CN104086650A - 人7型腺病毒的中和性单克隆抗体及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备人7型腺病毒的中和性单克隆抗体的方法，将人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区替换为所述人7型腺病毒的六邻体第5高变区基因，构建成嵌合病毒，将所述嵌合病毒作为所述免疫原。还提供了一种利用上述方法制备得到的鼠源人7型腺病毒中和性单克隆抗体和杂交瘤细胞株5MH5/3G5。还提供了利用上述方法制备得到的人源化和嵌合的单克隆抗体，以及一种药物组合物，包含上述人源化或人-鼠嵌合的单克隆抗体作为有效成分。本发明将外源中和表位嵌入3型腺病毒载体的高变区内，构建成展示外源中和表位的重组腺病毒，并以此为免疫原，能有效的展示外源中和表位，并增强免疫应答效应，对研制感染性疾病治疗性单抗具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于单克隆抗体制备技术领域，具体涉及人7型腺病毒的中和性单克隆抗体及其制备方法和应用。
背景技术
应用表位肽免疫来制备单克隆抗体，特别是治疗性单克隆抗体，是很有吸引力的途径。表位肽代表着蛋白质抗原最小的免疫原性单位。因此表位肽免疫能使免疫反应精确定位，能很好的控制产生所需的免疫应答。然而，应用表位肽免疫来制备单克隆抗体通常阳性率很低。因为简单肽通常免疫原性差，不能呈现良好的空间构象，而且不能有效激活T细胞和免疫记忆细胞。正因为如此，很多改善表位肽免疫原性的方法被开发出来，例如联合合适佐剂应用、偶联脂肽应用、直接呈递至树突状细胞和应用微粒呈递系统。然而，由于应用的成分过于单一、未能从根本上改善抗原的免疫原性等原因，这些方法呈递或展示表位肽的效果差强人意，应用十分有限。
治疗性单克隆抗体是对抗感染性疾病的非常有希望的生物药物。我们知道，有些病毒不能在细胞系中培养或者在体外培养的产量很低。因此，用病原体颗粒免疫从而制备针对这些病原体的中和单抗十分困难。基于表位肽的免疫方法是解决这一问题的一个方法，但是很多病原体的中和表位是构象表位，而简单的肽和应用上述方法呈递或展示的肽均难以呈现出空间构象。因此，仍需要开发出更有效的表位呈递或展示系统，以增强免疫应答，提高感染性疾病中和性单克隆抗体制备的阳性率。
发明内容
为克服上述技术缺陷，本发明提供了一种人7型腺病毒中和性单克隆抗体及其制备方法和应用，该人3型腺病毒抗原表位展示载体系统能有效的展示外源表位，并增强免疫应答效应。
本发明目的之一是提供一种制备针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体的方法，所述方法包括如下步骤：
构建免疫原：将人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区替换为所述人7型腺病毒的六邻体第5高变区基因，构建成嵌合病毒，将所述嵌合病毒作为所述免疫原。
所述人7型腺病毒的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQ NO:1所示序列，所述氨基酸序列位于所述人7型腺病毒的六邻体的第255位到269位。
所述人3型腺病毒载体为E3区缺失并表达有增强型绿色荧光蛋白的人3型腺病毒载体。
所述人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQ NO:2所示序列，所述氨基酸序列位于所述人3型腺病毒载体的六邻体的第264位到279位。
本发明的目的之二是提供了一种利用上述方法制备得到的鼠源的针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体。
本发明的目的之三是提供了一种分泌上述鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞株5MH5/3G5，所述杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.C2014104。
本发明的目的之四是提供了一种利用上述方法制备得到的人源化的针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体抗体。
本发明的目的之五是提供了一种上述方法制备得到的针对人7型腺病毒的中和性人-鼠嵌合单克隆抗体。
本发明的目的之六是提供了一种药物组合物，包含上述人源化或人-鼠嵌合的单克隆抗体作为有效成分。
本发明将人7型腺病毒六邻体第5高变区(HAdv7HVR5)嵌入六邻体第5高变区缺失的人3型腺病毒载体，构建成嵌合病毒rAdMHE3；然后以嵌合病毒rAdMHE3为免疫原，免疫小鼠，利用杂交瘤技术，首次成功制备了针对7型腺病毒六邻体第5高变区(HAdv7HVR5)的HAdv7中和性单抗。本发明将外源中和表位嵌入3型腺病毒载体的高变区内，构建成展示外源中和表位的重组腺病毒，并以此为免疫原，制备针对外源表位的中和性单克隆抗体是可行的，能有效的展示外源中和表位，并增强免疫应答效应，对研制感染性疾病治疗性单克隆抗体具有重要意义。
附图说明
图1是荧光显微镜下观察3型腺病毒载体Ad3EGFP在HEp-2细胞中eGFP表达，图1A是pBRAd△E3GFP线性化片段转染HEp-2细胞后24小时(100×)的图像；图1B是重组腺病毒rAd_E3GFP感染HEp-2细胞后48小时(100×)的图像；
图2是嵌合体病毒构建示意图；
图3是嵌合体病毒的复制特性检测结果图；
图4是构建的嵌合病毒rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5(即rAdH7R3)和rAdH7R7(rAdH7R4)分别与3型腺病毒抗血清中和实验，检测中和滴度的实验结果图；
图5是用重组病毒rAdMHE3免疫小鼠后获得的抗血清在体外与7型腺病毒进行中和实验的结果图；
图6是间接ELISA法筛选针对免疫原rAdMHE3的阳性单抗的结果图；
图7为腺病毒结合实验结果图；
图8为四株中和性单抗与人7型腺病毒HVR5被替换和未被替换的人7型腺病毒与单抗的反应的活性测定实验结果图。
具体实施方式
为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。
本说明书实施例中所述病毒株、细胞系和实验动物术语及相关说明如下：
HAdv7：人7型腺病毒。
HAdv3：人3型腺病毒。
HVR：六邻体高变区。
HVR5：六邻体第5高变区。
HAdv7GZ08(GenBank登录号：GQ478341)分离自急性呼吸道感染幼儿的鼻咽拭子，HEp-2细胞分离培养。
HAdv3GZ01(GenBank登录号：DQ099432)分离自急性呼吸道感染幼儿的鼻咽拭子，HEp-2细胞分离培养。
Ad3EGFP：用作3型腺病毒载体。本发明所构建的基于人HAdv3E3区缺失
并表达有增强
型绿色荧光蛋白的腺病毒载体，能表达HAdv3基因组和增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒。
rAdMHE3：用作免疫原。将Ad3EGFP的六邻体高变区5(HVR5)
(264FDGRDAVAGALAPEIV279)
替换成HAdv7的HVR5(255FDGREAADAFSPEIV269)，成功拯救出的重组病毒rAdMHE3。
rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7：做鉴定用。将rAd3egf/H7相应的HVR基因替换成HAdv3的HVR基因产生的嵌合病毒，其六邻体只有一个HVR区(分别是HVR1、HVR2、HVR5、HVR7)为HAdv3序列，其余部分为7型腺病毒六邻体的序列。rAd3egf/H7(Ad3/H7)是将Ad3EGFP的六邻体基因替换成HAdv7GZ08的六邻体基因产生的嵌合体病毒。
HEp-2和AD293细胞：购自生物资源中心(ATCC)，用于培养上述腺病毒。
细胞培养使用的培养基：含有100IU/ml盘尼西林,100IU/ml链霉素和10％胎牛血清的DMEM培养基(Gibco，USA)。
BALB/c小鼠：购自中山大学实验动物中心，并在无特定病原体条件下饲养。
腺病毒纯化：采用标准的氯化铯梯度离心方法，纯化后病毒粒子的含量按每260nm下的一个吸光值含有1.1×1012个病毒粒子(VPs)计算。
本发明应用基于人HAdv3、E3区缺失并表达有增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体，命名为Ad3EGFP。并将Ad3EGFP的六邻体第5高变区(HVR5)(264FDGRDAVAGALAPEIV279)替换成HAdv7的HVR5(255FDGREAADAFSPEIV269)，成功构建出重组病毒，命名为rAdMHE3。用体外细胞培养扩增后氯化铯梯度离心纯化的rAdMHE3病毒粒子免疫BALB/c小鼠产生的血清对HAdv7有中和作用；随后的研究也证实，HAdv7的主要的血清型特异性中和表位位于HVR5。因此，本发明用体外细胞培养扩增后氯化铯梯度离心纯化的rAdMHE3病毒粒子免疫BALB/c小鼠，以期用杂交瘤技术制备出HAdv7中和性抗体，并进行鉴定。
实施例1：3型腺病毒载体Ad3EGFP的构建
本发明所构建的基于人HAdv3E3区缺失并表达有增强型绿色荧光蛋白的腺病毒载体，能表达HAdv3基因组和增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒。具体构建步骤为：HAdv3GZ01病毒株在HEp-2细胞培养后，提取病毒基因组，与穿梭质粒pBRALR在BJ5183细菌内同源重组，获得带HAdv3GZ01病毒全基因组的质粒pBRAdV；RsrII酶切线性化质粒pBRAdV后与穿梭质粒pSKE3LCMVeGFP-SV40R在BJ5183细菌内同源重组，获得插入EGFP基因表达框的重组质粒pBRAd△E3GFP，该质粒转染细胞后拯救得到重组腺病毒rAd△E3GFP。
实验结果见图1，图1是荧光显微镜下观察Ad3EGFP在HEp-2细胞中eGFP的表达，其中图1A是pBRAd△E3GFP线性化片段转染HEp-2细胞后24小时(100×)的图像，图1B是重组腺病毒rAd_E3GFP感染HEp-2细胞后48小时(100×)的图像。结果证明3型腺病毒载体Ad3EGFP构建成功。
实施例2：免疫原rAdMHE3的构建
将Ad3EGFP的六邻体高变区5(HVR5)(264FDGRDAVAGALAPEIV279)(人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQ NO:2所示序列，所述序列位于所述人3型腺病毒载体的六邻体的第264位到279位)替换成HAdv7的HVR5(255FDGREAADAFSPEIV269)(人7型腺病毒的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQNO:1所示序列，所述序列位于所述人7型腺病毒的六邻体的第255位到269位)，搭桥PCR扩增HVR5区突变的人3型细胞六邻体基因，酶切连接至穿梭载体pBRLR，与载体pBRAd△E3GFP在BJ5183细菌内同源重组获得六邻体突变的重组腺病毒质粒pBRAd-MHE3，转染293细胞后拯救重组病毒rAdMHE3。
图2是嵌合体病毒构建示意图。通过定量PCR测定病毒基因组拷贝数分析病毒复制特性。结果见图3，图3是嵌合体病毒的复制特性检测结果图，结果表明，rAdMHE3的基因组复制未受表位置换的影响。
实施例3：鉴定用嵌合病毒rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7的构建
首先构建rAd3egf/H7(Ad3/H7)嵌合体病毒，rAd3egf/H7(Ad3/H7)嵌合体病毒是将Ad3EGFP的六邻体基因替换成HAdv7GZ08的六邻体基因产生的嵌合体病毒。构建方法：PCR扩增HAdv7GZ08病毒株的六邻体片段，连接至穿梭质粒pBRALR上，与pBRAd△E3GFP骨架质粒在BJ5183内同源重组，获得重组质粒pAd3egf/H7，转染293细胞后拯救得到重组病毒rAd3egf/H7。对病毒免疫小鼠进行中和抗体滴度实验，实验结果见表1，表1是对腺病毒免疫小鼠进行中和抗体滴度实验的结果表。由表1数据可见，该病毒粒子中六邻体为7型腺病毒的六邻体蛋白，而病毒稳定性等特性没有改变。
表1
然后构建rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7。rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7是将rAd3egf/H7相应的HVR基因替换成HAdv3的HVR基因产生的嵌合病毒，其六邻体只有一个HVR区(分别是HVR1、HVR2、HVR5、HVR7)为HAdv3序列，其余部分为7型腺病毒六邻体的序列。
构建方法：搭桥PCR扩增仅一个HVR区突变为3型相应序列的7型腺病毒六邻体，连接至穿梭载体后与rAd3egf/H7在细菌BJ5183内同源重组获得重组质粒，转染293细胞后拯救得到重组病毒rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7。实验结果见图4，图4是构建的嵌合病毒rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5(即rAdH7R3)和rAdH7R7(rAdH7R4)分别与3型腺病毒抗血清中和实验，检测中和滴度的实验结果图。由图4显示，嵌合病毒能被3型腺病毒抗血清所中和，中和滴度高于对照Ad3/H7，表明3型腺病毒的HVR1、HVR2、HVR5、HVR7包含中和性表位。
实施例4：用实施例2中的免疫原免疫小鼠，制备rAdMHE3单克隆抗体
用实施例2中的免疫原免疫小鼠，制备rAdMHE3单克隆抗体，方法按如下步骤进行：
(1)免疫小鼠：
①纯化后的rAdMHE3病毒粒子加等体积弗氏完全佐剂乳化后，按每只小鼠5×109VPs的剂量初次免疫。
②2周后，用纯化的rAdMHE3病毒粒子加等体积弗氏不完全佐剂乳化后，按每只小鼠1010VPs的剂量加强免疫。
③2周后，再加强免疫一次。
④融合前三天，用纯化的rAdMHE3病毒粒子磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后，按每只小鼠2×1010VPs的剂量尾静脉冲击免疫。
(2)获得杂交瘤细胞株；
(3)利用杂交瘤技术，筛选步骤(3)中得到的杂交瘤细胞株，获得针对7型腺病毒的中和性单克隆抗体，按如下操作：
融合后，用间接ELISA法筛选针对rAdMHE3的阳性杂交瘤细胞株，并通过有限稀释法进行单克隆。再将单克隆后的细胞腹腔注射入弗氏不完全佐剂预免的小鼠体内，诱导并采集腹水。
用重组病毒rAdMHE3免疫小鼠后获得的抗血清在体外与7型腺病毒进行中和实验，结果见图5，图5是用重组病毒rAdMHE3免疫小鼠后获得的抗血清在体外与7型腺病毒进行中和实验的结果图，结果表明重组病毒rAdMHE3免疫小鼠后获得的抗血清能体外中和7型腺病毒感染。
实施例5：用间接ELISA法筛选针对rAdMHE3的阳性单克隆抗体
间接ELISA法测定实施例4中得到的腹水对rAdMHE3的效价，用小鼠抗体
亚类试剂盒
(美国Calbiochem公司)测定各株单抗的抗体亚类，按试剂盒说明书进行。
用间接ELISA法筛选针对rAdMHE3的阳性单克隆抗体的方法操作如下：将病毒颗粒用包被液(pH9.6，0.05M碳酸盐缓冲液)稀释成约1010VPs/ml(病毒粒子/毫升)之后每孔100μl加入96孔板(品牌为：Nunc Maxisorp)，4℃包被过夜。之后，包被过的96孔板用含0.05％Tween-20的PBS(PBST)洗一遍，每孔加入120μl含30％小牛血清，5％蔗糖的封闭液于37℃封闭2h。之后，96孔板再用PBST洗5遍，然后每孔加入100μl杂交瘤细胞培养上清，置于37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl用抗体稀释液(含0.02％苦杏仁酸、20％新生牛血清及0.01％TritonX-100的pH7.0，0.02M Tris-HCl)1：10,000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG二抗(Bio-Rad，中国)37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl TMB显色液显色10min。最后每孔加入50μl2M硫酸终止反应，置于酶标仪(型号为：Thermo Scientific MultiskanMK3)下读取450nm下减去630nm背景的吸光值。重组病毒rAdMHE3免疫小鼠血清和未免疫小鼠血清(阴性血清)分别用抗体稀释液1：8，000稀释，按同样方法操作，作为每次实验的阳性对照和阴性对照。
经间接ELISA法筛选，共得到22株针对rAdMHE3的阳性单克隆抗体，结果见图6，图6是间接ELISA法筛选针对rAdMHE3的阳性单抗的结果图。用间接ELISA法筛选，读取450nm下减去630nm背景的吸光值，有值的则为阳性克隆，因此由图6可见，共筛选得到22株针对rAdMHE3的阳性单克隆抗体。
实施例6：用体外腺病毒中和实验筛选HAdv-7中和抗体
对实施例5中得到的单抗进行体外腺病毒中和实验，操作如下：腹水2倍倍比用DMEM培养液稀释后，每个稀释度取50μl分别与50μl含有100TCID50的HAdv7GZ08或Ad3EGFP的病毒稀释液混合均匀，37℃孵育1h。之后再将抗体-病毒混合液加入96孔培养板培养的85-95％丰度的单层HEp-2细胞中。96h后，倒置显微镜观察并判定中和效价，以能保护单层细胞不形成细胞病变效应的最高稀释度为中和效价终点。重组病毒rAdMHE3免疫小鼠血清和未免疫小鼠血清经56℃处理30min后，按同样方法操作，作为每次实验的阳性对照和空白对照。
实验结果见表2，表2为单抗亚类、腹水间接ELISA法对rAdMHE3效价及体外腺病毒中和实验效价结果，由表2可得知，单抗3G5、6F3、1D9和1C7在体外腺病毒中和实验中表现出对HAdv7GZ08较强的中和活性。这样，我们筛到了四株HAdv-7中和性单抗。我们对3G5株进行了保藏，该杂交瘤细胞株命名为5MH5/3G5，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.C2014104。
表2
a单抗对rAdMHE3的腹水效价在此表示为腹水效价的倒数。
b体外腺病毒中和实验效价在此表示为中和效价的倒数。
实施例7：对比人7型腺病毒HVR5插入和未插入人3型腺病毒的对比反应，来鉴定HAdv-7中和性单抗识别的表位
用间接ELISA法测定实施例6得到的四株HAdv-7中和性单抗对免疫原rAdMHE3、3型腺病毒载体Ad3EGFP和野生型腺病毒HAdv-7GZ08的结合特性，操作如下：将病毒颗粒用包被液稀释成约1010VPs/ml之后每孔100μl加入96孔板，4℃包被过夜。之后，包被过的96孔板用含PBST洗一遍，加入封闭液后于37℃封闭2h。之后，96孔板再用PBST洗5遍，然后每孔加入100μl用抗体稀释液1：1，000稀释的腹水，置于37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl用抗体稀释液1：10,000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG二抗37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl TMB显色液显色10min。最后每孔加入50μl2M硫酸终止反应，置于酶标仪下读取450nm下减去630nm背景的吸光值。表1中非中和性单抗4E1和未免疫小鼠血清分别用抗体稀释液1:1,000稀释，按同样方法操作，作为阳性对照和阴性对照。实验重复3次，根据3次结果计算出平均值和标准差(在图中用误差线表示)。
实验结果见图7。图7为腺病毒结合实验结果图，如图7所示，四株中和性单抗1C7、3G5、1D9和6F3结合免疫原rAdMHE3和HAdv-7，但相比之下，结合3型腺病毒载体Ad3EGFP的活性却显著减弱(*P<0.001,Student’s t检验，P<0.05视为差异显著，有统计学意义)。而rAdMHE3与Ad3EGFP的差异仅在于前者的HVR5区多肽序列为HAdv-7的HVR5(255FDGREAADAFSPEIV269)，后者的HVR5区多肽序列为HAdv-3的HVR5(264FDGRDAVAGALAPEIV279)。因此，图7所示结果表明四株中和性单抗针对的是HAdv-7的HVR5。
实施例8：对比人7型腺病毒HVR5被替换和未被替换的人7型腺病毒与单抗的反应，来鉴定HAdv-7中和性单抗识别的表位
由实施例7，我们推断，四株HAdv-7中和性单抗1C7、3G5、1D9和6F3针对的是HAdv7的HVR5(255FDGREAADAFSPEIV269)。为证实这一推断，我们进行了单抗结合表位突变重组腺病毒实验。实验按如下操作进行：将病毒颗粒用包被液稀释成约1010VPs/ml之后每孔100μl加入96孔板，4℃包被过夜。之后，包被过的96孔板用含PBST洗一遍，加入封闭液后于37℃封闭2h。之后，96孔板再用PBST洗5遍，然后每孔加入100μl用抗体稀释液1：1，000稀释的腹水，置于37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl用抗体稀释液1：10,000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG二抗37℃孵育30min。之后再用PBST洗5遍，每孔加入100μl TMB显色液显色10min。最后每孔加入50μl2M硫酸终止反应，置于酶标仪下读取450nm下减去630nm背景的吸光值。表1中非中和性单抗4E1和未免疫小鼠血清分别用抗体稀释液1:1,000稀释，按同样方法操作，作为阳性对照和阴性对照。实验重复3次，根据3次结果计算出平均值和标准差(在图中用误差线表示)。
实验结果见图8。图8为四株中和性单抗与人7型腺病毒HVR5被替换和未被替换的人7型腺病毒与单抗的反应的活性测定实验结果图。表位突变重组腺病毒rAdH7R1、rAdH7R2、rAdH7R5和rAdH7R7是六邻体重组腺病毒rAd3egf/H7的表位突变重组株(相应的HVR区被替换成HAdv-3相应的HVR)。如图8所示，四株中和性单抗均结合HVR5区未被替换成HAdv-3HVR5的rAdH7R1、rAdH7R2和rAdH7R7，但相比之下，与HVR5区被替换成HAdv-3HVR5的rAdH7R5的结合活性却显著减弱(*P<0.001)。因此，图8所示结果证实了四株中和性单抗针对的是HAdv-7的HVR5。这样我们将HAdv-7中和表位肽嵌入3型腺病毒载体的高变区从而构建了展示HAdv-7中和表位的重组腺病毒，并将此重组腺病毒作为免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术获得了针对HAdv-7中和表位的四株HAdv-7中和性单克隆抗体。
该单抗由于是具中和性的单抗，通过人源化改造，可以用作药物组分。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种制备针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
构建免疫原：将人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区替换为所述人7型腺病毒的六邻体第5高变区基因，构建成嵌合病毒，将所述嵌合病毒作为所述免疫原。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人7型腺病毒的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQ NO:1所示序列，所述氨基酸序列位于所述人7型腺病毒的六邻体的第255位到269位。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人3型腺病毒载体为E3区缺失并表达有增强型绿色荧光蛋白的人3型腺病毒载体。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人3型腺病毒载体的六邻体第5高变区的氨基酸序列如SEQ NO:2所示序列，所述氨基酸序列位于所述人3型腺病毒载体的六邻体的第264位到279位。
5.一种利用权利要求1-4之一所述的方法制备得到的鼠源的针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体。
6.一种分泌权利要求5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5MH5/3G5，其特征在于，所述杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO.C2014104。
7.一种利用权利要求1-4之一所述的方法制备得到的人源化的针对人7型腺病毒的中和性单克隆抗体抗体。
8.一种利用权利要求1-4之一所述的方法制备得到的针对人7型腺病毒的中和性人-鼠嵌合单克隆抗体。
9.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求7或8所述的单克隆抗体作为有效成分。
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