CN104220067A - 可用于治疗病毒性疾病的组合物 - Google Patents

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M.W施塔尔赫特
D.哈朱达
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Abstract

本发明涉及包含丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制剂和一种或多种额外的治疗上有效的药剂的组合物。还公开了这样的组合物作为HCV抑制剂的用途以及通过施用这样的组合物来治疗HCV感染的方法。

Description

可用于治疗病毒性疾病的组合物
技术领域
本发明涉及包含丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制剂和一种或多种额外的治疗上有效的药剂的组合物。还公开了这样的组合物作为HCV抑制剂的用途以及通过施用这样的组合物来治疗HCV感染的方法。
背景技术
在大量被感染的个体中，丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致慢性肝病(诸如肝硬化和肝细胞癌)的主要健康问题。HCV病毒粒子是有包膜的正链RNA病毒，其具有约9600个碱基的单寡核糖核苷酸基因组序列，后者编码约3,010个氨基酸的多蛋白。HCV基因的蛋白产物由结构蛋白C、E1和E2，以及非结构蛋白NS2、NS3、NS4A和NS4B、和NS5A和NS5B组成。据信非结构(NS)蛋白为病毒复制提供催化机制。NS3蛋白酶释放NS5B，即来自多蛋白链的RNA依赖性的RNA聚合酶。HCV NS5B聚合酶是从单链病毒RNA合成双链RNA所必需的，所述单链病毒RNA在HCV的复制循环中充当模板。因此，认为NS3蛋白酶和NS5B聚合酶是HCV复制复合物中的必要组分。参见K. Ishii, 等人, “Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein: Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding,”Hepatology, 29: 1227-1235 (1999); V. Lohmann, 等人, “Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of the Hepatitis C Virus,”Virology, 249: 108-118 (1998)。
因而，与NS2-3金属蛋白酶、NS3解螺旋酶(全长)、NS4A蛋白酶辅因子、NS4B膜蛋白和NS5A锌金属蛋白一起，已经将NS3丝氨酸蛋白酶(氨基酸残基1-180)和NS5B RNA依赖性的RNA聚合酶鉴别为治疗干预的靶标。HCV NS3蛋白酶和/或HCV NS5B聚合酶的抑制会阻止双链HCV RNA的形成，并因此构成开发HCV-特异性的抗病毒疗法的有吸引力的方案。
联合治疗的应用可以提供增加的病毒复制抑制水平，后者可以增加在接受治疗的患者中实现持续病毒应答的可能性。与当个别地使用时相同剂量的每种化合物的应用相比，2种或更多种化合物的组合的应用可以产生更大的病毒复制抑制程度。使用联合治疗的另一个优点涉及病毒对化合物抑制的抗性的形成，所述抗性的特征在于对抑制的降低的易感性。在给受感染的个体施用化合物的过程中，可以产生具有序列突变的病毒变体。这些病毒变体可以具有降低的对特定化合物的抑制的易感性，但是仍然保留对另一种化合物或另一类化合物的抑制的易感性，所述另一种化合物或另一类化合物通过不同的机制起作用或者通过抑制另一种病毒酶而起作用。联合治疗的应用可以减少或消除抗性的形成和提高实现持续病毒应答的可能性。
显然需要开发用于治疗HCV感染的有效联合治疗剂。具体地，需要开发可用于治疗HCV感染的患者的组合和抑制HCV病毒复制的化合物。
发明内容
本发明提供了药物组合物(“HCV抑制性的组合物”)，其包含：(i) 药学上可接受的载体；(ii) 选自表1的化合物或其药学上可接受的盐；
和(iii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中所述一种或多种第一额外治疗剂选自：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS4A抑制剂和HCV NS5A抑制剂，其中所述一种或多种第一额外治疗剂不包括表1的化合物，且其中所述表1的化合物和所述一种或多种第一额外治疗剂的量一起有效地治疗患者中的HCV感染，使得当一种或多种第一额外治疗剂包括HCV NS5A抑制剂时，所述HCV NS5A抑制剂不是下述化合物之一:
或
。
所述HCV抑制性的组合物可以任选地进一步包含一种或多种如下文中定义的第二额外治疗剂。
所述HCV抑制性的组合物可以，例如，用于抑制HCV病毒复制或复制子活性，和用于治疗或预防患者中的HCV感染。不受任何具体理论约束，据信，表1的化合物会通过抑制HCV RNA蛋白酶来抑制HCV病毒复制。
在下面所附的详细描述中，阐述了本发明的细节。
尽管可以在本发明的实践或试验中使用与本文所描述的方法和材料相似的任何方法和材料，但是现在描述示例性的方法和材料。在下面的描述、实施例和所附权利要求中进一步描述了本发明的其它实施方案、方面和特征，或者从下面的描述、实施例和所附权利要求会显而易见本发明的其它实施方案、方面和特征。
附图说明
图1显示了化合物6和化合物T1的组合在HCV复制子测定中的抑制的MacSynergyTMII分析的结果。x-轴代表化合物6的浓度(μM)；y-轴代表化合物T1的浓度(μM)；且z-轴(垂直轴)代表所述组合表现出的协同作用程度与从累加效应预见到的程度的对比。该图指示化合物6和化合物T1的组合在由峰指示的浓度处存在协同作用。
图2显示了化合物6和化合物T1的组合在HCV复制子测定中的抑制分析的结果，其中使用Barton等人, Biometrics 1993 49, 95-105描述的方法进行所述分析。左侧边缘代表化合物6的浓度(μM)；右侧边缘代表指定浓度的化合物6相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比；上边缘代表化合物T1的浓度(μM)；且下边缘代表指定浓度的化合物T1相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比。在该表中阐述的数据可以如下解释：“Sat”是指100%饱和且不能解释；“Add”是指存在累加效应和潜在协同效应；且“Inert”是指观察到可测量的、但是不显著的相对于加和性的偏差。这些符号后面的数字指示所述组合相对于对照(即，不存在抑制剂)测得的抑制百分比。
图3显示了化合物6和化合物T2的组合在HCV复制子测定中的抑制的MacSynergyTMII分析的结果。x-轴代表化合物T2的浓度(μM)；y-轴代表化合物6的浓度(μM)；且z-轴(垂直轴)代表所述组合表现出的协同作用程度与从累加效应预见到的程度的对比。该图指示化合物6和化合物T2的组合在由峰(一个或多个)指示的浓度处存在协同作用。
图4显示了化合物6和化合物T2的组合在HCV复制子测定中的抑制分析的结果，其中使用Barton等人, Biometrics 1993 49, 95-105描述的方法进行所述分析。左侧边缘代表化合物6的浓度(μM)；右侧边缘代表指定浓度的化合物6相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比；上边缘代表化合物T2的浓度(μM)；且下边缘代表指定浓度的化合物T2相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比。在该表中阐述的数据可以如下解释：“Sat”是指100%饱和且不能解释；“Add”是指存在累加效应和潜在协同效应；且“Syn”是指存在协同效应。这些符号后面的数字指示所述组合相对于对照(即，不存在抑制剂)测得的抑制百分比。
图5显示了化合物6和化合物T3的组合在HCV复制子测定中的抑制的MacSynergyTMII分析的结果。x-轴代表化合物T3的浓度(μM)；y-轴代表化合物6的浓度(μM)；且z-轴(垂直轴)代表所述组合表现出的协同作用程度与从累加效应预见到的程度的对比。
图6显示了化合物6和化合物T3的组合在HCV复制子测定中的抑制分析的结果，其中使用Barton等人, Biometrics 1993 49, 95-105描述的方法进行所述分析。左侧边缘代表化合物6的浓度(μM)；右侧边缘代表指定浓度的化合物6相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比；上边缘代表化合物T3的浓度(μM)；且下边缘代表指定浓度的化合物T3相对于对照(即，不存在抑制剂)的抑制百分比。在该表中的术语“Add”是指存在累加效应和潜在协同效应，且该术语后面的数字指示所述组合相对于对照(即，不存在抑制剂)测得的抑制百分比。该图指示化合物6和化合物T3的组合在由峰(一个或多个)指示的浓度处存在协同作用。
具体实施方式
本发明涉及HCV抑制性的组合物和使用所述HCV抑制性的组合物治疗或预防患者中的病毒感染的方法。
定义和缩写
本文中使用的术语具有它们的普通含义，且这类术语的含义在其各自出现时是独立的。尽管如此和除非另行指明，下列定义在本说明书和权利要求书中通篇适用。化学名、俗名和化学结构可互换地用于描述相同结构。如果使用化学结构和化学名提到化学化合物并在结构与名称之间存在歧义，以结构为准。除非另行指明，无论一术语是单独使用还是与其它术语结合使用，这些定义都适用。
如在本文中使用的且贯穿本公开内容，除非另有说明，下面的术语应当理解为具有下述含义：
“患者”是人或非人哺乳动物。在一个实施方案中，患者是人。在另一个实施方案中，患者是黑猩猩。
本文中使用的术语“有效量”表示，当施用给遭受病毒感染或病毒相关障碍的患者时有效产生期望的治疗、改善、抑制或预防作用的HCV抑制性的组合物和一种或多种额外治疗剂或其组合物的量。在本发明的联合治疗中，有效量可以表示各独立药剂或作为整体的组合，其中所有药剂的给药量在一起是有效的，但是其中该组合的组分药剂可能不独自以有效量存在。
本文中关于HCV病毒感染或HCV-病毒相关障碍使用的术语“预防”表示，降低HCV感染的可能性。
本文中使用的术语“呈基本上纯化的形式”表示，从合成过程（例如从反应混合物）、天然来源或它们的组合中分离化合物以后，所述化合物的物理状态。术语“呈基本上纯化的形式”还表示，从本文所述或技术人员公知的一种或多种纯化方法（例如色谱法、重结晶等）获得化合物以后，化合物的物理状态，其纯度足以通过本文所述或技术人员公知的标准分析技术来表征。
还应当指出，本文的文本、流程图、实施例和表格中的任何具有不饱和化合价的碳及杂原子被假定具有足够数目的氢原子(一个或多个)以满足所述化合价。
本文中使用的术语“组合物”意图包括包含指定量的指定成分的产品，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产品。
本文中也预见到本发明的化合物的前药和溶剂合物。在T. Higuchi和V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14，A.C.S. Symposium Series中和在Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, 编, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中提供了前药的讨论。术语“前药”是指这样的化合物(例如，药物前体)：其在体内被转化以提供HCV抑制性的组合物或所述化合物的药学上可接受的盐或溶剂合物。所述转化可以通过不同的机制(例如，通过代谢过程或化学过程)而发生，例如，通过在血液中水解。
如果HCV抑制性的组合物包含胺官能团，可以通过用下列基团替代氨基的氢原子以形成前药：例如，R-羰基-，RO-羰基-，NRR'-羰基-，其中R和R'各自独立地是(C1-C10)烷基，(C3-C7)环烷基，苄基，天然α-氨酰基，-C(OH)C(O)OY1，其中Y1是H，(C1-C6)烷基或苄基，-C(OY2)Y3，其中Y2是(C1-C4)烷基，Y3是(C1-C6)烷基；羧基(C1-C6)烷基；氨基(C1-C4)烷基或单N-或二-N,N-(C1-C6)烷基氨基烷基；-C(Y4)Y5，其中Y4是H或甲基，Y5是单-N-或二-N,N-(C1-C6)烷基氨基吗啉代；哌啶-1-基或吡咯烷-1-基，等。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括下列酯∶(1)通过羟基化合物的羟基的酯化所获得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分选自直链或支链烷基(例如，甲基，乙基，正丙基，异丙基，叔丁基，仲丁基或正丁基)，烷氧基烷基(例如，甲氧基甲基)，芳烷基(例如，苄基)，芳氧烷基(例如，苯氧基甲基)，芳基(例如，任选被下列取代的苯基：例如，卤素，C1-4烷基，-O-(C1-4烷基)或氨基)；(2)磺酸酯，例如烷基-或芳烷基磺酰基(例如，甲磺酰基)；(3)氨基酸酯(例如，L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)膦酸酯，和(5)单、二或三磷酸酯。磷酸酯可以进一步被酯化，例如，被C1-20醇或其反应性衍生物或被2,3-二(C6-24)酰基甘油酯化。
一种或多种本发明的化合物可以以未溶剂化形式以及用药学上可接受的溶剂（诸如水、乙醇等）溶剂化的形式存在，本发明旨在涵盖溶剂化形式和未溶剂化形式。“溶剂合物”是指，本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合涉及不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键合。在某些情况下，该溶剂合物将能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。溶剂合物的非限制性例子包括乙醇化物，甲醇化物，等。“水合物”是其中溶剂分子是水的溶剂合物。
一种或多种本发明的化合物可以任选转变为溶剂合物。溶剂合物的制备方法通常是已知的。由此，例如，M. Caira等人,J. Pharmaceutical Sci., 93(3), 601-611 (2004)描述了抗真菌药氟康唑的乙酸乙酯溶剂合物以及水溶剂合物的制备方法。下列文献描述了溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的相似制备方法：E. C. van Tonder等人,AAPS PharmSciTechours., 5(1), article 12 (2004)；和A. L. Bingham等人,Chem. Commun., 603-604 (2001)。典型的非限制性方法包括：在高于室温的条件下，将本发明化合物溶解在需要数量的目标溶剂(有机溶剂或水或其混合物)中，以足以形成晶体的速度冷却该溶液，然后通过标准方法分离晶体。分析技术，例如，红外光谱，显示溶剂合物(或水合物)形式的晶体中存在溶剂(或水)。
所述HCV抑制性的组合物可以形成盐，这种盐也在本发明范围内。对本文的HCV抑制性的组合物的提及被理解为包括对其盐的提及，除非另外指明。本文使用的术语“盐(一种或多种)”表示与无机和/或有机酸形成的酸式盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱式盐。另外，当所述HCV抑制性的组合物含有碱性部分(例如但不局限于：吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不局限于：羧酸)两者时，可以形成两性离子（“内盐”），并且包括在本文使用的术语“盐(一种或多种)”的范围之内。在一个实施方案中，盐是药学上可接受的(即，无毒的、生理学可接受的)盐。在另一个实施方案中，盐是非药学上可接受的盐。例如，可以如下形成表1的化合物的盐：在介质(例如，盐沉淀于其中的介质)中，或在水性介质中，使HCV抑制性的组合物与一定量(例如，等当量)的酸或碱反应，而后低压冻干。
示范性的酸加成盐包括：乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐(“甲磺酸盐”)、二甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(也被称作甲苯磺酸盐)等。另外，通常认为适合于由碱性药学化合物形成药学可使用的盐的酸在下列文献中进行了讨论：例如，P. Stahl等人, Camille G. (编) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge等人,Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217；Anderson等人,The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York；和The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C.，在它们的网站上)。这些公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物是呈二盐酸盐的形式。在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物是呈二甲磺酸盐的形式。
示范性的碱式盐包括：铵盐，碱金属盐，例如钠、锂和钾盐，碱土金属盐，例如钙和镁盐，与有机碱(例如，有机胺)例如二环己基胺、叔丁胺、胆碱形成的盐，和与氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。可以用下列试剂将含有碱性氮的基团季铵化：例如，低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)，硫酸二烷基酯(例如，硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯)，长链卤化物(例如，癸基、月桂基和硬脂酰的氯化物、溴化物和碘化物)，芳烷基卤化物(例如，苄基溴和苯乙基溴)，等。
所有这样的酸式盐和碱式盐意图是在本发明范围内的药学上可接受的盐，并且就本发明的目的而言，所有的酸式和碱式盐被认为等效于相应化合物的游离形式。
基于非对映异构体的物理化学差异，通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱法和/或分步结晶，可以将非对映异构体混合物分离成它们的各非对映异构体。可以如下分离对映异构体：通过与适当的光学活性化合物（例如手性助剂，诸如手性醇或Mosher氏酰基氯）反应而将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离所述非对映异构体，并将各非对映异构体转化（例如水解）成相应的纯对映异构体。通过使用手性起始原料或通过采用盐拆分技术，也可以制备立体化学纯的化合物。并且，有些HCV抑制性的组合物可以是阻转异构体(例如，被取代的联芳)，并且被视作本发明的一部分。使用手性色谱技术，也可以直接分离对映异构体。
HCV抑制性的组合物也可能以不同的互变异构形式存在，并且在本发明范围内包括所有这样的形式。例如，本发明包括所述化合物的所有酮-烯醇和亚胺-烯胺形式。
在本发明范围内涵盖本发明化合物的所有立体异构体（例如几何异构体、光学异构体等）（包括所述化合物的盐、溶剂合物、水合物、酯和前药的所有立体异构体，以及所述前药的盐、溶剂合物和酯的所有立体异构体），例如由于各种取代基上的不对称碳而可能存在的那些立体异构体，包括对映异构形式（甚至在不存在不对称碳的情况下，其也可能存在）、旋转异构形式、阻转异构体和非对映异构形式。如果HCV抑制性的组合物包含双键或稠合环，在本发明范围内包括顺式-和反式-形式形式以及混合物。
本发明的化合物的各立体异构体可以例如基本不含其它异构体，或者可以例如作为外消旋体混合，或者与所有其它立体异构体或其它所选的立体异构体混合。本发明的手性中心可以具有如IUPAC 1974 Recommendations所定义的S或R构型。术语“盐”、“溶剂合物”、“酯”、“前药”等的使用意图同样应用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋体或前药的盐、溶剂合物、酯和前药。
在表1的化合物中，所述原子可以表现出它们的天然同位素丰度，或者所述原子中的一个或多个可以被人工地富集特定同位素，所述同位素具有相同原子数，但是其原子质量或质量数不同于在自然界中占优势地存在的原子质量或质量数。本发明意在包括表1的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(H)的不同同位素形式包括氕(1H)和氘(2H)。氕是在自然界中存在的占优势的氢同位素。氘富集可以提供某些治疗优点，诸如增加体内半衰期或减少剂量需求，或者可以提供可用作生物样品的表征的标准品的化合物。通过本领域技术人员众所周知的常规技术，或者通过与在本文的路线图和实施例中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素富集的试剂和/或中间体，无需过多实验，可以制备同位素富集的表1的化合物。在一个实施方案中，表1的化合物的一个或多个氢原子被氘替代。
在本发明中意图包括HCV抑制性的组合物的组分的多晶型形式，以及HCV抑制性的组合物的组分的盐、溶剂合物、水合物、酯和前药的多晶型形式。
HCV抑制性的组合物
本发明提供了HCV抑制性的组合物，其包含：(i) 药学上可接受的载体；(ii) 选自表1的化合物或其药学上可接受的盐；和(iii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中所述表1的化合物和所述一种或多种第一额外治疗剂的量一起有效地治疗患者中的病毒感染。
在一个实施方案中，本发明提供了HCV抑制性的组合物，其包含：(i) 药学上可接受的载体；(ii) 选自表1的化合物或其药学上可接受的盐；(iii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐；和(iv)一种或多种第二额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中所述表1的化合物、所述一种或多种第一额外治疗剂和所述一种或多种第二额外治疗剂的量一起有效地治疗患者中的病毒感染。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物的一种或多种组分是呈基本上纯化的形式。在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物的所有组分是呈基本上纯化的形式。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于以下用途的本发明的HCV抑制性的组合物：(i) 抑制HCV复制，或(ii) 治疗HCV感染和/或降低HCV感染的可能性或HCV感染症状的严重程度。在这些用途中，本发明的HCV抑制性的组合物可以任选地与一种或多种下文定义的第二额外治疗剂联合使用。
在另一个实施方案中，本发明还包括用于以下用途的本发明的HCV抑制性的组合物：(i) 用在以下(a)、(b) 或(c)中，(ii) 作为用于以下(a)、(b) 或(c)的药物，或(iii)用在制备用于以下(a)、(b) 或(c)的药物中：(a) 药物，(b) 抑制HCV复制，或(c) 治疗HCV感染和/或降低HCV感染的可能性或HCV感染症状的严重程度。在这些用途中, 本发明的HCV抑制性的组合物可以任选地与一种或多种下文定义的第二额外治疗剂联合使用。
HCV抑制性的组合的用途
所述HCV抑制性的组合物可以在人和兽医学中用于治疗或预防患者中的病毒感染。在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物可以是病毒复制的抑制剂。在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物可以是HCV复制的抑制剂。因此，所述HCV抑制性的组合物可用于治疗病毒感染，诸如HCV。根据本发明，可以将HCV抑制性的组合物施用给需要治疗或预防病毒感染的患者。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了治疗患者中的病毒感染的方法，所述方法包括：给所述患者施用有效量的HCV抑制性的组合物。当用于治疗病毒感染时，本发明的HCV抑制性的组合物的组分可以在单一剂型中一起施用，或者所述组分可以单独施用，并可以任选地在不同的时间施用。
黄病毒科病毒的预防的治疗
所述HCV抑制性的组合物可以与一种或多种额外治疗剂联合用于治疗或预防由黄病毒科病毒造成的病毒感染。
可以使用本发明方法治疗或预防的黄病毒科感染的例子包括、但不限于：登革热、日本脑炎、科萨努尔森林病、墨累山谷脑炎、圣路易斯脑炎、蜱传脑炎、西尼罗河脑炎、黄热病和丙型肝炎病毒(HCV)感染。
在一个实施方案中，治疗的黄病毒科感染是丙型肝炎病毒感染。
HCV感染的治疗或预防
所述HCV抑制性的组合物可以用于抑制HCV (例如，HCV NS5A)、治疗HCV感染、和/或降低HCV感染的可能性或HCV感染症状的严重程度、以及在基于细胞的系统中抑制HCV病毒复制和/或HCV病毒产生。例如，所述HCV抑制性的组合物可用于治疗疑似过去通过诸如以下方式暴露于HCV以后的HCV感染：输血、体液交换、叮咬、意外的针刺或在外科手术或其它医学操作过程中暴露于患者血液。
在一个实施方案中，所述丙型肝炎感染是急性丙型肝炎。在另一个实施方案中，所述丙型肝炎感染是慢性丙型肝炎。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗患者中的HCV感染的方法，所述方法包括：给所述患者施用有效量的HCV抑制性的组合物。在一个具体实施方案中，施用的HCV抑制性的组合物的组分的量一起有效地治疗或预防患者中的HCV感染。在另一个具体实施方案中，施用的HCV抑制性的组合物的组分的量一起有效地抑制患者中的HCV病毒复制和/或病毒产生。在另一个实施方案中，施用的抑制性组合物的组分的量是使得每种组分单独为有效的那些量。
本发明的组合物和组合可用于治疗遭受与任何HCV基因型相关的感染的患者。如Holland等人,Pathology, 30(2):192-195 (1998)所述，HCV类型和亚型可能在它们的抗原性、病毒血症的水平、产生的疾病的严重程度和对干扰素治疗的应答方面有差异。在Simmonds等人,J Gen Virol, 74(Pt11):2391-2399 (1993)中阐述的命名法被普遍使用，并且将分离物归类为六个主要基因型(1至6)，具有两个或更多个相关的亚型，例如，1a和1b。已经提出了其它基因型7-10和11，但是，对这种分类所依据的该种系发生的基础已经产生疑问，因此，将7、8、9和11型分离物再指定为6型，并将10型分离物再指定为3型(参见Lamballerie等人, J Gen Virol, 78(Pt1):45-51 (1997))。已经将主要基因型定义为：当在NS-5区域测序时，序列相似性在55-72%之间(平均64.5%)，在类型之内的亚型具有75%-86%的相似性(平均80%)(参见Simmonds等人,J Gen Virol, 75(Pt 5):1053-1061 (1994))。
额外治疗剂
本发明提供了HCV抑制性的组合物及其用于治疗或预防患者中的病毒性疾病的方法。所述HCV抑制性的组合物包含药学上可接受的载体、表1的化合物和一种或多种第一额外治疗剂。
在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗患者中的病毒感染的方法，所述方法包括，给所述患者施用：(i) 表1的化合物或其药学上可接受的盐，和(ii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中施用的量一起有效地治疗或预防病毒感染。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗患者中的病毒感染的方法，所述方法包括，给所述患者施用：(i) 表1的化合物或其药学上可接受的盐；(ii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐；和(iii)一种或多种第二额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中施用的量一起有效地治疗或预防病毒感染。
当给患者施用本发明的联合治疗时，可以以任何顺序（例如，顺序地、并行地、一起、同时地等）施用含有治疗剂的组合或一种或多种药物组合物中的活性剂。在这种联合治疗中，各种活性物的量可以是不同量(不同剂量)或相同量(相同剂量)。因而，为了非限制性说明的目的，HCV抑制性的组合物和第一额外治疗剂可以以固定量(剂量)存在于单次剂量单位(例如，胶囊剂、片剂等)中。
在一个实施方案中，当第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂发挥它们的预防性或治疗性效果时，施用表1的化合物，或反之亦然。
在另一个实施方案中，当将这样的药剂用作用于治疗病毒感染的单一疗法时，以常用剂量施用表1的化合物和第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂。
在另一个实施方案中，当将这样的药剂用作用于治疗病毒感染的单一疗法时，以低于常用剂量的剂量，施用表1的化合物和第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂。
在另一个实施方案中，当将这样的药剂用作用于治疗病毒感染的单一疗法时，表1的化合物和第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂协同地起作用，并且以低于常用剂量的剂量施用。
在一个实施方案中，表1的化合物和第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂存在于相同组合物中。在一个实施方案中，该组合物适合于口服施用。在另一个实施方案中，该组合物适合于静脉内施用。在另一个实施方案中，该组合物适合于皮下施用。在另一个实施方案中，该组合物适合于胃肠外施用。
可以使用本发明的联合治疗方法治疗或预防的病毒感染和病毒相关障碍包括、但不限于上面列出的那些。
在一个实施方案中，所述病毒感染是HCV感染。
表1的化合物和第一额外治疗剂和任选的第二额外治疗剂可以累加地或协同地起作用。协同组合可以允许使用更低剂量的一种或多种药剂，和/或以更低的频率施用联合治疗的一种或多种药剂。一种或多种药剂的更低剂量或更低频施用可以降低治疗的毒性，而不降低治疗的效力。
在一个实施方案中，HCV抑制性的组合物的施用可以抑制病毒感染对组合物的一种或多种组分的抗性。
表1的化合物
本发明的HIC包含表1的化合物、一种或多种第一额外治疗剂和任选的一种或多种第二额外治疗剂。
在一个实施方案中，所述表1的化合物是化合物5、6、7或12。
在另一个实施方案中，所述表1的化合物是化合物5。
在另一个实施方案中，所述表1的化合物是化合物6。
仍在另一个实施方案中，所述表1的化合物是化合物7。
在另一个实施方案中，所述表1的化合物是化合物12。
第一额外治疗剂
可用于本发明组合物和方法中的第一额外治疗剂包括HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS4A抑制剂和HCV NS5A抑制剂及其药学上可接受的盐，使得HCV蛋白酶抑制剂不是任一种表1的化合物。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的HCV蛋白酶抑制剂包括、但不限于在以下文献中公开的那些：美国专利号7,494,988、7,485,625、7,449,447、7,442,695、7,425,576、7,342,041、7,253,160、7,244,721、7,205,330、7,192,957、7,186,747、7,173,057、7,169,760、7,012,066、6,914,122、6,911,428、6,894,072、6,846,802、6,838,475、6,800,434、6,767,991、5,017,380、4,933,443、4,812,561和4,634,697；美国专利公开号US20020068702、US20020160962、US20050119168、US20050176648、US20050209164、US20050249702和US20070042968；和国际公开号WO 03/006490、WO 03/087092、WO 04/092161和WO 08/124148。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的其它HCV蛋白酶抑制剂包括、但不限于：VX-950 (特拉匹韦, Vertex), VX-500 (Vertex), VX-813 (Vertex), VBY-376 (Virobay), BI-201335 (Boehringer Ingelheim), TMC-435 (Medivir/Tibotec), ABT-450 (Abbott/Enanta), TMC-435350 (Medivir), RG7227 (丹诺普韦, InterMune/Roche), EA-058 (Abbott/Enanta), EA-063 (Abbott/Enanta), GS-9256 (Gilead), IDX-320 (Idenix), ACH-1625 (Achillion), ACH-2684 (Achillion), GS-9132 (Gilead/Achillion), ACH-1095 (Gilead/Achillon), IDX-136 (Idenix), IDX-316 (Idenix), ITMN-8356 (InterMune), ITMN-8347 (InterMune), ITMN-8096 (InterMune), ITMN-7587 (InterMune), BMS-650032 (Bristol-Myers Squibb), VX-985 (Vertex)和PHX1766 (Phenomix)。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的HCV蛋白酶抑制剂的其它例子包括、但不限于在以下文献中公开的那些：Landro等人,Biochemistry, 36(31):9340-9348 (1997); Ingallinella等人,Biochemistry, 37(25):8906-8914 (1998); Llinàs-Brunet等人,Bioorg Med Chem Lett, 8(13):1713-1718 (1998); Martin等人,Biochemistry, 37(33):11459-11468 (1998); Dimasi等人,J Virol, 71(10):7461-7469 (1997); Martin等人,Protein Eng, 10(5):607-614 (1997); Elzouki等人,J Hepat, 27(1):42-48 (1997); BioWorld Today,9(217):4 (1998年11月10日)；美国专利公开号US2005/0249702和US 2007/0274951；和国际公开号WO 98/14181、WO 98/17679、WO 98/17679、WO 98/22496和WO 99/07734和WO 05/087731。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的HCV聚合酶抑制剂包括、但不限于：SCH900942 (Schering-Plough), SCH900188 (Schering-Plough), BMS-791325 (Bristol-Myers Squibb), VP-19744 (Wyeth/ViroPharma), PSI-7851 (Pharmasset), RG7128 (Roche/Pharmasset), PSI-7977 (Pharmasset), PSI-938 (Pharmasset), PSI-879 (Pharmasset), PSI-661 (Pharmasset), PF-868554/非利布韦(Pfizer), VCH-759/VX-759 (ViroChem Pharma/Vertex), HCV-371 (Wyeth/VirroPharma), HCV-796 (Wyeth/ViroPharma), IDX-184 (Idenix), IDX-375 (Idenix), NM-283 (Idenix/Novartis), GL-60667 (Genelabs), JTK-109 (Japan Tobacco), PSI-6130 (Pharmasset), R1479 (Roche), R-1626 (Roche), R-7128 (Roche), INX-8014 (Inhibitex), INX-8018 (Inhibitex), INX-189 (Inhibitex), GS 9190 (Gilead), A-848837 (Abbott), ABT-333 (Abbott), ABT-072 (Abbott), A-837093 (Abbott), BI-207127 (Boehringer-Ingelheim), BILB-1941 (Boehringer-Ingelheim), VCH-222/VX-222 (ViroChem/Vertex), VCH-916 (ViroChem), VCH-716(ViroChem), GSK-71185 (Glaxo SmithKline), ANA598 (Anadys), GSK-625433 (Glaxo SmithKline), XTL-2125 (XTL Biopharmaceuticals)，以及在以下文献中公开的那些：Ni等人,Current Opinion in Drug Discovery and Development, 7(4):446 (2004); Tan等人,Nature Reviews, 1:867 (2002)；和Beaulieu等人,Current Opinion in Investigational Drugs, 5:838 (2004)。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的其它HCV聚合酶抑制剂包括、但不限于在国际公开号WO 08/082484、WO 08/082488、WO 08/083351、WO 08/136815、WO 09/032116、WO 09/032123、WO 09/032124和WO 09/032125中公开的那些以及下面描述的化合物T1-T4:
。
在一个实施方案中，所述HCV聚合酶抑制剂是：
。
在一个优选的实施方案中，所述HCV聚合酶抑制剂是PSI-7977。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的HCV NS4A抑制剂包括、但不限于在以下文献中公开的那些：美国专利号7,476,686和7,273,885；美国专利公开号US20090022688；和国际公开号WO 2006/019831和WO 2006/019832。在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的其它HCV NS4A抑制剂包括、但不限于：AZD2836 (Astra Zeneca)、ACH-1095 (Achillion)和ACH-806 (Achillion)。
在本发明组合物和方法中可用作第一额外治疗剂的HCV NS5A抑制剂包括、但不限于：A-832 (Arrow Therapeutics), PPI-461 (Presidio), PPI-1301 (Presidio), BMS-790052 (Bristol-Myers Squibb), BMS-824393 (Bristol-Myers Squibb), ACH-2928 (Achillon)和AZD-7295 (Astra Zeneca)。
在一个实施方案中，所述HCV NS5A抑制剂是BMS-790052或PPI-461。
在另一个实施方案中，所述HCV NS5A抑制剂是
。
在一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV蛋白酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括核苷HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括非核苷HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV聚合酶抑制剂和HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括核苷HCV聚合酶抑制剂和HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括非核苷HCV聚合酶抑制剂和HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括非核苷HCV聚合酶抑制剂和核苷HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括一种或两种选自PSI-7977、RG-7128、PSI-938、BMS-790052或PPI-461的化合物。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括：(i) PSI-7977或PSI-938和(ii) BMS-790052。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第一额外治疗剂包括PSI-7977和BMS-790052。
第二额外治疗剂
本发明也提供了HCV抑制性的组合物及其使用方法，所述组合物包含：(i) 表1的化合物或其药学上可接受的盐；(ii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐和(iii)一种或多种第二额外治疗剂或其药学上可接受的盐。
在本发明组合物和方法中有用的第二额外治疗剂包括、但不限于：干扰素、免疫调节剂、病毒复制抑制剂、反义药剂、病毒解螺旋酶抑制剂、病毒粒子产生抑制剂、病毒进入抑制剂、病毒装配抑制剂和抗体治疗(单克隆的或多克隆的)，使得所述第二额外治疗剂既不是表1的化合物也不是第一额外治疗剂。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的干扰素包括、但不限于：干扰素α-2a、干扰素α-2b、复合α干扰素和PEG-干扰素α缀合物。“PEG-干扰素α缀合物”是与PEG分子共价连接的干扰素α分子。示例性的PEG-干扰素α缀合物包括：聚乙二醇化干扰素α-2a (例如，在商业名称派罗欣TM下销售)形式的干扰素α-2a (RoferonTM, Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey)，聚乙二醇化干扰素α-2b (例如，在得自Schering-Plough Corporation的商业名称佩乐能TM下销售)形式的干扰素α-2b (IntronTM，得自Schering-Plough Corporation)，干扰素α-2b-XL (例如，在商业名称佩乐能TM下销售)，干扰素α-2c (Berofor AlphaTM, Boehringer Ingelheim, Ingelheim, 德国)，PEG-干扰素λ(Bristol-Myers Squibb和ZymoGenetics)，干扰素α-2bα融合多肽，与人血液蛋白白蛋白融合的干扰素(AlbuferonTM, Human Genome Sciences),ω干扰素(Intarcia)，Locteron控释干扰素(Biolex/OctoPlus)，Biomed-510 (ω干扰素)，Peg-IL-29 (ZymoGenetics)，Locteron CR (Octoplus)，R-7025 (Roche)，IFN-α-2b-XL (Flamel Technologies)，belerofon (Nautilus)和通过确定天然存在的干扰素α类的共有序列而定义的复合干扰素(干复津TM, Amgen, Thousand Oaks, California)。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的抗体治疗药剂包括、但不限于：对IL-10特异性的抗体(诸如在美国专利公开号US2005/0101770中公开的那些抗体，人源化的12G8，针对人IL-10的人源化单克隆抗体，含有编码人源化的12G8轻链和重链的核酸的质粒保存在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号分别为PTA-5923和PTA-5922)，等)。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的病毒复制抑制剂包括、但不限于：HCV复制酶抑制剂、IRES抑制剂、NS3解螺旋酶抑制剂、利巴韦林、AZD-2836 (Astra Zeneca)、盐酸塔立韦林、A-831 (Arrow Therapeutics)、EDP-239 (Enanta)、ACH-2928 (Achillion)、GS-5885 (Gilead)；反义药剂或治疗疫苗。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的病毒进入抑制剂包括、但不限于：PRO-206 (Progenics)、REP-9C (REPICor)、SP-30 (Samaritan Pharmaceuticals)和ITX-5061 (iTherx)。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的HCV复制酶抑制剂包括、但不限于在美国专利公开号US20090081636中公开的那些。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的治疗疫苗包括、但不限于：IC41 (Intercell Novartis)、CSL123 (Chiron/CSL)、GI 5005 (Globeimmune)、TG-4040 (Transgene)、GNI-103 (GENimmune)、Hepavaxx C (ViRex Medical)、ChronVac-C (Inovio/Tripep)、PeviPROTM (Pevion Biotect)、HCV/MF59 (Chiron/Novartis)、MBL-HCV1 (MassBiologics)、GI-5005 (GlobeImmune)、CT-011 (CureTech/Teva)和Civacir (NABI)。
在本发明组合物和方法中可用作第二额外治疗剂的其它药剂的例子包括、但不限于：利托那韦(Abbott), TT033 (Benitec/Tacere Bio/Pfizer), Sirna-034 (Sirna Therapeutics), GNI-104 (GENimmune), GI-5005 (GlobeImmune), IDX-102 (Idenix), 左旋韦林TM (ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California); Humax (Genmab), ITX-2155 (Ithrex/Novartis), PRO 206 (Progenics), HepaCide-I (NanoVirocides), MX3235 (Migenix), SCY-635 (Scynexis); KPE02003002 (Kemin Pharma), Lenocta (VioQuest Pharmaceuticals), IET - 干扰素增强疗法(Interferon Enhancing Therapy)(Transition Therapeutics), 日达仙(SciClone Pharma), VP 50406TM (Viropharma, Incorporated, Exton, Pennsylvania)；塔立韦林(Valeant Pharmaceuticals)；硝唑沙奈(Romark); Debio 025 (Debiopharm); GS-9450 (Gilead); PF-4878691 (Pfizer); ANA773 (Anadys); SCV-07 (SciClone Pharmaceuticals); NIM-881 (Novartis); ISIS 14803TM (ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California); HeptazymeTM (Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado); ThymosinTM (SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California); MaxamineTM (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California); NKB-122 (JenKen Bioscience Inc., North Carolina); Alinia (Romark Laboratories), INFORM-1 (R7128和ITMN-191的组合)；和吗替麦考酚酯(Hoffman-LaRoche, Nutley, New Jersey)。
在一个实施方案中，所述一种或多种第二额外治疗剂选自干扰素和利巴韦林。
在另一个实施方案中，所述一种或多种第二额外治疗剂选自利巴韦林和聚乙二醇化干扰素-α。
用于治疗或预防HCV感染的本发明的联合治疗中使用的其它药剂的剂量和剂量方案可以由主治临床医师在考虑包装说明书中的批准剂量和剂量方案；患者的年龄、性别和一般健康；和病毒感染或相关的疾病或障碍的类型和严重程度的情况下确定。当联合施用时，可以同时地(即，在相同组合物中，或在独立的组合物中一个紧接一个地施用)或顺序地施用HCV抑制性的组合物的组分和任选的第二额外治疗剂。当按照不同的给药计划施用所述组合的组分时，例如，每天1次地施用一种组分，每6小时施用另一种组分，或当优选的药物组合物是不同的时候，例如，一种是片剂，一种是胶囊剂，这是特别有用的。因此，含有独立剂型的试剂盒是有利的。
通常，单独地或当以联合治疗形式给药时，所述HCV抑制性的组合物的组分的总日剂量可以在每天约1至约2500 mg的范围内，尽管，根据治疗的靶标、患者和给药途径，必然会出现变化。在一个实施方案中，所述剂量是约10至约1000 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约1至约500 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约1至约100 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约1至约50 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约500至约1500 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。仍在另一个实施方案中，所述剂量是约500至约1000 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约100至约500 mg/天，在单次剂量中或在2-4次分份剂量中施用。
在一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为INTRON-A干扰素α2b (可商购得自Schering-Plough Corp.)时，对于初次治疗，该药剂以3MIU(12微克)/0.5mL/每周3次通过皮下注射给药24周或48周。
在另一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为佩乐能聚乙二醇化干扰素α2b(可商购得自Schering-Plough Corp.)时，该药剂以1.5微克/kg/周（在40至150微克/周范围内）通过皮下注射给药至少24周。
在另一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为罗荛愫干扰素α2a (可商购得自Hoffmann-La Roche)时，该药剂以3MIU（11.1微克/mL）/每周3次通过皮下注射或肌内注射给药至少48至52周，或可替换地，以6MIU/每周3次给药12周，然后以3MIU/每周3次给药36周。
在另一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为Pegasus聚乙二醇化干扰素α2a (可商购得自Hoffmann-La Roche)时，该药剂每周1次以180微克/1mL或180微克/0.5mL通过皮下注射给药至少24周。
在另一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为干复津复合α干扰素(可商购得自Amgen)时，对于初次治疗，该药剂以9微克/每周3次通过皮下注射给药24周，对于无响应或复发治疗，以最高达15微克/每周3次给药24周。
在另一个实施方案中，当所述第二额外治疗剂为利巴韦林（可从Schering-Plough作为REBETOL利巴韦林商购，或从Hoffmann-La Roche作为COPEGUS利巴韦林商购）时，该药剂以约600至约1400 mg/天的每日剂量给药至少24周。
在一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是干扰素。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是免疫调节剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是病毒复制抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是反义药剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是病毒解螺旋酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是病毒粒子产生抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是病毒进入抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是病毒装配抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是抗体治疗(单克隆的或多克隆的)。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是HCV NS2抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是HCV NS4B抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是HCV NS3解螺旋酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是HCV IRES抑制剂。
在另一个实施方案中，所述第二额外治疗剂是HCV p7抑制剂。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) HCV NS5A抑制剂；和(iii) HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) BMS790052。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一；(ii) HCV聚合酶抑制剂；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) HCV NS5A抑制剂；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) HCV NS5A抑制剂；(iii) HCV聚合酶抑制剂；(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一；(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；(iii) HCV NS5A抑制剂；和(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5、6、7和12之一和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；(iii) BMS790052；(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) HCV NS5A抑制剂；和(iii) HCV聚合酶抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) HCV NS5A抑制剂。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) BMS790052。
在一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5；(ii) HCV聚合酶抑制剂；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) HCV NS5A抑制剂；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) HCV NS5A抑制剂；(iii) HCV聚合酶抑制剂；(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5；(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；和(iii) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；(iii) HCV NS5A抑制剂；和(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
在另一个实施方案中，所述HCV抑制性的组合物包含：(i) 化合物5和(ii) PSI-7977、PSI-938和RG7128之一；(iii) BMS790052；(iv) 聚乙二醇化干扰素-α和利巴韦林中的一种或两种。
组合物和给药
由于它们的活性，所述HCV抑制性的组合物可用于兽医和人类医学。如上所述，所述HCV抑制性的组合物可用于治疗或预防有此需要的患者中的HCV感染。
在本发明的组合物和方法中，所述活性成分将通常与适宜的载体材料混合在一起给药，所述载体材料根据意欲的给药形式（即口服片剂、胶囊剂（固体填充的、半固体填充的或液体填充的）、用于构建的粉末、口服凝胶剂、酏剂、可分散的颗粒、糖浆剂、混悬剂等）适当地挑选，且符合常规的药学实践。例如，对于以片剂或胶囊剂的形式口服给药而言，所述活性药物组分可与任何口服无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述载体诸如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露醇、乙醇（液态形式）等。固体形式制剂包括散剂、片剂、可分散的颗粒、胶囊剂、扁胶囊剂和栓剂。散剂和片剂可包含有约0.5%至约95%的本发明的组合物。片剂、散剂、扁胶囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。
此外，当想要或需要时，混合物中还可掺入有适宜的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。适宜的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类、玉米甜味剂、天然胶和合成胶，诸如阿拉伯胶、海藻酸钠、羟甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在润滑剂中，用于这些剂型的可提及的润滑剂有硼酸、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜尔胶等。需要时还可包括甜味剂和调味剂以及防腐剂。
液体形式制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，并可包括用于胃肠外注射的水或水-丙二醇溶液剂。
液体形式制剂还可包括用于鼻内给药的溶液剂。
适于吸入的气雾剂制剂可包括溶液和粉末状固体，其可与药学上可接受的载体，诸如惰性压缩气体组合。
还包括意欲在使用前不久转变为用于口服或胃肠外给药的液体形式制剂的固体形式制剂。此类液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
对于栓剂的制备，首先将低熔点的蜡，诸如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂熔化，并如通过搅拌将活性成分均匀分散于其中。然后将熔融的均质混合物倒入大小合适的模具中，让其冷却并从而固化。
此外，本发明的组合物可制成缓释剂型以提供任意一种或多种组分或活性成分的控速释放以优化治疗效果，即，抗病毒活性等。用于缓释的适宜的剂型包括多层片剂，其含有崩解速率不同的层；或者控释聚合物基质，其用活性组分浸渍并成型为片剂形式；或者胶囊剂，其含有这样的被浸渍或被包封过的多孔聚合物基质。
在一个实施方案中，口服地施用所述HCV抑制性的组合物的一种或多种组分。
在另一个实施方案中，静脉内地施用所述HCV抑制性的组合物的一种或多种组分。
在另一个实施方案中，舌下地施用所述HCV抑制性的组合物的一种或多种组分。
在一个实施方案中，包含整个HCV抑制性的组合物的药物制剂是呈单位剂型。在这样的形式中，所述制剂被细分成含有有效量的活性成分的单位剂量。
在另一个实施方案中，分开的药物制剂（各自含有HCV抑制性的组合物的组分）是呈单位剂型。在这样的形式中，所述制剂中的每一个被细分成含有有效量的活性成分的单位剂量。
所述HCV抑制性的组合物可分别通过常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且在一个实施方案中，本发明的组合物可含有按重量或体积计约0.1%至约99%的HCV抑制性的组合物(一种或多种)。在不同的实施方案中，本发明的组合物可含有（在一个实施方案中）按重量或体积计约1%至约70%或约5%至约60%的活性成分。
单位剂量的制剂中的HCV抑制性的组合物的每种组分的量可在约1 mg至约2500 mg的范围内变化或调整。在不同的实施方案中，所述量为约10 mg至约1000 mg，1 mg至约500 mg，1 mg至约100 mg，和1 mg至约100 mg。
为了方便，如果需要可将总的每日剂量在一天当中进行拆分并分次给药。在一个实施方案中，每日剂量一次性给药。在另一个实施方案中，总的每日剂量在24小时的时间段内以两个拆分的剂量给药。在另一个实施方案中，总的每日剂量在24小时的时间段内以三个拆分的剂量给药。在另一个实施方案中，总的每日剂量在24小时的时间段内以四个拆分的剂量给药。
所述HCV抑制性的组合物的给药量和给药频率将根据主治临床医生考虑到诸如患者的年龄、情况和体型以及所治症状的严重程度等因素的判断进行调整。尽管根据治疗标靶、患者和给药途径的不同将需要做出改变，但所述HCV抑制性的组合物的总的每日剂量通常为约0.1至约2000mg/天。在一个实施方案中，所述剂量为约1至约200mg/天，以单次剂量或2-4个分份剂量给药。在另一个实施方案中，所述剂量为约10至约2000mg/天，以单次剂量或2-4个分份剂量给药。在另一个实施方案中，所述剂量为约100至约2000mg/天，以单次剂量或2-4个分份剂量给药。在另一个实施方案中，所述剂量为约500至约2000mg/天，以单次剂量或2-4个分份剂量给药。
试剂盒
在一个方面，本发明提供了一种包含HCV的试剂盒，其中所述HCV的所有组分存在于相同容器中，其中所述活性成分的量一起产生期望的治疗效果。
在另一个方面，本发明提供了一种包含HCV的试剂盒，其中所述HCV的组分提供在2个或更多个单独容器中，其中3种活性成分的量一起产生期望的治疗效果。
在另一个方面，本发明提供了一种包含HCV的试剂盒，其中表1的化合物和一种或多种第一额外治疗剂各自提供在单独的容器中，其中3种活性成分的量一起产生期望的治疗效果。
在另一个方面，本发明提供了一种包含HCV的试剂盒，其中表1的化合物、一种或多种第一额外治疗剂和一种或多种第二额外治疗剂各自提供在单独的容器中，其中3种活性成分的量一起产生期望的治疗效果。
实施例
实施例1
表1的化合物的制备
例如，使用在美国专利公开号US 2010/0099695和美国专利号7,012,066、7,244,721、7,470,664和7,973,040（它们中的每一篇通过引用整体并入本文）中描述的方法，可以制备表1的化合物。
如在美国专利号7,662,809中所述，可以制备化合物T1。
如在美国专利号7,105,499（其通过引用整体并入本文）中所述，可以制备化合物T2和T4。
使用在国际公开号WO 2006018725和WO 2004074270和美国专利公开号US 2005176701（它们中的每一篇通过引用整体并入本文）中描述的方法，可以制备化合物T3。
其它第一额外治疗剂和第二额外治疗剂是众所周知的治疗性化合物，并且描述它们的合成的参考文献是公众可得到的，并且将会被技术人员容易地找到。
实施例2
HCV RNA复制的抑制测定
在培养的含有亚基因组HCV复制子的肝细胞瘤(HuH-7)细胞中，评价了化合物的影响丙型肝炎病毒RNA复制的能力。下面描述了测定的细节。该复制子测定是在V. Lohmann等人, “Replication of a Sub-genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line,”Science 285:110 (1999)中描述的测定的改进。
方案：
使用的测定是原位核糖核酸酶保护，基于闪烁迫近的平板测定(SPA)。将10,000 - 40,000个细胞铺板在96-孔cytostar平板(Amersham)内的100-200 μL含有0.8mg/mL G418的培养基中。在时间0-18 h，将化合物在1% DMSO中以至多100 μM的不同浓度加给细胞，然后培养24-96 h。将细胞固定(20 min, 10% 福尔马林)，渗透化处理(20 min, 0.25% Triton X-100/PBS)，并与单链33P RNA探针杂交(过夜，50℃)，所述探针与在RNA病毒基因组中含有的(+) 链NS5B (或其它基因)互补。将细胞洗涤，用RNA酶处理，洗涤，加热至65℃，并在Top-Count中计数。将复制的抑制读出为每分钟的计数的下降(cpm)。
人HuH-7肝细胞瘤细胞（其被选择为含有亚基因组复制子）携带由HCV 5’非翻译区(NTR)、新霉素选择标记、EMCV IRES (内核糖体进入位点)和HCV非结构蛋白NS3至NS5B、随后的3’NTR组成的细胞质RNA。
实施例3
评价化合物的组合对HCV亚基因组复制子的抑制
在HCV复制子测定中评价了联合中试验的2种化合物的联合抗病毒效应。个别地和与其它化合物联合地评估每种化合物的抑制病毒复制的能力。
使用分析计算机程序(MacSynergyTMII)，基于Bliss独立模型(Bliss, C. I.: The toxicity of poisons applied jointly. Ann. Appl. Biol. 26: 585-615, 1939)，评价2种化合物的联合抗病毒效应，所述Bliss独立模型假定每种化合物独立作用以抑制病毒复制，从而计算所述组合的抑制的预测累加水平。然后将通过实验确定的抑制分数与所述组合包括的化合物浓度范围内的预测累加水平进行对比。大于预测的抑制在图上出现为超过加和性平面的表面。可替代地，已经采用了另一种分析方法，其使用类似的应答累加模型，所述模型假定每种化合物的独立作用以预测从加和性预见到的抑制水平(Barton, CN, Braunberg, RC, 和Friedman, L. Nonlinear statistical models for the joint action of toxins. Biometrics 1993 49, 95-105)。然后将通过实验确定的每对组合的抑制分数与预测的累加水平进行对比，并如下指定：当所述组合的抑制低于任一种单独化合物的抑制时，指定为干扰；当所述组合的抑制等于所述化合物在单独试验时的多重抑制时，指定为惰性；当所述组合的抑制大于任一种化合物在单独试验时的抑制、但是低于假定加和性的预测抑制时，指定为亚累加；当所述组合的抑制等于加和性的预测抑制时，指定为累加；当所述组合的抑制大于加和性的预测抑制时，指定为协同；或当所述组合的抑制接近100%时，指定为饱和的。
实施例4
评价对蛋白酶抑制剂的抑制具有降低的易感性的HCV亚基因组复制子变体的抑制
已经公开了含有氨基酸变化的HCV复制子，所述氨基酸变化会造成降低的对一类已知的抑制性化合物（诸如抑制HCV NS3/4A蛋白酶活性的化合物）的抑制的易感性(Courcambeck, 等人,Resistance of hepatitis C virus to NS3-4A protease inhibitors: mechanisms of drug resistance induced by R155Q, A156T, D168A and D168V mutations. Antiviral Therapy 2006, 11, 847-55)。通常，造成降低的抑制易感性的氨基酸变异发生在被所述化合物抑制的病毒酶中。通常，所述氨基酸变异会通过造成降低的所述化合物与靶酶的结合而造成降低的抑制易感性。联合使用2种或更多种通过不同机制影响病毒复制的化合物的组合来治疗HCV感染的一个优点是，由一类化合物引起的造成降低的抑制易感性的氨基酸变异可能对第二类化合物的抑制病毒复制的能力几乎没有或根本没有影响。
实施例5
复制子测定方法
在滴定前一天，将复制子细胞接种进96-孔Costar黑色壁透明底平板(3,000个细胞/孔)内的100 μl完全D-MEM中，并在37℃温育O/N。次日早晨，加入25 μl在完全DMEM和5% DMSO中的化合物稀释液(5 x终浓度)，将最终的DMSO浓度调至1.0%。将细胞与化合物一起在37℃温育48小时。
使用QIAGEN RNeasy 96-孔试剂盒，根据生产商的说明书(QIAGEN, Inc. Valencia, CA)，从每个孔的细胞中分离总RNA。将RNA在60 μl等分试样中洗脱2次，并合并。使用5 μl RNA，以25 μl的最终反应体积，用TaqMan EZ RT-PCR (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)进行TaqMan反应。循环条件是：50℃2分钟，60℃30分钟，95℃5分钟，随后是40个94℃20秒、55℃1分钟的循环。在ABI 7500 (Applied Biosystems Inc., Foster City CA)上进行反应。
用于检测复制子RNA的引物和探针是针对共编码的Neor基因，且显示如下：
正向引物5' CCG GCT ACC TGC CCA TTC (SEQ ID NO. 1)
反向引物5' CCA GAT CAT CCT GAT CGA CAA G (SEQ ID NO. 2)
探针: FAM-ACA TCG CAT CGA GCG AGC ACG TAC-Tamra (SEQ ID NO. 3)
所述探针由Applied Biosystems Inc.(Foster City, CA)合成。
如下确定复制子RNA的量的标准化值：测量如上所述的实验循环阈值CT，相对于总复制子细胞RNA的标准曲线确定RNA的量，和使用Taqman PDAR人亲环蛋白(Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)将其标准化为由细胞的人亲环蛋白A基因产生的信号。
实施例6
化合物6和化合物T1的组合
使用HCV基因型1b (con1)复制子细胞，在HCV复制子测定中评估了HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性的抑制剂化合物6和HCV NS5B RNA聚合酶活性的抑制剂化合物T1。使用MacSynergyTMII分析的在HCV复制子测定中确定联合效应的实验结果显示在图1中。结果主要指示累加的加和性，在加和性平面以上的体积对应于协同抑制的区域。还使用Barton等人的方法分析了相同的数据，并将结果显示在图2中。结果主要指示所述组合在试验的剂量范围内的抑制的加和性。
实施例7
化合物6和化合物T2的组合
使用MacSynergyTMII分析的在HCV复制子测定中确定化合物6和化合物T2的联合效应的实验结果显示在图3中。结果指示低浓度的化合物T2和高浓度的化合物6的协同抑制的区域。还使用Barton等人的方法分析了相同的数据，并将结果显示在图4中。结果指示所述组合在试验的剂量范围内的协同作用和加和性。
实施例8
化合物6和化合物T3的组合
使用MacSynergyTMII分析的在HCV复制子测定中确定化合物6和化合物T3的联合效应的实验结果显示在图5中。结果指示协同抑制的区域。还使用Barton等人的方法分析了相同的数据，并将结果显示在图6中。结果指示所述组合在试验的剂量范围内的加和性。
实施例9
使用基因型R155、A156T和D168Y的复制子测定
已经使用分子克隆中的标准技术构建了编码NS3蛋白酶中的氨基酸变异R155K、A156T和D168Y的HCV复制子。在HCV复制子测定中评估了这些复制子变体对化合物6和化合物T4的抑制的易感性，并将结果显示在表2中。结果指示，所述氨基酸变异与显著降低的对由化合物6造成的抑制的易感性有关，但是对化合物T4的抑制的易感性没有显著变化。
使用在实施例5中描述的TaqMan测定，评估了基因型1b (con1)的野生型HCV复制子和几种编码对化合物6具有抗性的突变的变体的抑制。结果指示化合物6对所述复制子变体的抑制效能的显著损失，但是化合物T4的抑制效能没有损失。
本发明不受限于在意图作为本发明几个方面的举例说明的实施例中所公开的具体实施方案，并且在功能上等同的任何实施方案均在本发明的范围内。实际上，除本文所示和所述的那些外，本发明的各种修改将是本领域技术人员显而易见的，并且意图落入到所附权利要求的范围内。
在本文中已经引用了许多参考文献，它们的整个公开内容通过引用并入本文。
　　　　　　　　　　　　　　　　　　序列表
 
<110> Steve Carroll
           John McCauley
          David Olsen
          Vincenzo Summa
          Mike Rowley
          Mark Stahlhut
          Daria Hazuda
 
<120> 可用于治疗病毒性疾病的组合物
 
<130> MRL-IFD-22574
 
<140> 61/553677
<141> 2011-10-31
 
<160> 3
 
<170> 用于Windows 4.0版的FastSEQ
 
<210> 1
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 5B.2F引物
 
<400> 1
ccggctactg cccat                                                  15
 
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> 5B.2R引物
 
<400> 2
ccagatcatc ctgatcgaca ag                                          22
 
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
 
<220>
<223> FAM标记的探针
 
<400> 3
acatcgcatc gagcgagcac gtac                                        24

Claims (11)

1. 一种药物组合物，其包含：(i) 药学上可接受的载体；(ii) 选自表1的化合物或其药学上可接受的盐；
和(iii) 一种或多种第一额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中所述一种或多种第一额外治疗剂选自：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS4A抑制剂和HCV NS5A抑制剂，其中所述一种或多种第一额外治疗剂不包括表1的化合物，且其中所述表1的化合物和所述一种或多种第一额外治疗剂的量一起有效地治疗患者中的HCV感染，使得当一种或多种第一额外治疗剂包括HCV NS5A抑制剂时，所述HCV NS5A抑制剂不是下述化合物之一：
或
。
2. 权利要求1所述的药物组合物，其中所述一种或多种第一额外治疗剂选自HCV聚合酶抑制剂和HCV NS5A抑制剂。
3. 权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV聚合酶抑制剂。
4. 权利要求1-3中的任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种第一额外治疗剂包括HCV NS5A抑制剂。
5. 权利要求1-4中的任一项所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含一种或多种第二额外治疗剂。
6. 权利要求1-5中的任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种第一额外治疗剂包括PSI-7977、PSI-938或R7128。
7. 权利要求1-6中的任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种第一额外治疗剂包括BMS-790052。
8. 权利要求1-7中的任一项所述的药物组合物，其中所述第二额外治疗剂包括利巴韦林和聚乙二醇化干扰素-α中的一种或两种。
9. 一种治疗被HCV感染的患者的方法，所述方法包括，给所述患者施用：(i) 选自表1的化合物或其药学上可接受的盐；
和(ii)一种或多种额外治疗剂或其药学上可接受的盐，其中所述一种或多种额外治疗剂选自：HCV蛋白酶抑制剂、HCV聚合酶抑制剂、HCV NS4A抑制剂和HCV NS5A抑制剂，其中所述一种或多种额外治疗剂不包括表1的化合物，且其中施用的表1的化合物和一种或多种额外治疗剂的量一起有效地治疗所述患者中的HCV感染，使得当所述一种或多种额外治疗剂包括HCV NS5A抑制剂时，所述HCV NS5A抑制剂不是下述化合物之一:
或
。
10. 一种治疗被HCV感染的患者的方法，所述方法包括，给所述患者施用权利要求1-8中的任一项所述的组合物。
11. 权利要求1-8中的任一项所述的组合物用于抑制HCV复制或用于预防和/或治疗有此需要的患者中的HCV感染的用途。
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