CN104186434A - 一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法。所述培育方法为将耐烟碱大头金蝇品种的大头金蝇卵接种含烟碱的在第一配方料中，将蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹，蝇蛹羽化后利用第二配方料喂养成虫，待其产卵后，进入下一世代的驯化培育，经过20～30世代的连续驯化培育，即可获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系。所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。本发明直接采用适宜浓度的烟碱水溶液与麸皮和进口鱼粉科学配伍，获得的第一配方料不仅成功掩盖烟碱的难闻和苦味，营养成分适当，保证大头金蝇幼虫生长顺利，而且因为烟碱含量的适当性和确定性，确保在同样的培育环境中，不同批次的同样重量组成的配方料获得的大头金蝇蛆率基本相同，获得稳定的培育效果。
Description
技术领域
本发明涉及昆虫培育技术领域，具体涉及一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法。
背景技术
不适用鲜烟叶指不适合用于烤烟生产的新鲜烟叶（含水量80～90%），与文献中大量提及的烤烟生产过程中产生的废次烟叶或低次烟叶（含水量约15%）不同。不适用烟叶通常是指烟株正常封顶并清除2～3片奶脚叶后，卷烟工业不适用的、需在田间清除处理的下部叶和上部叶，主要包括烟株底部因光照不足、发育不良、内含物不足、预计烤后品质较差、不具备烘烤价值的2片下部叶，以及烟株顶部开片不良、长度不足、结构僵硬、烤后品质较差的2片顶叶。
这些不适用烟叶若随意丢弃田间地头，极易造成环境污染和烟草病毒的重复感染，若采用现有技术的集中销毁或填埋的处理方式则需花费大量的费用，目前行业每吨不适用烟叶的处理费用平均高达200元，各烟叶产区往往需要在当地党委政府的组织领导下，进行政策宣传、造册登记、建设处理设施、统一清除、记录存档、公示、兑现补贴等措施督促进行不适用烟叶的处理，费时费力费成本。
采用耐烟碱的昆虫对不适用烟叶进行生物处理是一种较好的替代处理方法，环保，经济效益高。为了利用昆虫实现生物处理不适用鲜烟叶，首先需筛选出耐烟碱的昆虫品种。
本申请人基于对家蝇和不适用烟叶处理技术的长期研究，总结出利用不适用烟叶对家蝇进行耐烟碱品系的筛选、强化和培育方法。所述培育是将耐烟碱家蝇的卵接种于第一配方料，蝇蛹羽化后用第二配方料喂养成虫，经过20～30代的连续驯化获得耐烟碱家蝇品种。其方法的关键在于第一配方料和第二配方料的组成以保证耐烟碱家蝇的顺利生长。第一配方料组成为不适用鲜烟叶75～80%，麸皮10～15%，进口鱼粉5～10%；第二配方料为全脂奶粉70%、红糖29.8～29.9%、纯烟碱0.1～0.2%。
该技术方案可以成功培育出耐烟碱的家蝇品种，但是不同批次培育获得的老熟蝇蛆的数量相差较大，耐烟碱能力也有所区别，存在效果的不确定性。主要原因在于不适用烟叶的应用方面，虽然经过创造性的研究和大量实验总结出配方料中添加合理范围的不适用烟叶可保证对家蝇幼虫毒害作用的控制，但影响不烟叶烟碱含量的因素非常繁多，机理复杂，较难实现准确控制。影响烟叶中烟碱含量的因素主要包括：（1）不同生长期，烟叶中所含烟碱含量不同：烟草种子中烟碱含量为0，育苗过程中起开始在根部形成，后随着根系的发展壮大，烟碱的合成和积累能力逐渐增强，所以不同生长期，烟叶中所含烟碱含量不同；（2）烟株不同部位，烟碱含量显著不同，烟碱含量还受叶位和叶数较大的影响；（3）不同品种烟叶所含烟碱量不同；（4）土壤干湿的气候条件等均对烟碱含量有不同积蓄的影响；（5）农艺措施的不同显著影响烟叶烟碱含量，包括施肥种类、栽培密度、打顶抹杈施肥、环割和切根施肥、采收方式等等因素都显著影响烟叶中的烟碱含量，以施肥种类为例，三种形态的氮肥中，尿素施用后，烟碱积累最高，硝铵次之，硝酸钾处理的烟碱积累最低，比施用尿素低27%；以打顶时期为例，张丹等研究发现，随打顶时期推迟烟碱积累强度高峰依次下降，烟碱含量也依次减低，每推迟一天打顶，烟碱含量就下降0.0504%；再以切根施肥为例，切根1/8与不切根相比，上部叶烟碱下降1.9个百分点降幅31.33%，中部叶烟碱下降2.13个百分点，降幅51.4%。 如何避免采用不同批次培养料培育获得的老熟蝇蛆效果的不确定性是本领域亟待解决的技术难题。而采用稳定可行的技术方案培育出更多品种的耐烟碱昆虫品系并有效地连续驯化使其稳定，是本领域同时需要解决的重要技术问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺乏耐烟碱大头金蝇种的缺陷，提供一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法，本发明方法不受不适用烟叶各种因素影响，可获得稳定的培育效果。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
大头金蝇是不同于家蝇的一种昆虫，其是一种重要的经济昆虫和环保昆虫，可利用大头金蝇处理各种腐败有机废弃物，如啤酒渣、豆渣、鸡粪、猪粪和餐厨垃圾等。现有大头金蝇种对无毒的有机废弃物均有较好的生物处理能力，但对不适用鲜烟叶的处理效果不佳。主要原因是因为不适用鲜烟叶中含有一定量的烟碱等毒性物质，对大头金蝇幼虫（大头金蝇蛆）具有一定的毒害和抑制生长的作用。为了利用大头金蝇生物处理不适用鲜烟叶，首先需从野生大头金蝇种中筛选出耐烟碱的大头金蝇品种，提高大头金蝇对鲜烟叶的耐受能力。
本发明提供一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法，包括如下步骤：
S1.室内条件下将耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的大头金蝇品种的卵接种在第一配方料中，将蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹；
S2.蝇蛹羽化后利用第二配方料喂养其成虫，待其产卵后，进入下一世代的驯化培育；
S3.按上述步骤重复操作，经过20～30世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系；
其中，所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；
第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70%、红糖29.7～29.8%和烟碱0.2～0.3%。
优选地，所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
优选地，所述第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70%、红糖29.7%和烟碱0.3%。
所述烟碱优选采用纯度≥99.5%的市购产品。
所述第一配方料的配制方法为将第一配方料的各组分混匀后，加入特定质量百分比浓度的烟碱水溶液将配方料的湿度调至60%。
所述每1 kg第一配方料之中接入大头金蝇卵0.5～1.0 g。优选所述每1 kg第一配方料中接入大头金蝇卵0.8 g。
所述耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的耐烟碱大头金蝇品种是指首先从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种，然后再将筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料。
所述从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种的具体方法为：
S01.配置诱集培养料，将诱集培养料装入开口容器中；
所述诱集培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度1‰～2‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；
S02.天气晴好时，上午8:00～9:00将装有诱集培养料的容器分别放于生活垃圾堆、鸡场和猪场来诱集野生蝇卵，下午17:00～18:00收回放于各处的容器；
S03.将回收的各容器放在室内培养，等诱集到的野生蝇卵培育至幼虫老熟时，利用大头金蝇蛆的离食期行为将蝇蛆与配方料分离；
S04.通过大头金蝇幼虫的形态学鉴定，挑出大头金蝇蛆；
S05.筛选出4～5天老熟、每条蝇蛆重0.05～0.07 g、体态丰腴、颜色金黄的大头金蝇蛆，在室温条件下，让大头金蝇蛆自然化蛹、羽化后即可获得耐烟碱的大头金蝇种。
所述将筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的具体方法为：
S11.初始阶段：将耐烟碱大头金蝇品种的卵接种在初始培养料中，所述初始培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；在室内条件下，将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫；
S12.第1次强化阶段：待S11的成虫产卵后，将其产生的卵采用第1次强化培养料进行培育培养；所述第1次强化培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度（1+S）‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，S的取值选自0.1～0.5；在室内条件下，将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫；所述喂养其成虫均是利用全脂奶粉、红糖的混合物和水喂养。优选地，按照重量百分数计，所述全脂奶粉、红糖的用量比例为全脂奶粉70%，红糖30%；水喂养的方式是利用海绵吸饱水，供成虫吮吸。
S13.第N+1次强化阶段：对第N次强化阶段所得的成虫产的卵再次进行强化培养，并且第N+1次强化阶段所用的培养料所含组分符合如下比例：烟碱水溶液的质量百分比浓度=（第N次培育培养料中烟碱的含量+S）‰，其余组分含量不变，N为大于等于1的自然数，重复强化，直至最后一次培育阶段所述培养料中烟碱水溶液的质量百分比浓度达3‰为止。
优选地，所述培育大头金蝇的室内条件为温度25～30℃，湿度30～70%。
本发明的有益效果是：
本发明创造性地直接采用适宜浓度的烟碱水溶液与麸皮和进口鱼粉科学配伍，获得的第一配方料不仅成功掩盖烟碱的难闻和苦味，营养成分适当，保证大头金蝇幼虫生长顺利，而且因为烟碱含量的适当性和确定性，以及第一配方料和第二配方料营养物质和烟碱含量前后安排的合理性，确保在同样的培育环境中，不同批次的同样重量组成的配方料获得的大头金蝇蛆率基本相同，获得稳定的培育效果。
经过本发明培育获得的耐烟碱大头金蝇品系由于经过了20～30代的长期驯化培育，不仅适应了人工培养条件，而且形成了较稳定的遗传性状，其后代耐烟碱能力的稳定性很好，而不经过本发明培育获得的耐烟碱大头金蝇品系（只经过筛选和强化培养的大头金蝇）后代对烟碱的耐受性易发生退化，稳定性不好。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备为本技术领域常规试剂和设备。
烟碱购于常规化学试剂店，纯度为≥99.5%。
实施例1 从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种
S01.天气晴好时，配制诱集培养料，所述诱集培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮85%、进口鱼粉15%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
S02.将上述调制好的培养料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm）。于当日上午8:00将装有培养料的塑料盆放于一生活垃圾堆旁，下午17:00收回各处塑料盆，带回室内培养。
S03.在室内条件下（温度25℃，湿度30%），将诱集到的野生蝇卵培育至幼虫老熟，利用大头金蝇蛆的离食期行为将蝇蛆与配方料分离（即大头金蝇蛆老熟时会自行爬离培养料，寻找干燥的地方化蛹）。
S04.在解剖镜下通过幼虫的形态学鉴定，用镊子单独挑出大头金蝇蛆，排除其他蝇种。
S05.筛选出4～5天老熟、每条蝇蛆重0.05～0.07 g、体态丰腴、颜色金黄的大头金蝇蛆，在室温条件下，让这些大头金蝇蛆自然化蛹、羽化后即可获得耐烟碱的大头金蝇种。
实施例2 从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种
S01.天气晴好时，配制诱集培养料，所述诱集培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度1.5‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
S02.将上述调制好的培养料，每1kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm）。于当日上午8:00将装有培养料的塑料盆放于一生活垃圾堆旁，下午17:00收回各处塑料盆，带回室内培养。
S03.在室内条件下（温度25℃，湿度30%），将诱集到的野生蝇卵培育至幼虫老熟，利用大头金蝇蛆的离食期行为将蝇蛆与配方料分离（即大头金蝇蛆老熟时会自行爬离培养料，寻找干燥的地方化蛹）。
S04.在解剖镜下通过幼虫的形态学鉴定，用镊子单独挑出大头金蝇蛆，排除其他蝇种。
S05.筛选出4～5天老熟、每条蝇蛆重0.05～0.07 g、体态丰腴、颜色金黄的大头金蝇蛆，在室温条件下，让这些大头金蝇蛆自然化蛹、羽化后即可获得耐烟碱的大头金蝇种。
实施例3 从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种
S01.天气晴好时，配制诱集培养料，所述诱集培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70%、进口鱼粉30%，用质量百分比浓度2‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
S02.将上述调制好的培养料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm）。于当日上午8:00将装有培养料的塑料盆放于一生活垃圾堆旁，下午17:00收回各处塑料盆，带回室内培养。
S03.在室内条件下（温度25℃，湿度30%），将诱集到的野生蝇卵培育至幼虫老熟，利用大头金蝇蛆的离食期行为将蝇蛆与配方料分离（即大头金蝇蛆老熟时会自行爬离培养料，寻找干燥的地方化蛹）。
S04.在解剖镜下通过幼虫的形态学鉴定，用镊子单独挑出大头金蝇蛆，排除其他蝇种。
S5.筛选出4～5天老熟、每条蝇蛆重0.05～0.07 g、体态丰腴、颜色金黄的大头金蝇蛆，在室温条件下，让这些大头金蝇蛆自然化蛹、羽化后即可获得耐烟碱的大头金蝇种。
实施例4 对筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料
将实施例1～3任意实施例筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料，具体方法如下：
S11.初始阶段：
配制初始培养料，所述初始培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。将上述调制好的培养料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm），每盆接入大头金蝇卵0.8 g；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫。本实施例所述喂养其成虫是利用全脂奶粉、红糖的混合物和水喂养。按照重量百分数计，所述全脂奶粉、红糖的用量比例为全脂奶粉70%，红糖30%；水喂养的方式是利用海绵吸饱水，供成虫吮吸。
强化阶段：
S12.第1次强化阶段：待初始阶段的成虫产卵后，将其产生的卵采用第1次强化培养料进行强化培养；所述第1次强化培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度（1+S） ‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，S选自0.1～0.5；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫。
S13.第N+1次强化阶段：对第N次强化阶段所得的成虫产的卵再次进行强化培养，并且第N+1次强化阶段所用的培养料所含组分符合如下比例：烟碱水溶液的质量百分比浓度=（第N次培育培养料中烟碱的含量+S）‰，其余组分含量不变，N为大于等于1的自然数，重复强化，直至最后一次强化阶段所述培养料中烟碱水溶液的质量百分比浓度达3‰为止。
优选地，本实施中，在整个培育阶段中，烟碱水溶液的质量百分比浓度依次为1.1‰、1.2‰、1.3‰、1.4‰、1.5‰、1.6‰、1.7‰、1.8‰、1.9‰、2.0‰、2.1‰、2.2‰、2.3‰、2.4‰、2.5‰、2.6‰、2.7‰、2.8‰、2.9‰、3.0‰；也即大头金蝇卵共经历20次强化培养。此阶段培养出的大头金蝇种即对烟碱具有较高耐受能力。
实施例5 对筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料
将实施例1～3任意实施例筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料，具体方法如下：
S11.初始阶段：
配制初始培养料，所述初始培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70%、进口鱼粉30%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。将上述调制好的培养料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm），每盆接入大头金蝇卵0.8 g；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫。
强化阶段：
S12.第1次强化阶段：待初始阶段的成虫产卵后，将其产生的卵采用第1次强化培养料进行强化培养；所述第1次强化培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度（1+S） ‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，S选自0.1～0.5；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫；
S13.第N+1次强化阶段：对第N次强化阶段所得的成虫产的卵再次进行强化培养，并且第N+1次强化阶段所用的培养料所含组分符合如下比例：烟碱水溶液的质量百分比浓度=（第N次培育培养料中烟碱的含量+S）‰，其余组分含量不变，N为大于等于1的自然数，重复强化，直至最后一次强化阶段所述培养料中烟碱水溶液的质量百分比浓度达3‰为止。
优选地，本实施中，在整个培育阶段中，烟碱水溶液的质量百分比浓度依次为1.2‰、1.4‰、1.6‰、1.8‰、2.0‰、2.2‰、2.4‰、2.6‰、2.8‰、3.0‰；也即大头金蝇卵共经历10次强化培养。此阶段培养出的大头金蝇种即对烟碱具有较高耐受能力。
实施例6 对筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料
将实施例1～3任意实施例筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液的配方料，具体方法如下：
S11.初始阶段：
配制初始培养料，所述初始培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮85%、进口鱼粉15%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。将上述调制好的培养料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm），每盆接入大头金蝇卵0.8 g；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫。
强化阶段：
S12.第1次强化阶段：待初始阶段的成虫产卵后，将其产生的卵采用第1次强化培养料进行强化培养；所述第1次强化培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度（1+S） ‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，S选自0.1～0.5；在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养其成虫；
S13.第N+1次强化阶段：对第N次强化阶段所得的成虫产的卵再次进行强化培养，并且第N+1次强化阶段所用的培养料所含组分符合如下比例：烟碱水溶液的质量百分比浓度=（第N次培育培养料中烟碱的含量+S）‰，其余组分含量不变，N为大于等于1的自然数，重复强化，直至最后一次强化阶段所述培养料中烟碱水溶液的质量百分比浓度达3‰为止。
优选地，本实施中，在整个培育阶段中，烟碱水溶液的质量百分比浓度依次为1.5‰、2.0‰、2.5‰、3.0‰；也即大头金蝇卵共经历4次强化培养。此阶段培养出的大头金蝇种即对烟碱具有较高耐受能力。
实施例7 多个世代的连续驯化培育获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系
将实施例4～6任意实施例培育出来的耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的大头金蝇品种再经过多个世代的连续驯化培育，形成稳定的耐烟碱大头金蝇品系。具体方法为：
S1.室内条件下，将耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的大头金蝇品种的卵接种在第一配方料中，将蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹；
S2.蝇蛹羽化后利用第二配方料喂养其成虫，待其产卵后，进入下一世代的驯化培育；
S3.按上述步骤重复操作，经过20～30世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系；
第一配方料的配制：所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
将上述调制好的配方料，每1 kg装入一方形塑料盆中（长*宽*高=45cm*30cm*12cm），每盆接入大头金蝇卵0.8 g；
在室内条件下（温度25～30℃，湿度30～70%），将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹；
蝇蛹羽化后利用第二配方料喂养其成虫，第二配方料由以下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70.0%、红糖29.8%和烟碱0.2%，所述百分数均为重量百分数，待其产卵后，进入下一世代的驯化培育；
按上述步骤重复操作，经过30世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系。
实施例8
其他操作同实施例7，不同的是所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮85%、进口鱼粉15%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。所述第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70.00%、红糖29.85%和烟碱0.25%。经过25世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系。
实施例9
其他操作同实施例7，不同的是所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70%、进口鱼粉30%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。所述第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70.00%、红糖29.7%和烟碱0.3%。经过20世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系。
对比例1
操作同实施例1，不同的是所述诱集培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮95%、进口鱼粉5%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。实验发现利用如上诱集培养料几乎诱集不到大头金蝇种前来产卵。
对比例2
操作同实施例1，不同的是所述诱集培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%和进口鱼粉20%。实验发现利用如上诱集培养料诱集到的卵都不是耐烟碱的品种。
实施例10
将本发明实施例1至3筛选出来的大头金蝇品种、实施例4至6经过强化培养耐受3‰的烟碱配方料的大头金蝇品种、实施例7至9经过多代连续驯化培养的大头金蝇品种、各对比例处理后的大头金蝇品种进行耐烟碱能力测试，测试过程为：
分别取所述实施例培养处理后的大头金蝇成虫所产的卵0.5g，分别接入1kg重的含较高质量百分比浓度烟碱水溶液的配方料（麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3.0‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%）中，测试结果见表1所示：
表1
测试结果说明，对比例1、2大头金蝇种不能耐受质量百分比浓度3.0‰的烟碱水溶液。
实施例1至3只经过筛选的大头金蝇种在质量百分比浓度3.0‰的烟碱水溶液调制的配方料中发生了滞育现象，幼虫体重较轻，且有较大量死亡。实施例4至9强化或多代连续驯化培养处理后的大头金蝇品种的耐烟碱能力大大提高，可以耐受质量百分比浓度3.0‰的烟碱水溶液调制的配方料。
实施例11 稳定性实验
将经过本发明实施例4至6所述方法得到的耐烟碱大头金蝇种进行常规培育（其中蝇蛆培养料配方为麸皮80%+鱼粉20%，用清水将上述配方料调至湿度为60%，成虫饲料配方为全脂奶粉70%+红糖30%）20代后备用。同时，将经实施例7至9所述方法得到的耐烟碱大头金蝇品系利用培育料（其中蝇蛆培养料配方为麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3.0‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，成虫饲料配方为全脂奶粉70.00%、红糖29.7%和烟碱0.3%）再持续培育20代后备用。将上述两个品系的大头金蝇种进行耐烟碱能力测试，检测用培养料配方为麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至配方料的湿度为60%，检测其后代的耐烟碱能力是否下降。测试结果见表2所示：
表2经过30代后的大头金蝇品系的稳定性实验结果
| 处理 | 幼虫发育历期（天） | 幼虫条数/g（条） | 幼虫存活率（%） |
| 实施例4常规品系 | 7 | 25 | 64 |
| 实施例5常规品系 | 7 | 24 | 65 |
| 实施例6常规品系 | 7 | 25 | 64 |
| 实施例7培育品系 | 5 | 17 | 96 |
| 实施例8培育品系 | 5 | 17 | 96 |
| 实施例9培育品系 | 5 | 18 | 95 |
结果表明经过强化后的耐烟碱大头金蝇种在用常规培养料培养20代以后，耐烟碱能力发生了严重退化现象，而经过本发明培育获得的耐烟碱大头金蝇品系后代对烟碱耐受的稳定性很好，且在本发明配方料组成范围内，不同批次的同样重量组成的配方料获得的大头金蝇具有稳定的培育效果。
Claims (9)
1.一种耐烟碱大头金蝇品系的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.室内条件下，将耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的大头金蝇品种的卵接种在第一配方料中，将蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹；
S2.蝇蛹羽化后利用第二配方料喂养其成虫，待其产卵后，进入下一世代的驯化培育；
S3.按上述步骤重复操作，经过20～30世代的连续驯化培育，获得稳定的耐烟碱大头金蝇品系；
其中，所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；
第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70%、红糖29.7～29.8%和烟碱0.2～0.3%。
2.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，S1中所述室内条件为温度25～30℃，湿度30～70%。
3.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，所述第一配方料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮80%、进口鱼粉20%，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
4.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，所述第二配方料由如下重量百分数的各组分组成：全脂奶粉70%、红糖29.7%和烟碱0.3%。
5.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，所述第一配方料的配制方法为将第一配方料的各组分混匀后，用质量百分比浓度3‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%。
6.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，所述每1 kg第一配方料之中接入大头金蝇卵0.5～1.0 g。
7.根据权利要求1所述培育方法，其特征在于，所述耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料的耐烟碱大头金蝇品种的获得方法为：首先从野生大头金蝇品种中筛选出耐烟碱大头金蝇品种，然后再将筛选出来的耐烟碱大头金蝇品种进行强化培养，使其耐受质量百分比浓度为3‰的烟碱水溶液配方料。
8.根据权利要求7所述培育方法，其特征在于，所述耐烟碱大头金蝇品种的筛选的方法为：
S1.配置诱集培养料，将诱集培养料装入开口容器中；
所述诱集培养料含有如下重量百分数的各组分：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度1‰～2‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；
S2.天气晴好时，上午将装有诱集培养料的容器分别放于生活垃圾堆、鸡场和猪场来诱集野生蝇卵，下午收回放于各处的容器；
S3.将回收的各容器放在室内培养，等诱集到的野生蝇卵培育至幼虫老熟时，利用大头金蝇蛆的离食期行为将蝇蛆与配方料分离；
S4.通过大头金蝇幼虫的形态学鉴定，挑出大头金蝇蛆；
S5.筛选出4～5天老熟、每条蝇蛆重0.05～0.07 g、体态丰腴、颜色金黄的大头金蝇蛆，在室温条件下，让大头金蝇蛆自然化蛹、羽化后即可获得耐烟碱的大头金蝇种。
9.根据权利要求7所述培育方法，其特征在于，所述耐烟碱大头金蝇品种的强化培养的方法为：
初始阶段：将耐烟碱大头金蝇品种的卵接种在初始培养料中，所述初始培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度1‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%；在室内条件下，将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养成虫；
第1次强化阶段：待初始阶段的成虫产卵后，将其产生的卵采用第1次强化培养料进行强化培养；所述第1次强化培养料由如下重量百分数的各组分组成：麸皮70～85%、进口鱼粉15～30%，用质量百分比浓度(1+S) ‰的烟碱水溶液将上述配方料调至湿度为60%，S选自0.1～0.5；在室内条件下，将上述蝇卵培育至幼虫老熟、化蛹、羽化后，喂养成虫；
第N+1次强化阶段：对第N次强化阶段所得的成虫产的卵再次进行强化培养，并且第N+1次强化阶段所用的培养料所含组分符合如下比例：烟碱水溶液的质量百分比浓度=（第N次强化培养料中烟碱的含量+S）‰，其余组分含量不变，N为大于等于1的自然数，重复强化，直至最后一次强化阶段所述培养料中烟碱水溶液的质量百分比浓度达3‰为止。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109122587A (zh) * | 2018-07-21 | 2019-01-04 | 华中农业大学 | 一种使用大头金蝇幼虫饲养异色瓢虫的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1736186A (zh) * | 2005-08-04 | 2006-02-22 | 周志钦 | 具有抗肿瘤生物活性蝇蛆的养殖方法 |
| CN102150644A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-08-17 | 浙江千年春生物技术有限公司 | 一种抗肿瘤蝇幼虫的培养方法 |
| CN103651263A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-03-26 | 中山大学 | 一种耐烟碱家蝇品系的培育方法 |
| CN103975901A (zh) * | 2014-05-30 | 2014-08-13 | 中山大学 | 一种利用大头金蝇蛆养殖剩余料诱集野生黑水虻的方法 |
-
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- 2014-08-25 CN CN201410421790.0A patent/CN104186434A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1736186A (zh) * | 2005-08-04 | 2006-02-22 | 周志钦 | 具有抗肿瘤生物活性蝇蛆的养殖方法 |
| CN102150644A (zh) * | 2010-12-23 | 2011-08-17 | 浙江千年春生物技术有限公司 | 一种抗肿瘤蝇幼虫的培养方法 |
| CN103651263A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-03-26 | 中山大学 | 一种耐烟碱家蝇品系的培育方法 |
| CN103975901A (zh) * | 2014-05-30 | 2014-08-13 | 中山大学 | 一种利用大头金蝇蛆养殖剩余料诱集野生黑水虻的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 时燕薇 等: "大头金蝇的生物学及其在法医昆虫学上的应用", 《中山大学学报（自然科学版）》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109122587A (zh) * | 2018-07-21 | 2019-01-04 | 华中农业大学 | 一种使用大头金蝇幼虫饲养异色瓢虫的方法 |
| CN109122587B (zh) * | 2018-07-21 | 2020-11-24 | 华中农业大学 | 一种使用大头金蝇幼虫饲养异色瓢虫的方法 |
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