CN104232706A - 一种生产低聚果糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生产低聚果糖的方法，包括（1）固定化果糖基转移酶培养，（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖。本发明的优点是技术先进，果糖基转移酶经过固定化后，可以提高其利用率，采用分批反应法时，可以反复使用70次以上。柱式反应法，每公斤酶可以生产白砂糖浓度（Brix）≥50的FOS糖浆1T以上，含量≥55%的FOS糖浆。过滤液经再次稀释，经过固定化酵母细胞的转化，可以得到含量60—90%的FOS糖浆。而且FOS产品不必经过活性炭脱色，不需离子交换脱盐，直接经过浓缩获得Brix≥75，整个工艺简便，操作便利，生产成本明显下降。

Description

一种生产低聚果糖的方法

技术领域

本发明涉及一种功能性食品配料的制备方法，具体说是一种基于离子交换树脂固定果糖基转移酶法和固定化酵母细胞，以蔗糖为原料，工业化生产高纯度蔗果低聚糖（低聚果糖）的方法。 

背景技术

低聚果糖（Fructo－oligosaccharides，简称FOS），又称寡果糖或蔗果低聚糖，分子式为G-F-Fn，n＝1～3（其中G为葡萄糖基，F为果糖基），是由蔗糖和1～3个果糖基通过β2，1键与蔗糖中的果糖基结合而成的蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖（分别简称为GF2、GF3、GF4）及其混合物。

作为甜味剂和食品添加剂，低聚果糖是第一个通过 FDA审核作为公认安全级 (GRAS) 的功能性低聚糖，其低龋齿性、难消化性及双歧杆菌增殖性已得到证实，在非消化性功能食品中 ，低聚果糖是符合益生元标准 (即双歧杆菌促生素) 的典型双歧因子，具有双向调节体内菌群、降低血脂、促进维生素的合成、保护肝脏、促进Ca、Mg、Fe等矿物质吸收、防止肥胖、防止龋齿和美容的作用，是近 10年来国际市场上广泛应用的功能性食品配料 。

目前国内工业化生产FOS的现有技术只有液体深层发酵法。即用液体深层发酵法培养黑曲霉，这种微生物能分泌果糖基转移酶，从培养液分离收集黑曲霉菌体后，不经任何处理，直接投入蔗糖溶液中，使其转化为FOS。该法的缺点是产酶菌丝体只能利用一次，在FOS生产过程中，由于菌丝体及其培养基成分的存在并参与反应，使产品色度及盐分过高，需要活性炭脱色和离子交换树脂脱盐等后处理工序，使整个工艺复杂，成本提高。而菌体细胞的代谢物就只能作为杂质留在FOS产品中，无法除去，影响产品质量。

目前，虽有 固定化酶法生产低聚果糖的专利报导（CN1335402A），但此法只注重了低含量的低聚果糖生产，且指标含量只能维持在57%以下，载体使用成本偏高，处理过程需要先做出载体，然后再进行酶液交联，过程工艺复杂。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单，成本低，生产的FOS产品杂质少，低聚果糖含量高的生产方法。

为解决上述技术问题，本发明的一种生产低聚果糖的方法，包括以下步骤：

（1）固定化果糖基转移酶培养，包括以下步骤：选取具有能分泌果糖基转移酶的优良菌株，在合适的培养基中培养，然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化钙溶液，调ph6.5-7.2，30℃下交联反应8-12h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶。

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，在合适的培养基中培养，将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成6—8%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化20-30分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞。

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph5-6，温度48℃-55℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph5-6，温度28℃-35℃，反应10h左右，即可获得含量70%—90%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以20%—60%（w/w）的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，温度30—55℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量0.1-3m3/h下通过此柱，反应8—48h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以10%—40%（w/w）的过滤溶液在ph4.5-7.5，温度20—35℃下通过此柱，调节溶液的流量0.1-3m3/h下通过此柱，反应8—48h，，可控制FOS成分达到60—90%的要求。

作为对本技术方案的进一步改进，固定化果糖基转移酶培养，所述的合适的培养基培养包括以下步骤：

A.斜面培养基

土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天。

B.种子培养基

 蔗糖 5%—20%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、 硫酸镁  0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵16h。

C.发酵培养基

蔗糖 5%—25%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、 硫酸镁  0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

作为对本技术方案的进一步改进，固定化酵母细胞培养，所述的合适的培养基培养包括以下步骤：

A.斜面培养基

麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天。

B.种子培养基

 葡萄糖 1%—20%、蛋白胨 0.1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、 硫酸镁  0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01% —1%、消泡剂0.02%，30℃发酵16-20h。

C.发酵培养基

 葡萄糖1%—20%、蛋白胨0.1%—10%、玉米浆0.1%—5%、硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01%—1%、消泡剂0.02%，30℃发酵30-35h。

本发明的优点是技术先进，果糖基转移酶经过固定化后，可以提高其利用率，采用分批反应法时，可以反复使用70次以上。柱式反应法，每公斤酶可以生产白砂糖浓度（Brix）≥50的FOS糖浆1T以上，含量≥55%的FOS糖浆。过滤液经再次稀释，经过固定化酵母细胞的转化，可以得到含量60—90%的FOS糖浆。而且FOS产品不必经过活性炭脱色，不需离子交换脱盐，直接经过浓缩获得Brix≥75，整个工艺简便，操作便利，生产成本明显下降。

附图说明

图１是本发明的的工艺流程图。

具体实施方式

一种生产低聚果糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）固定化果糖基转移酶培养，包括以下步骤：选取具有能分泌果糖基转移酶的优良菌株，固定化果糖基转移酶培养，培养包括以下步骤。

A．斜面培养基培养，土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天。

B．种子培养基培养，蔗糖 5%—20%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、 硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵16h。

C．发酵培养基培养，蔗糖 5%—25%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化钙溶液，调ph6.5-7.2，30℃下交联反应8-12h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶。

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，所述的合适的培养基培养包括以下步骤：

A．斜面培养基培养，麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天。

B．种子培养基培养，葡萄糖 1%—20%、蛋白胨 0.1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、 硫酸镁  0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01% —1%、消泡剂0.02%，30℃发酵16-20h。

C．发酵培养基培养，葡萄糖1%—20%、蛋白胨0.1%—10%、玉米浆0.1%—5%、硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01%—1%、消泡剂0.02%，30℃发酵30-35h。

将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成6—8%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化20-30分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞。

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph5-6，温度48℃-55℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph5-6，温度28℃-35℃，反应10h左右，即可获得含量70%—90%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以20%—60%（w/w）的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，温度30—55℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量0.1-3m³/h下通过此柱，反应8—48h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以10%—40%（w/w）的过滤溶液在ph4.5-7.5，温度20—35℃下通过此柱，调节溶液的流量0.1-3m³/h下通过此柱，反应8—48h，，可控制FOS成分达到60—90%的要求。

实施例1

（1）选取黑曲霉（A.niger）菌种，进行固定化果糖基转移酶培养。

A．斜面培养基培养，土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天。

B．种子培养基培养， 蔗糖 5%、豆粕粉 1%，玉米浆 0.1%，玉米粉0.1%，硫酸镁0.01%，磷酸氢二钾0.01%，消泡剂0.03%，30℃发酵16h。

C．发酵培养基培养，蔗糖 5%、豆粕粉 1%、玉米浆 0.1%、玉米粉0.1%、硫酸镁0.01%，磷酸氢二钾0.01%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每100U酶液加入0.5g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.08%的戊二醛溶液，后再加入0.02%的氯化钙溶液，调ph6.5，30℃下交联反应8h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶。

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，

A．斜面培养基培养，麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天。

B．种子培养基培养，葡萄糖 1%，蛋白胨 0.1%，玉米浆 0.1%，硫酸镁0.01%，磷酸氢二钠0.01%，消泡剂0.02%，30℃发酵16h。

C．发酵培养基培养，葡萄糖1%，蛋白胨0.1%，玉米浆0.1%，硫酸镁0.01%，磷酸氢二钠0.01%，消泡剂0.02%，30℃发酵30h。

将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成6%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化20分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞。

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph5，温度48℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph5，温度28℃，反应10h左右，即可获得含量70%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以20%（w/w）的蔗糖溶液在ph4.5，温度30℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量0.1m³/h下通过此柱，反应8h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以10%%（w/w）的过滤溶液在ph4.5，温度20℃下通过此柱，调节溶液的流量0.1m³/h下通过此柱，反应8h，，可控制FOS成分达到60%的要求。

实施例2

（1）选取黑曲霉（A.niger）菌种，进行固定化果糖基转移酶培养；

A．斜面培养基培养，土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天。

B．种子培养基培养， 蔗糖20%、豆粕粉10%、玉米浆5%、玉米粉5%、 硫酸镁1%，磷酸氢二钾1%、消泡剂0.03%，30℃发酵16h。

C．发酵培养基培养，蔗糖25%、豆粕粉10%、玉米浆5%、玉米粉5%、硫酸镁1%，磷酸氢二钾1%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每150U酶液加入1.5g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.04%的氯化钙溶液，调ph7.2，30℃下交联反应12h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶。

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，

A．斜面培养基培养，麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天。

B．种子培养基培养，葡萄糖20%、蛋白胨10%、玉米浆5%、 硫酸镁  1%，磷酸氢二钠1%、消泡剂0.02%，30℃发酵20h。

C．发酵培养基培养，葡萄糖20%、蛋白胨10%、玉米浆5%、硫酸镁01%，磷酸氢二钠1%、消泡剂0.02%，30℃发酵35h。

将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成6—8%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化30分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞。

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph6，温度55℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph6，温度35℃，反应10h左右，即可获得含量90%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以60%（w/w）的蔗糖溶液在ph7.5，温度55℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量3m³/h下通过此柱，反应48h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以40%（w/w）的过滤溶液在7.5，温度35℃下通过此柱，调节溶液的流量3m³/h下通过此柱，反应48h，，可控制FOS成分达到90%的要求。

实施例3

（1）选取点青霉（A.Penicillium notatum ）菌种，进行固定化果糖基转移酶培养；

A．斜面培养基培养，土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天。

B．种子培养基培养， 蔗糖 15%、豆粕粉 6%、玉米浆 3%、玉米粉4%、 硫酸镁0.6%，磷酸氢二钾0.5%、消泡剂0.03%，30℃发酵16h。

C．发酵培养基培养，蔗糖15%、豆粕粉 6%、玉米浆 3%、玉米粉3%、硫酸镁0.6%，磷酸氢二钾0.6%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每130U酶液加入1g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.11%的戊二醛溶液，后再加入0.03%的氯化钙溶液，调ph7.0，30℃下交联反应10h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶。

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，

A．斜面培养基培养，麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天。

B．种子培养基培养，葡萄糖 15%、蛋白胨 6%、玉米浆 3%、 硫酸镁  0.6%，磷酸氢二钠0.6%、消泡剂0.02%，30℃发酵16-20h。

C．发酵培养基培养，葡萄糖15%、蛋白胨6%、玉米浆3%、硫酸镁0.5%，磷酸氢二钠0.5%、消泡剂0.02%，30℃发酵32h。

将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成7%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化25分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞。

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph5.5，温度52℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph5.5，温度32℃，反应10h左右，即可获得含量78.5%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以40%（w/w）的蔗糖溶液在ph5.5，温度42℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量1.5m³/h下通过此柱，反应25h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以25%（w/w）的过滤溶液在ph5.5，温度28℃下通过此柱，调节溶液的流量1.5m³/h下通过此柱，反应20h，，可控制FOS成分达到86.1%的要求。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (3)

1.一种生产低聚果糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）固定化果糖基转移酶培养，包括以下步骤：选取具有能分泌果糖基转移酶的优良菌株，在合适的培养基中培养，然后将培养得到的大量菌丝体进行破壁，用离心法和超滤法等将酶分离纯化，果糖基转移酶的酶液经HPLC测定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔阴离子交换树脂载体，搅拌混匀，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化钙溶液，调ph6.5-7.2，30℃下交联反应8-12h，后过滤，洗涤，既得固定化果糖基转移酶；

（2）固定化酵母细胞培养，包括以下步骤：选取能分泌葡萄糖转移酶的酵母菌种，在合适的培养基中培养，将发酵培养的酵母细胞经过离心制得酵母细胞湿菌体，将海藻酸钠配成6—8%的溶液，经消毒处理后，与湿菌体按比例在真空条件下混匀，然后利用压力喷雾法使混合液通过孔径为0.6mm的喷嘴，均匀落入10%的氯化钙溶液中，形成直径为2-3mm范围内的凝胶珠，硬化20-30分钟后，过滤分离得到固定化酵母细胞；

（3）通过分批反应法或柱式反应法利用固定化果糖基转移酶、固定化酵母细胞生产低聚果糖，包括以下步骤：按照分批反应法，在反应罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基转移酶，控制反应液ph5-6，温度48℃-55℃，反应10h左右，进行过滤，将过滤液稀释25%，加入8%的固定化酵母细胞，控制反应液ph5-6，温度28℃-35℃，反应10h左右，即可获得含量70%—90%的FOS产品，反应结束，用筛网过滤反应液，可以分离回收固定化酶，用于下一批原料的生产；按照柱式反应法，将固定化果糖基转移酶装入柱中，以20%—60%（w/w）的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，温度30—55℃下通过此柱，调节蔗糖溶液的流量0.1-3m³/h下通过此柱，反应8—48h，过滤，得到过滤溶液；将固定化酵母细胞装入柱中，以10%—40%（w/w）的过滤溶液在ph4.5-7.5，温度20—35℃下通过此柱，调节溶液的流量0.1-3m³/h下通过此柱，反应8—48h，，可控制FOS成分达到60—90%的要求。

2.根据权利要求１所述的生产低聚果糖的方法，其特征在于：固定化果糖基转移酶培养，所述的合适的培养基培养包括以下步骤：

A．斜面培养基

土豆200 g/L、琼脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30℃下培养5天；

B．种子培养基

 蔗糖 5%—20%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、 硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵16h；

C．发酵培养基

蔗糖 5%—25%、豆粕粉 1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钾0.01% —1%、消泡剂0.03%，30℃发酵24h。

3.根据权利要求1所述的生产低聚果糖的方法，其特征在于：固定化酵母细胞培养，所述的合适的培养基培养包括以下步骤：

A．斜面培养基

麦芽汁12 g/L、琼脂15 g/L，30℃下培养2天；

B．种子培养基

 葡萄糖 1%—20%、蛋白胨 0.1%—10%、玉米浆 0.1%—5%、 硫酸镁  0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01% —1%、消泡剂0.02%，30℃发酵16-20h；

C．发酵培养基

 葡萄糖1%—20%、蛋白胨0.1%—10%、玉米浆0.1%—5%、硫酸镁0.01% —1%，磷酸氢二钠0.01%—1%、消泡剂0.02%，30℃发酵30-35h。