CN104231283B - 一种用活性peg制备丝素纳米颗粒的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,它是利用酶溶解将透析过的丝素溶液降解至较小分子量,再将活化的PEG溶液在低温下滴加到含有四硼酸钠的丝素溶液中,混合溶液静置后得到丝素纳米颗粒溶液,经离心洗涤干燥,得到单分散性良好的丝素纳米颗粒。本发明利用酶降解控制丝素蛋白分子量的分布,并利用活性PEG促进丝素蛋白自组装,得到的丝素颗粒粒径小,分布均匀,安全无毒。
Description
技术领域:
本发明属于纺织材料技术领域,特别涉及一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法。
背景技术:
丝素蛋白是一种性能优良的生物大分子,丝素蛋白不溶于水、乙醇等有机溶剂,但经脱胶,溶解于某些中性盐的浓溶液后,透析固化容易得到粉末、膜、颗粒和凝胶等不同形态的材料。以丝素蛋白为原料制备的丝素纳米颗粒具有良好的透氧性、药物渗透性、无毒性、无刺激性,具有良好的生物相容性并可以被生物降解。
制备丝素纳米颗粒的方法主要有乳化法、去溶剂化法、共混膜法、自组装法、盐析法和机械粉碎法。乳化法需要加入和去除有机溶剂,残留的有机溶剂可能会引起毒性。去溶剂法是加入天然盐或者乙醇,再经离心提纯超声过滤冻干等手段得到丝素纳米颗粒,方法较复杂。共混膜法是将有机溶剂与蛋白质溶液混合后风干成膜,再溶解去除有机溶剂得到丝素纳米颗粒,但颗粒粒径较大,可达微米级别。机械粉碎法是利用多次机械粉碎制得纳米颗粒,方法时间长,粒径不可控。
自组装法是目前较有发展前景的方法,当体系拆分成相应的亚单元时,在一定的条件下,这些亚单元会重新混合组合成完整结构。丝素蛋白质自组装主要依靠氢键、静电相互作用、疏水作用等次级键的作用组成丝素纳米颗粒。
发明内容:
本发明的目的是提供一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,该方法利用酶降解控制丝素蛋白分子量的分布,并利用活性PEG溶液促进丝素蛋白自组装,得到的丝素颗粒粒径小,分布均匀,安全无毒。
本发明的目的通过如下技术方案实现:
一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,包括以下步骤:
(1)将蚕丝进行脱胶、溶解、透析处理后得到丝素蛋白溶液,再稀释,加入酶溶液,酶解得到降解的丝素蛋白溶液;
(2)将降解的丝素蛋白溶液中加入硼酸钠,低温处理,与活性PEG溶液混合均匀,室温静置,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
(3)将丝素纳米颗粒进行离心洗涤干燥,得到单分散性较好的丝素纳米颗粒。
作为上述技术方案的优选,步骤1所述的丝素蛋白溶液浓度为0.5-3%。
作为上述技术方案的优选,步骤1所述的酶为弹性蛋白酶,酶解时间为2-20min。
作为上述技术方案的优选,步骤1所述的降解的丝素蛋白分子量为20-100kDa。
作为上述技术方案的优选,步骤2所述的硼酸钠的质量为0.4-0.6g。
作为上述技术方案的优选,步骤2所述的低温的温度为4-8℃。
作为上述技术方案的优选,步骤2所述的活性PEG溶液质量分数为2-5%。
作为上述技术方案的优选,步骤2所述的混合方法为超声处理,处理时间10-30min。
作为上述技术方案的优选,步骤3所述的洗涤的溶剂为乙醇。
作为上述技术方案的优选,步骤2所述的丝素纳米颗粒的粒径为249-681nm。
本发明的有益效果在于:利用酶降解可有效控制丝素分子量的分布,利用活性PEG可促进丝素蛋白进行自组装形成纳米颗粒,得到的丝素颗粒粒径小,分布均匀,安全无毒。本发明方法中并未涉及有毒物质,对环境友好,生态环保。
具体实施方式:
为了加深对本发明的理解,下面结合实施例对本发明作进一步详述,该实施例仅用于解释本发明,并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例1:
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶,溴化锂溶液溶解,透析袋透析处理后得到浓度为3%的丝素蛋白溶液,再将浓度稀释至1%后,加入弹性蛋白酶溶液,酶解20min,得到分子量为70-100kDa的丝素蛋白溶液;
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.6g的硼酸钠,调节温度至4℃,与质量分数为5%的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀,室温静置12小时,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
将丝素纳米颗粒溶液进行离心,乙醇洗涤,干燥得到平均粒径为681nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例2:
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶,溴化锂溶液溶解,透析袋透析处理后得到浓度为0.5%的丝素蛋白溶液,再将浓度稀释至0.1%后,加入弹性蛋白酶溶液,酶解2min,得到分子量为15-20kDa的丝素蛋白溶液;
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠,调节温度至8℃,与质量分数为2%的活性PEG溶液用超声处理10min混合均匀,室温静置12小时,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
将丝素纳米颗粒溶液进行离心,乙醇洗涤,干燥得到平均粒径为249nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例3:
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶,溴化锂溶液溶解,透析袋透析处理后得到浓度为1%的丝素蛋白溶液,再将浓度稀释至0.3%后,加入弹性蛋白酶溶液,酶解5min,得到分子量为40-60kDa的丝素蛋白溶液;
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.5g的硼酸钠,调节温度至5℃,与质量分数为3%的活性PEG溶液用超声处理20min混合均匀,室温静置12小时,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
将丝素纳米颗粒溶液进行离心,乙醇洗涤,干燥得到平均粒径为452nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例4:
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶,溴化锂溶液溶解,透析袋透析处理后得到浓度为2%的丝素蛋白溶液,再将浓度稀释至0.5%后,加入弹性蛋白酶溶液,酶解10min,得到分子量为30-57kDa的丝素蛋白溶液;
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠,调节温度至6℃,与质量分数为4%的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀,室温静置12小时,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
将丝素纳米颗粒溶液进行离心,乙醇洗涤,干燥得到平均粒径为375nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
实施例5:
将蚕丝用碳酸氢钠脱胶,溴化锂溶液溶解,透析袋透析处理后得到浓度为1%的丝素蛋白溶液,再将浓度稀释至0.2%后,加入弹性蛋白酶溶液,酶解20min,得到分子量为小于20kDa的丝素蛋白溶液;
将降解的丝素蛋白溶液中加入0.4g的硼酸钠,调节温度至4℃,与质量分数为3%的活性PEG溶液用超声处理30min混合均匀,室温静置12小时,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
将丝素纳米颗粒溶液进行离心,乙醇洗涤,干燥得到平均粒径为327nm的单分散性较好的丝素纳米颗粒。
Claims (10)
1.一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)将蚕丝进行脱胶、溶解、透析处理后得到丝素蛋白溶液,再稀释,加入酶溶液,得到降解的丝素蛋白溶液;
(2)将降解的丝素蛋白溶液中加入硼酸钠,低温处理,与活性PEG溶液混合均匀,室温静置,去除上清液,得到丝素纳米颗粒溶液;
(3)将丝素纳米颗粒进行离心洗涤干燥,得到单分散性较好的丝素纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤1所述的丝素蛋白溶液浓度为0.5-3%。
3.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤1所述的酶为弹性蛋白酶,酶解时间为2-20min。
4.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤1所述的降解的丝素蛋白分子量为20-100kDa。
5.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤2所述的硼酸钠的质量为0.4-0.6g。
6.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤2所述的低温的温度为4-8℃。
7.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤2所述的活性PEG溶液质量分数为2-5%。
8.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤2所述的混合方法为超声处理,处理时间10-30min。
9.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤3所述的洗涤的溶剂为乙醇。
10.根据权利要求1所述的一种用活性PEG制备丝素纳米颗粒的方法,其特征在于,步骤2所述的丝素纳米颗粒的粒径为249-681nm。
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