CN103966328A - 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒 - Google Patents

与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN103966328A
CN103966328A CN201410191812.9A CN201410191812A CN103966328A CN 103966328 A CN103966328 A CN 103966328A CN 201410191812 A CN201410191812 A CN 201410191812A CN 103966328 A CN103966328 A CN 103966328A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mir
primer
mirna
forward primer
mmu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410191812.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103966328B (zh
Inventor
鲍永华
杨万才
郭永臣
李泽信
薛会朝
朱绍辉
徐红伟
游焜
韩荣飞
贾慧婕
李凯
王倩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Bai Yan Biotechnology Co., Ltd.
Original Assignee
Xinxiang Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xinxiang Medical University filed Critical Xinxiang Medical University
Priority to CN201410191812.9A priority Critical patent/CN103966328B/zh
Publication of CN103966328A publication Critical patent/CN103966328A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103966328B publication Critical patent/CN103966328B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术和医学技术领域，提供了一种与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物，该标志物为miR-138-5p、miR-145-5p、miR-146a-5p和miR-150-5p的组合。还提供了一种上述miRNA标志物的引物。还提供了一种上述miRNA标志物在制备直肠癌早期诊断试剂盒中的应用。还提供了一种直肠癌早期诊断试剂盒。本发明提供的与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物miR-138-5p、miR-145-5p、miR-146a-5p、miR-150-5p对结直肠癌进行早期筛查具有操作简单、高特异性、高灵敏性的特点。

Description

与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术和医学技术领域，特别涉及一种与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物对直肠癌早期筛查的应用。
背景技术
结直肠癌是第三常见的恶性疾病和癌症致死的第二主要原因。就如其他恶性疾病一样，基因因素是导致结直肠癌形成的重要原因，但是，只有20％的结直肠癌病例可以追溯到家族性基因变异。事实上，大部分的散发性结直肠癌和环境因素密切相关，最常见的抑癌基因APC的突变导致了Apc/GSK3β/Axin复合物的破坏，从而激活了Wnt/β-catenin信号转导通路。Wnt/β-catenin信号转导通路的异常激活不仅促进小肠上皮细胞的增殖，也抑制了其向腺窝底部的迁移和凋亡。典型的“结直肠癌发生的基因途径”已经被充分的研究，环境因素导致结直肠癌发生的最新机制和慢性炎症有关，称为肠炎相关性结直肠癌(CAC)。近几年来随着中国人的饮食和生活方式的改变，结直肠癌的发生率迅速增高，而且大部分的结直肠癌病例和慢性肠炎相关。临床上已经发现，肠炎相关性结直肠癌往往伴随着慢性肠炎疾病，例如克罗恩病，溃疡性肠炎。流行病学和临床研究表明，在伴随慢性肠炎30年后，溃疡性肠炎增加了18-20％的肠炎相关性结直肠癌的发病率，而克罗恩病增加了8％的发病率。在小鼠模型中，注射致癌物azoxymethane(AOM)和慢性肠炎诱导物DSS会导致多发的肠肿瘤，但是如果没有炎症的存在，则需要注射多倍剂量的AOM并需要更长时间才能导致肿瘤的形成。这些临床和实验结果表明，CAC是典型的炎症致癌。但是，不像Apc/Wnt/β-catenin信号转导通路，肠炎相关的结肠直肠癌的发病机制，特别是肠炎恶性转变的机制尚不清楚，主要是因为缺少动态研究的合适模型。小肠上皮组织的杯状细胞能够分泌一层黏液蛋白，这层黏液蛋白能够保护上皮组织免受机械的和化学的损伤，以及炎症因素的损害。这种黏液蛋白主要是由Muc2基因所编码。已有研究表明，杯状细胞的减少和Muc2的表达降低在溃疡性肠炎和结直肠癌中非常常见。MUC2对于维持肠道稳态非常重要，将小鼠的Muc2基因敲除后，肠上皮细胞的增殖、迁移和凋亡都发生了改变，最重要的是，Muc2敲除小鼠能够自发地导致小肠、大肠和直肠肿瘤的发生。而研究发现肿瘤的发生与慢性炎症相关，与Wnt/β-catenin信号通路无关。Muc2敲除引起的炎症促进了Apc突变小鼠的肿瘤发生，而且在Muc2敲除小鼠中，周期依赖性激酶抑制物p21WAF1的表达降低促进了肿瘤的形成。我们更深入的研究发现，Muc2敲除小鼠在出生后3个月以内会自发形成慢性肠炎，其组织病理特点与人的溃疡性肠炎类似。在3个月之后，Muc2-/-小鼠会形成结肠和直肠肿瘤。因此，3个月可能是慢性肠炎发展为结直肠癌的关键时间点。所以Muc2-/-小鼠可以作为一种动态研究慢性肠炎恶性转变形成结直肠癌的理想模型。为了揭示肠炎恶性转变的分子机制，我们分离了Muc2-/-小鼠的肠上皮细胞来做miRNA，我们在肠炎恶性转变的关键时间点发现了一些异常表达的miRNA。我们在人的肠炎和结直肠癌组织中对上述的一些miRNA做了验证，有趣的是，这些表达降低的miRNA在小鼠组织中同样表达降低，并且和一些细胞因子的表达增高相关，这些发现预示着表观改变可能在肠炎恶性转变中起着重要的作用。
发明内容
针对现有技术不足，本发明的目的是提供一种与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒。
为实现上述目的，本发明提供一种与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物，该标志物为miR-138-5p、miR-145-5p、miR-146a-5p和miR-150-5p的组合。以上四种miRNA在Muc2-/-小鼠模型的慢性肠炎恶性转变过程中表达明显降低，在人肠炎组织及结直肠癌组织中表达也明显降低，说明其与慢性肠炎恶性转变密切相关。
本发明还提供一种上述miRNA标志物的引物，该引物为：
miR-138-5p的正向引物序列为：5’-TGGAGCTGGTGTTGTGAATC-3’，如SEQ ID NO：1所示；
miR-145-5p的正向引物序列为：5’-GGGTCCAGTTTTCCCAGGA-3’，如SEQ ID NO：2所示；
miR-146a-5p的正向引物序列为：5’-TTCGGTGAGAACTGAATTCCA-3’，如SEQ ID NO：3所示；
miR-150-5p的正向引物序列为：5’-CCGGGTCTCCCAACCCTTGTA-3’，如SEQ ID NO：4所示；
通用反向引物序列为：5’-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’，如SEQ ID NO：5所示。
本发明还提供一种上述miRNA标志物在制备直肠癌早期诊断试剂盒中的应用。具体地，通过检测被试者结直肠组织中的四种miRNA的含量，并与正常水平相比较来对患者的病情发展做出预判，以此来指导临床治疗。在一个特定的实施方案中，使用定量PCR的方法来检测被试者结直肠组织中的四种miRNA含量。
优选的，上述miRNA标志物的引物在制备直肠癌早期诊断试剂盒中的应用。
本发明还提供一种直肠癌早期诊断试剂盒，试剂盒含有上述miRNA标志物的引物。
优选的，该试剂盒还包括PCR反应常用的酶和试剂。
优选的，该试剂盒包括组织总RNA提取试剂、总RNA加poly(A)试剂、RT-PCR试剂、定量PCR试剂。
优选的，所述RT-PCR试剂中包括RT-引物：
hsa-miR-138：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCGGCCT-3’；
hsa-miR-145：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAGGGAT-3’；
hsa-miR-146a：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCCA-3’；
hsa-miR-150：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACTGG-3’；
内参SNORD44：5’-GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTagtcag-3’；
所述定量PCR试剂中包括序列：
通用反向引物：5’-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’；
通用Taqman探针:56-FAM/CAGAGCCAC/ZEN/CTGGGCAATTT/3IABkFQ。
本发明的有益效果：
本发明提供的与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物miR-138-5p、miR-145-5p、miR-146a-5p、miR-150-5p对结直肠癌进行早期筛查具有操作简单、高特异性、高灵敏性的特点。
附图说明
图1Muc2-/-小鼠肠上皮miRNA array聚类分析结果；
图2Muc2+/+和Muc2-/-小鼠的肠上皮细胞因子表达水平；
图3在Muc2+/+和Muc2-/-小鼠的肠上皮细胞中验证差异表达的miRNA；
图4miR-138-5p在16对结肠癌组织中的表达水平；
图5miR-145-5p在16对结肠癌组织中的表达水平；
图6miR-146a-5p在16对结肠癌组织中的表达水平；
图7miR-150-5p在16对结肠癌组织中的表达水平；
图8miR-138-5p在6对结肠炎组织中的表达水平；
图9miR-145-5p在6对结肠炎组织中的表达水平；
图10miR-146a-5p在6对结肠炎组织中的表达水平；
图11miR-150-5p在6对结肠炎组织中的表达水平。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1结肠炎相关的癌模型Muc2基因敲除小鼠结肠上皮细胞中miRNA表达谱
小鼠的肠上皮细胞的收集：选择3月龄的Muc2+/+和Muc2-/-，每组包括四只小鼠，将小鼠处死，取结肠洗净，纵向剖开，各取一段置于20ml冰PBS；将组织移入37℃15mM EDTA30ml中；37℃振荡，220rpm，30min，充分振荡，去除肠组织；4℃离心5000rpm，5min；先弃去上清，5ml冷PBS重悬细胞，分装于1.5mlEP管中；4℃离心，3000rpm，5min；弃去上清，EP管开盖置于液氮中；取出后开盖置于-80℃过夜，次日将EP管盖上。
总RNA的提取：按照操作手册用Trizol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)提取总RNA。
miRNA array(表达谱)：实验操作由芝加哥大学基因研究所实施。
聚类分析结果如图1所示：21个miRNA下调，70个miRNA上调(change fold>2or<0.5；T<0.01,p value<0.05,q value<0.05)。
实施例2Muc2小鼠结肠上皮细胞中细胞因子的表达、差异表达miRNA的验证
小鼠结肠上皮细胞RNA提取与实施例1中方法相同；
利用qRT-PCR检测细胞因子mRNA表达水平，反应体系：正向引物(20μm)0.15μl，反向引物(20μm)0.15μl，cDNA0.7μl，H2O9μl，荧光染料SYBR Green(2×)10μl；反应条件：50℃2min，95℃2min；变性95℃15sec，退火/延伸60℃1min，共40个循环。
细胞因子mRNA表达水平如图2所示：与对照相比，Muc2-/-小鼠的结肠上皮细胞中几种细胞因子IL-6、COX-2、IL-10、TNFα、IL-1β表达水平明显上升。
IL-6：
正向引物：TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC，
反向引物：TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC；
COX-2：
正向引物：TGAGCAACTATTCCAAACCAGC，
反向引物：GCACGTAGTCTTCGATCACTATC；
IL-10：
正向引物：GCTCTTACTGACTGGCATGAG，
反向引物：CGCAGCTCTAGGAGCATGTG；
IL-1β：
正向引物：GCAACTGTTCCTGAACTCAACT，
反向引物：ATCTTTTGGGGTCCGTCAACT；
TNFα：
正向引物：CCCTCACACTCAGATCATCTTCT，
反向引物：GCTACGACGTGGGCTACAG；
IKKβ：
正向引物：CTGAAGATCGCCTGTAGCAAA，
反向引物：TCCATCTGTAACCAGCTCCAG；
GAPDH：
正向引物：TCTGGAAAGCTGTGGCGTGAT，
反向引物：GCCAGTGAGCTTCCCGTTCAG。
为了验证小鼠miRNA array的结果，选择15个miRNA利用荧光定量PCR技术来验证，如图3所示：mmu-miR-146a、mmu-miR-138、mmu-miR-5123、mmu-miR-196b、mmu-miR-5099、mmu-miR-150、mmu-miR-145、mmu-miR-27a、mmu-miR-23a表达下调；mmu-miR-705、mmu-miR-760-3p、mmu-miR-1962、mmu-miR-669c、mmu-miR-3104-5p、mmu-miR-5132表达上调，荧光定量PCR的结果与miRNA array的结果一致。
mmu-miR-146a-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCCA；
定量正向引物：TTCGGTGAGAACTGAATTCCA；
mmu-miR-138-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCGGCCT；
定量正向引物：TGGAGCTGGTGTTGTGAATC；
mmu-miR-5123逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACACC；
定量正向引物：TGGTGTAGATCCATATGCCAT；
mmu-miR-196b-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCCCAAC；
定量正向引物：TTCGGTAGGTAGTTTCCTGTT；
mmu-miR-5099逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGGAGCA；
定量正向引物：TGTCGGTTAGATCGATGTGG；
mmu-miR-150-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACTGG；
定量正向引物：CGGTCTCCCAACCCTTGTA；
mmu-miR-145a-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAGGGAT；
定量正向引物：GGGTCCAGTTTTCCCAGGA；
mmu-miR-27a-3p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGCGGAA；
定量正向引物：TTCGGTTCACAGTGGCTAAG；
mmu-miR-23a-3p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGGAAAT；
定量正向引物：TCGGATCACATTGCCAGGG；
mmu-miR-705逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTGCCCAC；
定量正向引物：TGGGGTGGGAGGTGGGG；
mmu-miR-760-3p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCCCCAC；
定量正向引物：CGGCGGCTCTGGGTCTG；
mmu-miR-1962逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTATGTGT；
定量正向引物：TGAGAGGCTGGCACTGGG；
mmu-miR-669c-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTACACAC；
定量正向引物：TTCGGATAGTTGTGTGTGGAT；
mmu-miR-3104-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAGAGGG；
定量正向引物：TAGGGGGCAGGAGCCGGAG；
mmu-miR-5132-5p逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCCTGAG；
定量正向引物：GGGCGTGGGGTGGTGGA；
内参snoRNA202逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCATCAG；
定量正向引物：GTACTTTTGAACCCTTTTCCAT；
定量通用反向引物：CAGTGCAGGGTCCGAGGT；
定量通用Taqman探针：56-FAM/CAGAGCCAC/ZEN/CTGGGCAATTT/3IABkFQ。
实施例3人结肠癌组织标本收集
16对结直肠癌组织、6对结肠肠炎组织及其配对正常组织皆从新乡医学院第一附属医院和新乡医学院附属中心医院收集，标本储存于-80℃环境中。
实施例4RNA提取
按照操作手册步骤用Trizol试剂(Invitrogen,Carlsbad,CA)提取冰冻的结肠癌及其邻近正常结肠组织的RNA。用A-PlusTM Poly(A)Polymerase Tailing Kit(CELLSCRIPT，INC)按操作手册对miRNA进行加polyA。
实施例5通过qRT-PCR对四个miRNA表达水平进行检测
为了检测来自结肠癌模型鼠中差异表达的miRNA是否有临床意义，我们选择了四个miRNA：即miR-138、miR-145、miR-146a、miR-150，在临床病人标本中进行验证。
使用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo SCIENTIFIC，USA)按操作手册对加poly(A)的miRNA进行逆转录。
使用实时荧光定量PCR(Applied Biosystem Inc.)对miRNA进行定量分析。定量的反应体系：GoTaq Hot Start Colorless Master Mix10μl，上游引物0.4μl，下游引物0.4μl，probe0.5μl，diluted cDNA2μl，RNase-free water6.7μl。反应条件：95℃2min；变性95℃10s，退火/延伸60℃30s，共40个循环。
所使用的引物如下：
hsa-miR-138逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCGGCCT；hsa-miR-138定量正向引物：TGGAGCTGGTGTTGTGAATC。
hsa-miR-145逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAGGGAT；hsa-miR-145定量正向引物：GGGTCCAGTTTTCCCAGGA。
hsa-miR-146a逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTAACCCA；hsa-miR-146a定量正向引物：TTCGGTGAGAACTGAATTCCA
hsa-miR-150逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTCACTGG；hsa-miR-150定量正向引物：CCGGGTCTCCCAACCCTTGTA
内参SNORD44逆转录引物：GTGCAGGGTCCGAGGTCAGAGCCACCTGGGCAATTTTTTTTTTTagtcag；内参SNORD44定量正向引物：TGGCCTGGATGATGATAAGCA。
定量通用反向引物：CAGTGCAGGGTCCGAGGT；
定量通用Taqman探针:56-FAM/CAGAGCCAC/ZEN/CTGGGCAATTT/3IABkFQ。
结肠癌组织与癌旁正常组织中4个miRNA的表达结果如图4-7所示：与正常组织相比，16个癌组织中miR-138、miR-145、miR-146a、miR-150的总体表达水平分别减少了3.37、3.39、2.56、4.99倍(P<0.001)。16个癌组织中miR-138和miR-150的表达都是降低的，15个癌组织中miR-145和miR-146a的表达是降低的。
结肠炎组织与正常结肠组织中4个miRNA的差异表达结果如图8-11所示：这4个miRNAs在人的结肠炎组织中的表达也是下调的，因此，这几个miRNA可能参与结肠炎的恶性转化。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物，其特征在于，该标志物为miR-138-5p、miR-145-5p、miR-146a-5p和miR-150-5p的组合。
2.一种如权利要求1所述的miRNA标志物的引物，其特征在于，该引物为：
miR-138-5p的正向引物序列为：5’-TGGAGCTGGTGTTGTGAATC-3’；
miR-145-5p的正向引物序列为：5’-GGGTCCAGTTTTCCCAGGA-3’；
miR-146a-5p的正向引物序列为：5’-TTCGGTGAGAACTGAATTCCA-3’；
miR-150-5p的正向引物序列为：5’-CCGGGTCTCCCAACCCTTGTA-3’；
通用反向引物序列为：5’-CAGTGCAGGGTCCGAGGT-3’。
3.权利要求1所述的miRNA标志物在制备直肠癌早期诊断试剂盒中的应用。
4.权利要求2所述的miRNA标志物的引物在制备直肠癌早期诊断试剂盒中的应用。
5.一种直肠癌早期诊断试剂盒，其特征在于，试剂盒含有权利要求2所述的miRNA标志物的引物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括PCR反应常用的酶和试剂。
CN201410191812.9A 2014-05-07 2014-05-07 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒 Active CN103966328B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410191812.9A CN103966328B (zh) 2014-05-07 2014-05-07 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410191812.9A CN103966328B (zh) 2014-05-07 2014-05-07 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103966328A true CN103966328A (zh) 2014-08-06
CN103966328B CN103966328B (zh) 2016-05-25

Family

ID=51236330

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410191812.9A Active CN103966328B (zh) 2014-05-07 2014-05-07 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103966328B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106244688A (zh) * 2016-07-31 2016-12-21 北京泱深生物信息技术有限公司 一种评估结肠腺癌患病风险的标志物
CN107385093A (zh) * 2017-09-07 2017-11-24 青岛大学 引物组合物及其应用和应用其的产品及产品的使用方法
CN108676893A (zh) * 2018-07-20 2018-10-19 江西佰延生物技术有限公司 用于检测大肠癌的生物标志物及其应用
CN109457033A (zh) * 2018-12-29 2019-03-12 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 用于结肠癌筛查的标志物
CN110724688A (zh) * 2019-10-09 2020-01-24 新乡医学院 miRNA138及其在调节TERT基因表达中的应用
CN112592980A (zh) * 2014-08-15 2021-04-02 深圳市晋百慧生物有限公司 用于检测肠癌的标记物及其应用
CN112891354A (zh) * 2021-03-18 2021-06-04 新乡医学院 MDM2抑制剂Nutlin-3a在制备激活内质网应激诱导的癌细胞凋亡药物中的应用
CN117695396A (zh) * 2024-02-05 2024-03-15 中国医学科学院北京协和医院 miR-3104-5p抑制剂在糖尿病治疗中的新用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012122239A1 (en) * 2011-03-07 2012-09-13 The Ohio State University MUTATOR ACTIVITY INDUCED BY MICRORNA-155 (miR-155) LINKS INFLAMMATION AND CANCER
CN103074431A (zh) * 2013-01-14 2013-05-01 山东大学齐鲁医院 检测结直肠癌血清miRNA-128的专用引物、试剂盒及方法
CN103320500A (zh) * 2013-05-30 2013-09-25 上海交通大学医学院附属新华医院 MicroRNA-29a通过KLF4促进结直肠癌远处转移的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012122239A1 (en) * 2011-03-07 2012-09-13 The Ohio State University MUTATOR ACTIVITY INDUCED BY MICRORNA-155 (miR-155) LINKS INFLAMMATION AND CANCER
CN103074431A (zh) * 2013-01-14 2013-05-01 山东大学齐鲁医院 检测结直肠癌血清miRNA-128的专用引物、试剂盒及方法
CN103320500A (zh) * 2013-05-30 2013-09-25 上海交通大学医学院附属新华医院 MicroRNA-29a通过KLF4促进结直肠癌远处转移的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RADMILA HRDLICˇKOVA ET AL.: "Multiple Tumor Suppressor microRNAs Regulate", 《PLOS ONE》, vol. 9, no. 2, 28 February 2014 (2014-02-28), pages 1 - 11, XP055075965, DOI: 10.1182/blood-2009-01-198408 *
任昊天等: "miR-193b对结肠癌细胞侵袭转移的影响及其机制", 《中国老年学杂志》, vol. 33, 31 January 2013 (2013-01-31), pages 351 - 354 *
徐建明: "正确认识结肠癌和直肠癌诊治理念的差异", 《中国实用外科杂志》, vol. 32, no. 9, 30 September 2012 (2012-09-30), pages 703 - 705 *
李景南等: "结肠癌和直肠癌发病模式和临床", 《中国实用内科杂志》, vol. 30, no. 10, 31 October 2010 (2010-10-31), pages 916 - 918 *

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112592980A (zh) * 2014-08-15 2021-04-02 深圳市晋百慧生物有限公司 用于检测肠癌的标记物及其应用
CN106244688A (zh) * 2016-07-31 2016-12-21 北京泱深生物信息技术有限公司 一种评估结肠腺癌患病风险的标志物
CN106244688B (zh) * 2016-07-31 2019-11-29 成都望路医药技术有限公司 一种评估结肠腺癌患病风险的标志物
CN107385093A (zh) * 2017-09-07 2017-11-24 青岛大学 引物组合物及其应用和应用其的产品及产品的使用方法
CN108676893A (zh) * 2018-07-20 2018-10-19 江西佰延生物技术有限公司 用于检测大肠癌的生物标志物及其应用
CN108676893B (zh) * 2018-07-20 2022-04-19 江西佰延生物技术有限公司 用于检测大肠癌的生物标志物及其应用
CN109457033A (zh) * 2018-12-29 2019-03-12 山东省肿瘤防治研究院（山东省肿瘤医院） 用于结肠癌筛查的标志物
CN110724688A (zh) * 2019-10-09 2020-01-24 新乡医学院 miRNA138及其在调节TERT基因表达中的应用
CN112891354A (zh) * 2021-03-18 2021-06-04 新乡医学院 MDM2抑制剂Nutlin-3a在制备激活内质网应激诱导的癌细胞凋亡药物中的应用
CN117695396A (zh) * 2024-02-05 2024-03-15 中国医学科学院北京协和医院 miR-3104-5p抑制剂在糖尿病治疗中的新用途
CN117695396B (zh) * 2024-02-05 2024-04-19 中国医学科学院北京协和医院 miR-3104-5p抑制剂在糖尿病治疗中的新用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN103966328B (zh) 2016-05-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103966328A (zh) 与结直肠炎恶性转变相关的miRNA标志物和试剂盒
Mehdipour et al. Diagnostic and prognostic relevance of salivary microRNA-21,-125a,-31 and-200a levels in patients with oral lichen planus-a short report
Jamieson et al. MicroRNA molecular profiles associated with diagnosis, clinicopathologic criteria, and overall survival in patients with resectable pancreatic ductal adenocarcinoma
Bao et al. Polymorphisms inside microRNAs and microRNA target sites predict clinical outcomes in prostate cancer patients receiving androgen-deprivation therapy
Lin et al. Circulating microRNAs are associated with docetaxel chemotherapy outcome in castration-resistant prostate cancer
Selth et al. Circulating microRNAs: macro-utility as markers of prostate cancer?
Ramachandran Functional association of oestrogen receptors with HPV infection in cervical carcinogenesis
CN103540679B (zh) 用于检测人肝癌细胞标志物的引物和探针及其检测试剂盒
Zhang et al. MicroRNA-218 is upregulated in gastric cancer after cytoreductive surgery and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy and increases chemosensitivity to cisplatin
CN103667516B (zh) 早期结直肠腺癌miRNAs检测试剂盒或生物芯片
AU2018202963B2 (en) Biomarkers useful for detection of types, grades and stages of human breast cancer
Elshimy et al. MiR-133a and MiR-155 as potential minimally invasive biomarkers in breast cancer
Ji et al. Differential microRNA expression by Solexa sequencing in the sera of ovarian cancer patients
Cabibi et al. Analysis of tissue and circulating microRNA expression during metaplastic transformation of the esophagus
CN101824464A (zh) miRNA表达谱在预测肺癌病人对放射治疗敏感性方面的应用
CN104152452A (zh) 一种与肝癌相关的血液miRNA标志物及其应用
Mazzoccoli et al. Analysis of clock gene-miRNA correlation networks reveals candidate drivers in colorectal cancer
Usmani et al. MiR-16: A novel hereditary marker in breast cancer and their offspring
Bahnassy et al. MiRNAs as molecular biomarkers in stage II egyptian colorectal cancer patients
Shi et al. Transcatheter arterial infusion chemotherapy increases expression level of miR-142-5p in stage III colorectal cancer
CN104498606A (zh) microRNAs在制备早期筛查或诊断Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用
Clemons et al. Advances in understanding the pathogenesis of Barrett’s esophagus
Wang et al. Dysregulation of exosomal miR-192 and miR-194 expression in lung adenocarcinoma patients
Kundaktepe et al. Associations between miRNAs and two different cancers: breast and colon
Wang et al. miR-218 tissue expression level is associated with aggressive progression of gastric cancer

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160115

Address after: 272067, 16 Lotus Road, Taibai Lake New District, Shandong, Jining

Applicant after: Jining Medical College

Address before: Xinxiang City, Henan province 453003 Jinsui Road No. 601 East Xinxiang Medical University

Applicant before: Xinxiang Medical College

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20181024

Address after: 336000 11 Anju Road, Yuanzhou District, Yichun, Jiangxi

Patentee after: Jiangxi Bai Yan Biotechnology Co., Ltd.

Address before: 272067 No. 16 Lotus Road, Taibai Lake New District, Jining, Shandong

Patentee before: Jining Medical College

TR01 Transfer of patent right