CN103961348B - Senp1小分子抑制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了SENP1小分子抑制剂及其应用，提供一种含有式（1）所示的2‑（4‑苯基）‑2‑氧乙基‑4‑苯甲酸氨基苯甲酸酯衍生物为有效成分的SENP1小分子抑制剂及其在制备治疗前列腺癌药物中的应用。本发明利用药物化学和化学生物学，发现了一系列小分子化合物在体外实验和一些细胞系中能够明显抑制SENP1活性，进一步设计并优化SENP1小分子抑制剂，阐明其原子水平/分子水平上调节SENP1的作用模式及机制，并系统评价其在前列腺癌中的作用，为SENP1作为抗前列腺癌靶标阐明药理学基础。该系列小分子化合物有望开发成为新的抗前列腺癌肿瘤的药物，对抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学治疗学领域，具体来说，涉及一种SENP1小分子抑制剂及其在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
背景技术
前列腺癌是危害男性健康的首要恶性肿瘤之一，居男性癌症死亡率第二位。前列腺癌发病率及死亡率在不同地区、不同经济状况的国家有一定差异。美国癌症研究所发表的一项研究报告表明，美国前列腺癌发病比例从1980年初的1‰增加到近年来的2.5‰，且发病出现年轻化趋势。随着人口老龄化、工业化发展和环境的污染，我国在前列腺癌的发生率和死亡率已呈明显上升趋势，严重威胁着社会的发展和人民的健康。发现针对前列腺癌的治疗靶点以及研发作用于这些靶点的抗癌药物对降低前列腺癌发病率、提高病人生存质量、降低死亡率都具有十分重要的意义。
蛋白质是生命活动的物质基础，是生物体结构和功能的基本单位。生物体内蛋白质的正确折叠和空间构象的正确形成决定了蛋白质的正常生物学功能，而蛋白质翻译后修饰对这个过程中发挥着重要的调节作用。因为翻译后修饰使蛋白质的结构更为复杂，功能更为完善，调节更为精细，作用更为专一，并且细胞内的许多蛋白质的功能也是通过动态的蛋白质翻译后修饰来调控的。蛋白质翻译后修饰是一个复杂的过程，目前在真核生物中有20种以上的修饰类型，常见的包括磷酸化、乙酰化、泛素化、脂基化、甲基化、糖基化以及近年来发现的SUMO化。
2004年，以色列科学家A.Ciechanover,A.Hershko和美国科学家O.Rose因为揭示了泛素调节的蛋白质降解机理，获得了诺贝尔化学奖。泛素(ubiquitin)是一种在真核生物中普遍存在的由76个氨基酸组成的小蛋白，在一系列特定酶（激活酶E1、结合酶E2以及连接酶E3）的催化作用下，一个或多个泛素分子通过共价结合的方式结合到底物蛋白的赖氨酸残基上，形成多聚泛素链，从而被26S蛋白酶体识别，介导蛋白质降解。
近年来，几种小的类泛素蛋白(ubiquitin-like proteins)陆续被发现，它们在生物进化过程中高度保守，其三维结构及生化修饰过程与泛素类似，但并不介导蛋白酶体依赖的蛋白质降解过程，其中SUMO(small ubiquitin-related modifier)是最受瞩目的一类。到目前为止，已经证实可以被SUMO修饰的底物蛋白有1000多种，如雄激素受体(androgen receptor，AR)、转录因子c-Jun、拓扑异构酶II(Topoisomerase II)、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases，HDACs)、RanGAP1、STAT5及p53等。SUMO化(SUMOylation)修饰作为一种重要的蛋白质翻译后修饰，由于其修饰的底物蛋白的多样性，因此在细胞内具有多种生物学功能，广泛参与转录因子活性调节、发育、细胞生长分化、DNA损伤修复、核质转运、信号转导和细胞周期调控等过程，与许多人类重大疾病密切相关。与泛素化途径类似，SUMO化也是一个多步骤的过程，包括成熟、激活、结合和连接。SUMO的前体是没有活性的，其必须经酶解切除C末端几个氨基酸暴露出双甘氨酸残基才能成为成熟的SUMO。成熟的SUMO通过特定的SUMO化酶的催化(活化酶E1、结合酶E2-UBC9以及连接酶E3)，SUMO的C端甘氨酸残基可以和被修饰底物蛋白特定位置上的赖氨酸残基的ξ-氨基连接形成异肽键，最终完成底物蛋白的SUMO化。
SUMO化是一个高度动态和可逆的蛋白修饰过程，去SUMO化(de-SUMOylation)过程是由一组SUMO特异性蛋白酶(SUMO-specific protease,SENPs)来完成的。SENPs是一种半胱氨酸特异的蛋白酶，既可以切除新合成SUMO前体蛋白C端的短肽，以利于SUMO的成熟；又能通过其异肽酶活性将SUMO从靶蛋白上移除。蛋白的去SUMO化修饰由一组SENPs来完成。近年来研究发现，SENP1主要介导细胞生长、发育和凋亡等生理功能，其异常表达与细胞恶性转化、肿瘤增殖、分化和凋亡障碍密切相关。因此，SENP1介导的信号通路研究越来越受到人们的广泛重视。在SENPs以上两种功能的调控下，生理状态下细胞内SUMO化结合维持在正常水平。哺乳动物细胞内的SENP家族有六个成员，它们定位不同，功能不同，具有不同的底物特异性。SENP1位于细胞核内，酶活性较强，具有广泛的可修饰底物，通过调控转录因子或共调节因子(coregulator)影响基因转录。程金科等的前期研究证实SENP1通过对SUMO化的HIF1α去SUMO化实现调节促红细胞生成素(Epo)作用，当SENP1的表达异常时，HIF1α的稳定性下降。由于HIF1α在肿瘤的新生血管形成过程中的关键作用，SENP1通过调节HIF1α而在肿瘤血管生成中起重要作用，进而辅助多种肿瘤的发生发展。最近，程金科等发现SENP1在前列腺癌的发生发展过程中的重要机制：SENP1能通过对HDAC的去SUMO化，解除HDAC对雄激素受体活性的抑制，从而增强雄激素介导的雄激素受体转录活性，而雄激素-雄激素受体信号又可诱导SENP1的表达，通过这种正反馈性质的相互关联而促进前列腺癌的发生发展。在此基础上，利用小鼠前列腺癌骨转移模型发现SENP1高表达能够通过HIF1α作为转录因子诱导下游靶基因MMP2和MMP9的高表达，从而促进前列腺癌的转移，并在超过150例前列腺癌病人标本中获得证实。同时，Kaikkonen等的研究也证实，抑制SENP1而非其它SENP家族成员可显著抑制雄激素受体的转录活性，下调其下游靶基因，抑制雄激素刺激的前列腺癌细胞生长。这些研究结果提示，SENP1在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用，抑制SENP1活性可能在肿瘤，特别是前列腺癌治疗中提供有效的解决方案。
综上所述，设计并合成高效低毒的SENP1小分子抑制剂，将其用于治疗前列腺癌的药物，这对抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种高效低毒的SENP1小分子抑制剂。
本发明所要解决的第二个技术问题是，提供SENP1小分子抑制剂在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
为了解决上述第一个技术问题，本发明公开了一种SENP1小分子抑制剂，所述抑制剂含有式（1）所示的以2-（4-苯基）-2-氧乙基-4-苯甲酸氨基苯甲酸酯衍生物或其药理学上可接受的盐；
式（1）中，A环上R0、R1和R2为取代的氢、甲基、氟、氯、溴、碘、硝基或氰基；
B环为苯环；
C环上R4和R6相同或不同，为氯或者碘，或者单取代或非取代烷基、单取代或非取代环烷基、单取代或非取代烯基、单取代或非取代炔基、单取代或非取代酯环式杂环基、单取代或非取代芳烷基、单取代或非取代芳香族杂环基、单取代或者非取代芳香族杂环烷基或者磺酰胺、巯基、乙氧基、甲基、氰基；
C环上R3、R5和R7相同或不同，为单取代或者非取代卤素，所述卤素指氟、氯、溴和碘，单取代或非取代烷基、单取代或非取代环烷基、单取代或非取代烯基、单取代或非取代炔基、单取代或非取代酯环式杂环基、单取代或非取代芳烷基、单取代或非取代芳香族杂环基、单取代或者非取代芳香族杂环烷基或者羟基、硝基、氨基、磺酰胺、巯基、甲氧基、乙氧基、苄氧基、甲基、氰基；
或者，C环上R3、R4、R5、R6和R7相同或不同，为多取代卤素，所述卤素指氟、氯、溴和碘，多取代烷基、多代环烷基、多取代烯基、多取代炔基、多取代酯环式杂环基、多取代芳烷基、多取代芳香族杂环基、多代芳香族杂环烷基或者羟基、硝基、氨基、磺酰胺、巯基、苄氧基、甲基、氰基；
C环中，T、U、V、W、X是单取代或多取代的碳原子或者氮原子；
C环本身为苯环、吡啶环、呋喃环、噻吩环、吡咯环、吡唑环、咪唑、噁唑、异噁唑、吲哚、三氮唑、四氮唑、哌啶环、萘环、蒽环或者肉桂酸及其衍生物；
A环和B环中间以2-乙氧基苯甲酸酯健形成衍生物，B环和C环中间以酰胺形成取代或非取代的衍生物。
作为一个优选方案，所述C环为苯环，在R4或者R6位相同或不同，为单取代或者非取代的氰基、单取代或者非取代的氯或者碘；R3、R5和R7相同或不同，为单取代或者非取代卤素，所述卤素指氟、氯、溴和碘，单取代或非取代烷基、单取代或非取代环烷基、单取代或非取代烯基、单取代或非取代炔基、单取代或非取代酯环式杂环基、单取代或非取代芳烷基、单取代或非取代芳香族杂环基、单取代或者非取代芳香族杂环烷基或者羟基、硝基、氨基、磺酰胺、巯基、甲氧基、乙氧基、苄氧基、甲基、氰基；
或者C环为苯环时，C环上R3、R4、R5、R6和R7相同或不同，为多取代卤素，所述卤素指氟、氯、溴和碘，多取代烷基、多代环烷基、多取代烯基、多取代炔基、多取代酯环式杂环基、多取代芳烷基、多取代芳香族杂环基、多代芳香族杂环烷基或者羟基、硝基、氨基、磺酰胺、巯基、苄氧基、甲基、氰基。
作为一个优选方案，所述C环为呋喃环，及其取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取代的甲基、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
作为一个优选方案，所述C环为噻吩环，及其取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取代的甲基、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
作为一个优选方案，所述C环为吡啶环，及其取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取代的甲基、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
作为一个优选方案，所述C环为杂环，所述杂环基为吡咯基，吡唑基，咪唑基，噁唑基，异噁唑基，三氮唑基，四氮唑基，哌啶基，吡喃基，吡嗪基，嘧啶基，异噻唑基，三嗪基，及其取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取代的甲基、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
作为一个优选方案，所述C环为环并环，所述环并环基包括萘基，喹啉基，异喹啉基，吲哚基，嘌呤基，喋啶基，喹唑啉基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，苯并噁唑基，苯并吡嗪基，苯并嘧啶基，吡啶并嘧啶基，嘧啶并嘧啶基，噻蒽基，苯并吲唑基，苯并三唑基，及其取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取代的甲基、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
作为一个优选方案，所述C环所对应部分为肉桂酸，包括取代或非取代的硝基、取代或者非取代的氨基、取代或者非取代的羟基、取代或者非取代的氰基、取代或者非取代的甲氧基、取代或者非取代的苄氧基、取代或者非取的甲、取代或者非取代的卤素，所述卤素指氟、氯、溴、碘。
为了解决本发明第二个技术问题，本发明公开了所述SENP1小分子抑制剂在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
本发明的优点在于，本发明利用药物化学和化学生物学，发现了一系列小分子化合物在体外实验和一些细胞系中能够明显抑制SENP1活性，进一步设计并优化SENP1小分子抑制剂，阐明其原子水平/分子水平上调节SENP1的作用模式及机制，并系统评价其在前列腺癌中的作用，为SENP1作为抗前列腺癌靶标阐明药理学基础，也为开发具有自主知识产权的抗前列腺癌创新药物提供优质的先导化合物候选。该系列小分子化合物有望开发成为新的抗前列腺癌肿瘤的药物，对抗肿瘤药物的开发具有重要的意义。
附图说明
图1为SENP1小分子抑制剂分子水平的检测(上图)和浓度梯度检测。
图2为SENP1小分子抑制剂细胞水平检测，左图小分子06-027在PC3细胞水平的抑制曲线；右图是检测通过抑制SENP1增加Hela细胞内SUMO化蛋白水平，以DMSO,10μM小分子抑制剂06-027分别处理Hela-Flag-sumo-1、Hela-Flag-sumo-2、Hela-Flag-sumo-3细胞1小时，Flag抗体检测蛋白的SUMO化改变。1.未处理；2.DMSO（0.1%处理)；3.10μM小分子抑制剂06-027处理。
图3为前列腺癌细胞株PC3作为模型应用流式细胞术检测SENP1小分子抑制剂06-027在不同浓度下处理24，48，72小时对细胞周期和凋亡的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1.化合物通式（1）的制备
化合物通式（1）能够按照下面的反应工序制造：
室温条件下，R0、R1和R2取代的氢、甲基、氟、氯、溴、碘、硝基和氰基的α-溴代苯乙酮和对氨基苯甲酸的衍生物在二甲基甲酰胺溶液中加入碳酸钾固体，然后加热，待TLC监测反应结束之后，加入水，并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并柱层析得到化合物3。反应溶液可以用二甲基甲酰胺，也可以用丙酮或者二甲亚砜，反应用碱可以用碳酸钾，碳酸钠等无机碱，也可以用三乙胺（TEA）或者N，N-二异丙基乙胺（DIPEA）等有机碱。
在低温条件下，将氯化亚砜缓慢的加入溶有化合物4的无水二氯甲烷溶液中，滴加完毕后，反应恢复至室温并在氮气保护下回流。待反应完全后，蒸去所有溶剂，然后溶解在无水四氢呋喃或者无水二氯甲烷重，在低温条件下加入化合物3和吡啶，反应转移至室温并过夜。往反应体系中加入水，并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，并柱层析得到化合物6。反应用氯化亚砜可用草酰氯或者三氯氧磷代替，反应用吡啶可用三乙胺（TEA）或者N，N-二异丙基乙胺（DIPEA）等有机碱替代。
制法二：
在低温条件下，将氯化亚砜缓慢的加入溶有化合物4的无水二氯甲烷溶液中，滴加完毕后，反应恢复至室温并在氮气保护下回流。待反应完全后，蒸去所有溶剂，然后溶解在无水四氢呋喃或者无水二氯甲烷重，在低温条件下加入化合物7和吡啶，反应转移至室温并过夜。往反应体系中加入水，并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，再用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤三次，用无水硫酸钠干燥，并柱层析得到化合物8。反应用氯化亚砜可用草酰氯或者三氯氧磷代替，反应用吡啶可用三乙胺（TEA）或者N，N-二异丙基乙胺（DIPEA）等有机碱替代。化合物7可以是甲酯化合物，可以用乙酯化合物。
室温条件下，将化合物8溶解在甲醇溶液中，并在相同温度下加入1摩尔/升氢氧化钠溶液。待反应结束后，蒸去有机溶液，用1摩尔/升的盐酸调PH值至2～3，过滤并干燥，所得固体即为产品9。反应酯用相应的醇作为溶剂进行水解。
室温条件下，R0、R1和R2取代的氢、甲基、氟、氯、溴、碘、硝基和氰基的α-溴代苯乙酮和化合物9在二甲基甲酰胺溶液中加入碳酸钾固体，然后加热，待TLC监测反应结束之后，加入水，并用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，再用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并柱层析得到化合物6。反应溶液可以用二甲基甲酰胺，也可以用丙酮或者二甲亚砜，反应用碱可以用碳酸钾，碳酸钠等无机碱，也可以用三乙胺（TEA）或者N，N-二异丙基乙胺（DIPEA）等有机碱。
在以上制造方法中，定义的基团在实施方法的条件下发生变化或者不适合实施方法时，能够通过使用有机化学中常用的保护基的导入和脱离方法（《有机合成中的保护基》华东理工大学出版社）等得到目的化合物。另外，各取代中含有的官能团的变换能够根据上述制造方法外的公知地方法进行，在化合物通式（1）中，有时能够将其作为合成中间体倒入其他衍生物。
上述制造方法的中间体和目的化合物能够以有机合成化学中常用的纯化法，例如中和、过滤、萃取、洗净、干燥、浓缩、重结晶、各种色谱等进行分离精制。另外，在中间体中，能够不通过特别纯化而提供给下面的反应。
在欲得到化合物通式（1）的盐时，当化合物（1）以盐的形式得到时，可以直接进行精制，或者，以后以游离的形式得到时，只要用适当的有机溶剂中溶解或悬浊，添加酸而由通常的方法形成盐即可。
另外化合物通式（1）及其药理学上可接受的盐有时一说或各种溶液的加成物的形式存在，这些加成物业能够作为本发明的SENP1抑制剂使用。
实例一：
实例二：
实例三：
实例四：
实例五：
在表1和表2中表示有上述制造法所得到的化合物的具体例子。
表1：
| 化合物编号 | R0取代基团 | R1取代基团 | R2取代基团 |
| 06-001 | H | H | H |
| 06-002 | Me | H | H |
| 06-003 | H | Me | H |
| 06-004 | H | H | Me |
| 06-005 | H | Et | H |
| 06-006 | Br | H | H |
| 06-007 | H | Br | H |
| 06-008 | H | H | Br |
| 06-009 | Cl | H | H |
| 06-010 | H | Cl | H |
| 06-011 | H | H | Cl |
| 06-012 | F | H | H |
| 06-013 | H | F | H |
| 06-014 | H | H | F |
| 06-015 | H | CN | H |
| 06-016 | H | H | NO2 |
| 06-017 | H | NO2 | H |
表2：
实施例2.
纯化RanGAP1-SUMO1/SUMO2与SENP1C（SENP1催化活性口袋）蛋白
将-80℃冻存的大量（1L LB培养液，约5-10克湿菌体）表达RanGAP1-SUMO1/SUMO2与SENP1C的菌体水浴化冻，用裂解Buffer（50mM PH=8.0，NaPi，0.3M NaCl，10mM咪唑，10mMβ-SH，10%甘油）20毫升悬起菌体。再用超声破菌（200W，on3S，off9S，300次），直到菌液相对澄清。同时取3毫升Agarose Ni-NTA柱（50%乙醇悬液），用双蒸水洗三次，每次10毫升，再用结合Buffer洗3次，每次10ml，预平衡柱子。将先前的菌液转移到50ml高速离心管中（4℃，20000转每分钟，50分钟），静止后取上清液转移至干净的50ml离心管中，用裂解Buffer浸润Ni-NTA柱，等分加入到RanGAP1-SUMO1/SUMO2与SENP1C上清液中。在4℃下旋转混合过夜。过夜结合的混和液转入到玻璃砂芯层析柱，静置5分钟，放出结合后的细胞裂解液并用裂解buffer洗刷离心管1次，将两次裂解液合并柱层析。用buffer（20mM咪唑，PH=8.0，50mMNaPi，0.3M NaCl，10%甘油，10mM p-SH）10毫升冲洗Ni-NTA柱三次，洗掉非特异性结合的蛋白。再依次用buffer（50mM咪唑，PH=8.0，50mM NaPi，0.3M NaCl，10%甘油，10mMβ-SH），buffer（100mM咪唑，PH=8.0，50mM NaPi，0.3M NaCl，10%甘油，10mMβ-SH），buffer（150mM咪唑，PH=8.0，50mM NaPi，0.3M NaCl，10%甘油，10mMβ-SH），buffer（250mM咪唑，PH=8.0，50mMNaPi，0.3M NaCl，10%甘油，10mMβ-SH）分别洗脱10毫升1次，5毫升2次，收集洗脱液。SDS-PAGE检测纯化的RanGAP1-SUMO1/SUMO2与SENP1C蛋白。
根据电泳结果，合并100mM，150mM，250mM的咪唑洗脱液，用Amicon15（Millipore，10KDa）浓缩至约1毫升，再用储存buffer（50mM Tris HCl，pH8.0，150mM NaCl，5mM DTT，1mMEDTA）洗3次，每次10毫升，用Amicon浓缩至1毫升，将浓缩液转移到1.5毫升EP管中，加入等体积的灭菌甘油在-20℃下冻存。
实施例3.Western检测RanGAP1-SUMO1/SUMO2的表达
用12%SDS-PAGE电泳分离检测组分。将滤纸，NC膜与海绵垫预先用转膜液浸泡（有机玻璃夹板黑面朝下，其上依次为海绵垫，滤纸，凝胶，NC膜，滤纸和海绵垫），在100V下60分钟。再用丽春红将NC染色以显现Pr条带，根据Marker位置以及染色所显示的Pr位置，剪下10KDa-43KDa间的NC膜，用TBST洗膜3次脱色。配制5%奶粉50毫升，用TBST溶解后，取5毫升室温下用摇床封闭NC膜1小时，加入抗His抗体，在4℃下过夜，再用洗液洗3次，每次5分钟；加入2抗IgG（1：2000稀释）4毫升，摇床混合2小时，再用洗液洗3次，每次5分钟将显色液加到膜表面显色。
通过图1分子水平的检测，发现06-027小分子在体外有明显抑制SENP1的活性。为了进一步确定06-027在细胞水平的抑制活性，我们选择了SENP1高表达的PC3细胞系，使用Cell Counting Kit-8assay的方法检测06-027对PC3细胞的生长抑制效应。从图2的左图可以看出，随着06-027浓度的增加，PC3细胞的生长明显被抑制，而且IC50为1.27μM。在这基础上，为了明确06-027小分子在细胞内是否通过SENP1发挥抑制作用，我们构建了Flag-sumo-1，Flag-sumo-2，Flag-sumo-3质粒并转染到Hela细胞中，然后检测06-027小分子处理后的Hela细胞内SUMO化蛋白水平。共分为3组：未处理组，DMSO（0.1%处理）组,10μM的06-027小分子抑制剂组，分别处理Hela-Flag-sumo-1、Hela-Flag-sumo-2、Hela-Flag-sumo-3细胞1小时，然后用Flag抗体检测蛋白的SUMO化改变。如图2(右)所示，在Hela-Flag-sumo-1，Hela-Flag-sumo-2，Hela-Flag-sumo-3这3种细胞中，06-027小分子处理后的SUMO化蛋白水平明显高于未处理组和DMSO（0.1%处理）组,说明在Hela细胞内，10μM的06-027小分子可以很大程度上增加蛋白的SUMO水平。从图2可以看出06-027小分子对PC3细胞有明显生长抑制效应，然后我们以前列腺癌细胞株PC3作为模型应用流式细胞术检测SENP1小分子抑制剂06-027在不同浓度下处理24小时对细胞凋亡的影响。如图3所示，经过06-027处理的凋亡细胞比例明显高于对照组和DMSO组，而且随着06-027小分子浓度增加凋亡细胞的比例也明显增加，因此，06-027小分子促进了PC3细胞的凋亡。
申请人前期已经报道了一些在分子水平上有活性的SENP1的小分子抑制剂（Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters22(2012)6867–6870），具有一定的生物学意义。但是在细胞水平中我们发现化合物本身的溶解性、透膜性和在一些相关细胞系中都存在着一些问题。本发明不仅又发现了一系列不同的、活性较好的SENP1的小分子抑制剂，在化合物的溶解性上也有了一定的改善。
在化合物水溶性提高的基础之上，我们又做了一系列小分子化合物对于相关细胞系的试验（见图2和图3），经过实验验证，从图2可以看出本发明的小分子抑制剂对PC3细胞有明显生长抑制效应，然后我们以前列腺癌细胞株PC3作为模型应用流式细胞术检测SENP1小分子抑制剂在不同浓度下处理24小时对细胞凋亡的影响。如图3所示，经过处理的凋亡细胞比例明显高于对照组和DMSO组，而且随着小分子浓度增加凋亡细胞的比例也明显增加，因此，新的SENP1小分子抑制剂促进了PC3细胞的凋亡。从上述试验我们发现了小分子化合物的透膜性有所提高，也往将来发现新的SENP1小分子抑制剂乃至新的前列腺癌新药发现提供了支持。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.化合物
在制备SENP1抑制剂中的应用。
2.化合物
在制备治疗前列腺癌药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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