术语“有效量”可以指能够完全或部分地减轻与疾病或病症相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防具有本文公开的疾病或处于发展本文公开的疾病的危险之中的受试者的疾病或病症的量，所述疾病诸如为炎性病况、免疫病况、癌症、新陈代谢病况或可通过抑制激酶或激酶途径治疗或预防的病况，在一个实施方案中，所述激酶途径为Syk、FLT-3、JAK1和/或JAK2和/或JAK3和/或BTK途径。在一个实施方案中，式(I)化合物的有效量为例如在体外或体内抑制细胞中的激酶的量。在一些实施方案中，与在未治疗的细胞中的激酶的活性相比较，有效量的式(I)化合物抑制细胞中的激酶达10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或99%。例如在药物组合物中的式(I)化合物的有效量可处于产生所需效果的水平；例如对于口服施用和肠胃外施用两者，在单位剂量中约0.005mg/kg受试者体重-约10mg/kg受试者体重。

用途

本发明化合物适合作为对于哺乳动物、特别是对于人类而言在治疗酪氨酸激酶诱发的疾病中的药物活性成分。

本发明包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物用于制备用于治疗或预防类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮喘、过敏性鼻炎、ITP、多发性硬化、白血病、乳腺癌和恶性黑素瘤的药物的用途。

炎性疾病的实例包括类风湿性关节炎、银屑病、接触性皮炎、迟发型超敏反应等。

还包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物用于制备用于治疗或预防哺乳动物的酪氨酸激酶诱发的疾病或酪氨酸激酶诱发的病况的药物的用途，其中对于该方法，将治疗有效量的根据本发明的化合物施用到需要所述治疗的患病哺乳动物。所述治疗量根据具体疾病而不同，且可由本领域的技术人员确定而无需过度工作。

本发明还包括式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂合物用于制备用于治疗或预防视网膜血管化的药物的用途。

表述“酪氨酸激酶诱发的疾病或病况”是指取决于一种或多种酪氨酸激酶的活性的病理学病况。酪氨酸激酶直接或间接参与包括增殖、粘附和迁移及分化的多种细胞活性的信号转导路径。与酪氨酸激酶活性相关的疾病包括肿瘤细胞增殖、促进实体肿瘤生长的病理性新血管形成、眼部新血管形成(糖尿病性视网膜病、年龄诱发的黄斑变性等)和炎症(银屑病、类风湿性关节炎等)。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

其用于治疗其中对Syk的抑制、调节和/或调制起作用的疾病。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，其用于抑制Syk。

本发明涉及治疗增殖、自体免疫、消炎或感染疾病病症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式I化合物。

优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法。

特别优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法，其中给药与至少一种其它活性药剂的施用同时、序贯或交替进行。

所公开的式I化合物可与包括抗癌剂的其它已知治疗剂组合施用。如在此使用，术语“抗癌剂”涉及为治疗癌症的目的施用到具有癌症的患者的任何药剂。

本文定义的抗癌治疗可作为唯一疗法施用，或除了本发明的化合物之外还可包括常规手术或放射疗法或化学疗法。所述化学疗法可包括一种或多种以下类别的抗肿瘤剂：

(i) 抗增殖/抗肿瘤/DNA-杀伤剂及其组合，如在医学肿瘤学中使用，诸如烷基化剂(例如，顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢物(例如，抗叶酸剂，诸如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲赛、甲氨喋呤、胞嘧啶阿糖胞苷、羟基脲和吉西他宾)；抗肿瘤抗生素(例如，蒽环霉素，如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和普卡霉素)；抗有丝分裂剂(例如，长春花生物碱类，如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞宾，和紫杉烷类，如紫杉醇和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如，表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康和喜树碱)和细胞分化剂(例如，全-反-视黄酸、13-顺-视黄酸和芬维A胺)；

(ii) 细胞生长抑制剂，诸如抗雌激素(例如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和依多昔芬)、雌激素受体下调剂(例如，氟维司群)、抗雄激素(例如，比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如，戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、黄体酮(例如，乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如，阿纳托唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂，诸如非那雄胺；

(iii) 抑制癌症细胞入侵的药剂(例如，金属蛋白酶抑制剂抑制剂，如马马司他和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能抑制剂)；

(iv) 生长因子功能抑制剂，例如所述抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-erbb2抗体曲妥单抗[Herceptin^TM]和抗-erbb1抗体西妥昔单抗[C225])、法呢基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如上皮生长因子家族的抑制剂(例如，EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(尔洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂；

(v) 抗血管形成药剂，诸如抑制血管内皮生长因子的作用的那些，(例如，抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM]；化合物，诸如在公布的国际专利申请案WO97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的那些和由其他机构研究的化合物(例如，利诺胺、整合素αvβ3功能抑制剂和血管他丁)；

(vi) 血管损伤剂，诸如考布他汀A4和在国际专利申请案WO 99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；

(vii) 反义疗法，例如针对上文所列的靶标的那些疗法，诸如ISIS 2503、抗-Ras反义；

(viii) 基因治疗方法，例如包括替换诸如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的异常基因的方法；GDEPT(基因导向酶前药疗法)方法，诸如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法；和增加患者对化学疗法或放射疗法的耐受性的方法，诸如多重抗药性基因疗法；和

(ix) 免疫治疗方法，例如包括用于增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体或体内方法，诸如用诸如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子转染；降低T细胞无反应性的方法；使用转染的免疫细胞诸如细胞因子转染的树突细胞的方法；使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；和使用抗特应性抗体的方法。

来自下表1的药物优选(但并不排他地)与式I化合物组合。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，其用于治疗类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮喘、过敏性鼻炎、ITP、多发性硬化、白血病、乳腺癌、恶性黑素瘤。

本发明特别涉及治疗或预防炎性病况、免疫病况、自体免疫病况、过敏性病况、风湿性病况、血栓性病况、癌症、感染、神经退化性疾病、神经炎性疾病、心血管疾病或新陈代谢病况的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体或溶剂合物。

另一方面，本文提供抑制在表达激酶的细胞中的所述激酶的方法，其包括使所述细胞与有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体或溶剂合物接触。在一个实施方案中，所述激酶为Syk、FLT3、JAK1或JAK2或JAK3或BTK或其突变体或同种型或其两种或更多种的组合。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性免疫病况包括但不限于贝切特氏综合征(Behcet' s syndrome)、非过敏性肥大细胞疾病(例如，肥大细胞增多症和过敏症治疗)、强直性脊椎炎、骨关节炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化、狼疮、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn’ s disease)、重症肌无力、格拉夫氏病(Grave's disease)、移植排斥、体液移植排斥、非体液移植排斥、细胞移植排斥、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、特发性血小板减少性紫癜、糖尿病、对细菌、寄生虫、蠕虫侵染或病毒感染的免疫反应、湿疹、皮炎、移植物抗宿主病、古德帕斯彻氏病(Goodpasture' s disease)、新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血、抗磷脂综合征、ANCA-相关脉管炎、谢格-司托司综合征(Churg-Strausssyndrome)、韦格纳氏肉芽肿(Wegeners granulomatosus)、寻常天疱疮、血清病、混合冷球蛋白血症、与IgM抗体相关的周围神经病、微观多血管炎、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’ sthyroiditis)、Sjogrens综合征、纤维化病况(诸如取决于先天性或适应性免疫系统或局部间质细胞的那些)或原发性胆汁性肝硬化。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性自体免疫病况包括但不限于自身免疫性溶血性贫血(A1HA)、贝切特氏综合征、克罗恩氏病、I型糖尿病、古德帕斯彻氏病、格拉夫氏病、桥本氏甲状腺炎、特发性血小板减少性紫癜、狼疮、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、重症肌无力、寻常天疱疮、原发性胆汁性肝硬化、类风湿性关节炎、硬皮病、Sjogrens综合征、溃疡性结肠炎或韦格纳氏肉芽肿。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性过敏性病况包括但不限于过敏症、枯草热、过敏性结膜炎、过敏性鼻炎、过敏性哮喘、特应性皮炎、湿疹、荨麻疹、粘膜病症、组织病症和某些肠胃病症。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性风湿性病况包括但不限于类风湿性关节炎、痛风、强直性脊椎炎或骨关节炎。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性炎性病况包括但不限于非-ANCA(抗-中性粒细胞胞质自身抗体)脉管炎(例如，其中Syk功能与中性粒细胞粘附、血细胞渗出和/或激活相关)、银屑病、哮喘、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、慢性荨麻疹、风疹(hives)、过敏症、支气管炎、慢性阻塞性肺病、囊性纤维化、炎性肠病、过敏性肠综合征、痛风、克罗恩氏病、粘液性结肠炎、溃疡性结肠炎、对肠抗原的过敏症(诸如，谷蛋白肠病)、糖尿病(例如，I型糖尿病和II型糖尿病)和肥胖症。在一些实施方案中，所述炎性病况为皮肤病学病况，诸如银屑病、荨麻疹、风疹、湿疹、硬皮病或皮炎。在其它实施方案中，所述炎性病况为炎性肺部病况，诸如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)或成人/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。在其它实施方案中，所述炎性病况为胃肠病况，诸如炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、特发性炎性肠病、过敏性肠综合征或结肠痉挛。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性感染包括但不限于细菌、寄生虫、朊病毒、病毒感染或蠕虫侵染。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性癌症包括但不限于以下部位的癌症：头、颈部、眼睛、口、喉咙、食管、支气管、喉头、咽、胸部、骨骼、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、宫颈、乳腺、卵巢、睾丸或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统、实体肿瘤和荷血肿瘤。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性心血管疾病包括但不限于再狭窄、动脉粥样硬化及其后果，诸如中风、心肌梗塞、对心脏、肺、肠管、肾、肝、胰腺、脾或脑的缺血性损伤。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性新陈代谢病况包括但不限于肥胖症和糖尿病(例如，I型和II型糖尿病)。在一个特定的实施方案中，本文提供治疗或预防胰岛素抵抗的方法。在某些实施方案中，本文提供治疗或预防导致糖尿病(例如，II型糖尿病)的胰岛素抵抗的方法。在另一实施方案中，本文提供治疗或预防X综合征或代谢综合征的方法。在另一实施方案中，本文提供治疗或预防II型糖尿病、I型糖尿病、缓慢发病的I型糖尿病、尿崩症(例如，神经原性尿崩症、肾原性尿崩症、致渴性尿崩症或促孕尿崩症)、糖尿病、妊娠糖尿病、多囊性卵巢综合征、青春发生型糖尿病、少年糖尿病、胰岛素依赖性糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、营养不良相关的糖尿病、趋酮症性糖尿病、前糖尿病(例如，葡萄糖代谢受损)、囊性纤维化相关糖尿病、血色素沉着病和酮症抵抗性糖尿病的方法。

可使用式I化合物治疗或预防的代表性神经退化性和神经炎性疾病包括但不限于亨廷顿氏病(Huntington’s disease)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、病毒(例如HIV)或细菌相关的脑炎和损伤。

在另一实施方案中，本文提供治疗或预防纤维化疾病和病症的方法。在一个特定的实施方案中，本文提供治疗或预防特发性肺部纤维化、骨髓纤维化、肝脏纤维化、脂肪纤维化和脂肪肝炎的方法。

在另一实施方案中，本文提供治疗或预防与血栓性事件相关的疾病的方法，所述疾病诸如但不限于动脉粥样硬化、心肌梗塞和缺血性中风。

本发明特别涉及式I化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，其用于治疗和/或预防炎性病况、免疫病况、自体免疫病况、过敏性病况、风湿性病况、血栓性病况、癌症、感染、神经退化性疾病、神经炎性疾病、心血管疾病和新陈代谢病况，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的权利要求1的化合物。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防癌症的化合物，

其中所述欲治疗的癌症为实体肿瘤或血液和免疫系统的肿瘤。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防癌症的化合物，其中所述肿瘤来源于急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病和/或慢性淋巴细胞性白血病。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防癌症的化合物，其中所述实体肿瘤来源于以下的肿瘤：上皮组织、膀胱、胃、肾、头颈部、食管、宫颈、甲状腺、肠管、肝、脑、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉头、骨骼包括软骨肉瘤和Ewing肉瘤、生殖细胞包括胚组织肿瘤和/或肺，来自单核细胞性白血病、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、纤维神经瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或恶性黑素瘤。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防选自类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮喘、多发性硬化、骨关节炎、缺血性损伤、巨细胞动脉炎、炎性肠病、糖尿病、囊性纤维化、银屑病、Sjögrens综合征和移植器官排斥的疾病的用途。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防选自阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、具有淀粉样变性-Dutch型的遗传性脑出血、淀粉样脑血管病、克罗伊茨费尔特-雅各布(Creutzfeldt-Jakob)病、额颞性痴呆、亨廷顿氏病、帕金森氏病的疾病的化合物。

此外，本发明特别涉及用于治疗和/或预防选自利什曼原虫(leishmania)；分枝杆菌(mycobacteria)，包括麻风分支杆菌(M. leprae)、结核分支杆菌(M. tuberculosis)和/或鸟分支杆菌(M. avium)；利什曼原虫、疟原虫(plasmodium)、人类免疫缺陷病毒、爱泼斯坦-巴尔氏病毒(Epstein Barr virus)、单纯疱疹病毒、丙肝病毒的疾病的化合物。

以下缩写分别是指以下定义：

aq (水性)、h (小时)、g (克)、L (升)、mg (毫克)、MHz (兆赫)、min. (分钟)、mm(毫米)、mmol (毫摩尔)、mM (毫摩尔浓度)、m.p. (熔点)、eq (当量)、mL (毫升)、L (微升)、ACN (乙腈)、AcOH (乙酸)、CDCl₃(氘化氯仿)、CD₃OD (氘化甲醇)、CH₃CN (乙腈)、c-hex(环己烷)、DCC (二环己基碳二亚胺)、DCM(二氯甲烷)、DIC (二异丙基碳二亚胺)、DIEA (二异丙基乙胺)、DMF (二甲基甲酰胺)、DMSO (二甲亚砜)、DMSO-d₆(氘化二甲亚砜)、EDC (1-(3-二甲基-氨基-丙基)-3-乙基碳二亚胺)、ESI (电喷雾电离)、EtOAc (乙酸乙酯)、Et₂O(乙醚)、EtOH (乙醇)、HATU (二甲氨基-([1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐)、HPLC (高效液相色谱)、i-PrOH (2-丙醇)、K₂CO₃(碳酸钾)、LC(液相色谱)、MeOH (甲醇)、MgSO₄ (硫酸镁)、MS (质谱)、MTBE (甲基叔丁基醚)、NaHCO₃(碳酸氢钠)、NaBH₄(硼氢化钠)、NMM (N-甲基吗啉)、NMR (核磁共振)、PyBOP (苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸盐)、RT (室温)、Rt (保留时间)、SPE (固相萃取)、TBTU(2-(1-H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐)、TEA (三乙胺)、TFA (三氟乙酸)、THF (四氢呋喃)、TLC (薄层色谱)、UV (紫外线)。

体外测定的描述

SYK Flashplate测定

激酶测定按384-孔Flashplate测定(例如，对于Topcount测量)或按384-孔Image--Flashplate测定(对于LEADseeker测量)进行。

将2.5nM SYK、400nM Biotin-Aha-Aha-KEDPDYEWPSAKK和10µM ATP (用0.3µCi33P-ATP/孔示踪)在总体积50μl (60mM Hepes、10mM MgCl₂、1.2mM二硫苏糖醇、0.02%Brij35、0.1% BSA，pH 7.5)中在有或没有试验化合物的情况下在30℃下培育1小时。反应用25μl 200mM EDTA停止。在30分钟之后，在30℃下将液体除去且将各孔用100μl 0.9%氯化钠溶液洗涤三次。在0.1μM十字孢碱存在下测定非特异性反应。放射性分别用Topcount (当使用Flashplate时)或用LEADseeker (当使用Image-Flashplate)测量。结果(例如，IC₅₀-值)用由IT-部门提供的程序工具(例如，Symyx Assay Explorer, Genedata Screener)计算。

体内测定

CIA

为了诱发胶原蛋白-诱发的关节炎(CIA)，对雄性DBA/1小鼠在第-21天腹膜内注射500μl姥鲛烷。在第0天，将小鼠用在完全弗氏佐剂(CFA)中的100μg II型鸡胶原蛋白(CII)皮内免疫，在第0天在耳廓之上和在背上的一个位点之上分配。在第21天，小鼠在腹膜内接受用在PBS中的可溶性CII的加强免疫(100μg)。Syk抑制剂的剂量将是预防性的：第0天开始并持续到第10天，且然后在第20天开始加强，持续到第30天。化合物以3、10和30mg/kg的剂量每日两次经口施用。

体重和临床评分将按每日记录。关节炎严重性使用临床评分系统基于对单个爪中的炎症的评价来分等级。该临床评分的标度对于每个爪为0-4。

GIA

对于葡萄糖-6-磷酸异构酶诱发的关节炎(GIA)的诱发，将雌性DBA/1小鼠用在完全弗氏佐剂(CFA)中的100μg G6PI皮内免疫，在第0天在耳廓之上和在背上的一个位点之上分布。Syk抑制剂的剂量将是预防性的，从第0天开始且持续到第14天。化合物以3、10和30mg/kg的剂量每日两次经口施用。

在上文和下文中，所有温度都以℃指出。在以下实施例中，“常规处理”是指：如果需要，则加入水，如果需要，则根据最终产物的构成将pH调节到2-10的值，将混合物用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，分离各相，将有机相在硫酸钠上干燥并蒸发，且残留物通过硅胶色谱法和/或通过结晶纯化。在硅胶上的R_f值；洗脱液：乙酸乙酯/甲醇9:1。

质谱(MS)：EI (电子碰撞电离) M⁺

　　　　FAB (快速原子轰击) (M+H)⁺

　　　　 ESI (电喷雾电离) (M+H)⁺

APCI-MS (大气压化学电离-质谱) (M+H)⁺

质谱(MS)：EI (电子碰撞电离) M⁺

　　　　 FAB (快速原子轰击) (M+H)⁺

　　　　ESI (电喷雾电离) (M+H)⁺

m.p. = 熔点

LCMS方法：

管柱：ZORBAX SB-C8 30*4.6mm, 3.5μm

流动相A：水 + 0.03%TFA

流动相B：ACN + 0.05%TFA

梯度：5-95%B，2.5分钟

流速：2.0mL/min

波长：UV1：220nm，UV2：254nm

质量扫描：100-900Da

GCN2：测定原理和条件

该测定可量化丝氨酸激酶GCN2 (一般性控制非不可抑制2)的活性。

该激酶包括在细胞的应激新陈代谢中。其在饥饿(氨基酸耗尽)时激活。其天然底物为eIF2α(真核起始因子2α亚基)，一种翻译因子，其在细胞中氨基酸瓶颈的情况下由GCN2激活(磷酸化)。这进而引起蛋白质合成中止。GCN2的抑制作用导致停止该机制：细胞在“饥饿”应激下不能停止蛋白质生产。

该测定以两个步骤进行：酶促反应和检测步骤。在第一步骤中，将GCN2在室温下用10μM ATP和80nM GFP-标记底物eIF2α培育。

该酶促反应通过加入EDTA停止。磷酸化eIF2α的量通过TR-FRET (Lanthascreen)测定：形成由抗体和GFP标记的磷酸-eIF2α组成的复合物，这允许在340nm激发时FRET。

GCN2-活性与在发射波长520nm下的荧光单位(磷酸肽-敏感性波长 = GFP的发射)和在495nm下的单位(参考波长 = 铽-螯合物的发射)的比率成正比。

酶促反应中的最终浓度

Hepes, pH 7.0 50mM

MgCl₂　　　　10mM

MnCl₂　　　　 5mM

BSA　　　　　 0.1%

DMSO　　　　 1%

ATP　　　　　 10μM

DTT　　　　　2mM

GFP-eIF2α　　80nM (底物)

GCN2　　　　　30nM (酶)

测定程序

4μL 酶溶液(在测定缓冲剂中)

1.5μＬ化合物(在化合物稀释缓冲液/6.3% DMSO中)

培育 20min，在室温下

4μL 底物/ATP混合物(在测定缓冲液中)

培育 90min，在室温下

10μL 停止/检测混合物(在抗体稀释缓冲液中)

培育 60分钟，在室温下

读出 Lanthascreen 340/495/520

分析设备的标准描述

¹H NMR使用氘化溶剂的残留信号作为内部参考记录在Joel 400MHz光谱仪上。化学位移(δ)以相对于残留溶剂信号的ppm报告(在DMSO-d₆中对于¹H NMR，δ = 2.49ppm)。¹HNMR数据报告如下：化学位移(多重性，偶联常数和氢的数目)。多重性缩写如下：s (单峰)、d(双重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、m (多重峰)、br (宽峰)。

LCMS方法：

管柱：Xbridge C8, 4.6 x 50mm 5μm

流动相A：水 + 0.1%TFA

流动相B：ACN + 0.1% TFA

梯度：5-95% B，在3.5分钟内

流速：0.8mL/min

波长：254nm

质量扫描：100-900Da

实施例1

的制备类似于以下方案进行：

1.1 制备2-(2-羟基乙基)-2-甲基-6-硝基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(1)

向在0℃(冰浴)下的2-氨基-4-硝基苯酚(1.00g；6.49mmol；1.00当量)在苯(5.00ml)中的溶液中加入三甲基铝(3.57ml；7.14mmol；1.10当量；2.00M，在己烷中)。将反应混合物搅拌45分钟，随后加入3-溴-3-甲基二氢呋喃-2(3H)-酮(0.73ml；6.49mmol；1.00当量)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液且将所得溶液升温至室温。在升温后，将反应烧瓶加热到65℃达15小时，随后经冰浴再次冷却到0℃。

向冷冻的烧瓶中缓慢加入1N HCl(水性)以淬灭反应，将其再搅拌30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机流分经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。随后将残留物溶解在ACN中，随后与碳酸钾(0.37ml；6.49mmol；1.00当量)一起加热到回流过夜，在经硅藻土塞过滤并经快速色谱法纯化后产生2-(2-羟基乙基)-2-甲基-6-硝基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(0.98g，60.1%)。Jeol ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.95, 7.86, 7.86, 7.84,7.84, 7.73, 7.73, 7.16, 7.14, 3.17, 3.16, 2.89, 2.73, 1.47. LCMS: rt 2.35; m/z 252.96。

1.2 制备6-氨基-2-(2-羟基乙基)-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(2)

在30℃下将含有溶解于甲醇(10.00ml)中的2-(2-羟基乙基)-2-甲基-6-硝基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(983.30mg；3.90mmol；1.00当量)的烧瓶使用10% Pd/C滤芯以1ml/min以完全H₂模式穿过H-Cube。在浓缩洗脱液之后定量地提供产物且将其直接用于进一步的反应中；LCMS：rt 0.24min；m/z 223.06。

1.3 制备6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-(2-羟基乙基)-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(3)

在装备有搅拌棒的清洁圆底烧瓶中，将2,4-二氯-5-氟嘧啶(500.00mg；2.99mmol；1.00当量)和6-氨基-2-(2-羟基乙基)-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(2)(0.73g；3.29mmol；1.10当量)溶解于四氢呋喃(30ml)中。向搅拌的溶液中加入三乙胺(0.46ml；3.29mmol；1.10当量)。将反应物在周围温度下搅拌16小时。在完成后，将反应混合物浓缩成残留物，将其溶解于最少的二氯甲烷中并用快速色谱法使用在二氯甲烷中的0-10%甲醇的梯度纯化以给出6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-(2-羟基乙基)-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(3)(243.8mg; 0.69mmol; 23.1%)；LCMS: rt 2.82min; m/z 353.09。

1.4 制备2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-硝基苯基)氨基甲酸酯(4)

在装备有搅拌棒的圆底烧瓶中，将3-硝基苯胺(78.31mg；0.57mmol；2.00当量)溶解于THF中。经由注射器向该混合物中加入N,N-二乙基乙胺(0.08ml；0.57mmol；2.00当量)，接着加入4-硝基苯基氯碳酸酯(114.28mg；0.57mmol；2.00当量)。允许反应混合物搅拌30分钟。向反应烧瓶中加入含6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-(2-羟基乙基)-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(3)(100.00mg；0.28mmol；1.00当量)的1ml二甲基甲酰胺。将反应物在周围温度下搅拌16小时。将反应粗物质用乙酸乙酯(200ml)稀释并用盐水溶液萃取。将有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩成粗粘性油，该粘性油用快速色谱法使用在己烷中的0-100%乙酸乙酯的梯度，接着使用在乙酸乙酯中的0-25%甲醇的梯度纯化，以给出作为灰白色固体的2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-硝基苯基)氨基甲酸酯(4) (35.9mg；0.07mmol；24.5%)；Jeol ¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 8.53, 8.53, 7.84, 7.84, 7.83, 7.83, 7.82, 7.82, 7.81, 7.73,7.73, 7.72, 7.71, 7.71, 7.70, 7.54, 7.54, 7.52, 7.52, 7.50, 7.50, 4.22, 4.18,3.15, 1.94, 1.42, 1.16, 1.15, 1.13. LCMS: rt 3.57min; m/z 517.15。

1.5 制备2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-氨基苯基)氨基甲酸酯(5)

将2-6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基乙基(3-硝基苯基)氨基甲酸酯(4) (144.70mg；0.28mmol；1.00当量)溶解于甲醇(35.00ml)中，随后以1ml/min在30℃下以完全H₂模式穿过装备有5% Pt/C滤芯的H-Cube反应器。所要产物通过制备型HPLC使用在具有0.1%三氟乙酸改性剂的水中的10-50%乙腈的梯度纯化以给出白色粉末2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-氨基苯基)氨基甲酸酯(5) (15.2mg；0.3mmol；11.2%)；LCMS:rt 3.70min; m/z 518.12。

1.6 使2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-氨基苯基)氨基甲酸酯(5)环化以给出大环(6)

向装备有冷凝器和搅拌棒的2-颈烧瓶中加入乙腈(45ml)、二甲基甲酰胺(5ml)和三氟乙酸(3.56mg；0.03mmol；1.00当量)。将反应容器回流。向反应容器中经注射泵逐滴加入在乙腈(5mL)中的2-(2-{[2-(3-氨基苯基)乙基]氨基}乙基)-6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮(6) (59.9mg；0.13mmol；1.00当量)。使反应回流16小时，随后将粗物质浓缩并经制备型HPLC使用在具有0.1%三氟乙酸改性剂的水中的10-40%乙腈纯化以给出所要产物6 (9.6mg; 0.02mmol; 68.3%)。Jeol ¹H NMR (400 MHz,甲醇-D₃) δ 9.07, 8.37, 8.02, 8.01, 7.23, 7.23, 7.21, 7.19, 7.06, 7.05, 7.04,6.92, 6.90, 6.78, 6.77, 6.75, 6.74, 6.73, 4.43, 4.40, 4.38, 4.19, 4.18, 4.17,4.16, 4.15, 4.15, 2.99, 2.85, 2.65, 1.67;

LCMS: rt 2.35min; m/z 451.20。

实施例2

制备

2.1 制备2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-硝基苄基)氨基甲酸酯(7)

(7)的制备类似于在(4)的制备中描述的程序进行；产率：92.3mg (0.17mmol;61.3%); LCMS: rt 2.98min; m/z 530.90。

2.2 制备2-{6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-基}乙基(3-氨基苄基)氨基甲酸酯(8)

从(7)起始的(8)的制备类似于在(5)的制备中描述的程序进行；产率：74.2mg(0.15mmol; 85.2%); LCMS: rt 2.72; m/z 500.90。

2.3 从(8)起始的(9)的制备类似于在(6)的制备中描述的程序进行；产率：3.1mg(0.01mmol; 4.5%); Jeol ¹H NMR (400 MHz, 甲醇-d₃) δ 8.04, 8.03, 7.30, 7.29,7.25, 7.19, 7.16, 7.14, 7.03, 6.99, 6.93, 4.40, 4.40, 4.25, 4.21, 4.19, 2.65,1.62, 1.54, 1.28; LCMS: rt 2.57min; m/z 465.18。

实施例3

制备

3.1 制备6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-[2-(3-硝基-苯基)乙基]-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酰胺(10)

将2-(3-硝基苯基)乙胺盐酸盐(100.00mg；0.49mmol；1.00当量)、6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酸(SYN5052A)(174.06mg；0.49mmol；1.00当量)、邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(375.28mg；0.99mmol；2.00当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.32ml；1.97mmol；4.00当量)放置到装备有搅拌棒的闪烁小瓶中。将混合物溶解于DMF (3.00ml)中。将反应混合物搅拌16小时。在完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释并用盐水溶液萃取。随后将有机层经硫酸镁干燥，过滤，浓缩并经制备型HPLC使用在具有0.1%三氟乙酸改性剂的水中的10-50%乙腈的梯度纯化以给出6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-[2-(3-硝基苯基)乙基]-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酰胺(10)(226.4mg; 0.45mmol;91.6%); Jeol ¹H NMR (400 MHz, 甲醇-d₃) δ 8.11, 8.10, 7.99, 7.98, 7.44, 7.42,7.37, 7.35, 7.34, 7.17, 7.17, 7.15, 7.14, 6.98, 6.96, 4.10, 4.08, 3.57, 3.56,3.12, 2.85, 2.84, 2.82, 2.80, 2.03, 2.00, 1.68, 1.36, 1.34, 1.25, 1.23, 1.21;

LCMS: rt 3.19min; m/z 501.12。

3.2 由(10)制备N-[2-(3-氨基苯基)乙基]-6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酰胺(11)

(11)的制备类似于在(5)的制备中描述的程序进行；产率：23.1mg (0.05mmol;10.9%); Jeol ¹H NMR (400 MHz, 甲醇-d₃) δ 8.35, 8.11, 8.10, 7.40, 7.39, 7.34,7.32, 7.23, 7.22, 7.20, 7.20, 7.11, 7.08, 7.06, 6.99, 6.97, 3.43, 3.39, 3.38,3.36, 2.74, 2.72, 2.70, 2.65, 1.66; LCMS: rt 2.03min; m/z 471.18。

3.3 从(11)起始的(12)的制备类似于在(6)的制备中描述的程序进行；产率：2.1mg (0.004mmol; 12.2%);

¹H NMR (Jeol 400 MHz, 甲醇-d₃) δ 8.27, 8.26, 8.24, 8.06, 8.05, 7.43,7.41, 7.37, 7.34, 7.34, 7.23, 7.21, 7.19, 7.16, 7.16, 7.14, 7.14, 6.98, 6.96,6.86, 6.84, 3.44, 3.44, 3.43, 3.42, 3.41, 3.39, 3.37, 3.36, 3.34, 3.33, 3.31,2.67, 2.65, 2.64, 1.66;

LCMS: rt 0.65min; m/z 435.18。

实施例4

制备

4.1 制备6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-N,2-二甲基-N-{2-[(3-硝基苯基)氨基]-2-氧乙基}-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酰胺(13)

(13)的制备类似于在(11)的制备中描述的程序进行；产率：341.5mg (0.63mmol;71.9%);

LCMS: rt 3.37min; m/z 543.97。

4.2 制备N-{2-[(3-氨基苯基)氨基]-2-氧乙基}-6-[(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)氨基]-N,2-二甲基-3-氧-3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-2-甲酰胺(14)

(14)的制备类似于在(5)的制备中描述的程序进行；产率：42mg (0.08mmol;44.6%);

¹H NMR (Jeol 400 MHz, 甲醇-d₃) δ 8.07, 8.06, 7.99, 7.44, 7.44, 7.40,7.39, 7.23, 7.23, 7.21, 7.20, 7.06, 7.04, 7.04, 7.03, 7.02, 7.02, 7.01, 4.10,4.08, 3.33, 2.98, 1.72;

LCMS: rt 2.54min; m/z 513.81。

4.3 从(14)起始的(15)的制备类似于在(6)的制备中描述的程序进行；产率：9.5mg (0.02mmol; 33.9%); Jeol ¹H NMR (400 MHz, 甲醇-d₃) δ 9.38, 9.29, 8.40,8.05, 8.04, 7.67, 7.37, 7.37, 7.25, 7.23, 7.17, 6.91, 6.77, 6.63, 6.61, 5.55,5.51, 5.47, 4.38, 4.34, 4.02, 3.98, 3.94, 3.51, 2.88, 2.85, 1.93, 1.86, 1.67;

LCMS: rt 2.44min; m/z 478.19。

实施例5

制备“16”和“17”

将外消旋物15 (43mg)溶解于3ml甲醇 + 0.5%二乙胺中。对映异构体通过SFC色谱法(Minigram SFC，250mm×4.6mm Chiralcel OJ-H柱，等度洗脱液：CO₂ + 30% 2-丙醇+0.5%二乙胺，流速：5ml/min.)分离。由于外消旋物在注入溶剂中沉淀：将外消旋物多次再溶解于更多注入溶剂中。在一些操作中，由于化合物沉淀，SFC的自动取样器管受到堵塞。将自动取样器的注射针和其他管清洁并继续注入。通过使用该方法，收集三个流分。第一流分为注入溶剂峰(甲醇)，第二馏分为10.6mg的第一洗脱对映异构体16且第三馏分为8mg的第二洗脱对映异构体17。没有测定任一化合物的绝对构型。

以下化合物类似地制备。

药理学数据

表1 一些代表性式I化合物的Syk和GCN2抑制作用

IC₅₀：< 0.3μM = A 0.3-3μM = B 3-50μM = C

*100%对应于零作用

-50%对应于IC₅₀

在表1中显示的化合物为根据本发明的特别优选的化合物。

以下实施例涉及药物：

实施例A：注射小瓶

将100g的式I活性成分和5g磷酸氢二钠在3 l双蒸水中的溶液使用2N盐酸调节到pH 6.5，无菌过滤，转移到注射小瓶中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。各注射小瓶含有5mg活性成分。

实施例B：栓剂

将20g的式I活性成分与100g大豆卵磷脂和1400g可可脂的混合物熔融，注入模具中并允许冷却。各栓剂含有20mg活性成分。

实施例C：溶液剂

溶液剂由1g的式I活性成分、9.38g NaH₂PO₄∙2H₂O、28.48g Na₂HPO₄∙12H₂O和0.1g苯扎氯铵在940ml双蒸水中制备。将pH调节到6.8，且将溶液补充到1L并通过照射灭菌。该溶液可以滴眼剂形式使用。

实施例D：软膏

将500mg的式I活性成分与99.5g凡士林(Vaseline)在无菌条件下混合。

实施例E：片剂

将1kg的式I活性成分、4kg乳糖、1.2kg马铃薯淀粉、0.2kg滑石粉和0.1kg硬脂酸镁的混合物用以下方法以常规方式压制以给出片剂：所述方法使得每个片剂含有10mg活性成分。

实施例F：锭剂

类似于实施例E压制片剂，且随后用蔗糖、马铃薯淀粉、滑石粉、黄蓍胶和染料的包衣以常规方式涂布片剂。

实施例G：胶囊剂

将2kg的式I活性成分用以下方法以常规方式引入硬明胶胶囊中：所述方法使得各胶囊含有20mg活性成分。

实施例H：安瓿

将1kg的式I活性成分在60 L双蒸水中的溶液无菌过滤，转移到安瓿中，在无菌条件下冻干并在无菌条件下密封。各安瓿含有10mg活性成分。

Claims

1.式I化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体，

其中：

表示亚苯基或2,3-二氢-吲哚-1,6-二基，其各自未被取代或被OA单取代，A表示具有1-10个C原子的非支链或支链的烷基，

X表示Hal，

Y表示具有1、2、3或4个C原子的烷基，

R¹表示H或甲基，

R²表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基、2,3-二氢-吡唑基、1,2-二氢-吡啶基或四氢吡喃基，其各自未被取代或被具有1-10个C原子的非支链或支链的烷基单取代或二取代，

R³和R⁴一起表示具有2、3或4个CH₂基团的亚烷基链，

R⁵表示苄基，

Hal表示F、Cl、Br或I，

n表示0、1、2、3或4，

p表示1、2、3或4。

2.权利要求1的化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体，所述化合物选自

。

3.制备权利要求1-2的式I化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体的方法，其特征在于使式II化合物环化，

其中

、L₁、L₂、X和Y具有在权利要求1中指出的含义，

和/或

使所述式I的碱或酸转化成其盐中的一种。

4.药物组合物，其包含至少一种权利要求1所述的式I化合物和/或其药学上可接受的盐和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及任选药学上可接受的载体、赋形剂或媒剂。

5.权利要求1所述的式I化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体在制备药物中的用途，所述药物用于治疗和/或预防有需要的受试者的炎性病况、免疫病况、自体免疫病况、过敏病况、风湿性病况、血栓性病况、癌症、感染、神经退化性疾病、心血管疾病及新陈代谢病况。

6.权利要求5的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防癌症，其中所述欲治疗的癌症为实体肿瘤或血液和免疫系统的肿瘤。

7.权利要求6的用途，其中所述实体肿瘤选自：上皮组织肿瘤、膀胱肿瘤、胃肿瘤、肾肿瘤、头颈部肿瘤、食管肿瘤、宫颈肿瘤、甲状腺肿瘤、肠管肿瘤、肝肿瘤、脑肿瘤、前列腺肿瘤、泌尿生殖道肿瘤、淋巴系统肿瘤、喉头肿瘤、骨骼肿瘤、生殖细胞肿瘤、肺肿瘤、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、纤维神经瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或恶性黑素瘤。

8.权利要求6的用途，其中所述血液系统的肿瘤是单核细胞白血病。

9.权利要求5的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防选自类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮喘、多发性硬化、骨关节炎、缺血性损伤、巨细胞动脉炎、炎性肠病、糖尿病、囊性纤维化、银屑病、Sjögrens综合征和移植器官排斥的疾病。

10.权利要求5的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防选自阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、具有淀粉样变性-Dutch型的遗传性脑出血、淀粉样脑血管病、克罗伊茨费尔特-雅各布病、额颞性痴呆、亨廷顿氏病和帕金森氏病的疾病。

11.权利要求5的用途，其中所述药物用于治疗和/或预防选自利什曼原虫；分枝杆菌；疟原虫；人类免疫缺陷病毒；爱泼斯坦-巴尔氏病毒；单纯疱疹病毒；和丙肝病毒的疾病。

12.药物组合物，其包含至少一种权利要求1所述的式I化合物和/或其药学上可接受的盐和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，及至少一种另外的药物活性成分。

13.套盒，其由以下单独的包装组成：

(a) 有效量的权利要求1所述的式I化合物和/或其药学上可接受的盐和立体异构体，包括其以所有比率的混合物，

和

(b) 有效量的另外的药物活性成分。