CN104054696A - 一种血小板液态保存方法以及保存装置 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种血小板液态保存方法以及保存装置，本发明是向装有浓缩或者单采血小板的密闭空间保存期间保持温度为22±2℃，氢气体积浓度为3.5％；保存装置为一密闭恒温可通氢气装置。本发明可降低浓缩或单采血小板22±2℃保存期间，氢气可以降低血小板激活和CD62p表达水平，减轻血小板保存损伤，提高血小板体外功能。

Description

一种血小板液态保存方法以及保存装置

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是一种将氢气用于血小板22±2℃液态保存的方法以及专用设备。

背景技术

血小板是血液中重要的止血和凝血成分，血小板输注是临床上治疗血小板减少或血小板功能障碍引起出血的不可替代的治疗方法。(22±2)℃持续振荡保存是目前国内外公认的血小板保存方法，但是随着保存时间的延长，血小板会发生一系列形态、功能和代谢上的改变——血小板保存损伤(platelet storage lesion)。

尽管已有大量新技术，如高通透的血小板保存袋、血小板保存添加剂、低温及冷冻保存血小板等，应用于血小板贮存，但是迄今为止还没有找到降低血小板保存损伤的最佳贮存方法。

氢气是1种非常理想的抗氧化物质，可改善多种脏器的缺血再灌注损伤。至今未见有关采用氢气降低血小板保存损伤，提高血小板保存质量的相关报道。也无任何有关氢气降低存储血小板激活和CD62p表达水平、以及氢气用于血小板22±2℃液态保存的相关报道。将传统血小板保存箱连接氢气可制备新型血小板保存箱。

所述的血小板保存损伤，是指随着保存时间的延长，血小板会发生一系列形态、功能和代谢上的改变，导致回输后血小板功能下降。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血小板液态保存方法，本发明的另一目的在于提供一种血小板液态保存装置。

本发明提供了一种血小板液态保存方法，该方法包括下述步骤：

向装有浓缩或者单采血小板的血小板保存袋血袋中缓慢注入纯氢气(气体加在血小板液面上，避免产生气泡，10升/分钟，持续充气2分钟)，氢气溶解至血小板液体中形成饱和氢水。保存期间将血小板保存袋放入密闭空间(血小板保存箱)，密闭空间内保持氢气体积浓度为2-10％，优选3.5％，维持血小板液体内氢气浓度25μM/L以上。添加氢气的浓缩或者单采血小板可在血小板保存箱22±2℃保存5天。

其中密闭空间内保持氢气体积百分比为2％已可降低血小板保存损伤，提高血小板保存质量，氢气体积浓度超过10％易产生氢气爆炸，故密闭空间的氢气浓度选择2-10％；

所述的血小板液态保存方法，浓缩或者单采血小板在保存过程中还需要进行振荡，振荡较佳为水平振荡，振幅为50mm，频率60周/分。

所述的浓缩血小板是指采用血小板血浆法二次离心法制备，参见文献：顾海慧，钱宝华，马秀珍，宋耘，查占山，郭峰；应用小剂量 第2信使调节剂混合物冰冻保存血小板的体外功能研究；中国输血杂志；2006,19(6)；454-456。

所述的单采血小板是指用血液细胞分离机采集制备，参见文献：王晨，马秀珍，朱燕霞，顾海慧，胡慧红，钱宝华；机采血小板献血者整体护理的体会；深圳中西医结合杂志；2010，20(2)；125-127。

所述的血小板液体是溶解在自体血浆中的血小板。

保存期间保持温度为22±2℃，作用是维持血小板的生理活性，因为4℃保存会导致血小板激活。

氢气是装在例如200巴下的钢瓶中市售，或是在高度隔热容器内温度为-253℃以液态形式储存。

本发明还提供了一种血小板液态保存装置，整体为密闭箱体，包括箱外壳、内衬箱、温控调节装置、气体调节装置、电源装置等，所述温控调节装置、气体调节装置分别与电源装置电连接；其特征在于所述的气体调节装置为氢气调节装置；该血小板保存装置还包括振荡装置，振荡装置与电源装置电连接。

所述氢气调节装置包括氢气探测器，氢气探测器位于内衬箱的顶部。

所述振荡装置为水平振荡装置，包括振幅调控开关，设定振幅为50mm，频率60周/分；

所述振荡装置还包括摇动支架，摇动支架设置于内衬箱内部，摇动支架上有4-10层隔板，优选6层；

所述的温控调节装置包括温控开关和温控感应探头，温度感应探 头放置于内衬箱的顶部，与温控开关相连，温控开关安装于箱体外下部调控区。

所述血小板液态保存装置还包括报警装置，报警装置与电源装置电连接。

所述箱体的长宽高尺寸为(1000-1500)mm*(400-800)mm*(400-600)mm，优选1200mm*600mm*550mm，箱内支架的长宽高尺寸为(900-1100)mm*(450-550)mm*(400-500)mm，优选1000mm*500mm*450mm，隔层间距厚60mm。

所述箱体外部设置有电源开关、温控开关、温度和气体比例显示屏、振幅调控开关、报警显示、氢气进气口等；

所述箱体采用隔热材料，箱门为双层玻璃或其他材质。

本发明的有益效果：

本发明经血小板体外保存质量检测：添加氢气后血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH值和血小板CD62p表达均显著改善。

本发明可降低浓缩或单采血小板22±2℃保存期间损失，氢气可以降低血小板激活和CD62p表达水平，减轻血小板保存损伤，提高血小板体外功能。

附图说明

图1是本发明的正视图；

图2是本发明的后视图；

1-电源开关；2-温控开关；3-温度和气体比例显示屏；

4-振幅调控开关；5-报警显示；6-振荡开关；

7-开门把手；8-内衬箱；9-隔板；

10-电源线；11-氢气进气口；12-温控感应探头；

13-氢气探测器；14-摇动支架。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

实施例1

通过0.22μm滤器(Millipore美国)向装有浓缩或者单采血小板的密闭血袋中缓慢注入纯氢气(气体加在血小板液面上，避免产生气泡，10升/分钟，持续充气2分钟)，氢气溶解至血小板液体中形成饱和氢水。保存期间将血小板保存袋放入密闭空间(血小板保存箱)，密闭空间内保持氢气体积浓度为3.5％，维持血小板液体内氢气浓度25μM/L以上。添加氢气的浓缩或者单采血小板可在血小板保存箱22±2℃保存5天。

实施例2

保存方法同实施例1，不同之处在于密闭空间内保持氢气体积浓度为2％。

实施例3

保存方法同实施例1，不同之处在于密闭空间内保持氢气体积浓度为10％。

实施例4

一种血小板液态保存装置，整体为密闭箱体，包括箱外壳、内衬箱(8)、温控调节装置(OMRON/欧姆龙型号:E5C4)、气体调节装置、振荡装置(匡贝GE-ID型振荡架体，)、电源装置(上海海向仪器设备厂，CHW-80L)、报警装置(上海海向仪器设备厂，CHW-80L)，温控调节装置、振荡装置、氢气调节装置、控报警装置分别与电源装置电连接；气体调节装置为氢气调节装置(亿优，3HYT氢气传感器)；氢气调节装置包括氢气探测器(13)，氢气探测器位于内衬箱的顶部；振荡装置为水平振荡装置，包括振幅调控开关，振幅为50mm，频率60周/分；振荡装置包括摇动支架(14)，摇动支架设置于内衬箱内部，摇动支架上有6层隔板(9)；温控调节装置包括温控开关(2)和温控感应探头(12)，温度感应探头放置于内衬箱的顶部，与温控开关(2)相连，温控开关安装于箱体外下部调控区。箱体的长宽高尺寸为1200mm*600mm*550mm，箱内支架的长宽高尺寸为1000mm*500mm*450mm，隔层间距厚60mm。电源开关(1)、温控开关(2)、温度和气体比例显示屏(3)、振幅调控开关(4)、报警显示(5)、氢气进气口(11)设置于箱体外部。

实施例5

一种血小板液态保存装置，同实施例2，不同之处在于箱体的长宽高尺寸为1000mm*800mm*400mm，，箱内支架的长宽高尺寸为900mm*550mm*400mm。

试验例1：检测血小板体外功能

一、实验分组：

随机取新鲜血小板，包括浓缩血小板12份[40ml/份，ACD-A抗凝、(22±2)℃持续振荡保存]、机器单采血小板10份[40ml/份，ACD-A抗凝、(22±2)℃持续振荡保存]；浓缩血小板采用富含血小板血浆法二次离心法(1617g8min和3423g8min)制备，单采血小板：用血液细胞分离机采集制备。实验前(d0)检测每份血小板的体外功能指标，作为新鲜对照；将每份血小板通过无菌接管机分装成2袋，随机取其中1半分别作为浓缩血小板实验组(n＝12)和单采血小板实验组(n＝12)：

二、检测血小板体外功能

血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)应用用全自动血细胞计数仪直接测定；pH、葡萄糖和乳酸水平采用血气分析仪直接测定；血小板CD62p表达采用细胞分析仪检测：分别从浓缩血小板和单采血小板的实验组和对照组中取血小板5μL/份，加入30μL PBS中，再分别各加入5μL的CD62p-FITC和CD41-PE，避光孵育20min，洗涤、3423g离心8min后加入300 μL1％冷多聚甲醛固定，流式细胞仪检测，以CD41阳性细胞设门，计算CD62p阳性细胞比例。

三、实验结果：

1、浓缩血小板添加饱和氢气后保存期间Plt、MPV、PDW代谢指标和体外功能的变化与新鲜血小板相比，保存5d后浓缩血小板的Plt明显减少(P<0.01)，MPV和PDW均明显增加(P<0.01或<0.05)，实验组较对照组的变化幅度更小(P>0.05)；对照组pH值明显下降(P<0.01)，实验组pH值虽也有所降低(P>0.05)，但明显高于对照组(P<0.05)；葡萄糖含量均明显下降(P<0.01)、乳酸水平及CD62p表达水平均明显增加(P<0.01)，除CD62p表达水平实验组明显低于对照组(P<0.01)外，其他指标2组的变化无明显差异(P>0.05)。(表1)

结果表明，氢气可明显改善浓缩血小板22±2℃保存质量。

2、单采血小板添加饱和氢气后保存期间Plt、MPV、PDW代谢指标和体外功能的变化与新鲜血小板相比，单采血小板保存5d后单采血小板的Plt有所下降(P>0.05)，MPV和PDW均明显增加(P<0.01或<0.05)，实验组较对照组的变化幅度更小(P>0.05)；对照组pH值明显下降(P<0.01)，实验组也有所降低(P>0.05)，但明显高于对照组(P<0.05)；葡萄糖含量均明显下降(P<0.01)，乳酸水平、CD62p表达水平均明显增加(P<0.01)，除CD62p表达水平实验组明显低于对照组(P<0.05)外，其他指标2组的变化无明显差异(P>0.05)。(表2)

结果表明，氢气可明显改善单采血小板22±2℃保存质量。

附表中，表1是本发明在浓缩血小板22±2℃保存中降低血小板保存损伤的情况；表2是是本发明在单采血小板22±2℃保存中降低血小板保存损伤的情况。其中：保存当天为新鲜采集的血小板；保存第5天对照组为未处理组(采集后的浓缩或者单采血小板不添加氢气，直接保存在常规血小板保存箱内)；保存第5天实验组为添加氢气组(按实施例1方法保存的氢气组)。

上述实验表明，本发明可降低浓缩或单采血小板22±2℃保存期间，血小板形态变化、pH值变化，及血小板表面CD62p表达水平，减轻血小板保存损伤，提高血小板体外功能。

因此本发明可用做血小板22±2℃保存。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (10)

1.一种血小板液态保存方法，该方法包括下述步骤：向装有浓缩或者单采血小板的密闭血袋中注入纯氢气，气体加在血小板液面上，10升/分钟，持续充气2分钟，氢气溶解至血小板液体中形成饱和氢水；保存期间将血小板保存袋放入密闭空间，密闭空间内保持氢气体积浓度为2-10％，维持温度22±2℃。

2.根据权利要求1所述的血小板液态保存方法，其特征在于，其中保存期间密闭空间内保持氢气体积浓度为3.5％。

3.根据权利要求1所述的血小板液态保存方法，其特征在于：浓缩或者单采血小板在保存过程中进行水平振荡，振幅为50mm，频率60周/分。

4.一种血小板液态保存装置，整体为密闭箱体，包括箱外壳、内衬箱、温控调节装置、气体调节装置、电源装置，所述温控调节装置、气体调节装置分别与电源装置电连接；其特征在于所述的气体调节装置为氢气调节装置；该血小板保存装置还包括振荡装置，振荡装置与电源装置电连接。

5.根据权利要求4所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述氢气调节装置包括氢气探测器，氢气探测器位于内衬箱的顶部。

6.根据权利要求4所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述振荡装置为水平振荡装置，包括振幅调控开关，设定振幅为50mm，频率60周/分；所述振荡装置还包括摇动支架，摇动支架设置于内衬箱内部，摇动支架上有4-10层隔板。

7.根据权利要求4所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述的温控调节装置包括温控开关和温控感应探头，温度感应探头放置于内衬箱的顶部，与温控开关相连，温控开关安装于箱体外下部调控区。

8.根据权利要求4所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述血小板液态保存装置还包括报警装置，报警装置与电源装置电连接；所述箱体采用隔热材料，箱门为双层玻璃或其他材质。

9.根据权利要求4所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述箱体的长宽高尺寸为1000-1500mm*400-800mm*400-600mm，箱内支架的长宽高尺寸为900-1100mm*450-550mm*400-500mm，隔层间距厚60mm。

10.根据权利要求9所述的血小板液态保存装置，特征在于，所述箱体的长宽高尺寸为1200mm*600mm*550mm，箱内支架的长宽高尺寸为1000mm*500mm*450mm，隔层间距厚60mm。