CN104101581A

CN104101581A - 一种快速检测食品中花生致敏蛋白的装置及其制备方法

Info

Publication number: CN104101581A
Application number: CN201310124885.1A
Authority: CN
Inventors: 赖卫华; 倪小琴; 刘道峰; 山珊; 彭涛
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2013-04-11
Filing date: 2013-04-11
Publication date: 2014-10-15

Abstract

本发明公开了一种快速、方便、高效、定量检测食品中花生致敏蛋白的检测装置及其制备方法，属于荧光微球标记的检测技术。本发明包括标记了特殊性质的具有生物特异性的生物大分子，以具有吸附移动性的聚合材料薄膜作载体，在便携轻巧的方形设备内进行的检测。本发明的优点是利用标记物的特殊性质对食品基质中的含有的微量花生致敏蛋白成分进行定量检测，检测限可达到0.1ng/mL。这种特殊的标记物克服了常见标记物的不稳定性，检测值低的问题。本发明主要应用于食品安全中残余花生致敏物的定量检测方面。

Description

一种快速检测食品中花生致敏蛋白的装置及其制备方法

技术领域

本发明属于食品安全中食品中花生致敏蛋白的检测领域，具体涉及一种定性和定量快速地检测食品中花生致敏蛋白的荧光微球标记的装置及其制备方法。

背景技术

近年来，随着人们的生活水平日渐提高，食品的安全问题越来越突出，包括食物过敏等。食物过敏是指机体对食品中的某种物质或成分产生的一种变态反应，是一种由IgE介导和非IgE介导的超敏反应，可引起皮肤、肠胃道、呼吸系统的反应，严重时甚至会导致系统过敏反应或休克。

花生过敏属于IgE 介导的超敏反应，其机制主要为I 型超敏反应机理，一定量的过敏原可诱导易感个体产生足够量的IgE ，IgE 与膜表面特定的受体结合，从而使机体处于致敏状态。当再次接触含相同或相似过敏原成分时，过敏原分子特异性识别致敏细胞膜表面的IgE ，诱导细胞脱颗粒释放炎症介质而触发花生过敏症。与牛奶、鸡蛋过敏相比，花生过敏一般不随年龄增长而消失，是终身致敏的。而目前，对于食物过敏的最好最直接的办法是严格避免食用含致敏蛋白的食物，但在食品的加工生产过程中，会掺杂着少量潜在的致敏物质，所以，人们亟需研究出能够快速检测食物中致敏物质的方法，达到预防的目的。食入含量甚微的花生过敏原食物就可能对高度敏感的患者引发过敏反应，如肠胃不适、过敏性皮炎等疾病，严重的甚至会发生过敏休克和过敏性死亡。如今，花生过敏作为世界各地普遍存在的一个公众性健康问题，得到了广泛的关注。

目前，有关花生致敏蛋白的检测手段包括主要包括基于免疫学的方法、聚合酶链式反应技术、毛细管电泳分析、色谱法、质谱法等，这些检测手法都比较繁琐，且需要一定的设备仪器和专业人才，不适用于食品的快速检测判断。随着新技术的开发应用，致敏蛋白的检测逐渐向高灵敏度、简便快速、准确性高方向发展。

这种装置是建立在免疫层析技术的基础上的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤维层析材料为固相，通过虹吸作用原理使样品溶液在层析条上扩撒，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体发生高特异高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域，通过酶反应或直接运用可目测的标记物而得到直观的实验结果。而游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。这种技术目前常见的标记粒子包括胶体金，乳胶，胶体硒、明胶等，其中运用最多和成熟的是胶体金。

但是，胶体金标记的装置存在以下缺陷：

（1）胶体金标记过程是静电吸附过程，是一种物理吸附，故在液相中稳定性较差，

往往造成已标记上的蛋白分子又再次脱落。

（2）结果通过显示单一的紫红色条带来判断，颜色单一，难以实现多检和联

检。

（3）只有当金颗粒集聚到一定量时，人肉眼才能观察到紫红的条带，且该颜色条

带与背景对比度不大，从而限制了检测灵敏度。

（4）不同的材料基质效应明显，背景干扰非常大。

（5）检测灵敏度较低。

（6）无法实现准确定量检测。

目前也出现了利用彩色乳胶等标记的检测方法，但是这些方法并不能完全实现对检测物的定量检测。

专利200910085054.1公开了一种采用荧光微球免疫层析检测卡来同时检测氯胺酮与甲基苯丙胺，反应灵敏度较胶体金法有很大提高，快速方便。

专利200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条，改进荧光微球的制备方法来实现对样品进行定性和定量检测。

但是花生致敏蛋白用常规的荧光微球免疫层析方法来定量检测仍然难以达到灵敏度、检测稳定性方面的要求。

发明内容

本发明目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种简便快速、灵敏度高且可进行定量检测的荧光微球标记装置。本发明的另一个目的是提供上述装置的制备方法。

为了实现上述目的本发明采取的一个技术方案是：

一种快速检测食品中花生致敏蛋白的装置，包括用于检测花生致敏蛋白的免疫层析试纸条；所述免疫层析试纸条为粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸；所述玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体；所述NC膜的检测区喷涂花生致敏蛋白；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG；所述所述荧光微球是直径为0.01～10 μm的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质的微球，其表面连接有活性基团。

所述的装置，还包括底卡和面卡，免疫层析试纸条固定在底卡上，试纸条表面用面卡压紧；所述面卡上预留有加样孔和观察窗，加样孔的位置与试纸条的样本垫对应，观察窗的位置与试纸条的NC膜对应，所述底卡和面卡为塑料卡。

所述聚合材料为聚苯乙烯、聚乙烯和聚氯乙烯，所述的活性基团为－CHO、-COOH、-OH、-NH₂ 或-SH，所述荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、荧光烷衍生物类、1,8-萘二酰亚胺类、香豆素类有机荧光染料或其掺杂物或量子点。

所述花生致敏蛋白用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80 μL/cm；所述羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80μL/cm。

前述述的装置的制备方法，包括如下步骤： (1) NC膜上检测区和质控区的制备；(2) 荧光微球垫的制备；(3) 装置组装；所述的NC膜上检测区和质控区的制备，包括所述NC膜的检测区喷涂花生致敏蛋白，花生致敏蛋白用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG，羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0mg/mL，喷膜量为0.8μL/cm；所述的荧光微球垫的制备，包括如下的步骤：（1）荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体的制备（2）将荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体喷涂在玻璃纤维膜上制备荧光微球垫。所述的装置组装为在粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、有荧光微球垫的玻璃纤维膜、固定有检测区和质控区的NC膜、吸水纸制成免疫层析试纸条，并剪成合适大小；

所述检测区和质控区的制备方法如下：用BIODOT Dispensing System将花生致敏蛋白和羊抗兔IgG包被到NC膜上：分别用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm，检测区上喷涂花生致敏蛋白，质控区上喷涂羊抗兔IgG，两区相隔5 mm；37℃烘干处理过夜后，室温干燥的环境下保存备用。

如权利要求4所述的制备方法，其特征在于荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体制备方法如下：取微球在1000×g离心10～15 min，离心后收集沉淀，用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD₄₅₀=0.2，然后分别加入20～100 mg/mL 对乙基-N，N- 二甲基丙基碳二亚胺EDC，和2～20 mg/mL N-羟基丁二酰亚胺NHS，振荡混匀，室温孵育10～30 min后，1000×g 离心5～15 min，沉淀用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，并调节微球浓度为OD₄₅₀为0.2-1.0，1 mL该荧光微球中加入100μg的花生致敏蛋白多克隆抗体，充分混合后，室温搅拌反应3 h；超纯水离心洗涤2～5次，沉淀用0.01 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液复溶沉淀至起始体积；用BIODOT Dispensing System将标记好的荧光微球喷涂至玻璃纤维膜上，25℃真空干燥1～2 h，置于室温干燥的环境下备用。

前述装置定性检测花生致敏蛋白的方法，包括如下步骤：a.在装置的加样孔上滴加待测样本，反应10 min后，将检测装置放入荧光分析仪检测窗口；b.荧光微球在灯源激发下，发出强烈的荧光；c.当样本中不含有被检测花生致敏蛋白时，观察窗内只出现两条荧光条带，即检测区和质控区分别有一条荧光带，则检测样本为阴性；当待测样本中含有过量的被检测花生致敏蛋白时，观察窗内只出现一条荧光条带，即检测区无荧光条带，质控区有一条荧光带，则检测样本即为阳性。

前述装置定量检测花生致敏蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：在装置加样孔上加入待测样本，反应10 min后，将检测装置放入荧光分析仪检测窗口；截留在检测区和质控区的荧光微球在灯源激发下，发出强烈的荧光条带；发射的荧光经CCD扫描系统汇聚后，经过光电聚集管，送入光电倍增管，光信号得到增强，再经过信号转换元件，软件处理后，荧光的强弱以数值的高低在显示器上显示；以不同已知浓度的待测花生致敏蛋白作检测，获得一系列数值后，绘制待检测花生致敏蛋白浓度与荧光强弱数值关系的标准曲线；根据检测样本的显示数值，以及上述标准曲线得出检测样本中花生致敏蛋白的浓度。

图2是定性和定量检测花生致敏蛋白的荧光微球标记的装置的检测原理图；

图3是一种简易荧光检测仪的检测原理及其结构示意图。

本发明的有益效果是：

1) 本发明制备的荧光微球使用寿命长，易于制造，制备稳定且具有良好的单分散性，与花生致敏蛋白多克隆抗体稳固结合，制备的荧光微球抗体荧光量等非常适宜于花生致敏蛋白的检测。

2) 本发明技术方案针对花生致敏蛋白本身的特性，经过大量的试验得出荧光标记抗体喷涂量、质控线上羊抗兔IgG、检测线花生致敏蛋白喷涂量，能灵敏地定量检测花生致敏蛋白。

3) 本发明能够快速准确地对食品中的花生致敏蛋白实现定性和定量检测。

4) 通过CCD扫描技术把过滤后的发射光谱收集后，再发送到荧光分析检测仪以及经过软件处理，把荧光信号数值化，从而实现定量检测。

5) 不同粒径和种类的量子点在相同的激发光谱下，能够发出多种颜色的条带；不同无机或者有机荧光染料按照不同比例掺混时能够发射不同的颜色，从而实现多检和联检。

附图说明

图1是检测花生致敏蛋白的荧光微球标记的装置的结构图；

图3是一种简易荧光检测仪的检测原理及其结构示意图。

如图1所示，该荧光微球免疫层析试纸条的构成为：在粘性底板18上，依次搭接地粘贴滤纸11、样本垫12、喷涂有荧光微球标记的抗花生致敏蛋白单克隆抗体（或多克隆抗体）的玻璃纤维膜13、包被有抗花生致敏蛋白多克隆抗体（或单克隆抗体）的检测区15和包被有抗兔抗体的质控区16的硝酸纤维素膜14和吸水纸17。质控区距吸水纸2 mm，质控区和检测区间隔5 mm。

如图1和2所示，检测原理如下：在样本垫12上滴加样品，检测试纸条放入检测窗口41；当检测样本中不包含待检测花生致敏蛋白时，荧光微球标记的抗花生致敏蛋白单克隆抗体（或多克隆抗体）不会直接与检测区15上包被的抗花生致敏蛋白多克隆抗体（或单克隆抗体）结合，而只与质控区16上的抗兔抗体特异性结合，待检样本43在光源42激发下，发射的荧光44通过单色光滤光片35过滤后，通过观察窗口36在质控区16能够观察到一条清晰的荧光条带检测区15无荧光条带。当待检样本43中含待检测花生致敏蛋白且含量超过检测限时，样本中的花生致敏蛋白会特异性地与荧光微球标记的花生致敏蛋白单克隆抗体（或多克隆抗体）结合，然后被检测区15的花生致敏蛋白多克隆抗体（或单克隆抗体）捕获，多余的荧光标记花生致敏蛋白单克隆抗体（或多克隆抗体）与质控区的抗兔抗体结合，所以在简易荧光检测仪上观察到，检测区和质控区都能看到一条清晰的荧光条带。

如图3所示，用荧光微球标记的装置定性检测花生致敏蛋白的检测步骤如下：

[1] 在装置上加入样本，反应10 min后，将检测装置放入检测窗口41；

[2] 荧光微球43在灯源42激发下，发出强烈的荧光；

[3] 当样本中不含有被检测花生致敏蛋白时，检测区不出现荧光条带，而质控区出现一条荧光条带，即检测样本为阴性；当样本中含有过量的被检测花生致敏蛋白时，检测区和质控区均有荧光条带，检测样本即为阳性。

如图3所示，用荧光微球标记的装置定量检测花生致敏蛋白的检测步骤如下：

[1] 在样本垫上滴加样品，反应10 min后，检测装置放入检测窗口41；

[2] 检测区或质控区被截留的荧光微球43在光源42激发下，发出强烈的荧光条带；

[3] 发射的荧光44经CCD扫描系统45汇聚后，经过光电聚集管46，送入光电倍增管47，光信号得到增强，再经过信号转换元件48，经过软件处理49后，荧光的强弱以数值的高低在数据输出410的显示器上显示出来；

[4] 检测过程中，以不同已知浓度的被检测花生致敏蛋白作检测，获得一系列数值后，绘制被检测花生致敏蛋白浓度与荧光强弱数值关系的标准曲线。最后根据检测样本的数据输出410的数值，查标准曲线图得出检测样本中花生致敏蛋白的浓度。

具体实施方式

实施例一

一、荧光标记装置的组装；

1.NC膜的制备：

检测区和质控区的制备：花生致敏蛋白多克隆抗体和抗兔抗体包被到硝酸纤维素膜上：用0.1 M pH 7.2的PBS（磷酸盐缓冲液，其中包含5 % 蔗糖和0.05 % 吐温-20（Tween-20））调节花生致敏蛋白多克隆抗体的浓度为0.5 mg/mL，所得的溶液在膜上喷涂作为检测区，用0.01 M pH 7.2的PBS（其中包含5 % 蔗糖和0.05 % 吐温-20（Tween-20））调节抗兔抗体的浓度为0.5 mg/mL，所得的溶液在膜上喷涂作为质控区，两区的喷膜量均为0.74 μL/cm，两区相隔5 mm，质控区距硝酸纤维素膜一端2 mm，37℃烘干处理过夜后，于室温干燥的环境下保存备用。

2.荧光微球垫的制备：

荧光微球标记花生致敏蛋白单克隆抗体的制备：取1 mg包裹有香豆素的荧光微球（0.01～10 μm）（购自默克公司）1000×g离心10 min，离心后收集沉淀用0.01M pH 4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD₄₅₀=0.2，然后分别加入80 μL的20 mg/mL 对乙基-N，N- 二甲基丙基碳二亚胺EDC，和130 μL的20 mg/mL N-羟基丁二酰亚胺NHS，振荡混匀后，室温孵育20 min后，1000×g 离心5 min，沉淀用0.01M pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，调节微球浓度OD₄₅₀为1.0，1 mL荧光微球中加入1 μg的花生致敏蛋白单克隆抗体，充分混合后，室温搅拌反应3 h，超纯水离心洗涤3次，沉淀用0.01 M pH 7.2的PBS（其中包含5 % 蔗糖和0.05 % Tween-20）复溶沉淀至起始体积后，用BIODOT操作平台(BIODOT Dispensing System)，按照8 μL/cm的量喷涂至30×0.8 cm的玻璃纤维膜上，25℃真空干燥1.5 h，放于干燥环境备用。

3.组装装置：

在PVC塑料底板上依次搭接地粘贴：（1）滤纸和样本垫，样本垫为一种经过5 % Tween-20处理的玻璃纤维膜；（2）分散有荧光微球标记花生致敏蛋白单克隆抗体的0.8×30 cm的荧光微球垫；（3）有花生致敏蛋白多克隆抗体作为检测区和有羊抗兔IgG作为质控区的NC膜；（4）吸水纸。切割组装好后，放到准备好的装置盒中，装入铝箔袋，加入干燥剂后，封口保存，于室温干燥的环境下至少可保存一年。

二、定性和定量检测食品中花生致敏蛋白；

1.定性检测：秤取1g粉状样品(若不是，需要先液氮研磨)，加入20 mL提取液(8 mmol/L Tris-HCl, 25 mmol/LTricine, pH 8.6)45℃1 h，11 000 r/min30 min离心收集上清，提取其中的花生蛋白成分，吸取50μL上清液加入样本垫上进行检测，十分钟后，将检测装置放入简易荧光检测仪中检测窗口内，荧光微球在LED灯源激发下，发射特定颜色的荧光，经过单色滤光片过滤后，选择只能透过红色光的滤光片，从观察窗口观察，在简易荧光检测仪上观察到只有质控区有一条清晰的红色荧光条带。说明检测样本中含有花生致敏蛋白。

2.定量检测：

(1)在装置的样本垫上加入样本，反应10 min后，检测装置放入检测窗口；

(2)荧光微球在LED灯源激发下，发出强烈的荧光；

(3)发射的荧光经CCD扫描系统汇聚后，经过光电聚集管，送入光电倍增管，光信号

得到增强，在经过信号转换元件，经过软件处理后，荧光的强弱以数值的高低在数据输出410的显示器上显示出来。

(4)实验过程中，将含花生致敏蛋白的标准样品配制成不同浓度，测出其对应的荧光强度的数值，从而根据这一系列数值与对应浓度建立一条标准曲线。样本经过前处理后，吸取50μL悬液，进行检测，检测限可以达到0.1ng/mL。

(4)实验过程中，将含花生致敏蛋白的标准样品配制成不同浓度，测出其对应的荧光强度的数值，从而根据这一系列数值与对应浓度建立一条标准曲线。样本经过前处理后，吸取50μL悬液，进行检测。根据实验数据绘制的标准曲线可知，在0.5~200ng/ml的范围内具有很好的线性关系，检测限值可达到0.1ng/ml，经过多次实验，变异系数CV<5%，稳定性好。

Claims

1.一种快速检测食品中花生致敏蛋白的装置，其特征在于包括用于检测花生致敏蛋白的免疫层析试纸条；所述免疫层析试纸条为粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸；所述玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体；所述NC膜的检测区喷涂花生致敏蛋白；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG；所述所述荧光微球是直径为0.01～10 μm的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质的微球，其表面连接有活性基团。

2.如权利要求1所述的装置，其特征在于还包括底卡和面卡，免疫层析试纸条固定在底卡上，试纸条表面用面卡压紧；所述面卡上预留有加样孔和观察窗，加样孔的位置与试纸条的样本垫对应，观察窗的位置与试纸条的NC膜对应，所述底卡和面卡为塑料卡。

3.如权利要求1所述的装置，其特征在于所述聚合材料为聚苯乙烯、聚乙烯和聚氯乙烯，所述的活性基团为－CHO、-COOH、-OH、-NH₂ 或-SH，所述荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、荧光烷衍生物类、1,8-萘二酰亚胺类、香豆素类有机荧光染料或其掺杂物或量子点；所述花生致敏蛋白用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80 μL/cm；所述羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80μL/cm。

4.权利要求1所述的装置的制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) NC膜上检测区和质控区的制备；(2) 荧光微球垫的制备；(3) 装置组装；所述的NC膜上检测区和质控区的制备，包括所述NC膜的检测区喷涂花生致敏蛋白，花生致敏蛋白用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1 mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG，羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm；所述的荧光微球垫的制备，包括如下的步骤：（1）荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体的制备（2）将荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体喷涂在玻璃纤维膜上制备荧光微球垫；所述的装置组装为在粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、有荧光微球垫的玻璃纤维膜、固定有检测区和质控区的NC膜、吸水纸制成免疫层析试纸条，并剪成合适大小。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述检测区和质控区的制备方法如下：用BIODOT Dispensing System将花生致敏蛋白和羊抗兔IgG包被到NC膜上：分别用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节包被物浓度为1 mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm，检测区上喷涂花生致敏蛋白，质控区上喷涂羊抗兔IgG，两区相隔5 mm；37℃烘干处理过夜后，室温干燥的环境下保存备用。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于荧光微球标记的花生致敏蛋白多克隆抗体制备方法如下：取微球在1000×g离心10～15 min，离心后收集沉淀，用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD₄₅₀=0.2，然后分别加入20～100 mg/mL 对乙基-N，N- 二甲基丙基碳二亚胺EDC，和2～20 mg/mL N-羟基丁二酰亚胺NHS，振荡混匀，室温孵育10～30 min后，1000×g 离心5～15 min，沉淀用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，并调节微球浓度为OD₄₅₀为0.2-1.0，1 mL该荧光微球中加入0.1～100 μg的花生致敏蛋白多克隆抗体，充分混合后，室温搅拌反应1～4 h；超纯水离心洗涤2～5次，沉淀用0.01 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液复溶沉淀至起始体积；用BIODOT Dispensing System将标记好的荧光微球喷涂至玻璃纤维膜上，25℃真空干燥1～2 h，置于室温干燥的环境下备用。

7.用权利要求1~4任一所述装置定性检测花生致敏蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：a.在装置的加样孔上滴加待测样本，反应10 min后，将检测装置放入荧光分析仪检测窗口；b.荧光微球在灯源激发下，发出强烈的荧光；c.当样本中不含有被检测花生致敏蛋白时，观察窗内只出现两条荧光条带，即检测区和质控区分别有一条荧光带，则检测样本为阴性；当待测样本中含有过量的被检测花生致敏蛋白时，观察窗内只出现一条荧光条带，即检测区无荧光条带，质控区有一条荧光带，则检测样本即为阳性。

8.用权利要求1~3任一所述装置定量检测花生致敏蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：在装置加样孔上加入待测样本，反应10 min后，将检测装置放入荧光分析仪检测窗口；截留在检测区和质控区的荧光微球在灯源激发下，发出强烈的荧光条带；发射的荧光经CCD扫描系统汇聚后，经过光电聚集管，送入光电倍增管，光信号得到增强，再经过信号转换元件，软件处理后，荧光的强弱以数值的高低在显示器上显示；以不同已知浓度的待测花生致敏蛋白作检测，获得一系列数值后，绘制待检测花生致敏蛋白浓度与荧光强弱数值关系的标准曲线；根据检测样本的显示数值，以及上述标准曲线得出检测样本中花生致敏蛋白的浓度。