CN103819467B - 喹唑啉衍生物的制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开式(I)所示的喹唑啉衍生物及其盐其中Z为‑NH‑，‑O‑；R₁，R₂代表C_1‑3烷氧基或氢；R₃为4‑氟、4‑氯、2‑氯、4‑溴、2,4‑二氯、4‑甲基、4‑甲氧基、氢、4‑三氟甲基、2,4‑二甲氧基。本发明涉及式(I)化合物和其盐的制备方法及其用途。该类化合物或其盐对大肠癌细胞株HCT‑116人肺癌细胞株A549及乳腺癌细胞株MCF‑7具有很强的抑制活性。该类化合物抗癌活性广谱，可作为治疗肿瘤、癌症等疾病的药物或先导化合物。

Description

喹唑啉衍生物的制备方法及其用途

技术领域

本发明属药物合成技术领域，涉及一类结构新颖的喹唑啉衍生物，具体涉及4-位被异噁唑杂环取代的喹唑啉衍生物的制备及含该类衍生物的药物组合物及其用途。该类化合物或其盐对大肠癌细胞株HCT-116人肺癌细胞株A549及乳腺癌细胞株MCF-7具有很强的抑制活性。该类化合物抗癌活性广谱，可作为治疗肿瘤、癌症等疾病的药物或先导化合物。

背景技术

癌症是以细胞异常增殖及转移为特点的一大类疾病，是人类第二大致死病因，仅次于心脑血管疾病。根据世界卫生组织统计，2008年全世界约有760万人死于癌症，占全年总死亡人数的13%。导致死亡的主要癌症种类有：肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和乳腺癌等。尤其是近年来肺癌成为发病率最高的肿瘤，世界卫生组织公布的数据表明，在2008年全世界被诊断为肺癌的人数为1.61亿人，占癌症总发病人数的13%。大部分癌症发现时已是中期至晚期，治疗总体效果较差，尤其是多药耐药性的不断出现，使得癌症的治疗困难重重，癌症已对人类的生存造成巨大威胁。因此，必须开发出活性高、副作用低的新型抗癌药物来满足临床的需求。

传统的抗癌药物主要是细胞毒类药物，这类抗癌药物主要作用于细胞的DNA、RNA和微管蛋白等，并且大多数是非选择性的。在杀伤癌细胞的同时，对机体的正常细胞也有杀伤力。因此传统的抗癌药物大部分选择性差、毒副作用强、易产生耐药等。

为了克服传统抗癌药物的这些缺点，基于靶向抗癌药物的开发成为了热点。确切的作用靶点是靶向药物研发的关键，表皮生长因子受体酪氨酸激酶(Epidermal GrowthFactor Receptor Tyrosine Kinase,EGFR-TK)是最早发现的蛋白酪氨酸激酶，广泛地分布于人体各组织的细胞膜上，其在大多数肿瘤(如：膀胱癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、食道癌等)中过表达，EGFR的胞内区有三磷酸腺苷(ATP)的结合位点，EGFR抑制剂可以竞争性的与ATP结合位点相结合，从而抑制EGFR的磷酸化，阻断下游信号的传导，进而抑制肿瘤细胞的生长、分化和转移。因此EGFR受体已作为设计合成抗肿瘤药物经久不衰的靶点之一。基于该受体所开发的抗肿瘤药物在临床研究中也已经取得了显著的疗效。其中以喹唑啉为母核的小分子化合物研究最为突出。

基于EGFR受体和以喹唑啉为母核的小分子抗肿瘤药物如：吉非替尼(易瑞沙)、厄罗替尼(特罗凯)和拉帕替尼已相继被FDA批准用于临床。浙江贝达药业公司研发的基于厄罗替尼的EGFR受体抑制剂埃克替尼(凯美纳)，三期临床研究表明其疗效和吉非替尼相当，安全性更好，给药剂量和方案更适合中国人，已于2011年6月被中国食品药品监督管理局批准用于晚期非小细胞肺癌的治疗。

专利申请公开号WO96/33977、WO96/33978、WO96/33979、WO96/33980、WO96/33981、WO97/30034、WO97/30035、WO97/38994、WO98/13354、WO00/55141、WO00/56720、WO02/41882、WO03/82290、EP566226和EP837063公开了在4-位上携带苯胺基取代和在6-和/或7-位上携带取代基的某些喹唑啉化合物，具有受体酪氨酸激酶抑制活性。上述所有文献引入本文作为参考。

专利申请公开号WO03/082831公开了在6-位上被杂环基氧基或杂环基烷氧基取代的4-(2，3-二卤代苯胺基)喹唑啉化合物，所述化合物是erbB尤其是EGFR酪氨酸激酶抑制剂。上述所有文献引入本文作为参考。

在我们的前期工作中，我们设计合成了6,7-位被烷氧基取代，2-位被苯环取代，4-位被异噁唑杂环取代的喹唑啉衍生物对肺癌细胞A549，大肠癌细胞HCT-116瘤株具有显著的抑制活性（卢灿忠，雍建平，中国专利申请公开号：CN103360382A）。

为了合成结构新颖的喹唑啉衍生物，丰富喹唑啉类化合物的种类、探讨其构效关系，并为抗癌药物的筛选提供丰富的先导化合物或候选化合物，本发明基于专利申请公开号CN103360382A基础，将3-取代苯基-异噁唑-5-甲醇和3-取代苯基-异噁唑-5-甲胺引入6,7-二甲氧基-2-氯-喹唑啉的4位，合成了一系列4-位被异噁唑杂环取代的新颖喹唑啉衍生物。体外抗癌活性研究表明该类化合物对大肠癌细胞株HCT-116、人肺癌细胞株A549及乳腺癌细胞株MCF-7具有很强的抑制活性。该类化合物抗癌活性广谱，可作为治疗肿瘤、癌症等疾病的药物或先导化合物。

发明内容

本发明的目的在于，提供了如式I所示的含异噁唑杂环的喹唑啉化合物。经过活性研究表明，该类化合物对大肠癌细胞株HCT-116、人肺癌细胞株A549及乳腺癌细胞株MCF-7具有很强的抑制活性。

本发明通过如下技术方案实现：

一种式I所示的喹唑啉化合物，或其药学上可接受的盐

其中：R₁、R₂、R₃、R₄、Z和n代表的基团如以下各项所述：

（1）R₁、R₂可以相同，也可以不同；分别选自自氢，C₁～C₆烷氧基，卤代C₁～C₆烷氧基，C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷氧基，C₃-C₈环烷氧基；

（2）Z可选自O、N、S;

(3)R₃选自氢、卤素，氰基，硝基，C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基或卤代C₁～C₆烷基;

(4)R₄可选自氢、卤素，C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基、卤代C₁～C₆烷基或芳香基或取代芳香基;

（5）n为0-5的整数

根据本发明的更优选技术方案，式I中：

（1）R₁和R₂均为甲氧基；

（2）Z选自O、NH;

(3)R₃选自氢、氟、氯、溴、甲基、甲氧基或三氟甲基，

(4)R₄选择氯;

（5）n为0、1、2的整数

根据本发明，所述式I所示的喹唑啉化合物更优选选自下述任一种化合物：

6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-三氟甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氟-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氨基-]-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-三氟甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氟苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

式I所示的喹唑啉化合物，可以分别选择与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。其中术语“药学上可接受的盐”包括但不限于与无机酸形成的盐，如盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐、及其类似盐；也包括与有机酸形成的盐，如乳酸、草酸、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、三氟乙酸或氨基酸和链烷酸盐如醋酸盐，HOOC-(CH2)n-COOH其中n是0-4的盐，及其类似盐。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。

本发明还提供一种包括前述任一项的式I所示的喹唑啉衍生物和医学上可接受的一种或多种选自填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、防腐剂和包衣材料形成的药物组合物。

本发明还提供一种药物组合物，其包括前述任一项的式I所示的喹唑啉化合物，或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体或稀释剂。

根据本发明的药物制剂，其特征在于，所述制剂优选为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

根据本发明的药物制剂，所述制剂选自片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、颗粒剂、口服溶液剂、注射用水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

本发明还提供一种式I所示的喹唑啉化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抗肿瘤或癌症药物中的应用。

根据本发明，所述的肿瘤或癌症是与EGFR过渡表达和/或活性过高的癌症。更优选地，所述肿瘤或癌症选自：膀胱癌，非小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，头颈癌，结肠癌，咽癌，和胰腺癌等，更是非小细胞肺癌中的应用。

本发明还提供一种式I所示的含异噁唑杂环的喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

以6,7-二甲氧基2，4-二氯-喹唑啉和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑（式II）或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑（式III）为原料，在干燥的有机溶剂和碱性缚酸剂体系中反应制备。

如果需要，可以将式（II）和式（III）中的任何官能团予以保护。

并且其后，如果有必要（以任何次序）：

（1）除去任何保护剂，和

（2）形成式I化合物的药学上可接受的盐。

根据本发明，所述反应温度为-20℃至回流条件，优选室温至回流条件。

根据本发明，所述有机溶剂为苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、异丙醇、四氢呋喃或DMF，更优选异丙醇。

根据本发明，所述碱性缚酸剂为有机碱或无机碱，所述有机碱优选为三乙胺、三丙胺、DMAP、叔丁醇钾等；所述无机碱优选为碳酸钾、氢化钠、碳酸钠等。优选的缚酸剂为三乙胺。

根据本发明，所述式（II）的中间体3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑或式（III）的中间体3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑可通过如下方法制备：

以取代苯甲醛为原料，通过合成肟、1,3-偶极环加成反应、甲磺酰酯化反应、叠氮化、还原反应制备(R₃如上所述)，具体见下述流程：

术语”有效量”指的是，所述至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐对于能有效“治疗”个体的一种疾病或不适的用量。如果是癌症时，有效量能减少癌症或肿瘤细胞的数目；缩小肿瘤的大小；抑制或阻止肿瘤细胞向周边器官的侵入，例如，肿瘤蔓延入软组织或骨骼中；抑制或阻止肿瘤的转移；抑制或阻止肿瘤的生长；一定程度上减轻一种或多种与癌症相关的症状；减少发病率和死亡率；提高生活质量；或者是上述效果的结合。有效量可以是通过抑制EGFR活性来减少疾病症状的用量。对于癌症治疗，体内实验的效果可以通过评估如存活期、疾病进展时间(Time to Disease Progression，TTP)、反应率(Response Rates，RR)、持续反应期和/或生活质量来测量。专业人员已经意识到，有效量可以随着给药的途径、赋形剂的剂量、以及与其他药物的合用而变化。

术语“有效量”还可指得是所述至少一种化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐对抑制EGFR的过度表达和/或活性过高有效的剂量。

本发明的化合物具有抗肿瘤、抗癌活性，尤其是对人肺癌细胞株A549具有很强的抑制活性，化合物Q-7抑制肺癌细胞株A549的IC₅₀为1.044μM，比阳性对照药吉非替尼活性高17倍（吉非替尼对肺癌细胞株A549的IC₅₀为17.9μM）；化合物Q-2对肺癌细胞株A549也显示出和阳性对照药相当的抑制活性，其IC₅₀为24.07μM.化合物Q-2同时对大肠癌细胞株HCT-116也显示出较强的抑制活性，其IC₅₀为31.8μM（吉非替尼抑制大肠癌细胞株HCT-116的IC₅₀为21.55μM）；化合物Q-7也对大肠癌细胞株HCT-116具有较强的抑制活性，其IC₅₀为58.9μM；化合物Q-7和Q-8对乳腺癌细胞株MCF-7具有极强的抑制活性，其IC₅₀分别为0.199和0.178nM。

因而本发明的化合物具有广谱的抗癌、抗肿瘤活性，可作为治疗肿瘤、癌症的候选药物或先导化合物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是，下述实施例不能作为对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上做出的改进都不违背本发明的精神。

其中，中间体和目标化合物的合成过程均以实施例中的代表说明，其余的中间体和目标化合物的合成过程同代表化合物。

仪器与试剂：

AVANCE III核磁共振仪(400MHz,DMSO-d₆,TMS为内标)，离子阱液质连用仪(DECAX-30000LCQ Deca XP)，XT5数字显示显微熔点测定仪(北京市科仪电光仪器厂制造，温度未经校正)，可调波长式微孔板酶标仪(Molecular Devies SPECTRAMAX190).可调波长式微孔板酶标仪(Molecular Devies SPECTRAMAX190)。化学试剂均为市售的分析纯或化学纯试剂，RPMI1640购自Gibco公司，噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)购自Sigma公司,6,7-二甲氧基-2,4-二氯喹唑啉可以通过文献报道的方法合成或购买；其它试剂均为市售的分析纯，在使用前没有特殊说明未进行处理，异丙醇在使用前用干燥分子筛处理。

实施例1中间体3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑（II）或中间体3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑（III）的合成：

其中以R₃为H作为示例：

（1）苯甲醛肟的合成

10.0mmol苯甲醛溶解在30mL30%CH₃OH和H₂O溶液中，加入装有磁力搅拌器的三角瓶中，搅拌下加入10.0mmol盐酸羟氨，等盐酸羟氨溶解后缓慢加入5.0mmol干燥研细的碳酸钠。室温反应，TLC检测反应完成后，体系减压蒸除甲醇后，加入30mL H₂O，二氯甲烷(3×30mL)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥有机层.脱溶剂即得苯甲醛肟粗产物，收率86.2%。该粗产物不用分离纯化直接进行下步反应。

（2）3-苯基-5-羟甲基-异噁唑

将10.0mmol苯甲醛肟和30mL干燥的二氯甲烷加入250mL单口圆底烧瓶中，搅拌下加入1.60g(12.0mmol)N-氯丁二酰亚胺（NCS），微微加热至NCS全部溶解后，滴加0.56g(10.0mmol)2-丙炔-1-醇，随后缓慢滴加入20mL含10.1g(10.0mmol)三乙胺的二氯甲烷溶液，加完后体系回流.TLC检测反应完成后，母液水洗，无水硫酸钠干燥，柱分离(V_石油醚:V_乙酸乙酯5:1～2：1)即得3-苯基-5-羟甲基-异噁唑，收率76.8%。

（3）3-苯基-5-氨甲基-异噁唑

将10.0mmol5-羟甲基-3-苯基-异噁唑和30mL干燥的二氯甲烷加入250mL单口圆底烧瓶中，冰浴搅拌下将含1.01g(10.0mmol)三乙胺的20mL二氯甲烷溶液加入体系中，接着将溶有1.37g(12.0mmol)甲磺酰氯(MsCl)的5mL二氯甲烷溶液缓慢滴加入体系中，冰浴反应2h后，室温反应。TLC检测反应完成后，母液水洗，5%的碳酸氢钠溶液洗，水洗，无水硫酸钠干燥，减压脱溶剂得粗产物5-甲磺酸-3-苯基-异噁唑-5-甲醇酯，收率68.0%。粗产物不必纯化直接进行下步反应。

将5.0mmol5-甲磺酸-3-苯基-异噁唑-5-甲醇酯溶解在20mL干燥的DMF中，加入0.34g（5.20mmol）叠氮化钠，室温搅拌溶解后，置于45℃-50℃油浴中反应，TLC指示反应完成后，过滤，滤饼用乙醚（2×30mL）洗涤，合并有机层，向有机层中加100mL水，用乙醚（5×30mL）萃取，合并有机层，有机层水洗2次，无水硫酸钠干燥，脱溶剂后得粗产物3-苯基-5-叠氮甲基-异噁唑，收率90%，粗产物直接进行下面的还原反应.

5.0mmol5-叠氮甲基-3-苯基-异噁唑溶解在80mL乙醇和20mL水的混合溶液中，将0.17g（2.6mmol）的锌粉和0.28g（5.2mmol）的NH₄Cl加入体系，回流1h，真空脱去乙醇，向体系加入20mL水，用20%的氢氧化钠溶液调至pH值到12，向体系中加入50mL DCM，搅拌均匀后，过滤，滤渣在用少量的水溶解，过滤，合并两次的滤液，分出有机层，有机层，水洗，无水硫酸钠干燥，真空脱溶剂,残渣柱分离（V_二氯甲烷：V_甲醇，10：1）得产物3-苯基-5-氨甲基-异噁唑，收率75%.浅黄色固体,m.p:39～40℃,¹H-NMR(400MHz,CDCl₃,TMS),δppm:1.60（s,2H,NH₂）,3.91(s,2H,CH₂),6.40(s,1H),7.39(m,2H,Ar-H),7.76(m,2H,Ar-H).

实施例2式I所示的喹唑啉衍生物的合成：

其中以R₃为H作为示例来说明：

（1）6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-喹唑啉的合成

将0.259g(1mmol)的6,7-二甲氧基-2,4-二氯-喹唑啉溶解在5mL干燥的异丙醇中，搅拌下将溶有0.175g(1mmol)5-羟甲基-3-苯基-异噁唑的5mL异丙醇溶液缓慢滴加入反应体系，接着加入0.101g(1mmol)新蒸的三乙胺，体系室温搅拌30min后，50℃反应，TLC检测反应完成后，反应液真空浓缩，残渣直接柱分离V_{（石油醚）}：V_{（乙酸乙酯）}=5:1～2:1）即得目标化合物[6,7-二（甲氧乙氧基）]-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉(Q-1)。其余的化合物按照6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-喹唑啉的合成过程合成。

（2）6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氨基-]-喹唑啉的合成

将0.259g(1mmol)的6,7-二甲氧基-2,4-二氯-喹唑啉溶解在5mL干燥的异丙醇中，搅拌下将溶有0.175g(1mmol)5-氨甲基-3-苯基-异噁唑的5mL异丙醇溶液缓慢滴加入反应体系，接着加入0.101g(1mmol)新蒸的三乙胺，体系室温搅拌30min后，50℃反应，TLC检测反应完成后，反应液真空浓缩，残渣直接柱分离V_{（石油醚）}：V_{（乙酸乙酯）}=5:1～2:1）即得目标化合物[6,7-二（甲氧乙氧基）]-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉(Q-11)。其余的化合物按照6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氨基-]-喹唑啉的合成过程合成。

其结构均通过IR,¹H NMR,ESI-MS等分析方法进行了表征。优选出的化合物的物性常数及光谱数据以列表的形式进行说明：

优选出的化合物的结构、编号及名称如下表所示：

表1-优选化合物结构、编号及名称

表2-表1化合物的¹H NMR数据

表3-表1部分化合物的MS数据

代号	MS(100%)	代号	MS(100%)
				Q-1	398([M+1],100)	Q-2	412([M+1]<sup>+</sup>,100)
Q-4	427([M]<sup>+</sup>,5)	Q-5	457([M]<sup>+</sup>,25)
				Q-7	432([M]<sup>+</sup>,80)	Q-8	432([M]<sup>+</sup>,87)
Q-9	467([M+1]<sup>+</sup>,10)	Q-15	457([M+1]<sup>+</sup>,85)

实施例3生物活性试验

采用MTT法进行了抗大肠癌细胞株HCT-116、人肺癌细胞株A549及乳腺癌细胞株MCF-7的活性筛选。具体的筛选过程如下：

（1）将肺癌细胞株A549铺于96孔板中，加入100μL培养基培养，待细胞长至90%，将1μL药品加入孔中，每种药品检测8种不同的浓度（分别为药品的初始浓度，50μM,5μM,500nM,50nM,5nM,500pM,50Pm），每种药品浓度平行做3个复孔，培养18h之后,在每个孔中加入配置好的5mg/mL MTT溶液20μL,4小时后将培养基吸出，每孔加入150μLDMSO，在595nm波长下测定其光密度（OD）值。其中阴性对照为DMSO。按照公式计算抑制率。

其IC₅₀值由GraphPad Prism5软件计算得出。

（2）大肠癌细胞株HCT-116及乳腺癌细胞株MCF-7的筛选过程同肺癌细胞株A549的筛选过程。

优选出的化合物抑制大肠癌细胞珠HCT-116、人肺癌细胞A549及乳腺癌细胞株MCF-7的活性结果见下表4、表5和表6。

表4-式(I)中部分实施例化合物抑制大肠癌细胞珠HCT-116活性测试结果

表5-式(I)中部分实施例化合物抑制人肺癌细胞A549的活性测试结果

表6-式(I)中部分实施例化合物抑制乳腺癌细胞株MCF-7的活性测试结果

Claims (11)

1.一种式I所示的喹唑啉衍生物及其药学上可接受的盐

其中：R₁、R₂、R₃、R₄、Z和n代表的基团如以下各项所述：

(1)R₁、R₂可以相同，也可以不同；分别选自氢，C₁～C₆烷氧基，卤代C₁～C₆烷氧基，C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷氧基，C₃-C₈环烷氧基；

(2)Z选自O、NH、S；

(3)R₃选自氢、卤素，氰基，硝基，C₁～C₆烷基、C₁～C₆烷氧基或卤代C₁～C₆烷基；

(4)R₄选自卤素；

(5)n为0-5的整数。

2.根据权利要求1所述的衍生物及其药学上可接受的盐

其中：R₁、R₂、R₃、R₄、Z和n代表的基团为：

(1)R₁和R₂均为甲氧基；

(2)Z选自O、NH；

(3)R₃选自氢、氟、氯、溴、甲基、甲氧基或三氟甲基；

(4)R₄选择氯；

(5)n为0、1、2的整数。

3.根据权利要求1或2所述的衍生物及其药学上可接受的盐，其中所述的衍生物选自：

6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氧基-]-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-三氟甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氟-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-溴苯基)-异噁唑-5-基]-甲氧基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-[(3-苯基-异噁唑-5-基)-甲氨基-]-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-三氟甲基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二甲氧基-苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氟苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(2,4-二氯苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉；

6,7-二甲氧基-2-氯-4-{[3-(4-溴苯基)-异噁唑-5-基]-甲氨基-}-喹唑啉。

4.一种药物组合物，其包括权利要求1-3中任一项所述的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体或稀释剂。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含一种或多种选自填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、矫味剂、防腐剂和包衣材料的药学可接受的辅助材料。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为制剂形式；所述制剂为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述制剂选自片剂、胶囊、颗粒剂、口服溶液剂、注射用水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述制剂选自分散片、肠溶片、咀嚼片或口崩片。

9.一种权利要求1-3任一项所述的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于抗癌症药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其中所述的癌症是与EGFR过渡表达和/或活性过高的下列癌症：膀胱癌，卵巢癌，乳腺癌，胃癌，食道癌，肺癌，头颈癌，结肠癌，咽癌和胰腺癌。

11.一种权利要求1-3任一项的式I所示的喹唑啉衍生物的制备方法，其特征在于：所述的方法包括如下步骤：

6,7-二甲氧基-2,4-二氯喹唑啉和3-取代苯基-5-羟甲基-异噁唑(式II)或3-取代苯基-5-氨甲基-异噁唑(式III)为原料，在干燥的有机溶剂和碱性缚酸剂体系中反应制备：

如果需要，可以将式(II)和(III)中的任何官能团予以保护；

并且其后，如果有必要以任何次序：

(1)除去任何保护剂，和

(2)形成式I化合物的药学上可接受的盐。