CN103848917A - Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents
Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103848917A CN103848917A CN201410058974.5A CN201410058974A CN103848917A CN 103848917 A CN103848917 A CN 103848917A CN 201410058974 A CN201410058974 A CN 201410058974A CN 103848917 A CN103848917 A CN 103848917A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sequence
- survivin
- protein
- muc1
- nucleic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种生物素(Survivin)和粘蛋白(MUC1)的融合蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的融合蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示。本发明还同时提供了编码所述融合蛋白的核酸分子,以及含有所述核酸分子的重组载体、表达盒、重组细胞、重组菌或重组病毒;所述核酸分子的核苷酸序列如序列表中序列2所示。实验证明,将本发明所提供的Survivin-MUC1融合蛋白以及经所述Survivin-MUC1融合蛋白致敏的DC免疫小鼠后,能够显著的提高小鼠血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体的水平。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物素(Survivin)和粘蛋白(MUC1)的融合蛋白及其编码基因与应用。
背景技术
生存素(Survivin)是目前已知作用最强的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosisprotein),为肿瘤生长所必需。Survivin有其进化上高度保守的凋亡抑制功能,能以特征性的结构直接或间接抑制caspase依赖或caspase不依赖的凋亡途径,有效地对抗细胞的凋亡过程。高表达的Survivin通过启动抗凋亡机制引起细胞增殖,肿瘤形成。Survivin经CMyc最终阻止细胞分裂造成的端粒缩短,从而延长细胞的寿命,导致细胞增生,永生化和癌变。
Survivin特异地表达于G2/M期,在绝大多数肿瘤组织中呈高表达,确定的有脑肿瘤、膀胱癌、肝癌、卵巢癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、食管癌、急性白血病、乳腺癌、淋巴瘤、胰腺癌等。而在分化成熟的正常组织中,则未见Survivin表达。这一特性,使得靶向Survivin的免疫治疗和基因治疗能够促进肿瘤细胞的凋亡,抑制其增殖,正常组织却能不受损伤和影响。Mesri等人把含有磷酸化缺失的Survivin突变体(Thr34Ala)的腺病毒PADT34A于体外分别转染前列腺癌、肺癌、宫颈癌和结肠癌细胞后都发生了自发性的凋亡,线粒体释放细胞色素C及caspase3的活性增加。相反,用PADT34A感染正常的人类细胞,如纤维细胞、内皮细胞,其增生能力不受影响。
可见,作为一种广泛的肿瘤抗原,Survivin可以作为抗肿瘤免疫治疗的一个广泛适用的靶基因。
MUC1是一类广泛存在于多种上皮细胞表面的糖蛋白,在介导内皮细胞与外环境的相互作用中起着十分重要的作用。据研究发现MUC1的作用有促进肿瘤生长和生存、参与致癌和肿瘤迁移过程、参与应激诱导凋亡及化疗因素等。MUC1正常情况下主要表达于多种组织、器官上皮细胞近管或腺腔面,呈顶端表达,极性分布,是糖基化的内在膜蛋白。在许多肿瘤中MUC1异常表达,主要见于唾液腺、消化道、呼吸道及生殖道的上皮细胞来源的恶性肿瘤。在恶性肿瘤中,MUC1过度表达,失去极性分布,表现为NH2端功能区低糖基化或糖基化紊乱,碳链缩短,暴露蛋白核心位点。这种异常糖链表位具有肿瘤抗原相对特异性,使其成为一种潜在的肿瘤生物学标志物,目前已用于肿瘤的诊断和生物学治疗。
MUC1在癌变时可发生质和量的改变,出现新的抗原表位。同时,MUC1也是最先与机体免疫系统接触的细胞表面分子之一。肿瘤MUC1可以非MHC限制性和MHC限制性方式活化CTLs,这些活化的CTLs可杀伤表达MUC1的肿瘤细胞。因此,MUC1是肿瘤主动特异性免疫治疗理想的靶分子。
发明内容
本发明的目的是提供一种生物素(Survivin)和粘蛋白(MUC1)的融合蛋白及其编码基因与应用。
本发明所提供的Survivin-MUC1融合蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
为了便于Survivin-MUC1融合蛋白的纯化,可在由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如下表所示的标签。
表:标签的序列
标签 | 残基 | 序列 |
Poly-Arg | 5-6(通常为5个) | RRRRR |
Poly-His | 2-10(通常为6个) | HHHHHH |
FLAG | 8 | DYKDDDDK |
Strep-tag II | 8 | WSHPQFEK |
c-myc | 10 | EQKLISEEDL |
编码所述Survivin-MUC1融合蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。
所述核酸分子可以是DNA,如cDNA、基因组DNA或重组DNA;所述核酸分子也可以是RNA,如mRNA、hnRNA或tRNA等。
在本发明的一个实施例中,所述核酸分子具体为编码所述Survivin-MUC1融合蛋白的基因(命名为Survivin-MUC1);所述基因是如下1)或2)所述的DNA分子:
1)编码序列为序列表中序列2的第3-575位DNA分子;
2)序列表中序列2所示的DNA分子。
其中,序列1由191个氨基酸组成;第1-131位氨基酸为生物素(Survivin),第132-191位氨基酸为粘蛋白(MUC1)。序列2由575个核苷酸组成,第3-575位为编码序列,编码序列表中序列1所示的蛋白质。
下述a)-f)中的任一种生物材料也属于本发明的保护范围:
a)含有所述核酸分子的重组载体;
b)含有所述核酸分子的表达盒;
c)含有所述核酸分子的重组细胞;
d)含有所述核酸分子的重组微生物;
e)含有所述核酸分子的重组病毒;
f)经所述Survivin-MUC1融合蛋白致敏的树突状细胞。
上述生物材料中,a)所述的重组载体可为重组表达载体,也可为重组克隆载体。在本发明的一个实施例中,所述重组表达载体中启动所述Survivin-MUC1基因转录的启动子具体为T7启动子。更为具体的,所述重组表达载体为在pET28a载体的多克隆位点处插入所述Survivin-MUC1基因得到的重组质粒。所述多克隆位点具体为BamH I和Xho I。b)所述的表达盒由能够启动所述Survivin-MUC1基因表达的启动子,所述Survivin-MUC1基因,以及转录终止序列组成。c)所述重组细胞不包括动植物繁殖材料。d)所述重组微生物具体可为细菌,酵母,藻和真菌。在本发明中,所述重组微生物具体为表达所述Survivin-MUC1融合蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)。e)所述重组病毒可为携带有所述Survivin-MUC1基因的重组腺病毒、重组腺相关病毒等。f)所述树突状细胞可为小鼠来源(如小鼠骨髓来源)的树突状细胞或人来源(如人外周血来源)的树突状细胞。在本发明中,所述树突状细胞为由小鼠骨髓来源的细胞经终浓度为20ng/ml的GM-CSF,以及终浓度为20ng/ml的IL-4诱导所得。
上述Survivin-MUC1融合蛋白,或核酸分子,或上述生物材料中的至少一种在制备下述产品中的应用也属于本发明的保护范围:提高血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体水平的产品。
活性成分为上述Survivin-MUC1融合蛋白,或核酸分子,或上述生物材料中的至少一种的如下产品也属于本发明的保护范围:提高血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体水平的产品。
所述Survivin-MUC1融合蛋白的制备方法也属于本发明的保护范围。
该方法可包括如下步骤:将所述Survivin-MUC1融合蛋白的编码基因在生物细胞中进行表达得到所述Survivin-MUC1融合蛋白;所述生物细胞可为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。在本发明的一个实施例中,所述生物细胞具体为大肠杆菌(具体如BL21DE3)。
在上述方法中,所述Survivin-MUC1融合蛋白为序列表中序列1所示的蛋白;具体的,所述Survivin-MUC1融合蛋白的编码基因(Survivin-MUC1基因)是如下1)或2)所述的DNA分子:
1)编码序列为序列表中序列2的第3-575位DNA分子;
2)序列表中序列2所示的DNA分子。
在本发明的一个实施例中,所述Survivin-MUC1基因具体通过重组表达载体的形式导入所述目的大肠杆菌中;所述重组表达载体具体为在pET28a载体的多克隆位点处插入所述Survivin-MUC1基因得到的重组质粒。
在本发明中,以上所有的所述Survivin-MUC1融合蛋白均是按照如下方法制备得到的:将序列表中序列2所示的DNA片段替换pET28a载体的酶切位点BamH I和XhoI之间的小片段后,经原核表达得到所述Survivin-MUC1融合蛋白。
实验证明,将本发明所提供的Survivin-MUC1融合蛋白以及经所述Survivin-MUC1融合蛋白致敏的DC免疫小鼠后,能够显著的提高小鼠血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体的水平。
附图说明
图1为重组表达载体pET-SM的PCR鉴定电泳结果。其中,泳道M为DNA maker2000,泳道1-7为不同克隆的PCR鉴定结果,目的条带大小约为600bp。
图2为重组表达载体pET-SM的BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定电泳结果。其中,泳道M为DNA maker2000plus,泳道1为pET-SM经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后的电泳结果(目的条带大小约为600bp)。
图3为纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白的Western blot检测结果。其中,泳道M为蛋白分子量标准;泳道1为纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白。
图4为体外诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞的鉴定结果。其中,对照组为未经诱导的骨髓细胞;结果显示有94.7%成熟的mDC细胞表达CD11c分子,有93.8%成熟的mDC细胞表达CD86分子,两分子的表达量均较对照组相比显著提高。
图5为ELISA检测血清中Survivin和/或MUC1特异性抗体的结果。其中,A为第一次免疫后7天的检测结果;B为第二次免疫后7天的检测结果。A和B中,1均为PBS DC组;2均为Survivin-MUC1融合蛋白(50μg/ml)负载DC组;3均为Survivin-MUC1融合蛋白(100μg/ml)负载DC组;4均为Survivin-MUC1融合蛋白免疫组(100μg/只)。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
8周龄的雄性Balb/C小鼠:军事医学科学院动物中心,Cat10062。
人淋巴细胞cDNA:北京傲锐东源生物科技有限公司,Cat:10006
pET-28a质粒:Merck公司,产品目录号TB273。
抗MUC1单克隆抗体:鼠源,中杉生物科技有限公司,货号:D10001。
HRP标记的羊抗鼠IgG:中杉生物科技有限公司,货号:B20056。
GM-CSF(鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子):北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:315-03。
IL-4(小鼠白细胞介素-4):北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:214-14。
LPS(鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子):北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:315-03。
FITC标记的CD86、CD11c、CD80、CD83、HLA-DR、CD40、CD1a抗体均购自BD公司。
NaHCO3包被液(pH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液):1.59克Na2CO3(北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:118-02)、2.93克NaHCO3(北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:118-04),加蒸馏水至1000ml。
PBST:将吐温20溶于PBS磷酸盐缓冲液,使吐温20的终浓度为0.05%的体积含量。
PBS磷酸盐缓冲液:北京鸿跃创新生物科技有限公司,产品目录号:308-04。
实施例1、Survivin-MUC1融合蛋白的制备
一、重组表达载体pET-SM的构建
以人淋巴细胞的cDNA为模板,以S-up和S-down为上下游引物进行PCR扩增,获得Survivin基因片段;以M-up和M-down为上下游引物进行PCR扩增,获得MUC1基因片段。
S-up:5’-acat gaaggaccac cgcatctcta-3’(序列2的第1-24位)
S-down:5’-a agcttatcca tggcagccag-3’(序列2的第375-395位的反向互补序列)
M-up:5’-ggtgtcacc tcggccccgg-3’(序列2的第396-414位)
M-down:5’-ttag tgggctgggg gggcggtgga-3’(该序列的第4-24位为序列2的第555-575位的反向互补序列)
以回收所得的Survivin基因片段和MUC1基因片段为模板,设计如下四条引物,通过融合PCR将扩增的Survivin-MUC1基因融合,在其引物中分别引入酶切位点BamH I(TaKaRa:D101A)和Xho I(TaKaRa:D1094A)。
Survivin上游:5’-aggatccacat gaaggaccac-3’(下划线部分为BamH I的识别位点,其后的序列为序列2的第1-14位)
Survivin下游:5’-ggggccga ggtgacacca agcttatcca-3’(序列2的第385-412位的反向互补序列)
MUC1上游:5’-tggataagct tggtgtcacc tcggcccc-3’(序列2的第385-412位)
MUC1下游:5’-aa ctcgag g tgggctgggg-3’(下划线部分为Xho I的识别位点,其后的序列为序列2的第565-575位的反向互补序列)
原核表达载体pET-28a(XhoⅠ识别位点的下游有由6个His组成的标签)用BamHI和Xho I双酶切将其线性化后,与经过同样双酶切的Survivin-MUC1融合片段于14℃连接过夜。连接产物转入大肠杆菌DH5α中,接种LB卡那霉素抗性固体培养基37℃培养过夜,挑取单克隆至1.5ml含有卡那霉素的LB培养基中,37℃220rpm培养过夜,16小时后提取质粒用于PCR(所用引物为“Survivin上游”和“MUC1下游”)、酶切和测序鉴定。
将经PCR和酶切鉴定正确的质粒(图1和图2)送样测序。将经测序表明在pET-28a的多克隆位点BamHⅠ和XhoⅠ之间插入序列表中序列2的重组质粒命名为pET-SM。
二、Survivin-MUC1融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定
1、Survivin-MUC1融合蛋白的原核表达、纯化
将步骤一中构建的重组表达载体pET-SM转化到大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)中,用终浓度为1.0mmol/L的IPTG,在37℃诱导3h,收集菌悬液,5000g离心收集菌体,将细菌重悬于Buffer A(终浓度为0.5mo l/L的NaCl,终浓度为20mmo l/L的Tris-HCl,pH8.0)中,4℃条件下超声10分钟,破碎细菌,离心洗涤沉淀(包涵体),8mol/L尿素变性增溶,获得待纯化的粗制蛋白。
由于目的蛋白Survivin-MUC1的C端带有6个His,故而将待纯化粗制蛋白经Ni-NTA agarose亲和柱(Merck:HB223)分离纯化,根据产品操作说明书进行。
纯化后的蛋白使用透析方法复性,尿素浓度梯度依次为6mol/L、4mo l/L、2mol/L、1mo l/L、0.25mol/L、0.1mo l/L、0mol/L,每个浓度透析时间为12h。
2、Survivin-MUC1融合蛋白的SDS-PAGE检测及Western blot检测
PBS缓冲液(pH7.4)配方:磷酸二氢钾(KH2PO4):0.27g,磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g,氯化钠(NaCl):8g,氯化钾(KCl)0.2g,加去离子水约800mL,充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。高温高压灭菌后室温保存。
样品稀释液:5g脱脂奶粉溶于100ml PBS缓冲液。
TBST(pH7.4)缓冲液:Tris(三羟甲基胺基甲烷):12.1g,NaCl:17.5g,加蒸馏水1500ml,加入20ml Triton X-100磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4,再加蒸馏水至2000ml,即可。
将步骤1获得的纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白进行SDS-PAGE电泳,电泳后转移硝酸纤维素膜,用5%脱脂奶粉(5g脱脂奶粉溶于100ml PBS缓冲液)封闭;加抗MUC1单克隆抗体(用样品稀释液按照1:2000的体积比稀释),室温轻摇作用2h;TBST缓冲液洗涤3次,每次5min;加入HRP标记的羊抗鼠IgG(用样品稀释液按照1:2000的体积比稀释),室温反应2h,同上洗涤;ECL显色。
SDS-PAGE检测结果显示,纯化后得到了单一的大小约为32KD的目的条带,与Survivin+MUC1融合蛋白分子量相符,且无其他杂带。可见,步骤1获得的纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白具有较高的纯度。Western blot检测结果如图3所示,可见,纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白具有保持了较好的抗原性。以上结果说明步骤1获得的纯化后的Survivin-MUC1融合蛋白满足实验需求,可用于以下实施例的动物实验。
实施例2、Survivin-MUC1融合蛋白致敏的树突状细胞的制备
一、体外诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞
取健康雄性10周龄Balb/c小鼠6只,颈椎脱位法将小鼠处死,75%乙醇浸泡10min,无菌状态下取出股骨及胫骨,浸泡在生理盐水中,分别用5ml、2ml、1ml注射器吸取5ml的生理盐水将股骨及胫骨中的骨髓冲出,将细胞悬液过200目筛网,去除多余的脂肪及组织后1500rpm×10min,弃上清,加入2ml红细胞裂解液,将细胞混匀,于4℃反应15min。加入40ml生理盐水混匀,1500rpm×10min,弃上清,重复2次,弃上清,加入5ml RPMI-1640培养基(北京茂健联星生物科技有限公司)将细胞混匀,取出部分细胞计数,调整细胞浓度为1.0×106个/ml,将细胞铺入6孔板中,每孔2ml培养基。于CO2培养箱中培养2h,2h后,弃培养上清,用生理盐水洗一次,每孔加入含有细胞因子的RPMI-1640培养基,细胞因子的终浓度分别为:GM-CSF(20ng/ml)、IL-4(20ng/ml),37℃、CO2培养箱培养,此时计为d0天,d2、d5天分别半量换液,并在d5天对诱导后的细胞进行鉴定和计数。方法如下:采用1000r/min离心10min,分别收集上述培养的细胞,再用含0.1%(0.1g/100ml)BSA的PBS冲洗封闭细胞一次,离心去上清后将细胞浓度调整为1.0×106个/ml,重悬于1.5mL的EP管中,分别加入2μL荧光标记的抗体(FITC标记的CD80、CD86、CD83、HLA-DR、CD11c、CD40、CD1a抗体),常温下染色20min,离心并取300μL的PBS把染色后的细胞转移于流式管,用于流式细胞仪检测,软件WinMDI2.9分析数据。实验同时设置未经诱导的骨髓细胞作为对照组。
对细胞的鉴定结果显示所示,经成熟诱导后的细胞,高表达HLA-DR、CD40、CD80、CD86、CD83、CD11c、CD1a,其中CD86和CD11c的表达量较诱导前(即对照组)有显著提高(图4)。可见经上述条件诱导已获得成熟的小鼠骨髓来源的树突状细胞。
二、Survivin-MUC1融合蛋白致敏的树突状细胞的制备
将步骤一获得的小鼠骨髓来源的树突状细胞按照1×106个细胞/孔的用量进行6孔板铺板。分为3组,向其中一组中加入终浓度为50μg/ml的Survivin-MUC1融合蛋白,向其中的另一组加入终浓度为100μg/ml的Survivin-MUC1融合蛋白,其余的一组不加Survivin-MUC1融合蛋白,作为对照组。待Survivin-MUC1融合蛋白与细胞孵育12-16小时后,加入终浓度为100ng/ml的LPS(没加蛋白的对照组也同时加入),孵育16-24小时后,收集各组DC细胞,并计数,准备用于免疫小鼠。
实施例3、用Survivin-MUC1融合蛋白致敏的树突状细胞以及Survivin-MUC1融合蛋白免疫小鼠
用实施例1制备得到的Survivin-MUC1融合蛋白和实施例2制备得到的Survivin-MUC1融合蛋白致敏的树突状细胞免疫小鼠,通过ELISA的方法分析小鼠血清中Survivin和/或MUC1特异性IgG抗体的产生情况。
一、小鼠免疫
实验分组及各组的免疫情况见表1。融合蛋白或树突状细胞溶于PBS中,分别于第0天和第8天各注射1针,每只小鼠每次皮下注射100微升。
表1小鼠免疫实验的分组及各组的免疫情况
二、ELISA检测血清中抗体水平
在步骤一第一次免疫后7天和第二次免疫后7天分别取小鼠尾血,采用ELISA的方法分析小鼠血清中Survivin和/或MUC1特异性IgG抗体的产生情况。具体操作如下:
以MUC1合成肽(序列3)、Survivin+MUC1蛋白(包被用量均为200ng/孔,用pH9.6的NaHCO3包被液稀释)分别4℃包被过夜,封闭液(PBS+3g/100ml的BSA)封闭2小时后,PBST洗涤4次;将小鼠血清按体积比1:25进行稀释,37℃孵育1h;PBST洗涤4次,每次5分钟;加羊抗小鼠辣根过氧化物酶标记IgG抗体(Sigma,按1:4000稀释),37℃孵育1h。每孔加入底物TMB,37℃避光显色5-15min,每孔加入50μl终止液(2mol/L H2SO4)终止显色,置于450nm测定每孔光密度值。各组中每只小鼠每个稀释度的血清设置3个复孔,同时以未经注射的健康小鼠的血清作为阴性对照。
一次免疫后7天的ELISA检测结果如图5中A所示,Survivin+MUC1融合蛋白免疫小鼠产生较强的特异性免疫抗体,而融合蛋白致敏的DC细胞免疫的小鼠与对照相比没明显差异。第二次免疫后7天的ELISA检测结果如图5中B所示,第二次免疫后,与融合蛋白免疫的小鼠相似,融合蛋白致敏的DC细胞免疫小鼠也产生了特异抗体。以上结果表明,通过两次免疫,融合蛋白致敏的DC在小鼠机体产生了与融合蛋白相似的体液免疫反应。由于致敏的DC还可诱发机体产生针对融合蛋白的T细胞免疫反应;所以在实际应用中,可以通过外周血分离肿瘤病人DC,用肿瘤特异蛋白Survivin-MUC1在体外致敏DC,回输病人,从而诱导机体产生针对肿瘤细胞的特异性体液反应和细胞免疫反应,杀死肿瘤细胞。
Claims (10)
1.蛋白质,其特征在于:所述蛋白质的氨基酸序列如序列表中序列1所示。
2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子,其特征在于:所述核酸分子为编码权利要求1所述蛋白质的基因;所述基因是如下1)或2)所述的DNA分子:
1)编码序列为序列表中序列2的第3-575位DNA分子;
2)序列表中序列2所示的DNA分子。
4.下述a)-f)中的任一种生物材料:
a)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体;
b)含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒;
c)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组细胞;
d)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组菌;
e)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组病毒;
f)经权利要求1所述蛋白致敏的树突状细胞。
5.根据权利要求4所述的生物材料,其特征在于:所述重组载体为重组表达载体或重组克隆载体。
6.根据权利要求5所述的生物材料,其特征在于:在所述重组表达载体中,启动所述基因转录的启动子为T7启动子。
7.权利要求1所述蛋白质,或权利要求2或3所述核酸分子,或权利要求4-6中任一所述的生物材料在制备下述产品中的应用:提高血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体水平的产品。
8.活性成分为权利要求1所述蛋白质,或权利要求2或3所述核酸分子,或权利要求4-6中任一所述生物材料的如下产品:提高血清中Survivin和/或MUC1蛋白特异性IgG抗体水平的产品。
9.权利要求1所述蛋白质的制备方法,包括如下步骤:将权利要求1所述的蛋白质的编码基因在生物细胞中进行表达得到权利要求1所述蛋白质;所述生物细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:所述蛋白质的编码基因是如下1)或2)所述的DNA分子:
1)编码序列为序列表中序列2的第3-575位DNA分子;
2)序列表中序列2所示的DNA分子。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410058974.5A CN103848917B (zh) | 2014-02-21 | 2014-02-21 | Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410058974.5A CN103848917B (zh) | 2014-02-21 | 2014-02-21 | Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103848917A true CN103848917A (zh) | 2014-06-11 |
CN103848917B CN103848917B (zh) | 2016-01-20 |
Family
ID=50857068
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410058974.5A Active CN103848917B (zh) | 2014-02-21 | 2014-02-21 | Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103848917B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104531707A (zh) * | 2014-12-16 | 2015-04-22 | 吉林大学 | 一种抑制survivin基因表达用途的siRNA序列及用途 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102086453A (zh) * | 2009-12-04 | 2011-06-08 | 长春百克生物科技股份公司 | 以粘蛋白1和生存素为靶点的肿瘤dna疫苗及病毒载体疫苗 |
CN102732543A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 长春百克生物科技股份公司 | 以粘蛋白1和生存素为靶点的肿瘤基因工程疫苗 |
-
2014
- 2014-02-21 CN CN201410058974.5A patent/CN103848917B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102086453A (zh) * | 2009-12-04 | 2011-06-08 | 长春百克生物科技股份公司 | 以粘蛋白1和生存素为靶点的肿瘤dna疫苗及病毒载体疫苗 |
CN102732543A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 长春百克生物科技股份公司 | 以粘蛋白1和生存素为靶点的肿瘤基因工程疫苗 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
张海红等: "以Survivin和MUC1 VNTR为靶点的肿瘤基因疫苗研究", 《第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文集》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104531707A (zh) * | 2014-12-16 | 2015-04-22 | 吉林大学 | 一种抑制survivin基因表达用途的siRNA序列及用途 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103848917B (zh) | 2016-01-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7091423B2 (ja) | 改変cd16が関係するポリペプチド、細胞、及び方法 | |
US10889803B2 (en) | Transgenic macrophages, chimeric antigen receptors, and associated methods | |
TW516962B (en) | A human TNFR1-IgG1 preparation | |
Takei et al. | A defucosylated anti‑CD44 monoclonal antibody 5‑mG2a‑f exerts antitumor effects in mouse xenograft models of oral squamous cell carcinoma | |
US8859507B2 (en) | Protein complex for intracellular delivery and uses thereof | |
US8404803B2 (en) | Cancer-associated antigen analogue peptides and uses thereof | |
EA013563B1 (ru) | Трансгенное животное, продуцирующее антитела с измененными углеводными цепями, способ получения антител и содержащее антитела лекарственное средство | |
CN104043102B (zh) | 一种多肽在制备治疗核因子‑κB异常活化疾病药物中的用途 | |
WO2021249549A1 (zh) | 一种嵌合抗原受体及其用途 | |
Liu et al. | regulation of the invasion and metastasis of human glioma cells by polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 2 | |
CN108137671A (zh) | 高亲和力的可溶性pdl-1分子 | |
CN109913422A (zh) | 一种包含肿瘤抗原识别受体的免疫细胞及其应用 | |
US20170173180A1 (en) | Cancer immunotherapy compositions and methods | |
CA3090317A1 (en) | Pd-1 variant having improved binding affinity to pd-l1 | |
CA3062978A1 (en) | Transgenic macrophages, chimeric antigen receptors, and associated methods | |
CN105229027A (zh) | Nme抑制剂以及应用nme抑制剂的方法 | |
CN112375147A (zh) | 一种抗人ykl-40中和性单克隆抗体及其制备与应用 | |
CN100543035C (zh) | 用于治疗B淋巴细胞白血病、淋巴瘤的B7.1-CD19scFv融合基因工程蛋白及其用途 | |
CA2725526A1 (en) | Anti-tumoral cells | |
CN103848917B (zh) | Survivin-MUC1融合蛋白及其编码基因与应用 | |
CN103517717B (zh) | 增强细胞介导的免疫的方法 | |
CN103382220A (zh) | 具有抗感染、抗肿瘤活性的细胞因子fam19a4及其应用 | |
CN113185597A (zh) | 一种可激活患者的抗肿瘤免疫反应的人肿瘤抗原及其应用 | |
EP2128172B1 (en) | Preparation process of recombinant human p43 protein | |
US20180214546A1 (en) | Modulation of srpx2-mediated angiogenesis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |