发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此,本发明的一个目的在于设计一种新的封装胚胎的装置。更具体地说是一种运输胚胎过程中所需要的封装装置及封装胚胎的方法。
在本发明的第一方面,本发明提出了一种封装胚胎的装置。根据本方明的实施例,该封装胚胎的装置包括:第一容器,所述第一容器的容量为1mL~10mL;第二容器,所述第二容器的容量为20mL~100mL,并且所述第二容器中设置有至少20mL的水;以及麦管,所述麦管中设置有包含胚胎的缓冲液,并且所述麦管的一端设置有纤维状塞子,所述麦管的另一端形成有折叠封闭结构,其中,所述第一容器设置在所述第二容器中,以及所述麦管设置在所述第一容器中。发明人发现利用根据本发明实施例的封装胚胎的装置,由于第二容器的容量为20mL~100mL,远大于麦管中储藏胚胎的空间。由此,可以有效地可以能够有效地将胚胎保持在相对恒定的温度和pH下,从而利用根据本发明实施例的封装胚胎的装置,能够有效地对胚胎进行封装,并且能够有效地用于对胚胎进行转移。
根据本发明的实施例,该胚胎装置还包括如下附加技术特征:
根据本发明实施例,所述第二容器为体积为50ml的离心管,所述离心管中预先设置有45毫升水,并且所述第一容器为巴氏滴管。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。
根据本发明实施例,所述离心管的管口处设置有泡沫板,并且所述巴氏滴管的一端插入所述泡沫板中。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。
本发明第二方面,本发明提出了一种封装胚胎的方法。根据本方明的实施例,该方法包括:将含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中,其中,所述麦管的一端设置有纤维状塞子,
通过折叠所述麦管,将所述麦管远离所述纤维状塞子的一端封闭;
将所述麦管置于第一容器中,其中,所述第一容器的容量为1mL~10mL;
将所述装载有所述麦管的第一容器置于第二容器中,所述第二容器的容量为20mL~100mL,并且所述第二容器中预先设置有至少20mL的运输缓冲液;以及将所述第二容器进行封装。发明人发现利用根据本发明实施例的封装胚胎的方法,由于第二容器的容量为20mL~100mL,远大于麦管中储藏胚胎的空间。由此,可以有效地可以能够有效地将胚胎保持在相对恒定的温度和pH下,从而利用根据本发明实施例的封装胚胎的装置,能够有效地对胚胎进行封装,并且能够有效地用于对胚胎进行转移。
根据本发明的实施例,封装胚胎的方法还包括如下附加技术特征:
根据本发明实施例,所述第二容器为体积为50mL的离心管,所述离心管中预先设置有45mL水,并且所述第一容器为巴氏滴管。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。
根据本发明实施例,在将所述含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中之前,预先将所述麦管在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少15分钟。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
根据本发明实施例,所述第二容器的管口处设置有泡沫板,在对所述第二容器进行封装之前,将所述巴氏滴管的一端插入所述泡沫板中。根据本发明实施例,在所述第二容器的管口处设置泡沫板,所以第二容器在未放入巴氏滴管前,已经通过泡沫板将其内部空间与外界作了简单隔离。由此,保证了离心管在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中内部环境的稳定性,从而进一步保证了胚胎的活性。
根据本发明的实施例,在将所述装载有麦管的第一容器置于第二容器之前,预先将所述设置有45毫升水的第二容器在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少1小时。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
根据本发明的实施例,在将所述麦管置于第一容器之前,预先将所述第一容器在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少15分钟。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。
根据本发明实施例,所述运输缓冲液的pH为7.0~7.1,并且所述运输缓冲液含有:NaCl、NaHCO3、KCl、KH2PO4、MgSO4、乳酸钙-5H2O(Ca-Lactate-5H2O)、丙酮酸钠(Na-pyruvate)、肌醇(Myo-Inositol)、酚红(PhenolRed)(母液10mg/mL)、BSA和H2O。其中,酚红可以被预先配制为已知浓度的母液,在配制运输缓冲液时,取适量的母液即可,例如可以配制浓度为10mg/mL的母液。根据本发明的具体实施例,所述运输缓冲液含有:
由此,发明人发现通过才用本发明实施例的运输缓冲液封存运输胚胎,与传统的运输缓冲液封存运输胚胎相比,更适于胚胎的长期存放,可以提高胚胎在运输过程中的活性,从而进一步提高胚胎移植的成功率。
所述运输缓冲液的pH保持在7.0~7.1之间,将有利于胚胎在运输过程中生长,同时也与移植受体体内的pH接近。所以通过控制运输缓冲液的pH值,可以提高胚胎在运输过程中的活性,从而进一步提高胚胎移植的成功率。
本方明的第三方面,发明人提出了一种运输胚胎的方法。根据本方明的实施例,该方法包括:利用前面所述的方法,对待运输的胚胎进行封装;以及将经过封装的胚胎在恒温条件下进行运输。利用该方法,能够有效地对胚胎进行运输。在本发明的一个实施例中,将所述经过封装的胚胎置于恒温箱中,以便实现在恒温条件下进行运输,其中,所述恒温箱的温度为38.5±0.5摄氏度。从而可以进一步确保在运输过程中,胚胎的活性得以维持。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例在附图中示出,其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的,旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。
此外,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中,“多个”的含义是两个或两个以上,除非另有明确具体的限定。
下面参考图1对本发明的封装胚胎的装置进行描述。如图1所示,根据本发明的实施例,本发明提出了一种用于封装胚胎的装置,其包括第一容器600、第二容器700、麦管500。其中,第一容器600的容量为1mL~10mL,第一容器600设置在第二容器700中,第二容器700的容量为20mL~100mL,并且在该第二容器700中设置有至少20mL的水300。麦管500设置在第一容器600中,并且在麦管500中,设置有包含胚胎的缓冲液400,并且麦管500的一端设置有纤维状塞子,另一端形成有折叠封闭结构,换句话说,通过在麦管500的一端塞入纤维状塞子,并且在另一端对麦管进行折叠,实现了对麦管500的封闭处理。发明人发现利用根据本发明实施例的封装胚胎的装置,由于第二容器700的容量为20mL~100mL,远大于麦管500中储藏胚胎的空间。由此,可以有效地可以能够有效地将胚胎保持在相对恒定的温度和pH下,从而利用根据本发明实施例的封装胚胎的装置,能够有效地对胚胎进行封装,并且能够有效地用于对胚胎进行转移。
根据本发明的实施例,可以利用本发明的胚胎封装装置进行封装的胚胎的类型并不受特别限制,可以为体细胞移植胚,体外受精胚。根据本发明的实施例,可以利用本发明的胚胎封装装置进行封装的通过体内冲胚方法所获胚胎的胚胎体积并不受特别限制,只要可以被根据本发明的实施例的麦管可以容纳即可。
根据本发明实施例,所述第二容器700为体积为50mL的离心管,所述离心管中预先设置有45mL水,并且所述第一容器600为巴氏滴管。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。根据本发明的实施例,当采用离心管作为第二容器,采用巴氏滴管作为第一容器,将巴氏滴管设置在离心管中的方式和手段并不受特别限制。根据本发明实施例,所述离心管的管口处设置有泡沫板200,并且所述巴氏滴管的一端插入所述泡沫板200中。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。根据该实施例,将所述巴氏滴管放置在所述离心管中时,是通过预先在离心管口设置泡沫板200,且泡沫板200预先设置一个与巴氏滴管直径相当的孔径,以便巴氏滴管固定在离心管中。换个方式说,就是所述巴氏滴管在离心管里具有可支撑的物体(泡沫板),它在离心管内部位置是固定的,不是随意性的。从而进一步减弱了巴氏滴管在运输过程中的震动。另外,发明人发现,通过事先在离心管管设置泡沫板200,可以减少外界环境对其内部环境的干扰。
根据本发明的实施例,第一容器的材质并不受特别限制,可以是任何常用的容器材料。根据本发明的实施例,可以采用橡胶材质,由此所得到的第一容器较为具有弹性,从而可以便于通过挤压排空其内部的空气。由此,根据本发明的实施例优选采用的第一容器可以为容量为1mL~10mL的巴氏滴管以及与巴氏滴管大小形状类似的容器。。
另外,第二容器的类型也不受特别限制,只要其容积能够足以容纳第一容器即可。根据本发明的实施例,可以采用的第二容器的类型为带塞的试管、离心管等,容器容量也不受特别限制。根据本发明的实施例,优选采用20mL~100mL的离心管,更优选采用50mL的离心管。
在本发明实施例中,所采用的运输缓冲液的pH为7.0~7.1所述运输缓冲液可以含有:NaCl、NaHCO3、KCl、KH2PO4、MgSO4、乳酸钙-5H2O(Ca-Lactate-5H2O)、丙酮酸钠(Na-pyruvate)、肌醇(Myo-Inositol)、酚红(PhenolRed)(母液10mg/mL)、BSA和H2O。其中,酚红可以被预先配制为已知浓度的母液,在配制运输缓冲液时,取适量的母液即可,例如可以配制浓度为10mg/mL的母液。根据本发明的具体实施例,优选可以采用的运输缓冲溶液可以含有:
由此,发明人发现通过才用本发明实施例的运输缓冲液封存运输胚胎,与传统的运输缓冲液封存运输胚胎相比,更适于胚胎的长期存放,可以提高胚胎在运输过程中的活性,从而进一步提高胚胎移植的成功率。
下面参考图2,对本发明封装胚胎的方法进行描述。如图2所示,根据本发明的实施例,本发明提出了一种用于封装胚胎的方法,包括:
S100:将含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中
在该步骤中,将含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中,其中,所述麦管的一端设置有纤维状塞子。根据本发明的实施例,可以利用本发明的方法进行封装的胚胎的类型不受特别限制。可以为体细胞移植胚,体外受精胚。根据本发明的实施例,可以利用本发明的胚胎封装装置进行封装的通过体内冲胚方法所获胚胎的胚胎体积并不受特别限制,只要可以被根据本发明的实施例的麦管可以容纳即可。本领域技术人员可以采用任何本领域中已知的方法进行胚胎收集,具体的,可以采用口吸管进行胚胎收集。根据本发明的实施例,通过在麦管的一端设置纤维状塞子,优选地,通过在麦管的一端设置棉花,由此,可以防止外界污染物进入麦管,并保持麦管的一端密闭,使得缓冲溶液不能漏出。在本发明实施例中,所述运输缓冲液可以包含:主要成分NaCl、NaHCO3、KCl、KH2PO4、MgSO4、乳酸钙-5H2O(Ca-Lactate-5H2O)、丙酮酸钠(Na-pyruvate)、肌醇(Myo-Inositol)、酚红(PhenolRed)(母液10mg/mL)、BSA和H2O。其中,酚红可以被预先配制为已知浓度的母液,在配制运输缓冲液时,取适量的母液即可,例如可以配制浓度为10mg/mL的母液。根据本发明的具体实施例,优选可以采用的缓冲溶液包括:
由此,发明人发现通过才用本发明实施例的运输缓冲液封存运输胚胎,与传统的运输缓冲液封存运输胚胎相比,更适于胚胎的长期存放,可以提高胚胎在运输过程中的活性,从而进一步提高胚胎移植的成功率。根据本发明的实施例,将含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中之前,预先将麦管在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少15分钟。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
S200:通过折叠,将麦管的一端封闭
在该步骤中,将含有胚胎的运输缓冲液装载入麦管中之后,可以通过折叠麦管,将麦管远离棉花的一端封闭。具体的,可以通过在离麦管无棉塞的一端1厘米处折一下并用镊子将折痕夹紧,后将折下的一部分再次反向折一下并用镊子将折痕夹紧,随后竖直麦管检测液面有无下降,如有则用镊子再次夹紧折痕或者将折下部分再折一次形成三道折痕。对单纯使用麦管和利用本发明所述胚胎封装装置的运输液运输前后pH进行测量对比。发明人发现,本发明所述的胚胎封装装置中的运输液颜色不变化,而单用麦管运输的运输液颜色加深。颜色变化是对运输液pH值变化的直观反应。而pH值是衡量溶液酸碱度的一个指标。胚胎在移植前活性指数是保证移植成功率的关键因素之一。因而本发明所采用封装胚胎装置大大提高了运输液的pH缓冲能力。从而为胚胎提供了较为稳定的液体环境。
根据本发明的实施例,将所述装载有所述麦管的第一容器置于第二容器之前,预先将所述设置有45毫升水的第二容器在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少1小时。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
S300:将麦管置于第一容器中
在将麦管封闭之后,将麦管置于第一容器中,根据本发明的实施例,第一容器的容量可以为1mL~10mL。根据本发明的实施例,第一容器的材质并不受特别限制,可以是任何常用的容器材料。根据本发明的实施例,可以采用橡胶材质,由此所得到的第一容器较为具有弹性,从而可以便于通过挤压排空其内部的空气。由此,根据本发明的实施例优选采用的第一容器可以为容量为1mL~10mL的巴氏滴管以及与巴氏滴管大小形状类似的容器。根据本发明的实施例,在将所述麦管置于第一容器中之前,预先将所述第一容器在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少15分钟。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
S400:将第一容器置于第二容器中
在将麦管装入第一容器之后,可以将第一容器置于第二容器中,根据本发明的实施例,第二容器的容量为20mL~100mL,并且第二容器中预先设置有至少20mL的运输缓冲液。在将第一容器置于第二容器中之后,将所述第二容器进行封装,由此实现了对胚胎的封装。第二容器的类型也不受特别限制,只要其容积能够足以容纳第一容器即可。根据本发明的实施例,可以采用的第二容器的类型为带塞的试管、离心管等,容器容也不受特别限制。根据本发明的实施例,优选采用20mL~100mL的离心管,更优选采用50mL的离心管。
根据本发明的实施例,将所述装载有所述麦管的第一容器置于第二容器之前,预先将所述设置有45mL水的第二容器在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中放置至少1小时。由此,发明人发现可以有效地进一步保证在胚胎的封装过程中,以及后续运输过程中,运输体系内温度和pH值以及二氧化碳浓度的稳定。由此,可以进一步保证所封装的胚胎的活性。
根据本发明实施例,所述第二容器为体积为50mL的离心管,所述离心管中预先设置有45mL水,并且所述第一容器为巴氏滴管。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。根据本发明的实施例,当采用离心管作为第二容器,采用巴氏滴管作为第一容器式,将巴氏滴管设置在离心管中的方式和手段并不受特别限制。根据本发明实施例,所述离心管的管口处设置有泡沫板,并且所述巴氏滴管的一端插入所述泡沫板中。由此,可以进一步提高对胚胎进行封装的效率,并且能够进一步有效地用于对胚胎进行转移。根据该实施例,将所述巴氏滴管放置在所述离心管中时,是通过预先在离心管口设置泡沫板,且泡沫板预先设置一个与巴氏滴管直径相当的孔径,以便巴氏滴管固定在离心管中。换个方式说,就是所述巴氏滴管在离心管里具有可支撑的物体(泡沫板),它在离心管内部位置是固定的,不是随意性的。从而进一步减弱了巴氏滴管在运输过程中的震动。另外,发明人发现,通过事先在离心管管设置泡沫板,可以减少外界环境对其内部环境的干扰。
根据本发明的实施例,发明人首先将胚胎置于含有棉花的麦管中,并对麦管进行折叠封闭,从而对胚胎提供第一道安全保护屏障,随后又将含有胚胎的麦管置于平衡好的巴氏滴管中,即为胚胎提供了第二道安全保护屏障(稳定的气体环境)。之后,又将巴氏滴管置于含有45mL温度为38.5摄氏度的纯净水的离心管。而装载胚胎的麦管所含的运输液仅为200mL,离心管中含有液体体积远远大于麦管所含运输液的体积,如此,便间接的对胚胎不断提供所需要的热能,增加运输液对环境温度变化的缓冲能力,使得胚胎所处环境温度处在相对稳定状态;其次,巴氏滴管本身是固定结构,而水是液态。所以将巴氏滴管置于远远大于自身体积液态里,就减弱了运输过程中的震动。
由此,本发明的又一方面,本发明提出了一种运输胚胎的方法。根据本方明的实施例,该方法包括:利用前面所述的方法,对待运输的胚胎进行封装;以及将经过封装的胚胎在恒温条件下进行运输。利用该方法,能够有效地对胚胎进行运输。在本发明的一个实施例中,将所述经过封装的胚胎置于恒温箱中,以便实现在恒温条件下进行运输,其中,所述恒温箱的温度为38.5±0.5摄氏度。从而可以进一步确保在运输过程中,胚胎的活性得以维持。
下面通过具体的实施例对本发明进行说明,这些实施例仅仅是说明性的,而不以任何方式限制本发明的范围。
1.工具与试剂准备:
1)在50mL离心管中注入45mL纯净水,并将泡沫塞入离心管,然后放置于加热台(38.5摄氏度)预热;
2)将巴斯滴管和装有至少800μL运输液(PZM3)离心管放入培养箱中(38.5摄氏度,5%CO2,最大湿度)分别平衡至少15分钟和4小时;
2.胚胎装载(以下步骤均除非特别说明,均在38.5摄氏度热台上进行操作):
1)在60mmPetridish中用运输液(平衡好的PZM3)做3个体积为300μL滴(编号1、2和3)
2)将胚胎从各个盘中收集到1号PZM3滴中,然后转入2号滴中进行清洗,将转入时带入的油滴洗掉,然后再转入3号滴中准备装载(尽量保持聚集以便装载);
3)一手拿移液器,一手拿麦管,先将移液器枪口对准麦管带有棉塞一端,然后连同PZM3吸入所有囊胚(200μL左右);
4)对麦管进行封闭,在离麦管无棉塞的一端l厘米处折一下——用镊子将折痕夹紧——后将折下的一部分再次反向折一下——再用镊子将折痕夹紧——竖直麦管检测液面有无下降,如有则用镊子再次夹紧折痕或者将折下部分再折一次形成三道折痕;
5)将麦管装进预先平衡好的巴氏滴管中,然后将巴氏滴管放入培养箱中平衡10分钟~15分钟;
6)捏住巴氏滴管口将其从培养箱中拿出,然后用夹子夹住口,放入平衡好的50mL离心管中;
3.离心管横着固定在保温箱中,运输到基地。
4.移植时直接从离心管中拿出巴氏滴管,用剪刀剪去管口一段,轻轻倒出麦管,然后剪去麦管密封端,进行移植。
在该实施例中,将部分运输液预先在温度为38.5摄氏度、二氧化碳浓度为5%以及湿度为100%的环境中平衡。根据本发明实施例,发明人准备好三支麦管(编号1、2和3),其中在1号管中加入未平衡的运输液,2号和3号管中加入平衡好的运输液,各管均加入了pH值指示剂,观察三支麦管,可以发现1号管中运输液因未平衡颜色较深,2和3号管中的运输液经过在培养箱中平衡颜色相同(浅),另外,又将3号管放入预先平衡且密封的巴氏滴管中,1号和2号管暴露在空气中,经过5小时放置后,2号管中运输液颜色逐渐加深,而3号管中的运输液仍为最浅。颜色变化是对运输液pH值变化的直观反应。而pH值是衡量溶液酸碱度的一个指标。从该实施例中,可以看出预先对运输液进行平衡是保证运输液pH值不变的前提,而对平衡好运输液放置环境选择是必要的。由此,证明了,巴氏滴管的预先平衡和密封保证了运输液pH值的稳定。在运输过程中,只有运输液的酸碱度保持稳定,才能保证胚胎生物性状不发生改变,也就可以进一步提高胚胎在移植中成活率。因此本发明的胚胎封装装置大大提高了运输液的pH缓冲能力。从而为胚胎提供了较为稳定的液体环境。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。