CN104094851A - 一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法。所述生根培养基配方为:基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉。所述生根培养基的配制方法为:配制基本培养基,按生根培养基配方称取各组分;将称取的香蕉、土豆制备成糊状,然后加入水煮沸,冷却至室温;将配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合;将前述制备得到的各组分混合、定容,调节pH值至5.9-6.0,灭菌,冷却凝固,制得所述生根培养基。按上述组成成分及配制方法制备的生根培养基,培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定,可使生根培养周期缩短至1.5-2个月,组培室的周转效率提高30%以上。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域,具体涉及一种铁皮石斛试管苗的生根培养基及其配制方法。
背景技术
铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物,是石斛属药用植物中最为珍稀名贵的一种。铁皮石斛被列为“中华九大仙草之首”,具有独特的药用价值,其茎、花都可入药,具有益胃生津,滋阴清热的作用。现代医学证明,铁皮石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力的作用。铁皮石斛因表皮呈铁绿色而得名,中国铁皮石斛主要分布于云南、浙江广西、四川贵州等地。
近年来,越来越多的研究机构或企业进行铁皮石斛的人工繁殖,尤其是利用组培技术进行试管苗的繁殖,相关的生产技术已日趋成熟,但是仍存在组织培养周期长的问题。无论是试管苗的增殖培养还是生根培养,培养周期均为3个月左右。试管苗培养周期长造成组培室周转率低、试管苗的污染率升高。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明旨在提供一种铁皮石斛试管苗生根培养基及其配制方法,确保培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定,使生根培养周期缩短,组培室的周转效率提高。
为解决上述技术问题,本发明提供如下技术方案:
一种铁皮石斛试管苗生根培养基,该生根培养基的配方为:基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉;上述各组分严格按照制备工艺制成。
其中,所述基本培养基的配方为:
大量元素:硝酸钾2200-2700 mg/L、硝酸铵500-600mg/L、七水硫酸镁150-200mg/L、磷酸二氢钾300-400 mg/L、二水氯化钙150-200mg/L;
微量元素:一水硫酸锰15-20mg/L、七水硫酸锌70-100mg/L、碘化钾0.8-1.0mg/L、六水氯化钴0.02-0.03mg/L;
有机物:肌醇100mg/L、维生素B10.1mg/L、维生素B60.1mg/L、甘氨酸3mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L。
本发明还提供一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法,包括如下步骤:
(1)配制基本培养基,按照权利要求1所述的质量配比称取香蕉、土豆、NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉;
(2)将前述称取的香蕉、土豆去皮后制备成糊状,然后加入水煮沸,冷却至室温;
(3)将前述配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合;
(4)将前述(1)和(2)制备得到的各组分混合、定容,调节pH值至5.9-6.0,灭菌,冷却凝固,制得所述生根培养基。
优选地,前述步骤(4)中的灭菌条件为:温度121℃、压力0.1MPa条件下灭菌18min。
与现有技术相比,本发明的有益效果如下:
1、利用本发明配制的生根培养基,生根培养时间仅1.5-2个月,组培室的周转效率提高30%以上。
2、本发明配制的生根培养基pH值较为稳定,因此培养的铁皮石斛生根苗质量更稳定。本发明中,将香蕉泥和土豆泥的混合物加热煮沸冷却后,再和培养基其他组分混合定容后,最后测定pH值。培养基灭菌后的pH变化较小,培养基稳定培养的试管苗质量更稳定。
具体实施方式
以下通过具体实施例来说明本发明的技术方案。本发明中所用的原料和试剂均市售可得。下面结合实施例对铁皮石斛试管苗生根培养基的配制进行详细说明。
以制备40升生根培养基为例,其制备过程如下:
(1)香蕉、土豆去皮,分别称取香蕉4000克、土豆2000克,将香蕉、土豆切成小块,用搅拌机制成糊状后加7-8升水加热,加热过程中,不断搅拌防止粘锅,直至煮沸,然后冷却至室温。
(2)准备一个体积为10升左右的容器,在容器中加入5-6升纯水,分别量取2000ml大量元素20倍母液、40ml微量元素1000倍母液、200ml铁盐200倍母液、40ml有机物1000倍母液(以上均为优化配方的母液)、40mlNAA0.5mg/ml母液,倒入容器中;称取40克活性炭、800克白砂糖、200克琼脂粉,分别倒入容器中并搅拌均匀。
(3)将前述制备好的(1)和(2)各组分倒入50L的容器中混合、搅拌,定容至40L,调节pH值至6.0,然后进行分装,每瓶灌装量为60ml左右。最后在高温121℃,高压0.1MPa灭菌18分钟,培养基冷却凝固后使用。
利用上述配制的生根培养基进行铁皮石斛试管苗培养,在1.5-2个月的培养周期内试管苗根系数量4-5根,根到3cm以上,试管苗株高5cm以上。使得组培室的周转效率提高30%以上。
常规的铁皮石斛培养基配制步骤是:将包括香蕉、土豆在内的所有组分混合、定容后,调节pH值,再加热、灭菌,这会造成培养基pH值因上述原因在灭菌后发生较大变化,因此试管苗质量因培养基pH值的差异而不稳定。
由于培养基中的香蕉泥和土豆泥是天然的添加物,所用香蕉和土豆产地或成熟度的不同,使两种添加物在加热后的酸碱度发生不同的变化,致使经过灭菌后,培养基的pH值发生较大改变。
本发明中,则是将香蕉泥和土豆泥的混合物加热煮沸冷却后,和培养基其他组分混合定容,然后再测定pH值。因此,培养基灭菌后的pH值变化很小,从而使得培养的试管苗质量稳定。
上述本发明的实施例,并不用于限制本发明。对于本领域技术人员来说,本发明的培养基配制方法可以有变化。凡在本发明的精神和原则内,所作的等同替换、改进等,均应包括在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种铁皮石斛试管苗生根培养基,其特征在于:所述生根培养基的配方为:基本培养基+0.1-0.5mg/LNAA+0.4-1.0g/L活性炭+100g/L香蕉泥+50g/L土豆泥+20g/L白砂糖+5g/L琼脂粉;
所述基本培养基的配方为:
大量元素:硝酸钾2200-2700 mg/L、硝酸铵500-600mg/L、七水硫酸镁150-200mg/L、磷酸二氢钾300-400 mg/L、二水氯化钙150-200mg/L;
微量元素:一水硫酸锰15-20mg/L、七水硫酸锌70-100mg/L、碘化钾0.8-1.0mg/L、六水氯化钴0.02-0.03mg/L;
有机物:肌醇80-100mg/L、维生素B10.05-0.15mg/L、维生素B60.05-0.15mg/L、甘氨酸2-4mg/L;
铁盐:七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L。
2.如权利要求1所述的一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法,包括如下步骤:
(1)配制基本培养基,按照权利要求1所述的质量配比称取去皮的香蕉和土豆,以及NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉;
(2)将前述称取的香蕉、土豆制备成糊状,然后加入水煮沸,冷却至室温;
(3)将前述配制好的基本培养基和称取的NAA、活性炭、白砂糖、琼脂粉各组分混合;
(4)将前述(1)和(2)制备得到的各组分混合、定容,调节pH值至5.9-6.0,灭菌,冷却凝固,制得所述生根培养基。
3.如权利要求2所述的一种铁皮石斛试管苗生根培养基的配制方法,其特征在于,所述步骤(4)中的灭菌条件为:温度121℃、压力0.1MPa条件下灭菌18min。
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