CN104042622B - 一种雪菊多糖口服液及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生产雪菊多糖口服液的方法。以雪菊粉为原料与水按质量体积比1：30的比例搅拌均匀，经恒温水浴后进行超声处理，超声处理温度为55℃，时间15min，功率160w，雪菊溶液进行酶解时纤维素酶的用量为1%，果胶酶的用量为1%，木瓜蛋白酶的用量为1.5%，酶促时间为3h，温度55℃，经灭酶进行离心得到上清液经聚酰胺柱层析，流出液加蒸馏水进行调配，流出液与蒸馏水按重量体积比1:0.8，将调配好的溶液调配、灌装、灭菌、包装，得到雪菊多糖口服液具有明显的抑菌作用，明显对自由基DPPH、羟基自由基具有清除能力和还原能力，明显具有提高机体的免疫功能，具有广泛的应用价值。

Description

一种雪菊多糖口服液及其生产方法

技术领域

本发明涉及雪菊多糖口服液制备技术领域。具体的说，本发明涉及一种生产制备具有抑菌、抗氧化、提高人体免疫力的雪菊多糖口服液技术领域。

背景技术

雪菊生长在海拔2600米以上的昆仑山脉，是目前新疆唯一与雪莲齐名，具有独特功效的稀有高寒植物。花瓣呈金黄色，球形花蕊呈棕色。最高等级的雪菊是指生长在海拔3000米左右的高寒地区的维秘昆仑雪菊，称之“高海拔昆仑雪菊”。目前，已从雪菊中分离鉴定出20余类，300多种天然成分，其中包括30多种黄酮类物质，30多种人体必需的矿物元素，20多种氨基酸，数十种芳香族化合物，还有丰富的有机酸、萜烯类、维生素、木质素、醇类、多糖等生物活性的天然成分。雪菊具有清热解毒、活血化瘀、清肝明目、益肝补阴、润肠通便等功效，降血压降血脂以及抗氧化能力效果非常好，因此新疆维吾尔族人民在日常生活中常选用雪菊当茶饮用。雪菊的功效与其所含的多糖成分有很大的关系。

当前，多糖提取的研究主要集中在传统热水提取，近年来出现了超声、微波新型辅助提取技术以及生物复合酶解技术提取多糖；多糖纯化的研究主要集中在离子交换柱层析和凝胶柱层析法的研究，采用聚酰胺柱层析技术纯化多糖的报道很少见；多糖口服液的生产主要集中在加入其它的成分，而未见纯雪菊多糖生产的口服液，这种生产雪菊多糖口服液的方法具有纯度高和功效好等多种优越性，对开发一种雪菊多糖口服液法具有重要意义；对于物质的效价分析，目前的研究多集中在某种物质中单一成分具有的功能性，而对于产品具有的功效的研究很少见，但是进入市场的是以产品的方式，因此产品的功效更加具有价值。

发明内容

针对目前没有对功能性雪菊多糖口服液进行研究分析的现状。本发明的目的是采用生物复合酶解技术和超声波技术提取并采用聚酰胺柱层析技术纯化雪菊多糖，灌装、灭菌、包装的方法生产雪菊多糖口服液，并对此产品进行功效评价，不仅解决了目前只是对单一成分进行效价分析的问题，还为雪菊加工企业提升技术水平提供了切实可行的方法。

本发明具体提供了生产雪菊多糖口服液的方法，并进行了产品的效价分析，具体步骤如下：

（1）挑选匀整度高、花骨饱满、花蕊花瓣色泽橙黄、不含叶梗、花蕊细末或其他非雪菊类的杂质的干制雪菊，将选好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目。

（2）雪菊粉末与水按质量体积比1：30的比例，将水加入到步骤（1）的雪菊粉末中，用玻璃棒搅拌均匀，放入到恒温水浴装置内预热半小时，恒温水浴温度是55℃。

（3）将上述步骤（2）处理后的溶液进行超声处理，超声处理时的温度为55℃，时间15min，功率160w。

（4）将上述步骤（3）超声处理后的雪菊溶液倒入到酶反应器内，在酶反应器内加入纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶；纤维素酶的用量为雪菊粉末质量的1%，果胶酶的用量为雪菊粉末质量的1%，木瓜蛋白酶的用量为雪菊粉末质量的1.5%，酶促反应的时间为3h，温度55℃，pH值自然。

（5）酶反应结束后将酶反应器内的雪菊溶液灭酶处理，灭酶的温度为100℃，时间为5min，使溶液内的酶失活。

（6）将步骤（5）灭酶后的溶液进行离心处理，离心的时间为15min，转速为3500r/min,得到上清液。

（7）将步骤（6）得到的上清液过聚酰胺柱，在过柱之前聚酰胺需要进行预处理，将上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液时要沿着柱子的壁缓慢的加入，以防聚酰胺飘起来，用一倍体积的蒸馏水进行洗脱，收集流出液；聚酰胺预处理采用95%的乙醇浸泡过夜，浸泡过夜后的聚酰胺装入柱中用蒸馏水进行洗涤，将乙醇洗净为止，再次用5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡6个小时，再次用蒸馏水进行洗涤，直到洗到中性为止，将洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3个小时，然后用蒸馏水洗到中性以后的聚酰胺就可以进行装柱、层析。

（8）将步骤（7）得到的流出液加蒸馏水进行调配，流出液与蒸馏水按重量体积比1:0.8，将调配好的溶液进行灌装、灭菌包装，即为制备的雪菊多糖口服液。

本发明提供一种雪菊多糖口服液，雪菊多糖口服液由雪菊多糖、水、山梨酸钾组成，其中，含有雪菊多糖1%-1.5%，山梨酸钾﹤0.1%，余量为水。

本发明采用的超声技术、生物复合酶解技术、聚酰胺层析技术、调配及灭菌等技术，这些技术环节具有上下一体，紧密不可分割的特点。通过超声技术和生物复合酶解技术将雪菊的细胞进行破碎，使雪菊中多糖物质充分的被浸提出来，达到雪菊的充分利用，而不造成雪菊的浪费。同时利用聚酰胺柱层析技术脱去粗雪菊多糖中的色素、蛋白质等杂质，且聚酰胺的脱色效果较粉末活性炭、颗粒活性炭、吸附树脂的脱色效果好，雪菊多糖的回收利用率也较高，可以制的较纯的雪菊多糖口服液。

本发明制备的雪菊多糖口服液具有如下典型的质量指标和相应的口感指标：

1、感官指标：色泽：透明，无悬浮状的杂质，滋味：具有多糖特有的口味。

2、理化指标：雪菊多糖的含量在1％—1.5％之间，山梨酸钾的添加量低于0.1%，蛋白质、核酸、色素等杂质的含量低于5％。

通过上述提供的技术方案，与现有技术相比，本发明的具体发明内容可以达到以下显著的技术效果：

(1)本发明以雪菊为原料，以水为辅料，采用超声技术、生物复合酶解技术、灭酶技术、聚酰胺层析技术、灌装和灭菌等技术，制备得到具有抑菌作用、抗氧化及提高机体免疫力的雪菊多糖口服液。

(2)本发明提供的雪菊多糖口服液的方法具有纯度高和功效好等多种优越性，对开发一种雪菊多糖口服液法具有重要意义；通过对本发明提供的工艺制备的雪菊多糖口服液产品的效价分析，实验结果表明，雪菊多糖口服液的抑菌作用显著（p＜0.05），雪菊多糖口服液具有明显的抑菌作用。

（3）通过对本发明提供的工艺制备的雪菊多糖口服液产品的效价分析，实验结果表明，本发明制备的雪菊多糖口服液明显对自由基DPPH、羟基自由基具有清除能力和还原能力。

（4）通过对本发明提供的工艺制备的雪菊多糖口服液产品的效价分析，实验结果表明，表明本发明制备的雪菊多糖口服液明显具有提高机体的免疫功能，对于机体免疫力低下的人群可以适当的饮用。

附图说明

图1显示为生产雪菊多糖口服液的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，当然，这些实施例仅用于说明本发明。

本发明中涉及到的主要原辅材料、试剂和仪器设备：主要原辅材料：雪菊、蒸馏水、山梨酸钾。

主要仪器与试剂：粉碎机、玻璃棒、酶反应器、恒温水浴锅、超声破碎仪、纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶。

本发明中选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：雪菊多糖口服液的制备

参见附图1，雪菊多糖口服液通过以下具体步骤制备获得：

（1）挑选匀整度高、花骨饱满、花蕊花瓣色泽橙黄、不含叶梗、花蕊细末或其他非雪菊类的杂质的干制雪菊，将选好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目。

（2）雪菊粉末与水按质量体积比1：30的比例，将水加入到步骤（1）的雪菊粉末中，用玻璃棒搅拌均匀，放入到恒温水浴装置内预热半小时，恒温水浴温度是55℃。

（3）将上述步骤（2）处理后的溶液进行超声处理，超声处理时的温度为55℃，时间15min，功率160w。

（4）将上述步骤（3）超声处理后的雪菊溶液倒入到酶反应器内，在酶反应器内加入纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶；纤维素酶的用量为雪菊粉末质量的1%，果胶酶的用量为雪菊粉末质量的1%，木瓜蛋白酶的用量为雪菊粉末质量的1.5%，酶促反应的时间为3h，温度55℃，pH值自然。

（5）酶反应结束后将酶反应器内的雪菊溶液灭酶处理，灭酶的温度为100℃，时间为5min，使溶液内的酶失活。

（6）将步骤（5）灭酶后的溶液进行离心处理，离心的时间为15min，转速为3500r/min,得到上清液。

（7）将步骤（6）得到的上清液过聚酰胺柱，在过柱之前聚酰胺需要进行预处理，将上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液时要沿着柱子的壁缓慢的加入，以防聚酰胺飘起来，用一倍体积的蒸馏水进行洗脱，收集流出液；聚酰胺预处理采用95%的乙醇浸泡过夜，浸泡过夜后的聚酰胺装入柱中用蒸馏水进行洗涤，将乙醇洗净为止，再次用5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡6个小时，再次用蒸馏水进行洗涤，直到洗到中性为止，将洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3个小时，然后用蒸馏水洗到中性以后的聚酰胺就可以进行装柱、层析。

（8）将步骤（7）得到的流出液加蒸馏水进行调配，流出液与蒸馏水按重量体积比1:0.8，将调配好的溶液进行灌装、灭菌包装，即为制备的雪菊多糖口服液。

经上述工艺制备的雪菊多糖口服液具有如下典型的质量指标和相应的口感指标：

1、感官指标：色泽：透明，无悬浮状的杂质，滋味：具有多糖特有的口味。

2、理化指标：雪菊多糖的含量在1％—1.5％之间，山梨酸钾的添加量低于0.1%，蛋白质、核酸、色素等杂质的含量低于5％。

3、制备的雪菊多糖口服液由雪菊多糖、水、山梨酸钾组成，其中，含有雪菊多糖1%-1.5%，山梨酸钾﹤0.1%，余量为水。

实施例二：雪菊多糖口服液的制备

为了进一步说明本发明，以5g雪菊为例。

（1）挑选5g匀整度高、花骨饱满、花蕊花瓣色泽橙黄、不含叶梗、花蕊细末或其他非雪菊类的杂质的干制雪菊，将选好的5g雪菊在万能粉碎机内粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目左右。

（2）在粉碎好的雪菊粉末中加入150ml的蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，放入到已经加热到55℃恒温水浴锅内预热半小时。

（3）将上述步骤（2）处理后的溶液利用超声波破碎仪进行超声处理，超声处理时的温度为55℃，时间15min，功率160w。

（4）将上述步骤（3）处理后的雪菊溶液倒入到酶反应器内，在酶反应器内加入纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶。纤维素酶为0.05g，果胶酶的用量0.05g，木瓜蛋白酶的用量为0.075g，酶促反应3h，温度55℃，pH值自然。

（5）酶反应结束后将酶反应器内的雪菊溶液灭酶处理，灭酶的温度为100℃，时间为5min，使溶液内的酶失活。

（6）将步骤（5）结束后的浸提液进行离心处理，离心的时间为15min，转速为3500r/min,得到上清液。

（7）将步骤（6）得到的上清液过聚酰胺柱，在过柱之前聚酰胺需要进行预处理，将聚酰胺加入柱中，聚酰胺占柱体积的1/2,柱子的规格为40x580mm，加上清液时要沿着柱子的壁缓慢的加入，以防聚酰胺飘起来，用300ml的蒸馏水进行洗脱，收集流出液；新购买的聚酰胺用95%的乙醇浸泡过夜，浸泡过夜后的聚酰胺装入柱中用蒸馏水进行洗涤，将乙醇洗净为止。再次用5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡时间在6个小时左右，再次用蒸馏水进行洗涤，直到洗到中性为止。将洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3个小时，然后用蒸馏水洗到中性以后的聚酰胺就可以进行装柱、层析。

（8）在流出液中加入240ml的蒸馏水、0.05g的山梨酸钾进行调配，将调配好的溶液进行灌装，每10ml为一瓶。

（9）将步骤（8）装好的口服液在灭菌锅内灭菌，温度121℃，15min。冷却到室温，即为成品。

实施例三：雪菊多糖口服液的效价分析实验

雪菊多糖口服液具有抑菌作用：

在无菌操作台上将金黄色葡萄球菌均匀的涂布在盛有牛肉膏蛋白胨的平板培养基上，将平板分成四份，在一对对角的位置将浸有上述实施例制备的雪菊多糖口服液的滤纸片贴在平板上，另一对对角的位置将浸有无菌生理盐水的滤纸片贴在平板上。做三个平行。将平板在37℃下的恒温培养箱内培养24h。通过观察并测定抑菌圈的直径来比较抑菌作用的大小。实验结果表明，雪菊多糖口服液的抑制金黄色葡萄球菌生长的作用显著（p＜0.05）。同理，处理黑曲霉。黑曲霉的培养基为马铃薯蔗糖培养基。黑曲霉在28℃下培养48h。实验结果表明，雪菊多糖口服液的抑制黑曲霉生长的作用显著（p＜0.05）。因此，本发明制备的雪菊多糖口服液具有明显的抑菌作用。

雪菊多糖口服液的抗氧化作用：

上述实施例制备的雪菊多糖口服液对自由基DPPH、羟基自由基的清除能力，以及雪菊多糖口服液的还原能力（普鲁士兰法）。以Vc作为对照。雪菊多糖口服液的抗氧化能力低于Vc，但是雪菊多糖口服液对自由基DPPH、羟基自由基具有一定的清除能力以及一定的还原能力。表明本发明制备的雪菊多糖口服液明显对自由基DPPH、羟基自由基具有清除能力和还原能力。

雪菊多糖口服液的提高机体免疫力的动物实验：

小鼠为昆明种小鼠，体重在19-24g,每天给小鼠灌胃1ml的上述实施例制备的雪菊多糖口服液，连续灌胃30d，阴性对照组给予去离子水。实验测定的指标：免疫器官、半数溶血值及PFC的测定：给小鼠腹腔注射2%（v/v）绵羊红细胞5d后，摘其眼球取血，进行血清半数溶血值的测定，然后处死动物，取胸腺，脾脏称重，计算脏/体的比值；脾淋巴细胞的转化实验：小鼠无菌取脾，制成脾细胞悬液，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×1000000个/ml,按照MTT法在570nm波长测定吸光度值，用加ConA孔的吸光度值减去不加ConA孔的吸光度值代表淋巴细胞的增殖能力；腹腔内巨噬细胞吞噬功能的测定：给小鼠腹腔注射2%（v/v）绵羊红细胞4d后，经腹腔注射给予小鼠2mlHanks液，立即处死动物，轻柔腹部30s，抛开腹壁，暴露腹腔。取腹腔洗液0.25ml滴于载玻片上，与油镜下对每只动物计数100个巨噬细胞，计算吞噬率和吞噬指数。实验结果表明：细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能三方面结果为阳性。因此表明本发明制备的雪菊多糖口服液明显具有提高机体的免疫功能。

以上阐述本发明中的实施例，并不是对本发明作其它形式上的限制，本专业的人员可以对上述阐述的技术内容进行变更等效实施例。但是只要是没有脱离本发明技术方案内容，根据本发明的技术实质，只是对以上实例进行简单修改、等同变化与改型，仍然属于本发明技术的保护范围。

Claims (3)

1.一种生产雪菊多糖口服液的方法，其特征在于，所述的生产方法步骤如下：

（1）挑选匀整度高、花骨饱满、花蕊花瓣色泽橙黄、不含叶梗、花蕊细末或其他非雪菊类的杂质的干制雪菊，将选好的雪菊粉碎，粉碎后的雪菊粉末的粒度在100目；

（2）雪菊粉末与水按质量体积比1:30的比例，将水加入到步骤（1）的雪菊粉末中，用玻璃棒搅拌均匀，放入到恒温水浴装置内预热半小时，恒温水浴温度是55℃；

（3）将上述步骤（2）处理后的溶液进行超声处理，超声处理时的温度为55℃，时间15min，功率160w；

（4）将上述步骤（3）超声处理后的雪菊溶液倒入到酶反应器内，在酶反应器内加入纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶；纤维素酶的用量为雪菊粉末质量的1%，果胶酶的用量为雪菊粉末质量的1%，木瓜蛋白酶的用量为雪菊粉末质量的1.5%，酶促反应的时间为3h，温度55℃，pH值自然；

（5）酶反应结束后将酶反应器内的雪菊溶液灭酶处理，灭酶的温度为100℃，时间为5min，使溶液内的酶失活；

（6）将步骤（5）灭酶后的溶液进行离心处理，离心的时间为15min，转速为3500r/min,得到上清液；

（7）将步骤（6）得到的上清液过聚酰胺柱层析，在过柱之前聚酰胺需要进行预处理，将上清液加入到聚酰胺柱中，加上清液时要沿着柱子的壁缓慢的加入，以防聚酰胺漂起来，用一倍体积的蒸馏水进行洗脱，收集流出液；

（8）将步骤（7）得到的流出液加蒸馏水进行调配，流出液与蒸馏水按重量体积比1:0.8，将调配好的溶液进行灌装、灭菌包装，即为制备的雪菊多糖口服液。

2.按照权利要求1的生产雪菊多糖口服液的方法，其特征在于，聚酰胺预处理采用95%的乙醇浸泡过夜，浸泡过夜后的聚酰胺装入柱中用蒸馏水进行洗涤，将乙醇洗净为止，再次用5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡6个小时，再次用蒸馏水进行洗涤，直到洗到中性为止，将洗到中性的聚酰胺用10%的醋酸浸泡2-3个小时，然后用蒸馏水洗到中性以后的聚酰胺就可以进行装柱、层析。

3.按照权利要求1的生产雪菊多糖口服液的方法，其特征在于，生产的雪菊多糖口服液含有雪菊多糖1%-1.5%，山梨酸钾﹤0.1%，余量为水。