CN104059008B - 水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种水仙花中β‑胡萝卜素的提取分离方法；包括如下步骤：步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二次浓缩、溶解即可。本发明方法获得的β‑胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。本发明材料来源广泛、操作简便、成本低廉、纯度较高，适用于天源β‑胡萝卜素标准品的制备。
Description
技术领域
本发明涉及植物中色素的提取方法，具体地，涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法。
背景技术
水仙是石蒜科(Amaryllidaceael)水仙属(Narcissus)多年生草本植物，是一种重要的观赏花卉。有研究发现水仙花中最主要的色素成分为类胡萝卜素。类胡萝卜素是一类重要的天然色素，主要包括胡萝卜素类和叶黄素类。其中β-胡萝卜素是胡萝卜素类最重要的一种化合物，且具有广泛的抗氧化、抗肿瘤和消炎功效。
β-胡萝卜素在类胡萝卜素定性定量分析中广泛被用作标准品使用，但由于提取工艺复杂、合成困难、成本较高、且易氧化、易光解的特性而致使其价格昂贵。目前已发现一些从植物中获取类胡萝卜素的相关报道，如专利号201010515845.6使用乙醚等有机溶剂提取了野菊花中类胡萝卜素混合物，专利号201210097866通过无溶剂提取法获得了类胡萝卜素混合物，并推荐直接用作食品添加剂，专利号201010233243.1使用乙醇及微波辅助提取方式获取类胡萝卜素混合物。然而，针对类胡萝卜素中高纯度的β-胡萝卜素的提取分离方式尚未见报道。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法。本发明采用的为大杯状副冠型水仙品种Narcissuspseudonarcissus‘Prof.Einstein’，其副冠为橙红色。本发明对其花色成分初步定性分析发现其副冠内含大量β-胡萝卜素。因此，本文以Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’为植物材料，不仅发现新型的天然源的类胡萝卜素，而且为制备廉价β-胡萝卜素标准品提供了可能。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二次浓缩、溶解即可。
优选地，包括如下步骤：
步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入料液比(副冠组织g:正己烷ml)为1-2:5-20的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
步骤三，向萃取液内加入料液比(副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
步骤五，加入料液比(副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比(副冠组织g:10％KOH-甲醇溶液ml)为1-2:4-10的10％KOH-甲醇溶液，避光皂化；
步骤六，向皂化液内加入料液比(副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:4-10的饱和NaCl溶液和料液比(副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比(副冠组织g:饱和NaCl溶液ml)为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β-胡萝卜素粉末；
步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比(副冠组织g:甲基叔丁基醚ml)为1-2:1-2的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
优选地，所述水仙花的为Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’。
优选地，步骤一中，所述色素提取液组成为正己烷：丙酮：无水乙醇：水＝6-12:1-3:1-3:0.5-1。
优选地，所述水仙花的副冠组织与所述色素提取液的质量体积比为1-3:20-50。
优选地，所述皂化的时间为2-5h，温度为18-25℃。
优选地，所述真空浓缩的压强为100-800Pa，温度45-70℃。
优选地，所述甲基叔丁基醚溶液中含有抗氧化剂BHT，其含量为0.005-0.1％。
优选地，所述超声提取的时间为30-120min。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1.本发明方法获得的β-胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。
2.本发明材料来源广泛、操作简便、成本低廉、纯度较高，适用于天源β-胡萝卜素标准品的制备。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例涉及的水仙花的品种为Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’。
本实施例涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入料液比(g:ml)为1:5的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
步骤三，向萃取液内加入料液比(g:ml)为1:10的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
步骤五，加入料液比(g:ml)为1:2的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为1:4的10％KOH-甲醇溶液，避光皂化；
步骤六，向皂化液内加入料液比(g:ml)为1:4的饱和NaCl溶液和料液比(g:ml)为1:2的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比(g:ml)为1:10的饱和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β-胡萝卜素粉末；
步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比为1:1的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
实施效果：经本实施例方法获得的β-胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。
实施例2
本实施例涉及的水仙花的品种为Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’。
本实施例涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入料液比(g:ml)为1.5:10的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
步骤三，向萃取液内加入料液比(g:ml)为1.5:20的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
步骤五，加入料液比g:ml)为1.5:3的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为1.5:6的10％KOH-甲醇溶液，避光皂化；
步骤六，向皂化液内加入料液比(g:ml)为1.5:6的饱和NaCl溶液和料液比(g:ml)为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比(g:ml)为1.5:20的饱和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β-胡萝卜素粉末；
步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比为1.5:2的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
实施效果：经本实施例方法获得的β-胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。
实施例3
本实施例涉及的水仙花的品种为Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’。
本实施例涉及一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，包括如下步骤：
步骤一，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入料液比(g:ml)为1:10的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
步骤三，向萃取液内加入料液比(g:ml)为1:15的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
步骤四，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
步骤五，加入料液比g:ml)为1:2的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比为1-2:4-10的10％KOH-甲醇溶液，避光皂化；
步骤六，向皂化液内加入料液比(g:ml)为1:5的饱和NaCl溶液和料液比(g:ml)为1:2的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比(g:ml)为1:15的饱和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
步骤七，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β-胡萝卜素粉末；
步骤八，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比为1:1的甲基叔丁基醚溶液内，即可。
实施效果：经本实施例方法获得的β-胡萝卜素样品液的纯度达98％以上，可直接作为高效液相色谱级标准品使用。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
Claims (5)
1.一种水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，取水仙花的副冠组织，冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤二，加入正己烷萃取，将萃取液合并洗涤，离心、真空浓缩、皂化、二次洗涤、二次浓缩、溶解即可；
所述方法具体包括如下步骤：
步骤1，取新鲜的水仙花的副冠组织，加液氮冻干并研磨至粉状，加入色素提取液，超声提取；
步骤2，加入料液比g：ml为1-2:5-20的正己烷，萃取至下层为无色，合并各萃取液；
步骤3，向萃取液内加入料液比g：ml为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗涤，使上清至中性，弃下层；
步骤4，将萃取液置于真空干燥箱内真空浓缩，至溶剂挥净；
步骤5，加入料液比g：ml为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液溶解，同时加入料液比g：ml为1-2:4-10的10％ KOH-甲醇溶液，避光皂化；
步骤6，向皂化液内加入料液比g：ml为1-2:4-10的饱和NaCl溶液和料液比g：ml为1-2:2-4的甲基叔丁基醚溶液使其分层，同时加入料液比g：ml为1-2:10-30的饱和NaCl溶液洗涤至中性，弃下层；
步骤7，取上层至离心管内，置于真空干燥箱内二次真空浓缩至干，即得橙红色β-胡萝卜素粉末；
步骤8，将β-胡萝卜素粉末溶解于料液比g：ml为1-2:1-2的甲基叔丁基醚溶液内，即可；
所述色素提取液组成为：正己烷、丙酮、无水乙醇、水的体积比为6-12:1-3:1-3:0.5-1；
所述甲基叔丁基醚溶液中含有抗氧化剂BHT，其含量为0.005-0.1％；
所述水仙花的品种为Narcissus pseudonarcissus‘Prof.Einstein’。
2.如权利要求1所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述水仙花的副冠组织与所述色素提取液的质量体积料液比为1-2:20-40。
3.如权利要求1所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述皂化的时间为2-5h，温度为18-25℃。
4.如权利要求1所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述真空浓缩的压强为100-800Pa，温度45-70℃。
5.如权利要求1所述的水仙花中β-胡萝卜素的提取分离方法，其特征在于，所述超声提取的时间为30-120min。
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