CN103952361A - 一种沉水型光合细菌的培养方法 - Google Patents

Abstract

一种沉水型光合细菌的培养方法，它包括：筛选长杆状的紫色非硫光合细菌；利用培养基采用两阶段培养法培养，第一阶段，按20%接种量接种，培养温度20～40℃，太阳光照射，培养3天，至pH＝8.7，以未接菌培养基作参照菌液OD₆₆₀≥2.5；第二阶段，按0.5%比例补充新鲜培养基，继续培养2天，得到黏稠状沉水型光合细菌培养液；其中，培养基组成：CH₃COONa：2.0～5.0g/L，(NH₄)₂SO₄：1.0～2.0g/L，KH₂PO₄：1.0～2.0g/L，MgSO₄7H₂O：0.2～0.8g/L，NaCl：1.0～6.0g/L，NaHCO₃：1.0-3.0g/L，CaCl₂：0.01～0.02g/L，FeSO₄·7H₂O：0.001～0.002g/L和酵母膏：0.2～1.0g/L。本发明能直接作用于养殖池底部，有效改善养殖池塘水质及底泥环境，解决了因光合细菌自身沉降性差而难以作用于水体底层的瓶颈。

Description

一种沉水型光合细菌的培养方法

 

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是提供了一种沉水型光合细菌的培养方法。

背景技术

光合细菌在黑暗好氧、光照厌氧等不同条件下能以不同的代谢方式，进行不放氧光合作用或化能异养作用，具有较强的转化和去除水体氨氮、亚硝态氮、硫化物或有机污染物的生理特性；同时，光合细菌细胞富含氨基酸种类全面的蛋白质、辅酶Q和B族维生素等多种生理活性物质，因而光合细菌作为净水剂或饲料添加剂被广泛应用于水产养殖业。

光合细菌作为水质净化剂应用于水产养殖池塘，存在因光合细菌自身沉降性差而不能自然沉降至水体底部的缺陷，因而不能直接作用于水体底层或底泥。目前，光合细菌制剂施用于养殖池塘底部的方法很多，传统的方法有饲料添加法和拌沙撒施法，但效果均不理想，使光合细菌达不到应有的净化水质的效果。随着水产养殖业的发展，养殖水体水质要求的提高，有关沉降光合细菌的研究越来越引起研究人员的重视，技术开发层出不穷，如公开号为CN92211292.4A的方法是采用菌液加注装置，将高压菌液输送到轮渡喷管上，经底输液喷管沉入池底段上的喷孔喷出。又如公开号为CN200610018362.9A 的方法是以沸石粉和海藻酸钠对光合细菌进行固定化，使光合细菌迅速沉入水底发挥作用。诸如上述的采用外部设备喷撒或对光合细菌进行固定化处理等方法，虽然在一定程度上改善了光合细菌的沉降问题，但都存在耗能费时的不足，前者需要特定装置，投入费用高，而后者难以保证菌体活性，不利于大面积推广使用。如能开发一种能自然沉降的光合细菌菌剂，则可以有效解决目前沉降光合细菌所存在的费用大、操作难度大、菌体活性低等问题，有效改善养殖水体水质，提高水产养殖效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可实现规模化生产的沉水型光合细菌培养方法，该方法制备的光合细菌使用时能自然沉降且能保证菌体活性。

本发明提供的一种沉水型光合细菌的培养方法，它包括：

筛选长杆状的紫色非硫光合细菌；

利用培养基采用两阶段培养法培养，第一阶段，按20%接种量接种，培养温度20～40℃，太阳光照射，培养3天，至pH＝8.7，以未接菌培养基作参照菌液OD₆₆₀ ≥2.5；第二阶段，按0.5%比例补充新鲜培养基，继续培养2天，得到黏稠状沉水型光合细菌培养液；

其中，培养基组成：CH₃COONa：2.0～5.0g/L，(NH₄)₂SO₄ ：1.0～2.0 g/L，KH₂PO₄：1.0～2.0 g/L，MgSO₄7H₂O ：0.2～0.8 g/L，NaCl：1.0～6.0 g/L，NaHCO₃：1.0-3.0 g/L，CaCl₂ ：0.01～0.02 g/L，FeSO₄·7H₂O：0.001～0.002 g/L和酵母膏：0.2～1.0 g/L。

在上述中，紫色非硫光合细菌的大小为0.6～8.0μm×1.2～2.5μm。

紫色非硫光合细菌的筛选方法：

取光合细菌活化菌液按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4梯度稀释后，采用四区划线法于固体琼脂培养基平板上划线，倒扣于装有0.5g碳酸钠和0.5g焦性没食子酸混合物的另一培养皿上，平板边沿用石蜡封口，30℃光照培养4天后长出红色菌落，镜检各菌落细菌形态，挑取杆状菌落进一步划线分离，如此重复多次，直至显微镜下检查全为杆状。

该培养液黏度为16～21 mP.s，菌体浓度为136亿个/mL，密度为1.003 kg/L，菌体形态为杆状。

本发明在传统光合细菌培养工艺基础上，筛选出具有杆状形态均一的菌种，采用改良培养基，采用两阶段培养的方法。本发明所得产品与现有光合细菌制剂相比具有的优势在于：培养液黏度大，为16~21 mP.s，自然沉降性能好，泼洒到水面后无需借助外部设备便可以6~8 cm/min的速度自然沉降，最大沉降效率为92.36%，解决了因光合细菌自身沉降性差而难以作用于水体底层的瓶颈。本发明具有培养基及培养条件粗扩，操作简便，能耗低等特点，实现了光合细菌同时净化水体及去除底泥有机污染物、硫化物的目的。

具体实施方式

实施例：

筛选长杆状的紫色非硫光合细菌：取光合细菌活化菌液按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4梯度稀释后，采用四区划线法于固体琼脂培养基平板上划线，倒扣于装有0.5g碳酸钠和0.5g焦性没食子酸混合物的另一培养皿上，平板边沿用石蜡封口，30℃光照培养4天后长出红色菌落，镜检各菌落细菌形态，挑取杆状菌落进一步划线分离，如此重复多次，直至显微镜下检查全为杆状，大小为0.6～8.0μm×1.2～2.5μm。

利用培养基采用两阶段培养法培养，第一阶段，按20%接种量接种，培养温度20～40℃，太阳光照射，培养3天，至pH＝8.7，以未接菌培养基作参照菌液OD₆₆₀ ≥2.5；第二阶段，按0.5%比例补充新鲜培养基，继续培养2天，得到黏稠状沉水型光合细菌培养液；

其中，培养基组成：CH₃COONa：3.5g/L，(NH₄)₂SO₄ ：1.5 g/L，KH₂PO₄：1.5g/L，MgSO₄7H₂O ：0.5g/L，NaCl：3.5g/L，NaHCO₃：2.0 g/L，CaCl₂ ：0.015 g/L，FeSO₄·7H₂O：0.0015 g/L和酵母膏：0.6g/L，采用井水配制。

该培养液黏度为18.5 mP.s，菌体浓度为136亿个/mL，密度为1.003 kg/L，菌体形态为杆状。

应用实例一

例1、实施例所得产品在罗非鱼养殖上的应用效果

（1）试验地点：广东省高州市茂大养殖场。

（2）试验时间：2013年7月2日至2013年9月2日。

（3）试验对象：奥尼罗非鱼。

（4）试验方法：设2个试验组和2个对照组，池塘面积为20х20m²，水深1.5~2.2 m。试验期间试验组每隔12天泼洒1次沉水型光合细菌，共使用5次，每次使用量为2.5 kg/亩。

（5）试验效果： 施用5次光合细菌前后池塘水质监测结果及产量见表1。

表1 罗非鱼池塘施用光合细菌前后的指标变化情况

应用实例2、实施例所得的产品在南美白对虾养殖上的应用效果

(1) 试验地点：广东省电白县龙山镇杨梅村某养殖场

(2) 试验时间：2013年5月2日至2013年11月2日

(3) 试验对象：南美白对虾。

（4）试验方法：虾池面积为350m²，水深50cm，设2个试验组和2个对照组。试验期间试验组每隔12天泼洒1次沉水型光合细菌，共使用15次，每次使用量1.6 kg/亩。

（5）试验效果：施用15次光合细菌前后池塘水质监测结果及产量见表2。

表2 对虾池塘施用光合细菌前后的指标变化情况

Claims (5)

1.一种沉水型光合细菌的培养方法，其特征在于，它包括：

筛选长杆状的紫色非硫光合细菌；

利用培养基采用两阶段培养法培养，第一阶段，按20%接种量接种，培养温度20～40℃，太阳光照射，培养3天，至pH＝8.7，以未接菌培养基作参照菌液OD₆₆₀ ≥2.5；第二阶段，按0.5%比例补充新鲜培养基，继续培养2天，得到黏稠状沉水型光合细菌培养液；

其中，培养基组成：CH₃COONa：2.0～5.0g/L，(NH₄)₂SO₄ ：1.0～2.0 g/L，KH₂PO₄：1.0～2.0 g/L，MgSO₄7H₂O ：0.2～0.8 g/L，NaCl：1.0～6.0 g/L，NaHCO₃：1.0-3.0 g/L，CaCl₂ ：0.01～0.02 g/L，FeSO₄·7H₂O：0.001～0.002 g/L和酵母膏：0.2～1.0 g/L。

2.根据权利要求1所述的一种沉水型光合细菌的培养方法，其特征在于，紫色非硫光合细菌的大小为0.6～8.0μm×1.2～2.5μm。

3.根据权利要求1或2所述的一种沉水型光合细菌的培养方法，其特征在于，紫色非硫光合细菌的筛选方法：

取光合细菌活化菌液按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4梯度稀释后，采用四区划线法于固体琼脂培养基平板上划线，倒扣于装有0.5g碳酸钠和0.5g焦性没食子酸混合物的另一培养皿上，平板边沿用石蜡封口，30℃光照培养4天后长出红色菌落，镜检各菌落细菌形态，挑取杆状菌落进一步划线分离，如此重复多次，直至显微镜下检查全为杆状。

4.根据权利要求1所述的一种沉水型光合细菌的培养方法，其特征在于，该培养液黏度为16～21 mP.s，菌体浓度为136亿个/mL，密度为1.003 kg/L，菌体形态为杆状。

5.根据权利要求1所述的一种沉水型光合细菌的培养方法，其特征在于，培养基采用井水配制。