一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料
技术领域
本发明涉及饲料领域,更具体地,涉及一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料。
背景技术
斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)属于鲶形目(Siluriformes)、鮰科(Ictaluridae)鱼类,是一种大型淡水鱼类,具有食性杂、生长快、适应性广、抗病力强等优点;斑点叉尾鮰肉质细嫩,无肌间刺,富含蛋白质和维生素,味道鲜美,是一种深受养殖生产者、加工者和消费者欢迎的优质鱼类。我国自1987年人工繁殖成功后已经在20多个省市推广养殖。
在斑点叉尾鮰集约化养殖模式下,高放养密度是获取高养殖效益回报的基础,投喂高档次饲料可促进斑点叉尾鮰生长、缩短养殖周期,实现提前上市。但长期投喂高档次饲料在确保斑点叉尾鮰具有良好生长优势的过程中,斑点叉尾鮰体质减弱的现象也比较严重,症状上主要表现为食欲减退、体色光泽暗淡,肝脏发白或发黄且多带“花斑状”,胆囊肿大,胆汁淡黄等; 遇较大温差变化或水质不稳定时,斑点叉尾鮰对病原菌的易感性上升,常出现零星发病,严重时斑点叉尾鮰亩均死亡数量高达70-100尾,造成的经济损失不容小视。针对斑点叉尾鮰体质减弱的情况,使用抗生素拌饲内服不但药不对症,而且会进一步诱发斑点叉尾鮰的体衰、药残和水质污染等问题;其他市售保健类药品因缺乏针对性往往很难达到理想的保健效果。
本发明通过分析斑点叉尾鮰的饲料营养结构和养殖管理特点,针对斑点叉尾鮰养殖过程中体质减弱的问题,开发一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料。
发明内容
本发明的目的是提供一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料,该饲料可明显提高斑点叉尾鮰的非特异性免疫力,提高斑点叉尾鮰的成活率。
本发明提供一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料,按重量份计,包括以下组分,肉骨粉5-14份,菜粕15-25份,去皮豆粕20-40份,氯化胆碱0.2-0.5份,次粉15-22份,豆油0.5-1份,维生素预混料0.2份,矿物质预混料0.15份、磷酸二氢钙1-2份,植物酶0.01-0.03份,胆盐类物质0.05-0.1份,毒素吸附剂0.03-0.06份,天然植物复合物0.1-0.3份,多糖复合物0.1-0.3份。
优选还包括鱼粉1-8份。
在每100Kg的所述的维生素预混料为中含有维生素A 11×106IU,维生素B1 27.5g,核黄素66g,维生素B6 55g,泛酸钙 175g,尼克酸110g,叶酸11g,维生素B12 0.05g,维生素C 250g,维生素D 5.5×106IU,维生素E 3.3×105IU,维生素K 5×104IU。
在每100Kg的所述的矿物质预混料中,含有氧化锌1000g,亚硒酸钠0.5g,碳酸钴0.25g,碘化钾13.2g,硫酸亚铁150g,硫酸铜25g,氧化锰125g,次粉97.5g。
在每100Kg的所述的天然植物复合物中含有当归50Kg,黄芪20Kg,杜仲叶10Kg,枸杞10Kg,玉竹10Kg。
在每100Kg的所述的多糖复合物中含有黄芪多糖15Kg,果寡糖3Kg,甘露糖7Kg,次粉75Kg。
所述胆盐类物质为18%胆汁酸盐。
所述毒素吸附剂为市售商品。
本发明所述的一种斑点叉尾鮰免疫增强型饲料的制备方法,操作步骤为:
(1)按饲料配方中各组分的质量百分比准确称取各组分;
(2)将鱼粉、肉骨粉、菜粕、去皮豆粕、氯化胆碱、次粉、多维预混料、多矿预混料、磷酸二氢钙、胆盐类物质、毒素吸附剂经过超微粉碎,使其能够通过50-60目的筛网,按配比充分混合3-5分钟,再与天然植物复合物、多糖复合物、豆油和水充分混匀;
(3)通入蒸汽调质熟化,调质时间80-100s,熟化温度85-90℃;
(4)在90-95℃条件下,将饲料颗粒干燥、冷却、包装。
本发明具有以下优点:
1. 本发明针对斑点叉尾鮰的消化性能和养殖特点,科学配比各种原料,均衡营养。本发明配方中鱼粉、豆粕、肉骨粉、菜粕等原料是为饲料提供重要的蛋白源,可促进斑点叉尾鮰快速生长,提高消化吸收率;本发明配方中添加的天然植物复合物和多糖复合物,来源广泛,绿色无污染,成本可控,对斑点叉尾鮰非特异性免疫力具有良好的增强作用。本发明所述的饲料配方中,棉粕为零添加,规避了棉粕中抗营养因子棉酚对斑点叉尾鮰生长性能的负作用。
2. 增强斑点叉尾鮰非特异性免疫水平,增强鱼体抗病力;饲料营养均衡,可促进斑点叉尾鮰快速生长,降低饵料系数。
3. 本发明加强了斑点叉尾鮰的白细胞杀菌活性,增强鱼体血液白细胞对外源入侵病原微生物的防御及清除能力;本发明还增强了斑点叉尾鮰血清溶菌酶活性,增强鱼体血清对外源入侵病原微生物的非特异性裂解能力;本发明还可以增强斑点叉尾鮰血清补体C3活性,激活补体旁路途径增强鱼对外源入侵病原微生物的识别与清除能力;结合以上三点从而大大降低了斑点叉尾鮰的死亡率。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明,本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
实施例1
(1)按饲料配方称取原料,各种原料的质量百分比如下:鱼粉8%、肉骨粉12%、菜粕20%、去皮豆粕36%、氯化胆碱0.25%、次粉20%、豆油1%、多维预混料0.2%、多矿预混料0.1%、磷酸二氢钙2%、植物酶0.03%,胆盐类物质0.07%,毒素吸附剂0.04%、天然植物复合物0.2%、多糖复合物0.11%。
(2)将鱼粉、肉骨粉、菜粕、去皮豆粕、氯化胆碱、次粉、多维预混料、多矿预混料、磷酸二氢钙、胆盐类物质、毒素吸附剂经过超微粉碎,使其能够通过50-60目的筛网,按配比充分混合3-5分钟,再与天然植物复合物、多糖复合物、豆油和水充分混匀;
(3)通入蒸汽调质熟化,调质时间80-100s,熟化温度85-90℃;
(4)在90-95℃条件下,将饲料颗粒干燥、冷却、包装。
实施例2
(1)按饲料配方称取原料,各种原料的质量百分比如下:鱼粉4%、肉骨粉14%、菜粕22%、去皮豆粕36%、氯化胆碱0.25%、次粉20%、豆油1%、多维预混料0.2%、多矿预混料0.1%、磷酸二氢钙2%、植物酶0.03%,胆盐类物质0.08%,毒素吸附剂0.04%、天然植物复合物0.15%、多糖复合物0.15%。
(2)将鱼粉、肉骨粉、菜粕、去皮豆粕、氯化胆碱、次粉、多维预混料、多矿预混料、磷酸二氢钙、胆盐类物质、毒素吸附剂经过超微粉碎,使其能够通过50-60目的筛网,按配比充分混合3-5分钟,再与天然植物复合物、多糖复合物、豆油和水充分混匀。
(3)通入蒸汽调质熟化,调质时间80-100s,熟化温度85-90℃。
(4)在90-95℃条件下,将饲料颗粒干燥、冷却、包装。
实施例3
养殖实验
(一)材料与方法
1.1材料
1.1.1试验用斑点叉尾鮰购自四川眉山某斑点叉尾鮰良种场。
1.1.2嗜水气单胞菌由海大畜牧水产研究中心保存提供。
1.1.3 试验饲料选取本发明中实施例1、2配制的饲料,空白饲料为未添加本发明的天然植物复合物和多粮复合物的基础饲料。
1.2方法
1.2.1 试验分组及饲养管理
选取健康、大小均匀的斑点叉尾鮰(100±5g)设3个处理(实施例1、实施例2、对照组),每个处理设置3个重复。每个重复组斑点叉尾鮰用鱼100尾,暂养露天水泥池中,用基础饲料投饲驯化到斑点叉尾鮰主动抢食为止,驯化时间为5-7d,正式养殖时间为30d,每天投喂三次,投喂时间分别为9:00、13:00,17:00,日投喂总量为鱼体重的3%,每周调整一次投饵率,试验期间水温为28±4℃,水质pH值7.0-7.4,溶氧≧ 7.0mg/L,氨氮≦0.1mg/L,亚硝酸盐≦0.05mg/L。
1.2.2测定指标与方法
1.2.2.1生长性能指标测定
试验开始及结束时分别对水族箱中的斑点叉尾鮰进行称重并记录其初始重量(g)及终末重量(g),记录试验期间各组饲料投喂总重量(g),计算增重率、饲料系数。
试验结束时,从各组随机捞取5尾斑点叉尾鮰,称量并记录;接着解剖斑点叉尾鮰,分离肝胰脏组织,称重并记录,测定肝胰体比。
1.2.2.2血液学指标测定
1.2.2.2.1血液采集与血清制备
试验开始及结束时,分别从各组随机捞取斑点叉尾鮰5尾,从尾静脉采非抗凝血,所采血液分为两份,一份为肝素钠抗凝血,用于白细胞杀菌活性的测定;另一份为非抗凝血,经5000rpm 离心10min,获取的上清液即为血清样品,置于-20℃保存,用于血清溶菌酶活性、补体C3测定。
1.2.2.2.2白细胞杀菌活性的测定
取白细胞悬液0.5mL,加入0.1mL的浓度为1.0×108cells/mL的金黄色葡萄球菌液,混匀后置于28℃水浴中孵育1h,离心10min弃上清液,加入0.5mL Hank's液重悬。在原温度下继续孵育80min、100min、120min和150min,定时从中吸取0.2mL细胞悬液于另一试管中,加入1.0mL0.2%的Tween_20破碎白细胞,并加入0.5mL MEM培养液培养16h,再加入0.06mL的5.0mg/mL的MTT,摇动15min后用分光光度计在600nm处测定吸光度[21]。按下列公式计算杀菌指数(BI):
BI<1.0为具有杀菌能力;BI>1.0则无杀菌能力;BI值升高,杀菌能力降低,反之亦然。
1.2.2.2.3 血清溶菌酶活性的测定
血清溶菌酶活性参照南京建成生物工程研究所生产的试剂盒(产品编号A050)测定,操作方法参照产品说明书进行。
1.2.2.2.4血清补体C3含量的测定
血清补体C3含量采用伊利康生物技术有限公司生产的试剂盒(产品编号YLK2005)测定,操作方法参照说明书进行。
1.2.2.2.5 活菌攻毒
在试验的第31d时,随机从各组捞取试验鱼80尾,先用1%(V/V)的乙醚对斑点叉尾鮰进行轻度麻醉,再以0.2mL每尾的剂量腹腔注射浓度为1.5×107cfu/mL嗜水气单胞菌活菌液,连续观察10d,记录各组试验鱼的死亡率,按以下公式计算免疫保护率。
(二)试验结果
2.1生长性能指标测定
注:同列标注不同大写字母表示差异极显著(P<0.01), 不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由上表可知,与对照组相比,本发明实施例斑点叉尾鮰终末均重、平均增重率显著增加(P<0.05),肝体比极显著增加(P<0.01),饵料系数显著降低(P>0.05)。这说明,本发明实施例可以促进斑点叉尾鮰生长,缩短养殖周期,提高肝体比,降低饵料系数,降低养殖成本,提高养殖效益。
2.2白细胞杀菌活性测定
注:同列标注不同大写字母表示差异极显著(P<0.01), 不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由上表可知,与对照组相比,连续投喂本发明的实施例30天,供试斑点叉尾鮰血液白细胞杀菌活性极显著增强(P<0.01),而本发明实施例1与实施例2对斑点叉尾鮰血液白细胞杀菌活性的增强效果组间差异不显著(P>0.05)。这说明本发明实施例可增强斑点叉尾鮰血液白细胞杀菌活性,增强鱼体血液白细胞对外源入侵病原微生物的防御及清除能力。
2.2血清溶菌酶活性测定
注:同列标注不同大写字母表示差异极显著(P<0.01), 不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由上表可知,与对照组相比,连续投喂本发明的实施例30天,供试斑点叉尾鮰血清溶菌酶活性极显著增强(P<0.01),而本发明实施例1与实施例2对斑点叉尾鮰血清溶菌酶活性的增强效果组间差异不显著(P>0.05)。这说明本发明实施例可增强斑点叉尾鮰血清溶菌酶活性,增强鱼体血清对外源入侵病原微生物的非特异性裂解能力。
2.3血清补体C3测定
注:同列标注不同大写字母表示差异极显著(P<0.01), 不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由上表可知,与对照组相比,连续投喂本发明的实施例30天,供试斑点叉尾鮰血清补体C3含量极显著增强(P<0.01),而本发明实施例1与实施例2对斑点叉尾鮰血清溶菌酶活性的增强效果组间差异不显著(P>0.05)。这说明本发明实施例可增强斑点叉尾鮰血清补体C3活性,激活补体旁路途径增强鱼对外源入侵病原微生物的识别与清除能力。
2.4保护率
由上表可知,与对照组相比,连续投喂本发明的实施例30天,在第31天以腹腔注射方式人工感染嗜水气单胞菌,感染后10天内,实施例1、2各组斑点叉尾鮰平均存活数量分别为64尾和67尾,而对照组斑点叉尾鮰平均存活数量仅为11尾。这说明,连续投喂本发明的斑点叉尾鮰免疫增强型饲料,可以明显增强斑点叉尾鮰抗感染能力。
养殖试验结果证明:本发明的斑点叉尾鮰免疫增强型饲料能够满足鮰鱼的全部营养需求,对鮰鱼生长具有促进作用,饵料系数低。与基础饲料相比,连续使用本发明的斑点叉尾鮰免疫增强型饲料30天,斑点叉尾鮰白细胞杀菌活性、溶菌酶活性和补体C3含量显著的提高,对经腹腔注射的嗜水气单胞菌活菌也具有良好的防御与抗感染能力。