SE536400C2 - Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor - Google Patents
Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor Download PDFInfo
- Publication number
- SE536400C2 SE536400C2 SE1250158A SE1250158A SE536400C2 SE 536400 C2 SE536400 C2 SE 536400C2 SE 1250158 A SE1250158 A SE 1250158A SE 1250158 A SE1250158 A SE 1250158A SE 536400 C2 SE536400 C2 SE 536400C2
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- hgf
- solid phase
- porous solid
- sample
- binding component
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 title description 5
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 title description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 4
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 title 1
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 claims description 57
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 19
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims description 18
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims description 18
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 claims description 14
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 8
- ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1NC(=O)OC1 ZPLCXHWYPWVJDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 claims description 6
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 4
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 11
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 10
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 3
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 2
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 2
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 2
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 2
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 description 1
- 206010037597 Pyelonephritis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000001555 acute pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N chelidonic acid Natural products OC(=O)C1=CC(=O)C=C(C(O)=O)O1 PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000004920 epithelial cell of skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
- G01N2333/4753—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
20 25 30 536 4ÜÜ vid infektionssjukdomar visats möjligen kunna visa på icke-fungerande terapi på ett tidigt stadium.
Insikt i den kliniska betydelsen och skillnader mellan rekommenderade terapier, differentialdiagnoser mellan inflammatoriska tillstånd i kroppen har varit änmet för ett flertal undersökningar. Ett stort kliniskt problem är att bestämma huruvida infektion eller andra inflarnrnatoriska störningar orsakar sjukdomen. Ett flertal markörer används typiskt av läkare för att ställa rätt diagnos, såsom mikroskopanalys och odling av kropsvätskor, antal vita blodkroppar, C-reaktivt protein, procalcitonin och laktat i plasma. Dock finns det ännu ingen gyllene standard att använda. Problem med att ställa rätt diagnos uppkommer dagligen vid behandling av inflammatoriska störningar i tarmen, ulcus, ledsjukdomar, störningar i centrala nervsystemet, utgjutningar i bukhinna, lungsäck och hjärtsäck, bland annat. Mängden rutinmarkörer som CRP och antal vita blodkroppar kan vara hög vid flera stömingar och odlingar är inte alltid positiva trots en infektion. Höga mängder HGF och dess användning i diagnos och prognos 'lör infektionssjukdomar diskuteras i PCT-ansökan PCT/SE200l/0O183l.
I dessa studier bestämdes dock hela mängden HGF i kroppsvätskoma med ELISA-metod.
Olika studier om HGF har rapporterats. Vissa studier har använt bestämning av HGF i plasma/serum och urin för diagnos och screening av sjukdomar som akut njursvikt, hjärtinfarkt, urinblåsecancer, akut bukspottkörtelinflannnation och akuta och kroniska lungsjukdomar. Av detta skäl har tidigare beskrivna metoder som ELISA och Westem blotting använts. Detektion av stora mängder cytokiner vid inflammatoriska sjukdomar är inget unikt fynd. Dock, i vissa fall, har bestämning av HGF funnits vara en känslig metod som kan detektera specifika kliniska problem mycket enklare än rutlnmetoderna (PCT-ansökan PCT/SE200l/001831).
Tidigare beskrivna metoder, som ELISA och Westem blotting baseras på en interaktion mellan HGF i proverna och en antikropp som binder specifikt till HGF. I ELISA bestäms mängden enkelkedj at och dubbelkedj at HGF. Genom Western blotting bestäms kvaliteten på HGF genom bestämning av synbara molekylvikter i provet. Dessa metoder är dock omständliga och arbetsintensiva. 10 15 20 25 536 4ÜO Den innovativa användningen av biosensorer är användbar, billig och snabb inom detta analysområde. Metoden ytplasmonresonans (BIACORE®) kan användas för detektion av HGFi feces (WO2005/031365). Tekniken kan detektera llGF-nivåer och kvalitet i samma körning.
WO20l0/151222 beskriver en metod för att bestämma närvaro, frånvaro eller mängd biologiskt aktivt eller inaktivt HGF i ett prov, innefattande att bringa provet i kontakt med en gel som innefattar en HGF-bindande komponent från extracellulära matrix eller cellmembran, tillsätta toluidinblått till gelen, och korrelera färgen på gelen och/eller en vätska i kontakt med gelen, med närvaro, frånvaro eller mängd biologiskt aktivt HGF i provet.
-I fallet infektion: I olika organ ökar nivåerna HGF lokalt vid infektionsstället. Hela mängden protein kan detekteras med ELISA. Med Biacore-teknologi är detektion av interaktionsnivån (signaler) till monoklonala, polyklonala antikroppar mot HGF såväl som chipimmobiliserat heparansulfatproteoglykan (HSPG) hög och korrclerar positivt med resultaten erhållna med ELISA.
-I fallet kronisk inflammation: Trots höga mängder HGF som kan hittas med ELISA i prov, observeras icke-signifikant korrelation mellan ELISA och resultat erhållna med Biacore. Det kan vara att ingen eller mycket låg signal dctekteras med Biacore som visar pâ en svag interaktion med liganderna. Interaktionen med protoonkogenreceptorn c-met kan vara hög och signalerna korrclcrar positivt med immobiliseringnivån. Det är en låg signalnivå i HSPG- kanalen. Tillsats av HSPG eller dextransulfat till proverna minst 10 minuter före analys minskar eventuellt inte signalen i HSPG-kanalen. Proteinet kan vara biologiskt inaktivt.
Metod tplattform) -Underliggande mekanism Tillväxtfalctorerna och cytokinerna som hepatocyttillväxtfaktor som produceras vid skador frisätts endokrint och produceras lokalt av intilliggande mesenkymala celler. Proteinet 10 15 20 25 30 535 400 interagerar med cellbindingsspecifika receptom med hög affmitet och skickar signaler in i cellen vilket resulterar i regeneration av det skadade organet. l fallet med HGF krävs en icke- specifik receptor på cellmembranet och den extracellulära matrixen (ECM) för att fånga cytokinet och göra det tillgängligt för den specifika receptom (c-Met-receptorn). Därför fångas inte varianter av HGF som inte uppvisar någon affinitet för H SPG eller andra proteoaminoglykaner av ECM efter frisättning och interagerar eventuellt inte med den specifika receptorn. Därför kan proteinet vara inaktivt trots hög affinítet till receptorn c-Met.
I våra tidigare arbeten har vi studerat HGF med SDS-PAGE, Western blot, ELISA och ytplasmonresonans och visat att HGF -proteinet (endogent och rekombinant) som inte band till proteoaminoglykan (HSPG, heparansulfat) eller dcxtransulfat, inte hade hade någon biologisk effekt i modellerna in vivo (hårtillväxt möss) eller in vitro (CCL-53.1 celler) som användes i vår grupp. Vi har sett skillnader i bindingsaffinitcter till HSPG i ytplasmonresonansmetoden för patienter med akuta infektioner jämfört med kroniska inflammationer. Vår primära slutsats är att i patienter med kronisk inflamrnation är höghierarkiska cytokiner som HGF inaktiverade och därför kan de behöva exogent biologiskt aktivt HGF för att stimulerar regenerering. Som ett exempel har behandling med exogent HGF visats vara fördelaktigt i behandling av vissa fall av kroniska bensår (PCT-ansökan PCT/SEZOOI/Ol 831 ). HGF har befunníts förstärka migration av friska intilliggande hudepitelceller mot det skadade området genom att ändra cellskelettstrukturen hos celler in vitro. Ett förhöjt uttryck av protoonkogenrcceptom met (c- met) i ulcusorrirådet hos patienter med kroniska ulcerationer observeras. Behandling med exogent HGF minskade uttrycket av c-met signifikant. Det farms en negativ korrelation mellan koncentration av biologiskt aktivt endogent HGF i utsöndringar från ulcerationer och uttryck av protoonkogenreceptorn met (c-met). Behandlingar med exogent HGF patienterna med en låg mängd endogent HGF och högt uttryck av protoonkogenreceptorn met (c-met) orsakade kärlproliferation och reduktion av ulcerationsarea. Denna modell av organskada i huden och besläktade händelser kan gälla även för andra organvävnader.
Sammanfattning av uppfinningen I en första aspekt hänför sig föreliggande uppfinning till en metod för att detektera närvaro eller frånvaro av biologiskt aktivt HGF i ett prov, innefattande att bringa ett HGF- 10 15 20 25 535 400 innehållande prov i kontakt med en porös fastfas som i sig har åtminstone en HGF-bindande komponent från extracellulär matrix (ECM) eller cellmembran, såsom en proteoaminoglykan eller en glukosaminoglykan, och en indikatorkomposition innefattande metylrött, bromtymolblått och en kvartenär ammoniumíörening.
I en andra aspekt hänför sig föreliggande uppfinning till en anordning innefattande en porös fastfas som i sig har åtminstone en HGF-bindnande komponent från extracellulär matrix (ECM) eller cellmembran, såsom en proteoaminoglykan eller en glukosaminoglykan, och en indikatorkomposition innefattande metylrött, bromtymolblått och en kvartenär ammoniumförening.
Definitioner och förkortningar Kvalitet på HGF indikerar fiânnågan hos HGF att binda till den extracelliilära matrixen och utöva sin biologiska effekt in vivo.
HGF betyder hepatocyttillväxtfaktor, även benämnd Scatter Factor på engelska.
ECM betyder extracellulär matrix.
HSPG betyder heparansulfatprotcoglykan.
MQ, eller Milli-Q, refererar till vatten som är böggradigt renat och avjoniserat.
PBS betyder fosfatbuffiad saltlösning.
Detaljerad beskrivning av upp/inningen Hepatocyttillväxtfaktor i sin biologiskt aktiva form har hög affmitet till proteoaminoglykaner som heparansulfatproteoglykan. och dextransulfat. Denna affmitet liknar bindningen av tillväxtfaktor till cellmembranet före interaktion med dess membranbindande receptor. 10 l5 20 25 535 4ÜÜ Denna affinitet används i följ ande aspekter och utföringsformer av föreliggande uppfinning.
Baserat på de tidigare resultaten med observationer från ytplasmonresonansmetoden som visade att cytokincr med hög affinitet till ECM-komponenter frisattes vid akut infektion, har uppfinnarna framställt en plattform genom tillsats av proteoarninoglykan i en basal fast matris, såsom cellulosa. Affrniteten för protein till proteoaminoglycan visualiseras därefter med fárgförändringar i närvaro av indikatorer innefattande bromtymolblått och en kvartenär arnmoniurnfórening och/eller metylrött.
Uppfinningen använder en kudd-fas innefattande innehållande en HGF-bindande komponent från den extracellulära matrixen eller cellmembran, företrädesvis dextransulfat eller HSPG.
Kudden är tillverkad av en porös fast fas, såsom cellulosa, nitrocellulosa eller papper. En for närvarande föredragen porös fast fas är ett tjockt cellulosa-baserat filterpapper med stor laddningskapacitet och genomsnittlig retention filterpapper 598 Schleicher & Schull. Följande recept föredras för närvarande: Den porösa fasta fasen impregneras med en lösning av 0,02% metylrött (Merck), 0,4% kvartenär arnrnoniumförening (Merck) och 0,l% bromtymolblått (Panreac) i metanol. All kemikalier fixeras till cellulosamatrisen genom att tillsätta 0,5% beläggnisngstabilisator (Acros). Pappren torkas i en ström varm luft.
Därefter dränks den porösa fasta fasen under 5 till l0 sekunder med en lösning sammansatt av 0,1 mM dextransulfat (Fluka) i avj oniserat destillerat vatten (MQ) och torkas i en ström av varm luft.
Den värmetorkade porösa fasta fasen innefattande proteoaminoglykan med indikatorkomposition kan senare fixeras på dubbelsidigt adhesivt papper och immobiliseras på ett fast underlag, såsom ett plastband, och skäras till remsor i storlek lämplig för användning, såsom med en bredd om 6 mm. 10 15 20 25 536 400 Vid användning, för enkel hantering, överförs en mängd feces till 0,5 ml spädningsbuffert (0,1 M PBS pH 7,4) och en testremsa innefattande en porös fastfas immobiliserad på ctt fast underlag doppas i lösningen. När testremsorna doppas i lösning innehållande HGF, beroende på mängd analyt, reagerar specifikt med dess konjugat eller receptor till exempel dextransulfat. Därför ändrar remsan färg från gul till olika observerbara intensiteter av grönt till marinblått.
De andra komponenterna av extracellulär matrix (glyko saminoglykaner) kan användas, men dextransulfat är billigare och visar liknande resultat. llppflnningenliänfór sig till en metod innefattande att doppa ner en remsa i ett biologiskt prov eller utspätt med buffert, företrädesvis PBS 0,5 M till 0,15 M, pH 6,00-8,00, varvid biologiskt aktivt HGF binder till dextransulfat.
Kvarvarande droppar av prov på remsans kanter avlägsnas genom att försiktigt knacka mot läskpapper. Interaktion mellan dextransulfat och indikator ändrar färgen på kudden från gult till ett spektrumav grön färg till mörkblått som positiv signal för närvaro av HGF.
Det finns en specifik interaktion mellan biologiskt aktivt HGF och dextransulfat i närvaro av indikatorer i det porösa fastfasmediet. Eftersom provet innehåller biologiskt aktivt HGF som binder till dextransulfat, ändras färgen på den porösa fasta fasen.
Intensiteten på den gröna färgen beror på affmiteten för HGF till dextransulfat och blockerand Hïj oner i den porösa fasta fasen.
Mängden HGF, som observerad intensitet av grön färg i den porösa fasta fasen, kan bestämmas genom jäiniörande mätning av HGF med användning av en standardmetod, till exempel en kvantitativ ELISA-metod. En eller flera referenslösningar med känt HGF-irmehåll 10 15 20 25 536 IlÜÜ används valfritt för att utvärdera reaktionsresultatet. En negativ referens kan användas (till exempel vatten eller PBS). En positiv referens kan vara ett prov av frisk kroppsvätska eller en HGF-innehållande produkt med känt HGF-innehåll.
Genom metoden enligt uppfinningen år det möjligt att snabbt särskilja mellan en akut inflammation såsom en bakteriell infektion i ett organ från en kronisk inflammation.
Metoderna och produkterna kan användas för att analysera följande: - Skillnader mellan septisk artrit och icke-septisk eller reaktiv artrit i leder - Skillnader mellan akut smittsam magtarmkatarr och kronisk inflammatorisk tarmsjukdom och andra orsaker till diarré - Skillnader mellan akut septisk hjärnhinneinflarmnation och icke-specifik pleocytos i cerebrospinalvätska - Skillnader mellan akut njursvikt såväl som pyelonefrit och distal urinvägsinfektion såväl som kronisk njurskada - Skillnadermellan lunginflammation och kronisk obstruktiv lungsjukdom i kondenserad utandningsluft - Skillnader mellan septisk inflammation i lungsäcksutgjutning och askites och icke- septisk inflammation - Närvaro av HGF i serum och plasma - Standradutvärdering av biologiskt aktivt HGF i läkemedel och blodprodukter - Övervakning av behandling med antibiotika - Lokalisering av infektiöst fokus vid sjukdom
Claims (1)
1. 0 15 20 25 30 536 4Ü0 PATENTKRAV . En metod för att bestämma närvaro, frånvaro eller mängd av biologiskt aktivt HGF i ett prov, innefattande stegen - bringa provet i kontakt med en porös fast fas innefattande en HGF-bindande komponent från extraeellulär matrix (ECM) eller eellmembran, samt en indikatorkomposition innefattande bromtymolblått, en kvartenär annnoniumförening, och metylrött, - korrelera färgen på den porösa fasta fasen med närvaron, frånvaron eller mängden biologiskt aktivt HGF i provet. . En anordning innefattande en porös fast fas innefattande åtminstone en HGF -bindande komponent från extraeellulär matrix (ECM) eller eellmembran, samt en indikatorkomposition innefattande bromtymolblått, en kvartenär arnmoniurniörening, och metylrött. . En metod enligt patentkrav 1 vari den HGF-bindande komponenten är en proteoaminoglykan eller glykosaminoglykan. . En metod enligt patentkrav 3, vari den HGF-bindande komponenten är heparansulfatproteoglykan eller dextransulfat. . En metod enligt något av patentkraven 1, 3 eller 4, vari nämnda prov är en vävnad, kroppsvätska eller exkrement från en patient. . En metod enligt något av patentkraven 1, 3-5, vari nämnda prov är en farmaeeutisk produkt. . En metod enligt något av patentkraven 1, 3-6, vari korreleringen av färgen på den porösa fasta fasen med närvaron, frånvaron eller mängden biologiskt aktivt HGF i provet inkluderar en jämförelse av färgen hos den porösa fasta fasen med en porös fast fas som har bringats i kontakt med åtminstone en referenslösning med känt HGF- innehåll. 535 4ÜÜ 10 8. En anordning enligt patentkrav 2, vari den HGF-bindande komponenten är en proteoaminoglykan eller glykosaminoglykan. 5 9. En anordning enligt patentkrav 8, vari den HGF-bindande komponenten år heparansulfatproteoglykan eller dextransulfat. 10. En anordning enligt något av patentkraven 2, 8 eller 9, vari den porösa fasta fasen innefattar cellulosa. 1 O
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE1250158A SE536400C2 (sv) | 2012-02-22 | 2012-02-22 | Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor |
CN201380014381.2A CN104246509B (zh) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | 快速检测生物液体中的肝细胞生长因子的新方法 |
PCT/SE2013/050157 WO2013126013A1 (en) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | New method for rapid detection of hepatocyte growth factor in biological fluids |
EP13751847.8A EP2817636B1 (en) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | New method for rapid detection of hepatocyte growth factor in biological fluids |
US14/380,153 US9435815B2 (en) | 2012-02-22 | 2013-02-22 | Method for rapid detection of hepatocyte growth factor in biological fluids |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE1250158A SE536400C2 (sv) | 2012-02-22 | 2012-02-22 | Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE1250158A1 SE1250158A1 (sv) | 2013-08-23 |
SE536400C2 true SE536400C2 (sv) | 2013-10-08 |
Family
ID=49006061
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE1250158A SE536400C2 (sv) | 2012-02-22 | 2012-02-22 | Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9435815B2 (sv) |
EP (1) | EP2817636B1 (sv) |
CN (1) | CN104246509B (sv) |
SE (1) | SE536400C2 (sv) |
WO (1) | WO2013126013A1 (sv) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3532849B1 (en) * | 2016-10-31 | 2022-06-01 | PEAS Institut AB | Device and method for detecting a bacterial infection |
CN116413431A (zh) * | 2020-06-24 | 2023-07-11 | 湖南新大陆生物技术有限公司 | 一种改良型特异性生长因子检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5183742A (en) * | 1984-02-24 | 1993-02-02 | Dai Nippon Insatsu Kabushiki Kaisha | Test device for detecting glucose, protein urobilinogen, and/or occult blood in body fluids and/or determining the PH thereof |
US5656443A (en) * | 1994-07-29 | 1997-08-12 | Long Island Jewish Medical Center | Method of diagnosing bladder cancer |
US5660790A (en) * | 1996-08-13 | 1997-08-26 | Litmus Concepts, Inc. | PH and amine test elements |
US5827673A (en) * | 1996-08-13 | 1998-10-27 | Akira Matsumori | Method of detecting myocardial infarction |
EP1840575A1 (en) | 2000-08-28 | 2007-10-03 | Damavand Wound AB | Kit for determining HGF |
ES2321105T3 (es) | 2003-09-29 | 2009-06-02 | Peas Institut Ab | Determinacion rapida de formas diferentes del factor de crecimiento de hepatocitos (hgf) en los fluidos corporales. |
US9157920B2 (en) | 2009-06-26 | 2015-10-13 | Peas Institut Ab | Method for determining biologically active HGF |
EP2504705B1 (en) * | 2009-11-27 | 2017-04-12 | Roche Diagnostics GmbH | Method for diagnosing and monitoring cardiac ischemia in patients with acute chest pain and without myocardial infarction |
-
2012
- 2012-02-22 SE SE1250158A patent/SE536400C2/sv not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-02-22 CN CN201380014381.2A patent/CN104246509B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-02-22 WO PCT/SE2013/050157 patent/WO2013126013A1/en active Application Filing
- 2013-02-22 EP EP13751847.8A patent/EP2817636B1/en not_active Not-in-force
- 2013-02-22 US US14/380,153 patent/US9435815B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SE1250158A1 (sv) | 2013-08-23 |
US9435815B2 (en) | 2016-09-06 |
CN104246509A (zh) | 2014-12-24 |
WO2013126013A1 (en) | 2013-08-29 |
EP2817636A1 (en) | 2014-12-31 |
EP2817636B1 (en) | 2019-02-20 |
US20150037908A1 (en) | 2015-02-05 |
CN104246509B (zh) | 2017-10-24 |
EP2817636A4 (en) | 2015-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Silva-Ramos et al. | Urinary ATP may be a dynamic biomarker of detrusor overactivity in women with overactive bladder syndrome | |
Ristikankare et al. | Serum cystatin C in elderly cardiac surgery patients | |
Irie et al. | Levels of the oxidative stress marker γ-glutamyltranspeptidase at different stages of nonalcoholic fatty liver disease | |
US11041864B2 (en) | Method for prediction of prognosis of sepsis | |
US20120276059A1 (en) | Fecal lactoferrin as a biomarker for determining disease severity and for monitoring infection in patients with clostridium difficile disease | |
RU2008103988A (ru) | Способ диагностики рассеяного склероза | |
Amara et al. | Circadian rhythm disruption aggravates DSS-induced colitis in mice with fecal calprotectin as a marker of colitis severity | |
CN108956998A (zh) | 一种应用免疫荧光干式定量法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 | |
JP2010521694A (ja) | 腎傷害のための診断テスト | |
US9157920B2 (en) | Method for determining biologically active HGF | |
Zivancevic-Simonovic et al. | Transforming growth factor beta 1 (TGF-β 1) in COVID-19 patients: relation to platelets and association with the disease outcome | |
SE536400C2 (sv) | Ny metod för snabb detektion av hepatocyttillväxtfaktor i biologiska vätskor | |
AU2012318345A1 (en) | Clostridium difficile dehydrogenase and toxin as a biomarker | |
Cenni et al. | The use of calgranulin-C (S100A12) and fecal zonulin as possible non-invasive markers in children with inflammatory bowel disease: A clinical study | |
Chang et al. | Intra-abdominal hypertension does not predict renal recovery or in-hospital mortality in critically ill patients with acute kidney injury | |
Liao et al. | Triggering receptor in myeloid cells (TREM-1) specific expression in peripheral blood mononuclear cells of sepsis patients with acute cholangitis | |
JP2011503631A (ja) | 創傷感染の診断マーカー | |
CN206772986U (zh) | 一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒 | |
RU2734670C1 (ru) | Способ диагностики осложнений вирусной и бактериальной этиологии у больных хроническим лимфолейкозом | |
CN109596836A (zh) | 一种lbp检测诊断试剂检测系统及方法 | |
CN103698533A (zh) | Apo-A1蛋白在制备肺癌早期筛查或诊断用血清标记物的用途 | |
Ashour et al. | Serum and ascitic fluid high sensitive C reactive protein as prognostic marker in patients with spontaneous bacterial peritonitis | |
Ilyosovna | The Importance of Uric Acid in the Development of Cardiovascular Diseases | |
JPH1132793A (ja) | 尿路感染症の診断キット | |
JP2017156174A (ja) | 尿路上皮癌診断薬及びその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NUG | Patent has lapsed |