CN104020283B - 一种用于肾功能检测的单层膜干片及制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于肾功能检测的单层膜干片及制备方法，涉及一种体外临床诊断试剂的改进，其特征是：在正方形的厚度为0.92mm、流速为190mm/30min的层析滤纸层析滤纸上吸附有60ul？CO2-CP检测试剂，层析滤纸贴附在盖玻片上。有益效果是：线性范围较宽，重复性良好；由于操作简单，患者可自行检测；由于是单层膜结构，有效的降低了成本；此种单层膜干片不但可用于临床快速检测，具有良好的经济效益和应用前景。

Description

一种用于肾功能检测的单层膜干片及制备方法
技术领域
本发明属于医疗器械技术领域，涉及一种体外临床诊断试剂的改进。
背景技术
干化学分析技术在近几十年取得了很大的进步，具体体现在以下几个方面：其分析样本从最初的尿液发展到现在已十分普及的全血、血清、血浆或其它体液；干试剂（干片）结构从最简单的只能定性或半定量的二层结构到能消除干扰成分的三层结构，再到现阶段的能进行精确定量的多层膜结构，多层膜结构的干片为现代干化学分析技术领域研究的热点及重要部分。
干化学是指预先将反应所需的部分或全部试剂固定在具有特殊结构的载体中，测定时将液体样品（血清、血浆、全血、尿液、脑脊液等）直接加到固定了试剂的载体上，以样品中的水分为溶剂，引起待测物与载体中的试剂发生化学反应并产生反应信号，最后通过目视定性或半定量，或通过一定仪器检测显示在载体上反应信号变化，从而测得样品中待测物的浓度。
干化学分析法简便、准确，其测量时间短，几分钟就可以得到检测结果。干化学法检验只需要仪器及其配套干片，而不需要湿化学检验中所使用的液体试剂或任何溶液。另外，干化学法中的干试剂为一次性使用的，使用干式生化分析仪进行检测时也没有任何废液产生，这能够避免污染。这使干化学法能够应用在湿化学法无法触及的领域，如宇宙空间站、战场、野外或舰艇等临床检验，还可应用于食品安全、环境监测等领域。
目前，干化学产品占市场份额最大的为美国强生、瑞士Roche和日本京都等，这些公司生产的干片均为多层膜干片。而我国干片主要依赖进口。其关键技术是干化学试剂干片的制备，针对目前市场的多层膜干片，一般都存在制备复杂、成本高等不足。
发明内容
本发明的目的是：提供一种用于肾功能检测的单层膜干片及制备方法，它解决了制备的干片操作复杂的问题，同时具有成本低、线性范围较宽、重复性良好特性。
本发明的技术方案是：在正方形的厚度为0.92mm、流速为190mm/30min的层析滤纸层析滤纸上吸附有60ulCO2-CP检测试剂，层析滤纸贴附在盖玻片上。
本发明的方法：
⑴首先将层析滤纸剪成边长为7×7mm大小的正方形，备用；
⑵将7mm×7mm的层析滤纸摆放在载玻片上，向玻片上的层析滤纸中心滴加58-62ulCO2-CP检测试剂，再在37℃电热恒温培养箱中烘干，烘干时间大约为30-40min，烘干后再滴加58-62ulCO2-CP检测试剂，再烘干，如此重复，一共滴加CO2-CP检测试剂9-11次；检测指标不同加样量、烘干温度、加样次数各不相同。
⑶将层析滤纸转移至24mm×24mm盖玻片的中央即制成了CO2-CP干片；
⑷上机检测选择波长460nm；育温时间1s；测量时间60s；加样量为60ul标准品为2倍连续稀释，
⑸制备干片的标准曲线
采用上述研制的干片和全光谱干式生化分析仪，建立样品中浓度与反射光相对强度之间的函数关系，作为测量二氧化碳浓度的依据。以每份标准溶液测量的反射光相对强度平均值为纵坐标Y，以标准溶液中待测物浓度（单位为mmol/L）为横坐标X，拟合成对数方程式，图2为拟合成的标准曲线图。所建立的干式生化分析法测定四种单层膜干片的线性范围分别为1.625-26mmol/L、25-200mmol/L、27.5-440mmol/L、30-480mmol/L。
本发明的有益效果是：线性范围较宽，重复性良好；由于操作简单，患者可自行检测；由于是单层膜结构，有效的降低了成本；此种单层膜干片不但可用于临床快速检测，具有良好的经济效益和应用前景。
批内、批间重复性检测
用上述的方法制备干片，用建立的干化学法进行检测，每个样品重复测定20次，计算均值、标准差、变异系数。所测数据如表1
表1批内重复性试验的平均值、标准差、变异系数
检测样品 平均值 标准差 变异系数（﹪）
CO2-CP高值 0.8 0.033 4.1
CO2-CP低值 0.73 0.027 3.71
UA高值 1.95 0.066 3.4
UA低值 1.84 0.07 3.8
CRE高值 1.56 0.048 3.1
CRE低值 1.34 0.045 3.4
UREA高值 0.68 0.02 2.9
UREA低值 0.52 0.017 3.2
用上述的方法制备CO2-CP干片20片，每个样品每天重复测定2次，一共测定10天，计算均值、标准差、变异系数。所测数据如表2
表2批间重复性试验的平均值、标准差、变异系数
检测样品 平均值 标准差 变异系数（﹪）
CO2-CP高值 0.78 0.034 4.3
CO2-CP低值 0.69 0.028 4.1
UA高值 1.9 0.068 3.6
UA低值 1.86 0.074 4
CRE高值 1.6 0.066 4.1
CRE低值 1.45 0.05 3.5
UREA高值 0.62 0.024 3.8
UREA低值 0.57 0.021 3.7
由表看出该方法测定四种单层膜干片批内批间不精密度均小于5%，在允许范围内。
附图说明
图1是本发明的制备方法的原理框图；
图2是本发明干式生化分析方法测定CO2-CP的标准曲线；
图3是本发明干式生化分析方法测定UA的标准曲线；
图4是本发明干式生化分析方法测定UREA的标准曲线；
图5是本发明干式生化分析方法测定CRE的标准曲线；
图6是本发明结构图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步描述：
实施例1
此种单层膜为厚度为0.92mm、流速为190mm/30min的层析滤纸。
通过将生化试剂固定吸附层析滤纸上，建立了制备单层膜CO2-CP干片的方法，制备CO2-CP干片的标准色阶，采用自全光谱干式生化分析仪，将测定的反射光相对强度（Y）及待测物浓度（X）拟合成对数方程式，建立了干式生化法，至此建立了干式生化分析法测定CO2-CP标准曲线，并确定了测定的相关参数，如加样量、育温时间等。
下面以二氧化碳结合力（CO2-CP）为例进行说明：
⑴首先将层析滤纸剪成边长为7×7mm大小的正方形，备用；
⑵将7mm×7mm的层析滤纸摆放在载玻片上，向玻片上的层析滤纸中心滴加60ulCO2-CP检测试剂，再在37℃电热恒温培养箱中烘干，烘干时间大约为30-40min，烘干后再滴加60ulCO2-CP检测试剂，再烘干，如此重复，一共滴加CO2-CP检测试剂10次；检测指标不同加样量、烘干温度、加样次数各不相同。
⑶将层析滤纸转移至24mm×24mm盖玻片的中央即制成了CO2-CP干片；
⑷上机检测选择波长460nm；育温时间1s；测量时间60s；加样量为60ul标准品为2倍连续稀释，
⑸制备干片的标准曲线
采用上述研制的干片和全光谱干式生化分析仪，建立样品中浓度与反射光相对强度之间的函数关系，作为测量二氧化碳浓度的依据。以每份标准溶液测量的反射光相对强度平均值为纵坐标Y，以标准溶液中待测物浓度（单位为mmol/L）为横坐标X，拟合成对数方程式，图2、3、4、5为拟合成的标准曲线图。所建立的干式生化分析法测定四种单层膜干片的线性范围分别为1.625-26mmol/L、25-200mmol/L、27.5-440mmol/L、30-480mmol/L。

Claims (1)

1.一种用于肾功能检测的单层膜干片的制备方法，其方法是：
⑴本干片的制备采用层析滤纸为反应层，层析滤纸的厚度为0.92mm，流速为190mm/30min，首先将层析滤纸剪成边长为7mm大小的正方形，备用；
⑵将边长为7mm正方形的层析滤纸摆放在载玻片上，向玻片上的层析滤纸中心滴加60μlCO2-CP检测试剂，再在37℃电热恒温培养箱中烘干，烘干时间为30-40min，烘干后再滴加60μlCO2-CP检测试剂，再烘干，如此重复，一共滴加CO2-CP检测试剂10次；
⑶将层析滤纸转移至24mm×24mm盖玻片的中央即制成了CO2-CP干片；
⑷上机检测选择波长460nm；育温时间1s；测量时间60s；加样量为60μl；标准品为2倍连续稀释。
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