CN104042610A - 组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备抗休克药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备抗休克药物中的用途，特别是下式的S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺在制备抗休克药物中的用途，所述休克优选地选自创伤性休克、低血容量性休克、感染性休克、神经源性休克、心源性休克和过敏性休克，特别优选为烧烫伤休克。

Description

组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备抗休克药物中的用途

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体地说，本发明涉及组蛋白去乙酰化酶抑制剂在制备抗休克药物中的用途。

背景技术

休克是指由于心排量不足或周围血流分布异常引起周围组织的灌注量不足，不能维持生命需要的一种状态，通常都有低血压和少尿。休克可由低血容量、血管扩张、心源性或这些因素综合引起。休克常见的分类有：

(1)低血容量性休克：指血液有效成分丢失，包括失血性休克、失血浆性休克和失体液性休克。

(2)创伤性休克：除与失血、失液等引起的有效循环量减少有关外，组织创伤后分解产物的毒素作用和强烈的疼痛刺激也是重要的因素。

(3)感染性休克：感染病灶的病原菌和毒素被血液吸收后所致的休克。

(4)神经源性休克：强烈刺激引起的神经反射性血管扩张，有效血容量下降所致的休克。

(5)心源性休克：心功能障碍引起的心排量下降性血压下降和微循环障碍。

(6)过敏性休克：机体对某些药物、食物、血清等过敏引起的休克。

现代战争、恐怖袭击、突发事故和灾害时，短时间内常出现成批创伤(包括烧伤)休克伤员，由于环境特殊、交通破坏、护送延迟、液体供不应求等原因使常规静脉液体复苏难以实施，伤员因得不到及时救治，病死率和并发症大大增加。在既无输液条件、又无水源时，如果给予抗休克药物提高伤员对休克的耐受能力，保护休克状态下的组织细胞，维持生命脏器的功能，延长伤员的存活时间，就能为安全转运和后继治疗争取时间。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)是一类在转录水平调控基因表达的化合物，通过抑制组蛋白去乙酰酶(HDAC)，增加组蛋白的乙酰化水平，具有促进基因转录、染色体重建、影响细胞分化和凋亡等一系列生物学效应。近几年研究发现，组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有抗肿瘤、细胞保护、抗氧化、抗炎等作用。

HDACI按结构类型通常分为异羟肟酸类、短链脂肪酸类、苯甲酰胺类、亲电酮类、环肽类等。异羟肟酸类化合物主要包括SAHA、TSA、CBHA、LAQ-824、PXD101、pyroxamide等。短链脂肪酸类主要包括丙戊酸(VPA)、丁酸钠、苯丁酸等。苯甲酰胺类主要包括MS-275、CI-199等。亲电酮类包括各种三氟甲基酮和α-酮酰胺。环肽类主要包括FK228、Trapoxin、HC-toxin、Apicidin等。

本发明人早期研究发现，犬42％血容量失血后静注VPA能有效提高MAP，增加尿量，减轻器官功能损害，提高72h早期生存率(丙戊酸对致死性失血性休克犬器官功能和预后的影响，中国危重病急救医学，2011，23(8):481-484)。进一步，本发明人发现丙戊酸钠可降低脏器血管通透性，减少液体丢失，提高烫伤休克大鼠生存率，其作用机制可能与降低TNF-α的含量抑制其炎性反应发生，提高2,3-二磷酸甘油酸水平提升红细胞供氧能力有关(组蛋白去乙酰化酶抑制剂对50％TBSAⅢ度烫伤休克大鼠生存率及微血管通透性影响，武警医学，2013，24(7):564-567,571)。

S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺(S-(E)-3-(1-(1-(benzo[d]oxazol-2-yl)-2-methylpropyl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)-N-hydroxyacrylamide)为一种新的HDACI，本文中代号为NK-HDAC-1。

Hou等报道NK-HDAC-1在生物利用度和体内半衰期上优于SAHA(Discovery and extensive in vitro evaluations of NK-HDAC-1:achiral histone deacetylase inhibitor as a promising lead,J Med.Chem.2012,55(7):3066-3075)。Li等报道NK-HDAC-1通过诱导成纤维样滑膜细胞凋亡治疗风湿性关节炎(Therapeutic Effects of NK-HDAC-1,a NovelHistone Deacetylase Inhibitor,on Collagen-Induced Arthritis Through theInduction of Apoptosis of Fibroblast-Like Synoviocytes,INFLAMMATION,2013,36(4):888)。Li等报道NK-HDAC-1可以治疗乳腺癌(Antitumor effects of a novel histone deacetylase inhibitorNK-HDAC-1on breast cancer,Oncol Rep.2013,30(1):499-505)。

目前，未见关于化合物NK-HDAC-1用于制备抗休克，特别是烧烫伤休克药物的研究。

发明内容

本发明人经过研究意外的发现，NK-HDAC-1具有抗休克的医药活性，随后通过大量动物试验进一步验证了NK-HDAC-1的抗休克医药活性。

因此，本发明的目的在于提供S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺在制备抗休克药物中的用途。

所述休克选自创伤性休克、低血容量性休克、感染性休克、神经源性休克、心源性休克和过敏性休克。优选地，所述创伤性休克为烧烫伤休克。

在本发明的一个优选实施方案中，S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺进一步与药学上可接受的载体组合。

所述的载体选自稀释剂、湿润剂、粘合剂、崩解剂、崩解抑制剂、吸收促进剂、润滑剂、助溶剂、缓冲剂和表面活性剂。

在本发明的另一个优选实施方案中，所述药物是以片剂、注射剂、胶囊、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂的形式施用。优选地，所述注射剂为冻干粉针剂或注射液。

在本发明的另一个优选实施方案中，所述药物经静脉、口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹腔或直肠施用。

NK-HDAC-1可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露糖、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。其它载体如聚丙稀酸树脂类、脂质体，水溶性载体如PEG4000和PEG6000、PVP等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分NK-HDAC-1与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将NK-HDAC-1制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中应用。

例如，将NK-HDAC-1制成液体制剂，如注射剂、混悬剂、溶液剂、乳剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

栓剂用于直肠施用，其采用在直肠温度下熔化的粘合剂，例如，可可脂或聚乙二醇来制备。

此外，如果还需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

为达到用药目的，增强治疗效果，NK-HDAC-1制成的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

NK-HDAC-1、含有它的药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中化学成分的使用剂量可以根据NK-HDAC-1组合物中最后的制剂中所含有的化合物实际数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的治疗目的。

具体实施方式

通过阅读下列实施例，本领域技术人员将会更好地理解本发明。这些实施例仅用于解释本发明。

本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

一、材料与仪器

NK-HDAC-1由南开大学药院药物化学生物学国家重点实验室提供；

丙戊酸钠(VPA)购自美国Sigma公司；

辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)购自美国Sigma公司；

上述试剂实验前现配现用，

自动生化分析仪：日本Hitachi公司；

多波长酶标仪：美国Dynex公司；

激光多普勒血流仪：瑞典PERIMED公司；

二、研究方法

1.实验动物及分组：80只清洁级大鼠，体重240g-260g，购自军事医学科学院实验动物中心，购入后适应性饲养1周。术前12小时禁食，自由饮水。实验动物随机分为5组①假烫对照组(SC组)②烫伤+生理盐水组(SN组)③烫伤+VPA组(SV组，腹腔注射，300mg/kg，溶于0.25ml0.9％生理盐水)；)④烫伤+SAHA组(SS组腹腔注射，7.5mg/kg，溶于0.25ml0.9％生理盐水))⑤烫伤+NK-HDAC-1组(SNK组，1.5mg/kg，溶于0.25ml0.9％生理盐水))；每烫伤组根据观察时间点不同又分烫伤3h(S3)和烫伤6h(S6)两个亚组(n＝8)。

2.大鼠50％TBSAIII°烫伤模型：戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉，剪除背部和腹部毛发，将大鼠放置在预制模板的矩形开口，露出裸露皮肤，同时保护剩余皮肤，裸露的皮肤沉浸在沸水中(100℃水浴，背部15秒，腹部8秒)造成50％TBSA III°烫伤，烫伤后大鼠立即干燥。假烫对照组采用温水(37℃水浴，背部15秒，腹部8秒)行腹部、背部浸泡。烫伤后3h或6h行剖腹手术，用激光多普勒血流仪测定肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量后，腹主动脉抽血处死动物，取心脏组织用于指标检测和形体学观察。

3.指标检测与方法：①生化分析仪检测CK-MB、ALT、Cr水平；②ELISA方法检测血浆NSE含量(试剂盒购自美国R&D Systems公司)；③激光多普勒血流仪测定肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量。

三、结果

1.CK-MB含量：烫伤及各HDACIs治疗组伤后CK-MB含量显著高于SC组(P均<0.05)，烫伤+HDACIs治疗组6h CK-MB含量显著低于SN组(P均<0.05)；各HDACIs治疗组间比较，伤后3h,各组间无明显差异；伤后6h，SV组显著高于SS组和SNK组(P均<0.05)。

表1  血浆中CK-MB含量(n＝8,U/L)

2.ALT含量：烫伤及各HDACIs治疗组伤后ALT含量显著高于SC组(P均<0.05)，烫伤+HDACIs治疗组(SV组和SNK组)ALT含量显著低于SN组(P均<0.05)，SS组与SN组无明显差异；各HDACIs治疗组间比较，伤后3h,SS组显著高于SV组和SNK组(P均<0.05)；伤后6h，SS组显著高于SV组和SNK组(P均<0.05)，SNK组显著高于SV组(P<0.05)。

表2  血浆中ALT含量(n＝8,U/L)

3.CR含量：烫伤及各HDACIs治疗组伤后CR含量显著高于SC组(P均<0.05)，烫伤+HDACIs治疗组(SV组和SNK组)CR含量显著低于SN组(P均<0.05)，SS组在3h时显著低于SN组(P<0.05)；各HDACIs治疗组间比较，伤后3h,各组间无明显差异；伤后6h，SS组显著高于SV和SNK组(P均<0.05)，SNK组显著高于SV组(P<0.05)。

表3  血浆中CR含量(n＝8,umol/L)

4.NSE含量：烫伤及各HDACIs治疗组伤后NSE含量显著高于组(P均<0.05)，烫伤+HDACIs治疗组NSE含量显著低于SN组(P均<0.05)；各HDACIs治疗组间比较，伤后3h和6h,各组间无明显差异。

表4  血浆中NSE含量(n＝8,ng/mL)

5.肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量：烫伤及各HDACIs治疗组伤后肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量显著低于SC组(P均<0.05)，伤后3h，烫伤+HDACIs治疗组肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量显著高于SN组(P均<0.05)，伤后6h，SV组和SNK组肝脏血流量显著高于SN组(P均<0.05)，SNK组肾脏血流量显著高于SN组(P<0.05)，烫伤+HDACIs治疗组小肠粘膜血流量显著高于SN组(P均<0.05)；各HDACIs治疗组间比较，伤后3h，SS组肝脏和肾脏血流量显著高于SV组和SNK组(P均<0.05)，SNK组肾脏血流量显著高于SV组(P<0.05)，SS组和SNK组小肠粘膜血流量显著高于SV组(P均<0.05)；伤后6h，SNK组肝脏和肾脏血流量显著高于SV组和SS组(P均<0.05)，SV组肝脏血流量显著高于SS组(P<0.05)，SS组和SNK组小肠粘膜血流量显著高于SV组(P均<0.05)。

表5  肝脏、肾脏、小肠粘膜血流量(n＝8,BPU)

结果表明：NK-HDAC-1能改善50％TBSAIII°烫伤后心脏、肝脏、肾脏和脑功能指标以及肝脏、肾脏和小肠粘膜血流量，保护重要脏器功能；此外，本发明人的研究结果还显示，NK-HDAC-1能减少50％TBSAIII°烫伤引起的心肌细胞内HIF-1及下游靶基因iNOS和BNIP3表达，降低caspase-3活性及含量，减少心肌细胞凋亡，保护心脏功能。因此，NK-HDAC-1用于治疗烧伤休克的效果显著。

虽然本发明己以较佳实施例公开如上，但它们并不是用来限定本发明，本发明的保护范围应当以本申请的权利要求保护范围所界定的内容为准。任何熟习本技术领域者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的各种变化或等同替换，都应当属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺在制备抗休克药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述休克选自创伤性休克、低血容量性休克、感染性休克、神经源性休克、心源性休克和过敏性休克。

3.根据权利要求2所述的用途，其中所述创伤性休克为烧烫伤休克。

4.根据权利要求1所述的用途，其中S-(E)-3-(1-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-2-甲基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-N-羟基丙烯酰胺进一步与药学上可接受的载体组合。

5.根据权利要求4所述的用途，其中所述的载体选自稀释剂、湿润剂、粘合剂、崩解剂、崩解抑制剂、吸收促进剂、润滑剂、助溶剂、缓冲剂和表面活性剂。

6.根据权利要求1所述的用途，其中所述的药物是以片剂、注射剂、胶囊、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂的形式施用。

7.根据权利要求6所述的用途，其中所述注射剂为冻干粉针剂或注射液。

8.根据权利要求1所述的用途，其中所述的药物经静脉、口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹腔或直肠施用。