CN104109201A - 一种艾塞那肽的18f标记物及制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于放射性药物标记领域，具体涉及一种18F-FBEM-Cys39-Exenatide标记物及其制备方法和应用。本发明通过将Exenatide的N端39位的丝氨酸(Ser39)用半胱氨酸(Cys39)进行替换，得到新型Exenatide类似物，进而利用类似物的巯基与标记辅基(18F-FBEM)能够特异性结合的特征，实现了对Exenatide的定位标记。临床前研究表明，标记产物18F-FBEM-Cys39-Exenatide可以与GLP-1受体特异性结合，是潜在的GLP-1受体显像剂，适于胰岛素瘤的诊断。

Description

一种艾塞那肽的18F标记物及制备方法与应用
技术领域
本发明属于放射性药物标记领域，具体涉及一种艾塞那肽的18F标记物及制备方法和应用。
背景技术
胰岛素瘤(Insulinoma)又称胰岛β细胞瘤，是一种以分泌大量胰岛素而引起发作性低血糖症候群为特征的疾病，为器质性低血糖症中较常见的病因。其中90％的肿瘤位于胰腺内，在胰腺头、体、尾各部位发生的几率基本相同。有创性检查如腹腔动脉造影和经皮肝穿刺门静脉系统置管分段取血测胰岛素法存在并发症的风险。由于胰岛素瘤直径平均小于2cm，而常规的CT或MRI诊断的灵敏度仅为50-70％，对于胰岛素瘤的无创诊断常常会有偏差，因此临床上迫切需要一种更为灵敏的无创胰岛素瘤显像方法。
分子影像学是近年来由医学影像技术和分子生物学相结合发展起来的学科，可在活体分子水平上进行生理、病理过程无创和实时成像，对疾病早期诊断和疗效判断，以及疾病发生和发展的生物学特性研究等方面有重要作用。以单光子断层扫描(SPECT)和正电子断层扫描(PET)为代表的核医学显像技术是目前临床应用较成熟的分子影像技术，与传统解剖学影像技术相比，具有灵敏度高、分辨率优、用量微、可定量、以及提供脏器的功能和代谢信息等优点。
肽受体在多种疾病尤其肿瘤中高度表达，放射性核素(99mTc，111In，18F等)标记的受体特异性多肽SPECT或PET可进行肿瘤显像，同时量化肽受体的表达，为临床医生评估肿瘤的恶性程度及预后，制定疾病的治疗方案提供重要的帮助。
临床上常规用于胃肠胰神经内分泌肿瘤的诊断的放射性多肽类受体显像剂一般采用生长抑素受体(SSTR)分子探针和111In标记的奥曲肽(111In-DTPA-octreotide)，这也是临床上应用最为普遍的放射性多肽类受体显像剂。但111In-DTPA-octreotide仅适于SSTR过度表达的肿瘤，对于SSTR表达缺失或不足的神经内分泌肿瘤如胰岛素瘤的诊断，其诊断敏感性低于50％。因此，针对不同肿瘤中特定肽受体的高表达，选择合适的肽类分子探针进行肿瘤显像可以提高诊断的准确性和敏感性。
分子生物学研究显示，胰岛素瘤中胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体过度表达(8000-10000dpm/mg)，特异性GLP-1受体分子探针为胰岛素瘤无创靶向显像提供了可能。Gotthard等最初对GLP-1进行放射性碘标记，制得GLP-1受体分子探针123I-GLP-1，并应用于胰岛素瘤显像研究。结果表明123I-GLP-1虽可被鼠源性胰岛素瘤RINm5F摄取，但标记效率低，体内稳定性差，放射性核素易清除，肿瘤/背景摄取比值偏小，临床应用受限。
艾塞那肽(Exenatide、Exendin-4)是从动物唾液中分离得到的一种多肽激素，由39个氨基酸残基组成(His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gly-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2)，其与GLP-1有53％的同源性。与天然GLP-1相比，艾塞那肽具有较强的二肽基酶抗性，可以在体内更持续，稳定的发挥GLP-1的效应。111In标记的Exendin-4(111In-DOTA-exendin-4)与GLP-1受体高度特异性亲和，可定位转基因小鼠Rip1Tag2中体积较小的胰岛素瘤。临床试验表明111In-DOTA-exendin-4SPECT成功检测出6名患者体内CT无法显示的胰岛素瘤。但111In-DOTA-exendin-4在肾中被高度保留，这不仅额外增加了正常器官的辐照剂量，而且为了确证结果，早期扫描为阴性的患者还必须在3-7天后进行延迟显像，也延迟了病症的诊断。
与SPECT相比，PET可以进一步量化其检测诊断指标，并提供更好的分辨率和图像对比度，为临床诊断、治疗和预后检测等提供了有力的科学手段。Wild等以正电子金属核素68Ga对exendin-4进行了标记，并进行了模型鼠microPET显像。结果表明，68Ga-DOTA-exendin-4的药代动力学性能与111In-DOTA-exendin-4相似，但有效辐照剂量却显著低于后者(0.0317vs0.155mSv/MBq)。68Ga释放出的正电子能量较高(1.9兆电子伏)，空间分辨率只能达到3mm，这可能影响临床PET图像的质量。
18F是目前PET显像中使用最多的核素之一，18F标记主要通过亲核取代反应实现。首先通过加速器质子辐照18O富集水获得18F-(比活度约为2.6～21.1T Bq·g-1)。通过亲核取代反应可在芳香环、杂环和脂肪链上取代氢或离去基团(卤素、硝基、季铵盐、磺酸酯基等)直接实现18F的标记。但鉴于生物大分子等对温度和有机溶剂较为敏感，一般通过标记合成子(Synthon)或辅助基团(Prosthet ic Group)后，利用基团上的反应活性部位与生物大分子上的对应基团在温和条件下高效键合，从而实现放射性核素标记。
随着PET临床显像需要的日益增加，18F标记的肽和蛋白类PET药物引起了广泛关注。由于18F具有接近100％的正电子效率，低正电子能量(0.64兆电子伏)和相对较短的物理半衰期(t1/2＝109.7分)等特点，是理想的多肽标记和PET显像核素。
多肽和蛋白类虽然分子靶向性较好，但其结构较复杂，一般均含有多个活性位点，对温度、酸碱度以及有机溶剂等较敏感，直接标记法极易造成多肽和蛋白类分子变性而失去靶向性，通常需要小分子标记中间体通过选择性的定位反应进行标记，所得产物放化纯度和放化产率都较高。多肽的18F标记通常依赖辅基与肽的耦合间接完成，例如市面上N-琥珀酰亚胺-4-[18F]氟苯甲酸酯(18F-SFB)，可以通过与蛋白质或多肽中的赖氨酸残基反应实现生物分子的18F标记，虽然合成及纯化方法简单、放化产率高，标记产物的体内稳定性较好。例如中国专利CN102617728A中记载以18F-SFB标记Exendin-4的方法，但是由于Exenatide序列拥有2个赖氨酸，使得采用18F-SFB标记的方式无法获知准确的标记位点，进而影响后期的诊断。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种标记位点准确、标记效率高、制备简单、稳定性好的Exenatide的18F标记物；
本发明还提供一种上述Exenatide的18F标记物的制备方法以及其在制备胰岛素瘤显像诊断药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明公开了一种Exenatide的18F标记物，具有如下所示的结构：18F-FBEM-Cys39-Exenatide，其中，所述Cys39-Exenatide是将具有如下所示氨基酸序列结构的Exenatide的第39位Ser突变为Cys获得的；
所述Exenatide的氨基酸序列具体为His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2。
本发明还公开了一种制备所述Exenatide的18F标记物的方法，包括如下步骤：
(1)取无水18F-与4-三甲胺苯甲酸乙酯三氟磺酸盐在110-120℃反应，随后依次加入NaOH进行水解和HCl酸化，分离制得4-18F-苯甲酸；
(2)取4-18F-苯甲酸，并加入2-氨乙基马来酰亚胺、N，N-二异丙基乙胺以及氰基磷酸二乙酯，于室温反应，并酸化处理；以制备型HPLC纯化分离,即得标记辅基18F-FBEM；具体的合成线路如下：
(3)按常规合成或定点突变技术制备得到Cys39-Exenatide，并溶于PBS缓冲液；
(4)取18F-FBEM溶于乙腈，加入含Cys39-ExenatidePBS缓冲液，室温下进行偶联反应，利用制备型HPLC进行纯化，得到目标产物18F-FBEM-Cys39-Exenatide，具体的合成路线如下：
进一步的，所述的步骤(4)中，所述制备型HPLC的条件为：选用反相C18色谱柱,以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间20min的产品。
所述的步骤(4)中，还包括将HPLC纯化得到的产物以活化后的Sep-PakC18柱纯化进行纯化，并以乙醇淋洗和生理盐水稀释保存的步骤。
进一步的，所述的步骤(2)中，所述制备型HPLC的条件为：选用反相C18色谱柱,以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间11min的产品。
所述的步骤(2)中，还包括将HPLC纯化得到的产品以活化后的Sep-PakC18柱纯化进行纯化，并以二氯甲烷淋洗，氮气吹干的步骤。
所述的步骤(1)中，所述无水18F-按照如下方法制备：通过回旋加速器制备18F-，加入含K2CO3和Kryptofix222的反应瓶中，共沸蒸干得到无水18F-。
优选所述步骤(4)中，所述溶于乙腈的18F-FBEM的放射性活度为5-60mCi。
本发明还公开了由上述方法制备得到的Exenatide的18F标记物。
本发明还公开了一种PET示踪剂，为所述的Exenatide的18F标记物。
本发明还公开了所述示踪剂在检测胰岛素瘤PET显像领域的应用。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
(1)本发明通过将Exenatide的N端39位的丝氨酸(Ser39)用半胱氨酸(Cys39)进行替换，得到新型Exenatide类似物，进而利用类似物的巯基与标记辅基(18F-FBEM)能够特异性结合的特征，实现了对Exenatide的定位标记，为Exenatide标记物的设计及合成提供了新思路；
(2)本发明所述标记物的放化纯大于95％，标记率分别为30％和5％(以18F-FBEM和18F-为起始物计算)，标记效率较高；
(3)临床前研究表明，标记物18F-FBEM-Cys39-Exenatide可以与GLP-1受体特异性结合，是潜在的GLP-1受体显像剂，且荷胰岛素瘤INS-1裸鼠microPET示肿瘤对该示踪剂高度摄取且图像对比度清晰，可见18F-FBEM-Cys39-Exenatide适于胰岛素瘤的诊断，在胰岛素瘤诊断方面前景广阔，也为其PET显像的研究提供了有利的机制。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
图1是本发明实施例1的18F-FBEM-Cys39-Exenatide的HPLC图谱；
图2A为实验例1的荷胰岛素瘤INS-1裸鼠18F-FBEM-Cys39-Exenatide及18F-FBEM-Cys40-Exenatide的小动物PET显像图；
图2B为实验例1的荷乳腺癌MDA-MB435裸鼠18F-FBEM-Cys39-Exenatide及荷胰岛素瘤INS-1裸鼠阻断小动物PET显像图；
图3为实验例1的ROI计算所得荷胰岛素瘤INS-1裸鼠主要器官对PET示踪剂的摄取值；
图4为实验例1中18F-FBEM-Cys39-Exenatide的荷胰岛素瘤INS-1裸鼠的靶/非靶比值。
具体实施方式
本发明下述实施例中涉及的材料及设备包括：
Cys39-Exenatide和Cys40-Exenatide由上海楚肽生物科技有限公司(上海，中国)，按照标准FMOC化学过程合成；
4-三甲胺苯甲酸乙酯三氟磺酸盐由NIH馈赠；
18F-由江苏省原子医学研究所加速器中心提供，通过质子轰击富氧18O-H2O获得；
制备型HPLC购自美国Waters公司，配有放射性检测器(BioScan)。
实施例
本实施例所述18F-FBEM-Cys39-Exenatide标记物的制备包括如下步骤：
(1)由回旋加速器制备得到的18F-，并加入到0.1ml含K2CO3(3mg)和Kryptofix222(15mg)的乙腈-水溶液的反应瓶中，通过共沸蒸干得到无水18F-；取无水18F-加入4-三甲胺苯甲酸乙酯三氟磺酸盐(5mg，溶于0.3ml无水二甲亚砜(DMSO))，加热至115℃反应20min，反应液冷却后，随后加入0.1M NaOH水解及1MHCl酸化后；反应液通过活化的Sep-Pak C18柱进行纯化,并将产物以二氯甲烷淋洗，氮气吹干，得到4-18F-苯甲酸；
(2)取制得的4-18F-苯甲酸，加入含15mg2-氨乙基马来酰亚胺、10mg N，N-二异丙基乙胺(DIEA)和20μL氰基磷酸二乙酯的DMSO溶液0.3ml，室温反应，然后用醋酸酸化；并将上述溶液用制备型HPLC纯化，条件如下：选用反相C18色谱柱(5μm，19×150mm，Waters)，以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间11min的产品；并将所得产物溶液通过活化的Sep-Pak C18柱纯化，并经二氯甲烷淋洗，氮气吹干，得标记辅基18F-FBEM；HPLC测放射化学纯度>95％，放化产率基于18F-FBA和18F-计算分别为49.1±2.0％和25.2±4.0％；
(3)取200μg合成后的Cys39-Exenatide溶于PBS溶液；
(4)将18F-FBEM溶解在100μL乙腈中(放射性活度为60mCi)，加入含Cys39-Exenatide的PBS溶液，室温下反应30min；将反应液进行HPLC纯化，条件为：所用色谱柱为反相C18柱(5μm，19×150mm，Waters),以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间20min的产品；所得产物溶液通过活化的Sep-Pak C18柱纯化，并经乙醇淋洗，并溶于生理盐水稀释保存，得到目标化合物18F-FBEM-Cys39-Exenatide。
所得产物以Radio-HPLC进行表征测定，检测谱图如图1所示，Radio-HPLC所用色谱柱为反相C18柱(Luna，4.6×250mm，phenomenex)，以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B；流动相采用如下梯度以1ml/min的速度淋洗：0-2min A：B为95％：5％→35min A：B为35％：65％。HPLC测产物的放射化学纯度>95％，放化产率基于18F-FBEM和18F-计算分别为30.1±2.6％和5.1±1.6％。
对比例
申请人提供了一种在Exenatide末端连接Cys进行标记的产物，记为18F-FBEM-Cys40-Exenatide，作为对比例，其制备包括如下步骤：
将实施例1中所得干燥18F-FBEM溶解在100μL乙腈中，加入含Cys40-ExenatidePBS溶液，室温下反应30min；将反应液进行HPLC纯化，条件为：所用色谱柱为反相C18柱(5μm，19×150mm，Waters)，以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间20min的产品；所得产物溶液通过活化的Sep-Pak C18柱纯化，并经乙醇淋洗，并溶于生理盐水稀释保存，得到目标化合物18F-FBEM-Cys40-Exenatide。
实验例
1、裸鼠模型小动物PET显像
取荷GLP-1受体表达阳性的胰岛素瘤INS-1裸鼠置于小动物PET床板上，异氟烷麻醉，胶带固定。模型鼠经尾静脉注射实施例1所得标记产物，18F-FBEM-Cys39-Exenatide的生理盐水溶液(1.85MBq，0.2mL)。注射后30分钟、1小时、2小时，分别进行microPET显像，结果分别如图2A所示，图中箭头所示为肿瘤。
作为对比，另取荷GLP-1受体表达阳性的胰岛素瘤INS-1裸鼠置于小动物PET床板上，异氟烷麻醉，胶带固定。模型鼠经尾静脉注射对比例1所得标记产物，18F-FBEM-Cys40-Exenatide的生理盐水溶液(1.85MBq，0.2mL)。注射后1小时行microPET显像，结果如图2A所示，图中箭头所示为肿瘤。
另取荷GLP-1R表达阴性的乳腺癌MDA-MB435裸鼠置于小动物PET床板上，异氟烷麻醉，胶带固定。模型鼠经尾静脉注射18F-FBEM-Cys39-Exenatide的生理盐水溶液(1.85MBq，0.2mL)。注射后1小时进行microPET显像，结果如图2B所示，图中箭头所示为肿瘤。
阻断显像
取荷乳胰岛素瘤INS-1裸鼠由尾静脉注射100μL含200μg的未标记Cys39-exendin-4，30min后置于小动物PET床板上，异氟烷麻醉，胶带固定。模型鼠经尾静脉注射18F-FBEM-Cys39-Exenatide的生理盐水溶液(1.85MBq，0.2mL)。注射后1小时进行microPET显像，结果如图2B所示。图中箭头所示为肿瘤。
采用二维有序子集期望最大化算法进行图像重建。在肿瘤、肌肉、肝等器官用感兴趣区(ROI)法计算放射性活度(MBq/mL)，所得值除以注射剂量获得各组织对PET示踪剂摄取值(％ID/g)(假定组织密度为1g/ml)。计算结果分别如图3所示。靶/非靶比值(T/NT)如图4所示。
结果
如图2所示，注射实施例1所述PET示踪剂，18F-FBEM-Cys39-Exenatide，后30min到120min，GLP-1受体表达阳性的胰岛素瘤INS-1均清晰可见，从图中可以看到，肿瘤与对侧相比具有良好的对比度。与之相比，注射上述PET示踪剂后60min，GLP-1受体表达阴性的乳腺癌MDA-MB435放射性浓聚不明显。在过量未标记Cys39-exendin-4存在下，胰岛素瘤INS-1对上述示踪剂的摄取不显著。如图4所示，肿瘤较正常的组织如肌肉对1 8F-FBEM-Cys39-Exenatide摄取显著，肿瘤与肌肉摄取比值(T/NT)均大于20。
ROI定量分析表明，注射60分钟后，INS-1胰岛素瘤和乳腺癌MDA-MB435对18F-FBEM-Cys39-Exenatide的摄取值分别为10.01±1.21％ID/g和0.92±0.23％ID/g。同期INS-1胰岛素瘤对18F-FBEM-Cys40-Exenatide的摄取值为9.67±2.19％ID/g。阻断后，同期INS-1胰岛素瘤对18F-FBEM-Cys39-Exenatide的摄取值降为1.23±0.21％ID/g。
荷瘤鼠microPET显像示，注射18F-FBEM-Cys39-Exenatide1小时后，腹部放射性浓聚较同期18F-FBEM-Cys40-Exenatide显著降低。与之相对应，ROI定量分析表明，注射1小时后，荷瘤鼠肝对18F-FBEM-Cys39-Exenatide(2.62±0.35％ID/g)显著低于18F-FBEM-Cys40-Exenatide的对应摄取值(4.27±0.75％ID/g，p<0.01)。由于低腹部本底值有利于获得高对比度的胰岛素瘤PET图像，因此，18F-FBEM-Cys39-Exenatide可能较18F-FBEM-Cys40-Exenatide更适于肿瘤的鉴别诊断和治疗。
以上结果表明18F-FBEM-Cys39-Exenatide可有效的靶向胰岛素瘤，与肿瘤细胞GLP-1受体特异性结合，为后续肿瘤的诊断及治疗提供了可靠的技术保证。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种Exenatide的18F标记物，具有如下所示的结构：18F-FBEM-Cys39-Exenatide，其中，所述Cys39-Exenatide是将具有如下所示氨基酸序列结构的Exenatide的第39位Ser突变为Cys获得的：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2。
2.一种制备权利要求1所述Exenatide的18F标记物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取无水18F-与4-三甲胺苯甲酸乙酯三氟磺酸盐在110-120℃反应，随后依次加入NaOH进行水解和HCl酸化，分离制得4-18F-苯甲酸；
(2)取4-18F-苯甲酸，并加入2-氨乙基马来酰亚胺、N，N-二异丙基乙胺以及氰基磷酸二乙酯于室温反应，并酸化处理；以制备型HPLC纯化分离,即得标记辅基18F-FBEM；
(3)按常规合成或定点突变技术制备得到Cys39-Exenatide，并溶于PBS缓冲液；
(4)取18F-FBEM溶于乙腈，加入含Cys39-ExenatidePBS缓冲液，室温下进行偶联反应，利用制备型HPLC进行纯化，得到目标产物18F-FBEM-Cys39-Exenatide。
3.根据权利要求2所述的Exenatide的18F标记物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，所述制备型HPLC的条件为：选用反相C18色谱柱，以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间20min的产品。
4.根据权利要求2或3所述的Exenatide的18F标记物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，还包括将HPLC纯化得到的产物以活化后的Sep-Pak C18柱纯化进行纯化，并以乙醇淋洗和生理盐水稀释保存的步骤。
5.根据权利要求2-4任一所述的Exenatide的18F标记物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，所述制备型HPLC的条件为：选用反相C18色谱柱,以含0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A、以含0.1％三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B，流动相流速为20ml/min；按照0-2min A：B为95％：5％→21min A：B为35％：65％的程序进行梯度洗脱，检测波长为218nm，收集保留时间11min的产品。
6.根据权利要求2-5任一所述的Exenatide的18F标记物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，还包括将HPLC纯化得到的产品以活化后的Sep-Pak C18柱纯化进行纯化，并以二氯甲烷淋洗，氮气吹干的步骤。
7.根据权利要求2-6任一所述的Exenatide的18F标记物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，所述无水18F-按照如下方法制备：通过回旋加速器制备18F-，加入含K2CO3和Kryptofix222的反应瓶中，共沸蒸干得到无水18F-。
8.权利要求2-7任一所述方法制备得到的Exenatide的18F标记物。
9.一种PET示踪剂，为权利要求1或8所述的Exenatide的18F标记物。
10.权利要求9所述的示踪剂在检测胰岛素瘤PET显像领域的应用。
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