CN104073567A - 牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 - Google Patents
牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104073567A CN104073567A CN201410343467.6A CN201410343467A CN104073567A CN 104073567 A CN104073567 A CN 104073567A CN 201410343467 A CN201410343467 A CN 201410343467A CN 104073567 A CN104073567 A CN 104073567A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liquid
- pasteurella multocida
- sample
- detection method
- pcr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocida）的基因诊断试剂盒及检测方法，属于生物科学技术领域。该试剂盒及检测方法是以多杀性巴氏杆菌基因保守区序列设计的一对引物为主体而设计的。本发明采用聚合酶链式反应（PCR）技术，对牛的病原菌－多杀性巴氏杆菌的特异性DNA片断进行定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高；可用于牛巴氏杆菌病的临床检测，也用于牛各时期养殖过程中的细菌跟踪检测，还可以用于牛养殖环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物科学技术领域，具体涉及牛重大病原菌的诊断试剂盒及检测方法，主要是针对多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）基因诊断的试剂盒及检测方法。
背景技术
牛巴氏杆菌病又称为牛出血性败血症，是牛的一种急性、热性传染病，以发生高热、肺炎和内脏器官广泛出血为特征。病原为多杀性巴氏杆菌, 菌体为细小、两端钝圆的球杆状或短杆状菌，大小为1-1.5μm×0.3-0.6μm，多散在、无运动性、不形成芽胞，革兰氏染色阴性。多杀性巴氏杆菌对各种畜禽和野生动物都有致病性，不分年龄均可发生。牛群以黄牛、奶牛易感，其中青、壮年奶牛最易感，牦牛发病较少见。根据临床症状可分为败血型、浮肿型和肺炎型。但败血型以猝死为特征，而水肿型和肺炎型是在败血型的基础上发展而来的，因此在临床上以肺炎型为主的混合型最为常见。
败血型病牛常突然发病而死亡。表现体温升高，达41℃～42℃，心跳加快，精神沉郁，食欲减退或废绝，随后开始腹泻，呈粥样或水样，粪中混有粘液或血液，并有腹痛，不久体温下降而迅速死亡。病程很短，为12～24 h。常来不及查清病因和治疗，牛就死亡。
水肿型常发热，精神沉郁，反刍停止，流涎，流泪，流粘液样鼻汁，下颌和颈部发生炎性水肿，水肿还可蔓延到前胸、舌及周围组织。常伴有咳嗽，呼吸困难。后期倒地，体温下降，最后窒息死亡。病程为数小时至2d。
肺炎型主要是纤维素性胸膜肺炎症状。表现体温升高，呼吸促迫，继而呼吸困难，严重的头颈前伸，张口呼吸，黏膜发绀；流泡沫样鼻汁，有时带血，后变粘液脓性；咳嗽，胸部听诊有啰音，有时听到摩擦音，叩诊有浊音区，触诊有痛感。病初便秘，后期腹泻，粪中有血，有恶臭味。病程为3～7d左右。病死率高达80%以上。
可以说多杀性巴氏杆菌是细菌中对牛健康安全危害最大的种类之一，给牛养殖业带来较大的危害。多杀性巴氏杆菌引起的牛出血性败血症具有暴发快、流行广、死亡率高等特点，由于细菌极易对抗生素产生抗药性，因此对多杀性巴氏杆菌病应以预防为主，而这主要依赖于早期的快速检测。目前对多杀性巴氏杆菌的检测技术主要包括传统的TCBS培养及进一步的形态及生理生化鉴定法、免疫学方法（主要有单克隆抗体技术、酶联免疫检测法（ELISA））、 免疫电镜技术、分子生物学方法（主要有分子杂交技术、限制性内切酶长度多态（RELP））等。但是这些检测方法有些对技术条件要求高，检测时间长。有些所需的材料制备麻烦，费用高，有些方法灵敏度不高，特异性不强，因此广大兽医和牛养殖业主掌握的技术难度很大，很难推广，限制了这些技术的应用和发展。
早期快速诊断牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌是目前预防牛出血性败血症暴发流行的主要措施和牛养殖业减少损失的有效途径，因此，简便快速、特异性好又灵敏度高的诊断试剂盒及其检测方法是广大兽医工作者和牛养殖者急切盼望的。
多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，简称PCR技术），是上世纪80年代发展起来的一种体外扩增特异DNA片断的技术，由于具有快速、敏感、特异性强等特点，所以这种方法建立后，很快就被应用于实践中。
发明内容
本发明的目的是利用多杀性巴氏杆菌毒素基因（toxA）保守序列设计的一对引物，建立多杀性巴氏杆菌PCR反应体系，在此基础上优化和设计，提供牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒及检测方法。该试剂盒可批量生产，操作简单，简便快速，特异性好，灵敏度高；可用于牛出血性败血症的临床检测，也可用牛养殖过程中的细菌跟踪检测，也还可以用于养殖环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值。
本发明采用的技术方案如下：
.牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒，该试剂盒包括A液、B液、C液、盒子和泡沫板；
所述的A液为样品稀释液，内装无菌生理盐水，5管，每管5mL；
所述的B液为PCR反应液，1管，内装192μl PCR扩增反应液，包括168μl ddH2O、14.4μl 含Mg2+ 的10×Buffer [Tris-HCl 100mmol/L 、pH为9.0, KCl 500mmol/L, MgCl2 15mmol/L,
Triton-X100 1%]、3.2μl 浓度为250μmol/L的dNTP、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmF、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmR和1.6μl酶活单位为8U 的TaqE；PmF为：5'-ACGCTTTGCCTT GCAAGATAC-3',PmR为：5'-GATTCACGTAACAAACCAGGC-3'；所述的C液为阳性对照液，1管，内装50μl 多杀性巴氏杆菌阳性模板；
所述泡沫板装于盒子中，其大小与盒子的底面相同；泡沫板上有不少于上述小管数量的小孔，上述各小管分别对应放置于这些小孔中。
本发明还提供一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，使用上述试剂盒，按下列步骤进行：
步骤（1），取被检标本的新鲜含DNA样品，加入样品稀释液，稀释10～20倍，冰浴匀浆；
步骤（2）， 将匀浆后的样品下离心，得到离心后样品的上层清液；
步骤（3），将200μl离心后样品的上层清液煮沸10min，然后立刻放于冰上5～10min冷却；
步骤（4），将冷却后的样品离心，取上层清液作为PCR模板；
步骤（5），分别取体积比为1：1的PCR模板和C液，各加入到PCR反应液中，PCR模板与PCR反应液的体积比为1：24，C液与PCR反应液的体积比为1：24，混匀后2000r/min离心5秒，置于PCR仪上；
步骤（6）， 按下列条件扩增：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火45sec，72℃延伸1min，34个循环，72℃延伸10min，保存于4℃，得到扩增产物；
步骤（7），反应结束后取5～10μl扩增产物，加2μl溴酚蓝混匀，经1％琼脂糖凝胶电泳20～30分钟后于紫外仪上观察，若在300bp处出现明亮的反应条带，则为多杀性巴氏杆菌阳性；若无反应条带显示则为阴性。
本发明技术方案中所述的新鲜含DNA样品为新鲜鼻腔拭子液。
本发明技术方案中所述的冰浴匀浆是在无菌匀浆器中。
本发明技术方案中所述的步骤（2）匀浆后的样品离心的速度为3000～4000r/min，时间为5～10min。
本发明技术方案中所述的步骤（4）冷却后的样品离心的速度为3000～4000r/min，时间为5～10min。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明的牛重大病原菌—多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒及检测方法，是以根据多杀性巴氏杆菌毒素基因（ToxA）保守区序列设计的一对引物为主体而设计的。利用该对引物，可以特异性地扩增携带多杀性巴氏杆菌的待测样品的有关基因片断，所建立的优化的PCR体系保证检测结果的快速性、准确性和稳定性。因此，使用本发明的试剂盒及检测方法，可以简便、快速、灵敏而特异的地检测感染多杀性巴氏杆菌的患牛鼻腔拭子液，大大高于传统和常规的生物学方法，可运用于牛烈性传染病—出血性败血症的临床检测，也可用于肉牛或奶牛各时期养殖过程中的细菌跟踪检测，还可以用于牛养殖环境监测，避免病菌传播流行，具有很高的实用价值。
附图说明
图1 是感染多杀性巴氏杆菌的病牛鼻腔拭子液样品的PCR扩增结果；其中M：DNA分子量标准；1：多杀性巴氏杆菌阳性对照；2：多杀性巴氏杆菌阴性对照；3：检测样品；
图2 是因出血性败血症死亡的西门塔尔牛肺部组织样品的PCR扩增结果；其中M：DNA分子量标准；1：多杀性巴氏杆菌阳性对照；2：多杀性巴氏杆菌阴性对照；3：检测样品；
图3是急性病死牛的的血液组织样品的PCR扩增结果；其中M：DNA分子量标准；1：多杀性巴氏杆菌阳性对照；2：多杀性巴氏杆菌阴性对照；3：检测样品。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。文中所述的较佳条件实施方法仅作示范之用。
实施例1
牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒，该试剂盒包括A液、B液、C液、盒子和泡沫板；
所述的A液为样品稀释液，内装无菌生理盐水，5管，5ml/管；
所述的B液为PCR反应液，1管，内装192μl PCR扩增反应液，包括168μl ddH2O、14.4μl 含Mg2+ 的10×Buffer [Tris-HCl 100mmol/L 、pH为9.0, KCl 500mmol/L, MgCl2 15mmol/L,
Triton-X100 1%]、3.2μl 浓度为250μmol/L的dNTP、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmF、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmR和1.6μl酶活单位为8U 的TaqE；PmF为：5'-ACGCTTTGCCTT GCAAGATAC-3',PmR为：5'-GATTCACGTAACAAACCAGGC-3'；所述的C液为阳性对照液，1管，内装50μl 多杀性巴氏杆菌阳性模板；
所述的C液为阳性对照液，1管，内装50μl 多杀性巴氏杆菌阳性模板；
所述的盒子为长方体盒子，8.5×5.8×6.2cm3。
所述泡沫板装于盒子中，其大小与盒子的底面相同，高2.2cm, 有三排孔，第一排五个孔，孔径1.3cm，第二排五个孔，孔径1.0cm，第三排六个孔，孔径0.6cm。上述各小瓶和小管分别对应放置于这些小孔中，装于长方体盒子中。
该试剂盒中的一对引物的DNA序列如下：
PmF：5'-ACGCTTTGCCTT GCAAGATAC-3'；
PmR：5'-GATTCACGTAACAAACCAGGC-3'
PCR扩增反应液体系（25μl体系）如下：
ddH2O 21μl
10×Buffer 1.8μl
dNTP 0.4μl
引物PmF 0.3μl
引物PmR 0.3μl
TaqE 0.2μl
实施例2
一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，使用实施例1试剂盒，按下列步骤进行：
步骤（1），取0.05g被检标本的急性病死牛的的肺部组织，加入样品稀释液，稀释10倍，在无菌匀浆器中冰浴匀浆；
步骤（2）， 将匀浆后的样品下离心，离心的速度为3000r/min，时间为5min，得到离心后样品的上层清液；
步骤（3），将200μl离心后样品的上层清液煮沸10min，然后立刻放于冰上5min冷却；
步骤（4），将冷却后的样品离心，离心的速度为3000r/min，时间为5min，取上层清液作为PCR模板；
步骤（5），分别取体积比为1：1的PCR模板和C液，各加入到PCR反应液中，PCR模板与PCR反应液的体积比为1：24，C液与PCR反应液的体积比为1：24，混匀后2000r/min离心5秒，置于PCR仪上；
步骤（6）， 按下列条件扩增：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火45sec，72℃延伸1min，34个循环，72℃延伸10min，保存于4℃，得到扩增产物；
步骤（7），反应结束后取5μl扩增产物，加2μl溴酚蓝混匀，经1％琼脂糖凝胶电泳20分钟后于紫外仪上观察，在300bp处出现一明亮的反应条带，与阳性对照在同一位置，则为多杀性巴氏杆菌阳性，说明检测样品中携带多杀性巴氏杆菌；若无反应条带显示，则为阴性，表明检测样品中不含多杀性巴氏杆菌，如图1所示。
实施例3
一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，使用实施例1试剂盒，按下列步骤进行：
步骤（1），取0.05g被检标本的新鲜鼻腔拭子液，加入样品稀释液，稀释20倍，在无菌匀浆器中冰浴匀浆；
步骤（2）， 将匀浆后的样品下离心，离心的速度为4000r/min，时间为10min，得到离心后样品的上层清液；
步骤（3），将200μl离心后样品的上层清液煮沸10min，然后立刻放于冰上10min冷却；
步骤（4），将冷却后的样品离心，离心的速度为4000r/min，时间为10min，取上层清液作为PCR模板；
步骤（5），分别取体积比为1：1的PCR模板和C液，各加入到PCR反应液中，PCR模板与PCR反应液的体积比为1：24，C液与PCR反应液的体积比为1：24，混匀后2000r/min离心5秒，置于PCR仪上；
步骤（6）， 按下列条件扩增：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火45sec，72℃延伸1min，34个循环，72℃延伸10min，保存于4℃，得到扩增产物；
步骤（7），反应结束后取10μl扩增产物，加2μl溴酚蓝混匀，经1％琼脂糖凝胶电泳30分钟后于紫外仪上观察，在300bp处出现一明亮的反应条带，与阳性对照在同一位置，则为多杀性巴氏杆菌阳性，说明检测样品中携带多杀性巴氏杆菌；若无反应条带显示，则为阴性，表明检测样品中不含多杀性巴氏杆菌，如图2所示。
实施例4
一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，使用实施例1试剂盒，按下列步骤进行：
步骤（1），取0.1g被检标本的急性病死牛的的血液组织，加入样品稀释液，稀释15倍，在无菌匀浆器中冰浴匀浆；
步骤（2）， 将匀浆后的样品下离心，离心的速度为3600r/min，时间为7min。得到离心后样品的上层清液；
步骤（3），将200μl离心后样品的上层清液煮沸10min，然后立刻放于冰上8min冷却；
步骤（4），将冷却后的样品离心，离心的速度为3200r/min，时间为9min，取上层清液作为PCR模板；
步骤（5），分别取体积比为1：1的PCR模板和C液，各加入到PCR反应液中，PCR模板与PCR反应液的体积比为1：24，C液与PCR反应液的体积比为1：24，混匀后2000r/min离心5秒，置于PCR仪上；
步骤（6）， 按下列条件扩增：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火45sec，72℃延伸1min，34个循环，72℃延伸10min，保存于4℃，得到扩增产物；
步骤（7），反应结束后取6μl扩增产物，加2μl溴酚蓝混匀，经1％琼脂糖凝胶电泳25分钟后于紫外仪上观察，在300bp处出现一明亮的反应条带，与阳性对照在同一位置，则为多杀性巴氏杆菌阳性，说明检测样品中携带多杀性巴氏杆菌；若无反应条带显示，则为阴性，表明检测样品中不含多杀性巴氏杆菌，如图3所示。
Claims (6)
1.牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的基因诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒包括A液、B液、C液、盒子和泡沫板；
所述的A液为样品稀释液，内装无菌生理盐水，5管，每管5mL；
所述的B液为PCR反应液，1管，内装192μl PCR扩增反应液，包括168μl ddH2O、14.4μl 含Mg2+ 的10×Buffer [Tris-HCl 100mmol/L 、pH为9.0, KCl 500mmol/L, MgCl2 15mmol/L,
Triton-X100 1%]、3.2μl 浓度为250μmol/L的dNTP、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmF、2.4μl浓度为0.5μmol/L引物PmR和1.6μl酶活单位为8U 的TaqE；PmF为：5'-ACGCTTTGCCTT GCAAGATAC-3',PmR为：5'-GATTCACGTAACAAACCAGGC-3'；所述的C液为阳性对照液，1管，内装50μl 多杀性巴氏杆菌阳性模板；
所述泡沫板装于盒子中，其大小与盒子的底面相同；泡沫板上有不少于上述小管数量的小孔，上述各小管分别对应放置于这些小孔中。
2.一种牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，其特征在于使用权利要求1所述试剂盒，按下列步骤进行：
步骤（1），取被检标本的新鲜含DNA样品，加入样品稀释液，稀释10～20倍，冰浴匀浆；
步骤（2）， 将匀浆后的样品下离心，得到离心后样品的上层清液；
步骤（3），将200μl离心后样品的上层清液煮沸10min，然后立刻放于冰上5～10min冷却；
步骤（4），将冷却后的样品离心，取上层清液作为PCR模板；
步骤（5），分别取体积比为1：1的PCR模板和C液，各加入到PCR反应液中，PCR模板与PCR反应液的体积比为1：24，C液与PCR反应液的体积比为1：24，混匀后2000r/min离心5秒，置于PCR仪上；
步骤（6）， 按下列条件扩增：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃退火45sec，72℃延伸1min，34个循环，72℃延伸10min，保存于4℃，得到扩增产物；
步骤（7），反应结束后取5～10μl扩增产物，加2μl溴酚蓝混匀，经1％琼脂糖凝胶电泳20～30分钟后于紫外仪上观察，若在300bp处出现明亮的反应条带，则为多杀性巴氏杆菌阳性；若无反应条带显示则为阴性。
3.根据权利要求2所述的牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，其特征在于所述的新鲜含DNA样品为新鲜鼻腔拭子液。
4.根据权利要求2所述的牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，其特征在于所述的冰浴匀浆是在无菌匀浆器中。
5.根据权利要求2所述的牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，其特征在于所述的步骤（2）匀浆后的样品离心的速度为3000～4000r/min，时间为5～10min。
6.根据权利要求2所述的牛重大病原菌－多杀性巴氏杆菌的检测方法，其特征在于所述的步骤（4）冷却后的样品离心的速度为3000～4000r/min，时间为5～10min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410343467.6A CN104073567B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410343467.6A CN104073567B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104073567A true CN104073567A (zh) | 2014-10-01 |
| CN104073567B CN104073567B (zh) | 2017-08-15 |
Family
ID=51595170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410343467.6A Active CN104073567B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104073567B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104774967A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-07-15 | 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 | 一种用于多杀性巴氏杆菌实时荧光定量pcr方法的引物及检测方法 |
| CN106755462A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-05-31 | 南阳师范学院 | 一种牛多杀性巴氏杆菌的环介导等温扩增检测引物组合物、检测盒及其应用 |
-
2014
- 2014-07-18 CN CN201410343467.6A patent/CN104073567B/zh active Active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 唐先春等: "应用双重PCR检测产毒素多杀性巴氏杆菌", 《中国兽医学报》 * |
| 曾静雯等: "多杀性巴氏杆菌鉴定与特性分析的分子生物学方法", 《畜牧兽医科技信息》 * |
| 马文戈等: "牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定", 《中国预防兽医学报》 * |
| 鲍娟等: "猪源多杀性巴氏杆菌的生物学特性与ToxA基因鉴定", 《畜牧与兽医》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104774967A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-07-15 | 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 | 一种用于多杀性巴氏杆菌实时荧光定量pcr方法的引物及检测方法 |
| CN106755462A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-05-31 | 南阳师范学院 | 一种牛多杀性巴氏杆菌的环介导等温扩增检测引物组合物、检测盒及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104073567B (zh) | 2017-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Segalés et al. | Senecavirus A: an emerging pathogen causing vesicular disease and mortality in pigs? | |
| Khalafalla et al. | A study on some reproductive disorders in dromedary camel herds in Saudi Arabia with special references to uterine infections and abortion | |
| CN110079637B (zh) | 一种牛轮状病毒、冠状病毒、病毒性腹泻病毒多联rt-pcr检测方法 | |
| CN105349707A (zh) | 一种猪流行性腹泻病毒逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用 | |
| Zerom et al. | Tuberculosis in dromedaries in eastern Ethiopia: Abattoir-based prevalence and molecular typing of its causative agents | |
| CN106167837A (zh) | 牛病毒性腹泻‑粘膜病病毒的实时荧光定量pcr检测试剂盒及其专用引物和探针 | |
| CN109593869A (zh) | 一种用于检测副猪嗜血杆菌的rpa引物、rpa探针、试剂盒及核酸检测方法 | |
| Goecke et al. | Design of a high-throughput real-time PCR system for detection of bovine respiratory and enteric pathogens | |
| CN108504782A (zh) | 用于同步检测4种猪传染病病毒的引物组合及检测试剂盒 | |
| CN104073567A (zh) | 牛重大病原菌―多杀性巴氏杆菌基因诊断试剂盒及检测方法 | |
| Kılıç et al. | Molecular investigation of Coxiella burnetii infections in aborted sheep in eastern Turkey | |
| CN104152582B (zh) | 牛疙瘩皮肤病病毒Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和检测方法 | |
| Golender et al. | Bluetongue Serotype 3 in Israel 2013–2018: Clinical Manifestations of the Disease and Molecular Characterization of Israeli Strains | |
| CN103276104B (zh) | 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的rt-lamp核酸试纸条试剂盒及应用 | |
| CN101392299A (zh) | 一种马流感检测试剂盒和检测方法 | |
| CN106755529A (zh) | 一种检测猪细菌性肠炎病原的多重pcr特异性引物及其应用 | |
| CN106086238A (zh) | 猪圆环病毒2型的pcr检测方法、所用引物及检测试剂盒 | |
| CN103205493B (zh) | 一种检测布鲁氏菌的lamp方法 | |
| Sukumar et al. | Goat milk as a non-invasive sample for confirmation of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis by IS900 PCR | |
| Zeedan et al. | Rapid detection and differentiation between sheep pox and goat pox viruses by real-time qPCR and conventional PCR in sheep and goat in Egypt | |
| CN104651536A (zh) | 一种prrsv逆转录环介导等温扩增试剂盒及其应用 | |
| CN106701994A (zh) | 同步检测肺炎克雷伯氏菌和豚鼠气单胞菌的双重pcr引物及其检测方法 | |
| CN101319253A (zh) | 高致病性蓝耳病的检测方法 | |
| El-Feky et al. | Detection of invA gene in non typhoidal Salmonellae isolated from food products and clinical cases | |
| Hammer et al. | Preliminary results of field and experimental investigations of pre-weaning diarrhea in mink |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |