CN103918558A - 一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法 - Google Patents

一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物组培快繁技术领域，提供了一种铁皮石斛（DendrobiumofficinaleKimuraetMigo）组培苗通过培养瓶驯化的方法。本发明所述方法包括以下步骤：选取成熟组织培养瓶苗；瓶苗遮阴预培养；瓶苗去琼脂、消毒；瓶苗晾干脱水；瓶苗再次入瓶内半开盖培养；最后移栽苗床基质中。本发明所述方法操作简单，成本低廉，有效地克服了铁皮石斛组培苗出瓶后易溃烂死亡，栽种成活率低的技术难题。使得组培苗在出瓶后较短的时间里，叶片基本形成完善的角质层，能很好地进行有效的光合作用，合成各种物质。经过本法驯化的组培苗，根系发达，叶片变厚，叶色深绿，茎变粗变硬，保持生长的连贯性。移栽后，成活率可达95%以上。

Description

一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法
技术领域
本发明属于植物组培快繁技术领域，具体涉及一种铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）组培苗通过培养瓶完成驯化的方法。
背景技术
铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是我国常用的名贵中药，为兰科石斛兰属多年生草本植物，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效，常用于热病伤津、口干烦燥、病后虚热等多种病症。用途广泛，需求量大。由于长期无节制采挖，再加上自身资源再生能力低，铁皮石斛自然资源已渐趋枯竭。目前该种植物已成为国家重点保护药材品种之一。人工种植铁皮石斛具有广阔的前景，种植规模正在不断扩展，组培快繁规模化生产种苗是其关键技术之一。国内外学者在铁皮石斛快速繁殖、扩大繁殖系数等方面已获得关键性的进展，已能规模化生产铁皮石斛组培苗。但目前普遍存在组培苗移栽成活率低的情况，从瓶苗到大田栽培的中间环节成为制约铁皮石斛生产发展的一大障碍。如中国专利《铁皮石斛的种植方法》（申请人：桂平市白石洞天仙山铁皮石斛专业合作社；申请日：2013年11月30日；申请号：CN201310623199.9）公开了一种铁皮石斛的种植方法，所述方法中利用泥炭土、花生壳、松土糠、松树皮和少量蝙蝠粪便等原料打粉作基质培育铁皮石斛，但该方法中所述蝙蝠粪便较难获得，并且所述基质需在100~110℃下处理后使用，从一定程度上加大了培育成本，较为繁琐，并且也存在组培苗移栽成活率低的情况。
综上所述，目前急需一种方法操作简单，成本低廉，组培苗移栽成活率低的铁皮石斛的培育方法。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种铁皮石斛组培苗驯化炼苗的方法，大幅度提高铁皮石斛组培苗移栽成活率。
该方法根据铁皮石斛组培苗在出瓶之前其茎叶未形成完善的角质层，也不能进行有效的光合作用等生理特征，使用组培瓶并配合平衡营养液控制光温湿微环境, 使组培苗处于适宜生长的环境条件下，较快地完成从异养型代谢向自养型代谢的转变，叶片表皮细胞发育成熟，能适应自然环境条件，完成铁皮石斛组培苗的驯化过程。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，所述方法包括以下步骤：
1）选取成熟的培养瓶苗；
2）瓶苗遮阴预培养；
3）瓶苗去琼脂、消毒；
4）瓶苗晾干脱水；
5）瓶苗再次入瓶内半开盖培养，；最后将其移栽苗床基质中，得到的铁皮石斛组培苗。
    所述的成熟的铁皮石斛培养瓶苗，是指苗高5-8cm，有明显茎节，具4-6条根。所述的瓶苗遮阴预培养，是指在可遮雨的塑料大棚，或者温室内培养，荫蔽度约为70%，预培养20-30 d，并在苗子出瓶处理的前3 d敞开瓶盖预培养。所述的瓶苗去琼脂、消毒，是指将预培养过的瓶苗取出，用饮用自来水轻柔漂洗，洗净组培苗上粘附的培养基。洗完后晾干并用0.1%多菌灵侵泡消毒30 s。所述的瓶苗晾干脱水，是指将将消毒好的组培苗晾干脱水1-2 d，晾干至根系完全发白。所述的瓶苗再次入瓶内半开盖培养，是指将将苗再放回组培瓶内进行半开瓶盖培养。使用自来水、营养液定期喷雾补液, 瓶内培养14-21 d。所述的移栽苗床基质中，是指将苗移栽于由椰糠、木屑刨花、树皮等混合而成的苗床基质中，经30-40 d栽培为成苗。
本发明相比现有技术的有益效果为：
本发明所述方法操作简单，成本低廉，有效地克服了铁皮石斛组培苗出瓶后易溃烂死亡，栽种成活率低的技术难题。使得组培苗在出瓶后较短的时间里，叶片基本形成完善的角质层，能很好地进行有效的光合作用，合成各种物质。经过本法驯化的组培苗，根系发达，叶片变厚，叶色深绿，茎变粗变硬，保持生长的连贯性。移栽后，成活率可达95%以上。
具体实施方式
依据本发明提出的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化方法，具体实施方式详细叙述如下： 
实施例1
一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，所述方法包括以下步骤：
1）选取成熟的培养瓶苗；
2）瓶苗遮阴预培养；
3）瓶苗去琼脂、消毒；
4）瓶苗晾干脱水；
5）瓶苗再次入瓶内半开盖培养，最后将其移栽苗床基质中，得到的铁皮石斛组培苗。
进一步的，步骤1）所述成熟的培养瓶苗，是指苗高5-8cm，有明显茎节，具4-6条根。
进一步的，步骤2）所述瓶苗遮阴预培养，是指在可遮雨的塑料大棚，或者温室内培养，荫蔽度约为70%，预培养20-30 d，并在苗子出瓶处理的前3 d敞开瓶盖预培养。
进一步的，步骤3）所述瓶苗去琼脂、消毒，是指将所述步骤2）预培养过的瓶苗取出，用饮用自来水轻柔漂洗，洗净组培苗上粘附的培养基，洗完后晾干并用0.1%多菌灵侵泡消毒30 s。
进一步的，步骤4）所述瓶苗晾干脱水，是指将将消毒好的组培苗晾干脱水1-2 d。
进一步的，步骤5）所述瓶苗再次入瓶内半开盖培养，是指将将苗再放回组培瓶内进行半开瓶盖培养，使用自来水、营养液定期喷雾补液, 瓶内培养14-21 d。
进一步的，步骤5）所述移栽苗床基质中，是指将苗移栽于苗床基质中，经30-40 d栽培为成苗。
进一步的，所述苗床基质为椰糠、木屑刨花、树皮或上述两种或三种的混合物。
本实施例的单位为克，也可以为千克。
本实施例中所述的各原料均为市场上出售的常规产品，本实施例的培育方法中采用的设备也均为市场上出售的常规产品。
实施例2
本实施例是在实施例1的基础上的优选化方案，提供了一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法。本实施例中与实施例1相同的部分，请参照实施例1中公开的内容进行理解，实施例1公开的内容也应当作为本实施例的内容，此处不作重复描述。
所述方法包括以下步骤：
1、选取成熟的铁皮石斛组培苗：选择苗高5-8 cm，有明显茎节，具4-6条根的组培苗作为瓶苗。
 2、瓶苗遮阴预培养：将步骤1）选取的瓶苗放在可遮雨的塑料大棚内培养，荫蔽度约为70%，预培养20-30 d，并在苗子出瓶处理的前3 d敞开瓶盖预培养。
 3、瓶苗去琼脂、消毒：将阴棚内预培养的瓶苗开盖，取出苗，用饮用自来水轻柔漂洗，洗净组培苗上粘附的培养基。洗完后晾干并用0.1%多菌灵侵泡消毒30 s, 防止微生物感染。
 4、瓶苗晾干脱水：将将消毒好的组培苗晾干脱水1-2 d，使苗表层细胞快速角质化。必须晾干至根系完全发白。
5、瓶苗再次入瓶内半开盖培养：将上述处理好的苗再放回组培瓶内培养。空瓶、瓶底保持少量水分，瓶盖半开，1次/1-2 d喷雾补水，使用1/10的MS培养液营养液1次/周喷雾补液, 瓶内培养14-21 d。
6、移栽苗床基质中：将苗移栽于木屑刨花、椰糠（刨花：椰糠=2.5：1；预先泡透）混合而成的基质中，经30-40 d栽培为成苗。
移栽后，成活率可达95.9%。
实施例3
本实施例是在实施例1的基础上的优选化方案，提供了一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法。本实施例中与实施例1相同的部分，请参照实施例1中公开的内容进行理解，实施例1公开的内容也应当作为本实施例的内容，此处不作重复描述。
所述方法包括以下步骤：
1、选取成熟的铁皮石斛组培苗：选择苗高5-8 cm，有明显茎节，具4-6条根的组培苗作为瓶苗。
 2、瓶苗遮阴预培养：将步骤1）选取的瓶苗放在可遮雨的塑料大棚内培养，荫蔽度约为70%，预培养20-30 d，并在苗子出瓶处理的前3 d敞开瓶盖预培养。
 3、瓶苗去琼脂、消毒：将阴棚内预培养的瓶苗开盖，取出苗，用饮用自来水轻柔漂洗，洗净组培苗上粘附的培养基。洗完后晾干并用0.1%多菌灵侵泡消毒30 s, 防止微生物感染。
 4、瓶苗晾干脱水：将将消毒好的组培苗晾干脱水1-2 d，使苗表层细胞快速角质化。必须晾干至根系完全发白。
5、瓶苗再次入瓶内半开盖培养：将上述处理好的苗再放回组培瓶内培养。培养瓶瓶底垫1/4厚度基质（新鲜刨花：水苔=3：1；所述新鲜刨花和水苔需预先用水泡透），基质保持湿润，瓶盖半开，1次/1-2 d喷雾补水，使用1/10的MS培养液营养液1次/周喷雾补液, 瓶内培养14-21 d。
6、移栽苗床基质中：是指将苗移栽于树皮（松树皮粗：细=2：1；预先泡透）等混合而成的苗床基质中，经30-40 d栽培为成苗。
移栽后，成活率可达97.4%。
所述MS培养液MS培养基为植物组织和细胞培养最常见的培养基之一，由威斯康星大学的村重敏夫（英语：Toshio Murashige）和福尔克·K ·斯科格（英语：Folke K. Skoog）所研发并用于植物激素的研究。培养基以两人的姓氏首字母命名，包括大量元素组分和微量元素组分，其配方如下：
大量元素
硝酸铵 (NH4NO3) 1,650 mg/l
氯化钙 (CaCl2 · 2H2O) 440 mg/l
硫酸镁 (MgSO4 · 7H2O) 370 mg/l
磷酸二氢钾 (KH2PO4) 170 mg/l
硝酸钾 (KNO3) 1,900 mg/l。
微量元素
硼酸 (H3BO3) 6.2 mg/l
氯化钴 (CoCl2 · 6H2O) 0.025 mg/l
硫酸铜 (CuSO4 · 5H2O) 0.025 mg/l
硫酸亚铁 (FeSO4 · 7H2O) 27.8 mg/l
硫酸锰 (MnSO4 · 4H2O) 22.3 mg/l
碘化钾 (KI) 0.83 mg/l
钼酸钠 (Na2MoO4 · 2H2O) 0.25 mg/l
硫酸锌 (ZnSO4·7H2O) 8.6 mg/l
Na2EDTA · 2H2O 37.2 mg/l。 

Claims (8)

1.一种铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1）选取成熟的培养瓶苗；
2）瓶苗遮阴预培养；
3）瓶苗去琼脂、消毒；
4）瓶苗晾干脱水；
5）瓶苗再次入瓶内半开盖培养，最后将其移栽苗床基质中，得到的铁皮石斛组培苗。
2.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤1）所述成熟的培养瓶苗，是指苗高5-8cm，有明显茎节，具4-6条根。
3.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤2）所述瓶苗遮阴预培养，是指在可遮雨的塑料大棚，或者温室内培养，荫蔽度约为70%，预培养20-30 d，并在苗子出瓶处理的前3 d敞开瓶盖预培养。
4.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤3）所述瓶苗去琼脂、消毒，是指将所述步骤2）预培养过的瓶苗取出，用饮用自来水轻柔漂洗，洗净组培苗上粘附的培养基，洗完后晾干并用0.1%多菌灵侵泡消毒30 s。
5.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤4）所述瓶苗晾干脱水，是指将将消毒好的组培苗晾干脱水1-2 d。
6.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤5）所述瓶苗再次入瓶内半开盖培养，是指将将苗再放回组培瓶内进行半开瓶盖培养，使用自来水、营养液定期喷雾补液, 瓶内培养14-21 d。
7.如权利要求1所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，步骤5）所述移栽苗床基质中，是指将苗移栽于苗床基质中，经30-40 d栽培为成苗。
8.如权利要求7所述的铁皮石斛组培苗玻瓶驯化的方法，其特征在于，所述苗床基质为椰糠、木屑刨花、树皮或上述两种或三种的混合物。
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