CN104246509B - 快速检测生物液体中的肝细胞生长因子的新方法 - Google Patents
快速检测生物液体中的肝细胞生长因子的新方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104246509B CN104246509B CN201380014381.2A CN201380014381A CN104246509B CN 104246509 B CN104246509 B CN 104246509B CN 201380014381 A CN201380014381 A CN 201380014381A CN 104246509 B CN104246509 B CN 104246509B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hgf
- solid phase
- porous solid
- sample
- bioactivity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 42
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 14
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 claims description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 17
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 claims description 16
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 claims description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 14
- -1 amino glycan Chemical class 0.000 claims description 11
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 11
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 11
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 9
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 8
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 claims description 7
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 claims description 6
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 claims description 6
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 6
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 claims description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 39
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 27
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 24
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 19
- 102000001109 Leukocyte L1 Antigen Complex Human genes 0.000 description 16
- 108010069316 Leukocyte L1 Antigen Complex Proteins 0.000 description 16
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 14
- 238000011160 research Methods 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 6
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 5
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010017918 Gastroenteritis viral Diseases 0.000 description 3
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 241000726107 Blastocystis hominis Species 0.000 description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 101000972946 Homo sapiens Hepatocyte growth factor receptor Proteins 0.000 description 2
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 229940011597 blastocystis hominis Drugs 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000726108 Blastocystis Species 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010061166 Gastroenteritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010017913 Gastroenteritis rotavirus Diseases 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010024774 Localised infection Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035551 Pleocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 206010037597 Pyelonephritis acute Diseases 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 241000242680 Schistosoma mansoni Species 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010062255 Soft tissue infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 208000012873 acute gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001555 acute pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N carbonyl sulfide Chemical compound O=C=S JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N chelidonic acid Natural products OC(=O)C1=CC(=O)C=C(C(O)=O)O1 PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019902 chronic diarrheal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002573 colposcopy Methods 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000002242 deionisation method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000011846 endoscopic investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009415 formwork Methods 0.000 description 1
- 230000007849 functional defect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004768 organ dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/4753—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及测定样品中生物活性HGF的存在与否或量的方法，包括(i)将样品与第一多孔固相接触，所述第一多孔固相包含胞外基质或细胞膜的HGF结合组分和含有溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物；和(ii)将多孔固相的颜色与样品中生物活性HGF的存在与否或量相关联。本发明还涉及包含第一多孔固相的装置，所述第一多孔固相包含胞外基质或细胞膜的至少一种HGF‑结合组分和含有溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物。
Description
发明领域
本发明属于用于检测生物样品中的生长因子如肝细胞生长因子(HGF)存在的产品的技术领域。本发明还涉及实施这类方法的方法。
发明背景
肝细胞生长因子(HGF)是一种独特的生长因子，其与其他已知的多肽有丝分裂原不相关。其是在间充质细胞(如肺巨噬细胞和成纤维细胞)、肝脏中的库普弗(Kupffer)细胞，以及白细胞中表达的一种蛋白质。HGF响应细胞损伤而分泌并且似乎对于某些器官的再生和创伤愈合很重要。其为异二聚体，具有二硫键结合的分别为约60和30kDa的重链和轻链，其首先以非活性的前体形式合成。在受损伤的器官中，前体由特定的激活剂切割成活性蛋白。HGF以旁分泌形式起作用(即其影响相邻的细胞)，并以内分泌形式起作用(即，其具有长距离)。HGF的靶细胞是完全发育的上皮细胞。HGF在器官损伤的位点处以高浓度产生并存在。
已经研究了各种感染性疾病中HGF的全身和局部产生，并且在急性感染疾病(如胃肠炎、脓毒、肺炎、皮肤和软组织感染以及肾盂肾炎)中观察到了高血清HGF浓度。在增强的全身性产生HGF的同时，已在脑膜炎期间的脑脊液中发现高HGF浓度。肺炎患者的呼出气冷凝物中升高的HGF浓度(其与血清HGF水平无关)表明在肺炎期间局部产生HGF。此外，已经研究了血清中HGF的稳定性，并且已发现HGF在稀释的粪便样品中非常稳定，并且几次冻融循环、不同的缓冲液或在20℃下储存几年并不显著影响粪便HGF浓度。已显示腹泻期间粪便中高量的HGF可能表示患者患有可传染的胃肠炎。另外，已显示在感染性疾病中监测治疗前和治疗后的HGF水平有可能在早期揭示治疗失败。
对建议疗法之间的临床重要性和差异的识别、身体中炎性紊乱之间的不同诊断已经成为几类研究的目标。一个主要的临床问题是确定感染或其他炎性紊乱是否引起疾病。医生通常采用几种标志物来建立正确的诊断，如显微镜分析和体液的培养、白细胞计数、C-反应性蛋白、血浆原降钙素和乳酸盐。然而，仍然没有可使用的金标准。在治疗肠内炎症紊乱，溃疡，关节病，CNS病症，腹腔、胸腔和心包积水等时，在正确诊断的建立中每天都会产生问题。常规标记物(如CRP和WBC)的量可能在几种紊乱中很高，并且尽管存在感染，培养物并不总是阳性的。在PCT申请PCT/SE2001/001831中讨论了高量的HGF及其在感染性疾病的诊断和预后中的应用。但在这些研究中，通过ELISA方法来确定体液中HGF的总量。已经报道了各种关于HGF的研究。一些研究已经使用血浆/血清和尿中HGF的测定来诊断和筛选疾病，如急性肾功能缺陷、心肌梗塞、膀胱癌、急性胰腺炎和急性及慢性肺病。出于该原因，已经使用了之前描述的方法，如ELISA和Western印迹。在炎性病症期间检测到高量的细胞因子并不是唯一发现。然而，在一些情况中，已发现HGF的测定是灵敏的方法，其可以比常规方法更容易地检测到特定的临床问题(PCT申请PCT/SE2001/001831)。
之前描述的方法(如ELISA和Western印迹)基于样品中的HGF和特异性结合HGF的抗体之间的相互作用。在ELISA中，测定HGF单链和双链的量。通过Western-印迹，通过检测样品中存在的表观分子量来确定体液中HGF的质量。然而，该方法是繁琐且费力的。
生物传感器的创新应用在该分析领域中是有用、便宜并且快速的。可以使用表面等离子共振技术来检测粪便中的HGF(WO2005/031365)。该技术能够在单次运行中检测HGF水平和质量。
WO2010/151222描述了测定样品中生物活性或无活性HGF的存在与否或量的方法，包括将样品与包含胞外基质或细胞膜的HGF结合组分的凝胶接触，向凝胶添加甲苯胺蓝，和将凝胶和/或与该凝胶接触的液体的颜色与样品中生物活性HGF的存在与否或量相关联。
-在感染的情况中：在不同的器官中，在感染位点处HGF的水平局部增高。可以通过ELISA检测总蛋白量。使用Biacore技术，检测到单克隆、多克隆抗体与HGF以及固定于芯片上的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的相互作用(信号)的水平较高，并且其与ELISA所得的结果正相关。
-在慢性炎症的情况中：尽管可能通过ELISA发现样品中高量的HGF，但是观察到ELISA和通过Biacore所得的结果之间的非显著相关性。可能由Biacore检测到无信号或非常低的信号，其显示与配体的弱相互作用。与c-met原癌基因受体可能具有高相互作用，并且该信号与固定化的水平正相关。在HSPG通道中有低信号率。在分析前至少10分钟向样品添加HSPG或硫酸葡聚糖可能并不减少HSPG通道中的信号。该蛋白质可能是无生物活性的。
方法(平台)
-内在机制
受伤期间产生的生长因子和细胞因子(如肝细胞生长因子)以内分泌方式释放并且通过相邻的间充质细胞局部产生。该蛋白质与高亲和力细胞结合特异性受体相互作用并且向细胞内传送信号导致受伤器官的再生。在HGF的情况中，需要细胞膜和胞外基质(ECM)上的非特异性受体来捕获细胞因子并且使其可及于特定的受体(c-Met受体)。因此，显示对HSPG或其他蛋白氨基聚糖(proteoaminoglycan)无亲和性的HGF的变体没有在释放后被ECM捕获并且可能不与特定受体相互作用。因此，该蛋白质可以无活性方式起作用，尽管其对c-Met受体有高亲和性。
在我们之前的工作中，我们已经通过SDS-page、Western印迹、ELISA和SPR研究了HGF，并且显示不与蛋白氨基聚糖(HSPG，硫酸乙酰肝素)或硫酸葡聚糖结合的HGF蛋白(内源或重组)在用于我们研究组的体内(毛发生长小鼠)或体外生物活性方法(CCL-53.1细胞)时没有生物学效果。我们已经观察到与慢性炎症相比患有急性感染的患者在SPR方法中与HSPG的结合亲和性上具有差异。我们的初步结论是在患有慢性炎症的患者中，高等级的细胞因子(如HGF)是无活性的，因此他们可能需要外源性生物活性的HGF来刺激再生。例如，使用外源性HGF的治疗已经显示出有益于治疗一些慢性腿部溃疡的病例(PCT申请PCT/SE2001/001831)。已经发现HGF通过在体外改变细胞的细胞骨架结构来增强健康相邻皮肤上皮细胞向受伤区域的迁移。在患有慢性溃疡的患者的溃疡区域中观察到met原癌基因受体(c-met)的增强表达。用外源性HGF治疗显著减少了c-met表达。从溃疡分泌的生物活性内源性HGF浓度和met原癌基因受体(c-met)表达之间存在负相关。在具有低量内源性HGF和高met原癌基因受体(c-met)表达的患者中用外源性HGF治疗引起血管增殖和溃疡面积减少。这种皮肤器官损伤模型和相关事件在其他器官组织中也可能存在。
发明概述
在第一方面，本发明涉及检测样品中生物活性HGF存在与否的方法，所述方法包括将含有HGF的样品与其上固定有胞外基质(ECM)或细胞膜的至少一种HGF-结合组分(如蛋白氨基聚糖或葡糖胺聚糖)的多孔固相以及包含溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物接触。
在第二方面，本发明涉及一种包含多孔固相的装置，所述多孔固相具有固定于其上的胞外基质(ECM)或细胞膜的至少一种HGF结合组分(如蛋白氨基聚糖或葡糖胺聚糖)和含有溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物。
附图简要说明
图1：根据粪便pH的死亡率增加的柱状图
定义和缩写
HGF的质量指示HGF结合至胞外基质并在体内发挥其生物效果的能力。
HGF表示肝细胞生长因子，也称为分散因子。
ECM表示胞外基质。
HSPG表示硫酸乙酰肝素蛋白聚糖。
MQ，或Milli-Q是指已经高度纯化或去离子化的水。
PBS是指磷酸盐缓冲盐水。
发明详述
生物活性形式的肝细胞生长因子对蛋白氨基聚糖(如硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和硫酸葡聚糖)具有高亲和性。这种亲和性类似于生长因子在与其膜结合受体发生相互作用之前与细胞膜结合。
在本发明的以下方面和实施方式中利用这种亲和性。基于利用之前来自SPR方法的观察的结果(显示对ECM组分具有高亲和性的细胞因子在急性感染中释放)，发明人通过在基本固相基质(如纤维素)中加入一定量的蛋白氨基聚糖制备了平台。然后通过在包括溴麝香草酚蓝，季铵化合物和/或甲基红的指示剂存在下的颜色变化观察蛋白质对蛋白氨基聚糖的亲和性。
本发明使用含有胞外基质或细胞膜的HGF结合组分(优选硫酸葡聚糖或HSPG)的垫料相(pad phase)。该垫料由多孔固相制成，如纤维素、硝酸纤维素或纸。目前优选的多孔固相是具有高加载容量的厚纤维素基滤纸和中等截留滤纸598Schleicher & Schull(施莱些许尔公司)。目前优选如下配方：
用内含0.4％季铵化合物(默克公司(Merck))和0.1％溴麝香草酚蓝(Panreac)的甲醇溶液浸渍多孔固相。通过添加0.5％涂覆稳定剂(阿科斯公司(Acros))将所有的化学物固定于纤维素基质。在热空气流中使固相干燥。
之后，多孔固相用由去离子蒸馏水(MQ)中0.1mM硫酸葡聚糖(伏路卡公司(Fluka))组成的溶液浸泡5-10秒并在热空气流中干燥。
在一个实施方式中，还制备用作pH指示剂的第二固相。用内含0.02％甲基红(默克公司)、0.4％季铵化合物(默克公司)和0.1％溴麝香草酚蓝(Panreac)的甲醇溶液浸渍第二固体多孔固相。通过添加0.5％涂覆稳定剂(阿科斯公司)将所有的化学物固定于纤维素基质。在热空气流中使第二固相干燥。该第二多孔固相优选不含胞外基质或细胞膜的HGF结合组分。
包含蛋白氨基聚糖和指示剂组合物的第一多孔固相和任选地用作pH指示剂的第二多孔固相可以在双侧粘合纸上固定并且被固定在固体支持物(如塑料带)上，随后切割成具有适用尺寸的试条，如宽度为6mm。
在实践中，为了便于实施，将菌环刷上的粪便转移至0.5ml的稀释缓冲液(0.1MPBS pH 7.4)或水(优选MQ)中，并且将包含固定在固体支持物上的多孔固相的测试条浸入该溶液中。当测试条浸入含有HGF的溶液中时，根据分析物的量，HGF与其偶联物或受体(例如硫酸葡聚糖)特异性地发生反应，从而所述试条的颜色从黄色变为各种可观察强度的绿色至海蓝色。
也可使用胞外基质的其他组分(葡糖胺聚糖)，但是硫酸葡聚糖价格上更便宜并且显示相似的结果。
本发明涉及一种方法，所述方法包括将试条浸入生物样品或由缓冲液稀释的样品中，优选PBS 0.5M-0.15M，pH 6.00-8.00，或水(优选MQ)稀释，从而试生物活性的HGF与硫酸葡聚糖相连。
通过在棉纸上轻拍来去除试条边缘上的残余样品液滴。硫酸葡聚糖和指示剂之间的相互作用使垫料的颜色从黄色变为绿色光谱到深蓝色，作为HGF存在的阳性信号。
在多孔固相介质中存在指示剂的情况下，在生物活性的HGF和硫酸葡聚糖之间存在特异性相互作用。由于样品含有与硫酸葡聚糖结合的生物活性HGF，多孔固相的颜色改变。
绿色的强度取决于HGF与硫酸葡聚糖的亲和性，以及多孔固相中封闭的H+离子。
可以通过使用标准方法例如定量ELISA方法来比较性地检测HGF，以确定观察到绿色强度的多孔固相中的HGF的量。任选地，使用一种或多种已知HGF含量的参比溶液来评估反应结果。可以使用阴性参比(例如，水或PBS)。阳性参比可以是已知HGF含量的健康体液样品或含有HGF的产品。
对于一些样品(如包括尿和粪便的排泄物)的分析，除了生物活性HGF的存在与否或量以外，还对分析样品的pH感兴趣。如上所述，第二多孔固相用作pH指示剂，并且因此优选被引入采用这类样品的方法和装置中。
通过本发明的方法，能够快速区分急性炎症(如器官中的细菌性感染)与慢性炎症。
本发明的方法和产品可用于分析以下内容：
-关节中的脓毒性关节炎与非脓毒性或反应性关节炎之间的差异
-急性可传染的胃肠炎与慢性炎性肠疾病或其他腹泻原因之间的差异
-脑脊液中急性脓毒性脑膜炎与非特异性脑脊液细胞增多之间的差异
-急性肾机能不全和肾盂肾炎与远端尿道感染和慢性肾损伤之间的差异
-肺炎与慢性阻塞性肺部疾病在呼出气冷凝物中的差异
-胸腔积液和腹水中的脓毒性炎症与非脓毒性炎症的差异
-血清和血浆中HGF的存在
-唾液中HGF的存在
-医药和血液产品中生物活性HGF的标准评价。
-对抗生素治疗的监测。
-在疾病中定位感染灶点
实施例
按照本发明开发了具有用于检测对HSPG的亲和性和pH的两个表面的测试条。在这个实施例中，已经评价试条测试来从其它腹泻原因识别感染性胃肠炎。在几种慢性炎性疾病的检测中，评价了一组患有SIRS的患者中粪便pH与存活的相关性和测试结果与粪便钙卫蛋白的相关性。在2011年到我们的病房中入院和出院的患者材料中回顾性地评价常规微生物方法鉴定感染性胃肠炎的灵敏度。
研究群体
该研究中包括从健康机构检索到的瑞典东约特兰的肠紊乱为病因的所有患者的粪便样品。没有排除标准。样品立即被编号并且未经鉴定。在收集后48小时内，在得到培养物或PCR结果之前通过试条测试对2012年3月3日和8月3日之间从健康护理中心检索到的患者(n＝140)或在林雪平的大学医院、北雪平和穆塔拉的乡村医院入院的患者(n＝305)总共445份粪便样品(10-99，中值70岁，243名女性)进行分析。各病房的主治医师进行诊断操作和治疗。从而，对患者进行参比测试。另外包括来自健康志愿者(9-73，中值53岁，17名女性)的27个培养物阴性粪便样品(也包括在之前的研究中)。将-20℃冷冻保存的证实感染的另外64份在2003(n＝16)、2009(n＝20)和2011(n＝28)年收集的粪便样品再解冻并对其进行回顾性分析。将2011年从健康中心送到生物化学系用于半定量的粪便钙卫蛋白测试并且自此在-20℃下冷冻保存的总共85份来自慢性腹泻患者的样品再解冻并分析。
项目领导人研究了患者-日志并且记录了试条测试的结果和病史。文件每天更新并且因此记录了常规测试、x-射线、内窥镜过程和患者出院之前的最终诊断。患者在纳入后随访至多一年供于最终诊断和结果。在未鉴定的研究中包括未患有腹泻的志愿者的粪便样品。林雪平的伦理委员会批准了该研究方案。
试验完成和结果解释
在分析前，粪便在室温下存放15分钟。封闭的微刷(micro-brush)浸泡在Milli Q水中，然后浸入粪便中10秒，然后微刷在试条垫上擦拭并且在60秒内观察颜色变化并与CMYK比色表比较(Klasner等，Anal Bioanl Chem，2010年7月；397(5)1821-1829)。
试条测试的再现性
为了控制制备中方法差异，10个样品用不同的批次分析10次。也用阴性和阳性对照来测试来自各批次的20个试条。每天在分析样品之前也使用阳性和阴性对照。粪便样品一式两份地进行分析。
参比测试
在林雪平的大学医院中以常规测试形式进行粪便检验，该粪便检验通过显微镜(n＝52)、病毒(杯状病毒PCR，用ELISA检测轮状病毒和腺病毒抗原，n＝90)和细菌培养的方法(n＝170)以及血清学和毒素鉴定技术(艰难梭菌(Clostridium difficile)毒素，n＝431)、半定量钙卫蛋白(n＝85，在2011年收集的新鲜粪便样品上进行)和粪便血红蛋白(n＝30)检测方法组合进行。可以根据指示采用多种X-射线和内窥镜技术。对所有的粪便样品进行试条测试。然而，在得到参比测试的结果之前观察并记录条测试的结果。
外部验证
为了对测试进行客观的评价，将林雪平传染病科入院的患者的新鲜粪便上进行的试条测试的结果立即记录在研究数据库和数字患者日志(COSMIC)中并且标注日期和时间。请外部评价员研究测试结果和最终结果以评价测试在病例(n＝30)中的灵敏度。
对2011年诊断患感染性胃肠炎的病例的回顾性研究
2011年在林雪平传染病科被诊断为感染性胃肠炎而入院和出院的181名患者中，对其医学日志进行了回顾性研究并且在2012年评价了传统微生物测试的灵敏度(表3)。进行了针对沙门菌(Salmonella)、志贺氏菌(Shigella)和弯曲杆菌(Campylobacter)的总共187次粪便培养、针对梭菌(Clostridium)分型的7次粪便培养、针对EHEC的23次粪便培养、123次杯状病毒PCR和105次轮状病毒+肠道病毒ELISA以及51次粪便寄生虫分析。
统计
使用Graphpad prism 5版进行对相关性的回归分析。计算了测试结果的特异度(真阴性的数目/真阴性的数目+假阳性的数目)、灵敏度(真阳性的数目/真阳性的数目+假阴性的数目)、阳性预测值(PPV＝真阳性/真阳性+假阳性)、阴性预测值(NPV＝真阴性/真阴性+假阴性)和精确性(真阳性+真阴性/真阳性+真阴性+假阳性+假阴性)。对粪便pH和死亡率使用克-瓦二氏、曼-惠特尼和费舍尔精确检验并且使用双向逻辑回归Minitab16来比较试条测试和半定量粪便钙卫蛋白测试。
结果
亚组
-感染性胃肠炎：在总共173个病例中，粪便检测揭示阳性培养物(沙门菌n＝6，弯曲杆菌n＝15和艰难梭菌n＝113)，病毒诊断(杯状病毒n＝23，轮状病毒n＝12和腺病毒n＝1)，寄生虫(曼氏血吸虫(Schistosomia mansoni)n＝1和人芽囊原虫(Blastocystishomonis)n＝3)。在34个病例中，高度疑似有艰难梭菌感染但是未通过培养物证明。用针对艰难梭菌感染的药物对患者进行了有效的治疗。因此，患有感染性胃肠炎的亚组207份粪便样品组成(表1)。在133例细菌感染中有9例试条测试呈阴性(6.7％)。在病毒性胃肠炎中假阴性结果的频率更高(36个病例中有6例＝16％)。病史查阅表明若样品在腹泻发作的前两天内收集，则没有在患有病毒性胃肠炎的病例中发现假阴性结果。在急性腹泻症状已经消退但是常规测试表示为阳性结果的9个病例中，试条测试呈阴性。认为该组是携带者并且将其从统计学计算中省去。
-非感染性病例：在172个病例中，排除了以肠为感染灶点的病例。该组由常规测试为阴性并且腹泻被认为是其他疾病(n＝123)或IBD(n＝36)过程的副症状(bi-symptom)的病例组成。在该亚组的总共199个病例(包括健康志愿者n＝27)中，有13个病例的试条测试呈阳性(表1)。
-SIRS：在40个病例中观察到伴随多重器官功能缺陷和/或SIRS的脓毒过程中的腹泻。在这组中，疑似有一般炎症和器官功能缺陷。
-疑似感染/不明确的：在81名患者中，常规测试表明没有感染。病史和/或诊断过程不完整或无法获得，因此不能确定腹泻的原因。然而，疑似在伴有感染的流行病学史或之前的培养物的病例中有感染性胃肠炎。该组并不包括在统计学分析内，因为诊断没有经过客观检验。
估计
-在经检验的感染性胃肠炎(n＝207)，以及进而包括患有IBD的患者、患有其他全身性疾病的患者和健康的非感染性病例(n＝199)的组中计算灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值以及精确性。如表2所示，试条测试可以92.2％的灵敏度，93.5％的特异度，93.6％的阳性预测值和92.1％的阴性预测值来区分急性感染性胃肠炎。测试的精确性为92.9％。
-在由感染性胃肠炎(n＝38)、非感染性腹泻(n＝34)和脓毒/SIRS(n＝38)组成的三组中计算pH对死亡率的影响。使用试条测试来测试粪便pH并且使用比色表标尺记录。与非感染性胃肠炎相比，脓毒/SIRS组中的pH和死亡率明显较高(P＜0.05)(使用克-瓦二氏、曼-惠特尼和费舍尔精确检验进行统计学分析)(图1)。
-在求医于健康护理中心的患有肠紊乱的85个病例中评价试条测试和粪便钙卫蛋白结果之间的相关性。这些病例都没有患急性胃肠炎并且常规测试的结果是阴性的。在1年后检查病史以研究后果。在该选定的患有慢性肠紊乱的材料中，粪便钙卫蛋白显示出与严重肠疾病的显著相关性(双向逻辑回归Minitab 16p＜0.01)，其具有高阴性预测值(NPV＝0.92)，当在样品材料中同时控制钙卫蛋白和Dexact-f时，其没有差别。同时控制粪便钙卫蛋白和Dexact-f能在诊断过程(CT扫描、阴道镜检和病理诊断)揭示紊乱的性质之前以14/19病例从良性的那些区分严重的慢性肠疾病。因此，阳性Dexact-f对肠的急性炎症诊断起作用，并且阴性粪便钙卫蛋白对排除慢性炎症起作用(表2)。
-没有发现试条测试的结果与粪便中血液存在之间的显著相关性(R2＝0.08)。
-没有观察到相同或不同批次的试条测试之间的显著差异。
-在来自2011年的材料中常规微生物诊断方法鉴定感染性胃肠炎的灵敏度为59％。研究日志和最终后果表明在轮状病毒胃肠炎中，错误诊断的风险最小且抗生素的过量使用最少。在40-70岁的中年患者并且尤其是在患有细菌性胃肠炎的组中，出现最多的抗生素过量使用。观察到4例双重感染并且观察到1例寄生虫感染(鞭毛虫(Giardia))。
讨论
粪便pH的测定给出了关于肠中离子交换的重要信息(Bachmann O等，ActaPhysiol(Oxf).2011年1月；201(1)：33-46)。该信息已经被用作诊断一些肠感染的非特异性方法。最近，提出了该方法用于预测严重疾病患者的后果(OsukaA等，Crit Care.2012年7月10日；16(4)：R119)。由于患者具有一般炎症响应的事实；严重外伤和/或脓毒的过程中的SIRS在肠中生成大量HGF和高粪便pH(文章已接收)，我们假设同时检测粪便中的HGF和pH可能会提高试条测试在肠的急性炎症诊断中的灵敏度。我们观察到，与非感染性病例和健康者相比，患有感染性胃肠炎的患者有较高的pH。然而，在患有严重结肠炎和SIRS的病例中观察到粪便pH＞8.0，这进而显示出显著增加的死亡率。因此，阳性试条测试和pH＜8.0的结合可指示需要补液的自限性感染性胃肠炎。另一方面，高度阳性的试条测试和pH＞8.0-9.0可预示严重的结肠炎败血症或其他严重的疾病，其中经验性的宽范围抗生素治疗可能是有益的。这可导致更少但是更直接的抗生素使用。
钙卫蛋白是一种炎症期间在肠中表达的蛋白质。粪便中存在高水平的钙卫蛋白表明有炎性过程。虽然该测试具有高阴性预测值，并不能通过粪便中钙卫蛋白的存在来从慢性炎性肠病中鉴定急性疾病(Kostakis ID等，Dig Dis Sci.2012年8月17日和J Chen CC等，Pediatr Gastroenterol Nutr.2012年6月13日)。在最近的研究中，我们已经显示HGF在肠中的急性炎症位点处而不在慢性炎症区域高度表达(文章已接收)并且粪便中的高HGF水平可能表明肠中的急性炎性过程，如处于感染过程中。在患有肠紊乱的门诊患者组中，在新鲜的样品上测定粪便钙卫蛋白。这种选定的材料由如此病例组成，其中基于之前根据这种测试的指示的记录选择粪便钙卫蛋白的对照并且疑似未发现感染性胃肠炎。随访该患者组一年并且记录最终的结果。由试条测试对新鲜的材料(文章已接收)和再解冻的粪便进行半定量测试。结果与其他研究一致，证明了粪便钙卫蛋白的阴性预测值排除了严重的慢性肠疾病。然而，在由85名患者组成的我们的材料中，高粪便钙卫蛋白和阴性试条测试的组合能够从11个IBD病例中鉴定出10个并且从4个患有结肠癌的病例中鉴定出3个(表2)。
如之前研究所示(Nayeri F等，Scand J Clin LabInvest.2004；64(6)：589-97)，HGF在粪便中非常稳定。我们观察到，甚至再解冻的样品也可以用于试条测试。然而，从疾病活跃阶段的粪便中取样是重要的，虽然在病毒性胃肠炎中在症状首次出现几天后进行取样测试的病例中观察到假阴性结果，或者
表
表1：灵敏度：191/207＝0.9227，特异度：186/199＝0.935，阳性预测值(PPV)＝191/204＝0.936，阴性预测值(NPV)＝186/202＝0.921，精确性＝186/207+199＝0.929
表2：从2011年5月求医于健康护理中心的肠疾病患者中收集粪便样品和病史控制2012年8月(n＝84)。粪便培养物(n＝19)为阴性并且寄生虫诊断(n＝17)没有揭示粪便中有致病性寄生虫。*在该组中发现3个人芽囊原虫病例。
表3：2011年林雪平传染病科中隔离的诊断为“感染性胃肠炎”的患者病史的回顾性分析
Claims (9)
1.第一多孔固相和第二多孔固相在制备用于测定粪便样品中生物活性HGF的存在与否或量和所述样品的pH并将所述HGF的存在与否或量和pH与对象中肠急性或慢性炎症关联的方法中的产品中的应用，所述第一多孔固相包含胞外基质或细胞膜的HGF结合组分和含有溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物，所述第二多孔固相包含含有溴麝香草酚蓝、季铵化合物和甲基红的pH指示剂组合物；
所述方法包括以下步骤：
-使所述样品与所述第一多孔固相和所述第二多孔固相接触；和
-将所述第一多孔固相的颜色与所述样品中生物活性HGF的存在与否或量相关联，并由所述第二多孔固相确定所述样品的pH，其中所述样品中生物活性HGF存在的量指示急性炎症，且所述样品的pH>8指示严重结肠炎或SIRS。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述HGF结合组分是蛋白氨基聚糖或葡糖胺聚糖。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述HGF结合组分是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖或硫酸葡聚糖。
4.如权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，将所述第一多孔固相的颜色与所述样品中生物活性HGF的存在与否或量相关联包括将所述第一多孔固相的颜色和已与已知HGF含量的至少一种参比溶液接触的第一多孔固相的颜色做比较。
5.一种包含第一多孔固相和第二多孔固相的装置，所述第一多孔固相包含至少一种胞外基质或细胞膜的HGF结合组分，和含有溴麝香草酚蓝和季铵化合物的指示剂组合物，所述第二多孔固相包含含有溴麝香草酚蓝、季铵化合物和甲基红的pH指示剂组合物。
6.如权利要求5所述的装置，其特征在于，所述HGF结合组分是蛋白氨基聚糖或葡糖胺聚糖。
7.如权利要求6所述的装置，其特征在于，所述HGF结合组分是硫酸乙酰肝素蛋白聚糖或硫酸葡聚糖。
8.如权利要求5-7中任一项所述的装置，其特征在于，所述第一多孔固相包括纤维素。
9.如权利要求5-7中任一项所述的装置，其特征在于，所述第二多孔固相包括纤维素。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1250158-1 | 2012-02-22 | ||
| SE1250158A SE536400C2 (sv) | 2012-02-22 | 2012-02-22 | Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor |
| PCT/SE2013/050157 WO2013126013A1 (en) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | New method for rapid detection of hepatocyte growth factor in biological fluids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104246509A CN104246509A (zh) | 2014-12-24 |
| CN104246509B true CN104246509B (zh) | 2017-10-24 |
Family
ID=49006061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201380014381.2A Expired - Fee Related CN104246509B (zh) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | 快速检测生物液体中的肝细胞生长因子的新方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9435815B2 (zh) |
| EP (1) | EP2817636B1 (zh) |
| CN (1) | CN104246509B (zh) |
| SE (1) | SE536400C2 (zh) |
| WO (1) | WO2013126013A1 (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018078184A1 (en) * | 2016-10-31 | 2018-05-03 | Peas Institut Ab | Device and method for detecting a bacterial infection |
| CN111721934B (zh) * | 2020-06-24 | 2023-05-09 | 湖南新大陆生物技术有限公司 | 一种改良型特异性生长因子检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5183742A (en) * | 1984-02-24 | 1993-02-02 | Dai Nippon Insatsu Kabushiki Kaisha | Test device for detecting glucose, protein urobilinogen, and/or occult blood in body fluids and/or determining the PH thereof |
| US5656443A (en) * | 1994-07-29 | 1997-08-12 | Long Island Jewish Medical Center | Method of diagnosing bladder cancer |
| US5827673A (en) * | 1996-08-13 | 1998-10-27 | Akira Matsumori | Method of detecting myocardial infarction |
| US5660790A (en) * | 1996-08-13 | 1997-08-26 | Litmus Concepts, Inc. | PH and amine test elements |
| WO2002017964A1 (en) | 2000-08-28 | 2002-03-07 | Fariba Nayeri | The synergetic effects of hgf and antibacterial treatment |
| EP1687636B1 (en) * | 2003-09-29 | 2009-01-14 | PEAS Institut AB | Rapid determination of different forms of hepatocyte growth factor (hgf) in the body fluids |
| US9157920B2 (en) * | 2009-06-26 | 2015-10-13 | Peas Institut Ab | Method for determining biologically active HGF |
| WO2011064358A1 (en) * | 2009-11-27 | 2011-06-03 | Roche Diagnostics Gmbh | Method for diagnosing and monitoring cardiac ischemia in patients with acute chest pain and without myocardial infarction |
-
2012
- 2012-02-22 SE SE1250158A patent/SE536400C2/sv not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-02-22 CN CN201380014381.2A patent/CN104246509B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-02-22 US US14/380,153 patent/US9435815B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-02-22 WO PCT/SE2013/050157 patent/WO2013126013A1/en active Application Filing
- 2013-02-22 EP EP13751847.8A patent/EP2817636B1/en not_active Not-in-force
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2817636A4 (en) | 2015-08-19 |
| US9435815B2 (en) | 2016-09-06 |
| EP2817636B1 (en) | 2019-02-20 |
| CN104246509A (zh) | 2014-12-24 |
| EP2817636A1 (en) | 2014-12-31 |
| SE1250158A1 (sv) | 2013-08-23 |
| US20150037908A1 (en) | 2015-02-05 |
| WO2013126013A1 (en) | 2013-08-29 |
| SE536400C2 (sv) | 2013-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Alibrahim et al. | Fecal calprotectin use in inflammatory bowel disease and beyond: a mini‐review | |
| Germaná et al. | Clinical usefulness of serum pepsinogens I and II, gastrin-17 and anti-Helicobacter pylori antibodies in the management of dyspeptic patients in primary care | |
| Sierra et al. | C-reactive protein used as an early indicator of infection in patients with systemic inflammatory response syndrome | |
| Nishikawa et al. | A prospective evaluation of new rapid urease tests before and after eradication treatment of Helicobacter pylori, in comparison with histology, culture and 13C-urea breath test | |
| Morrissey et al. | Sensitivity and specificity of urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin and kidney injury molecule-1 for the diagnosis of renal cell carcinoma | |
| CN103403549B (zh) | 败血症的预后的预测方法 | |
| CN101960308A (zh) | 急性肾损伤及预后推测用生物标记物以及其用途 | |
| EP2071332A1 (en) | Method for monitoring persons with IBD using total endogeneous lactoferrin as a marker | |
| Renata et al. | Urinary concentration of cytokines in children with acute pyelonephritis | |
| CN101910845A (zh) | 个体分子形式的生物标志的诊断用途 | |
| Odaka et al. | Evaluation of TheHelicobacter PyloriStool Antigen Test for Monitoring Eradication Therapy | |
| CN103384824B (zh) | 癌症诊断方法及其用途 | |
| Grove et al. | Comparison of culture, histopathology and urease testing for the diagnosis of Helicobacter pylori gastritis and susceptibility to amoxycillin, clarithromycin, metronidazole and tetracycline | |
| Skowron et al. | Urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin, kidney injury molecule-1, uromodulin, and cystatin C concentrations in an experimental rat model of ascending acute kidney injury induced by pyelonephritis | |
| US20150202329A1 (en) | Methods and Composition for Detecting Intestinal Cell-Barrier Dysfunction | |
| Aykur et al. | Fecal calprotectin as a factor that supports the pathogenicity of Dientamoeba fragilis | |
| CN104246509B (zh) | 快速检测生物液体中的肝细胞生长因子的新方法 | |
| Hradsky et al. | Fecal calprotectin levels in children is more tightly associated with histological than with macroscopic endoscopy findings | |
| US9157920B2 (en) | Method for determining biologically active HGF | |
| Ambe et al. | Improving the preoperative diagnostic accuracy of acute appendicitis. can fecal calprotectin be helpful? | |
| Shah et al. | Upper GI endoscopy in subjects with positive fecal occult blood test undergoing colonoscopy: systematic review and meta-analysis | |
| Trevisani et al. | Touch Cytology (A Reliable and Cost-Effective Method for Diagnosis of Helicobacter pylori Infection) | |
| Tzai et al. | Urine prothymosin-alpha as novel tumor marker for detection and follow-up of bladder cancer | |
| Chandrapalan et al. | The role of fecal markers in the investigation of patients with chronic diarrhea | |
| US8697368B2 (en) | Diagnostic marker for lung cancer comprising HPαR as active ingredient |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171024 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |