CN103781483A - 包含抗生素及溶血磷脂酰胆碱的免疫增强或细菌性感染疾病治疗用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含溶血磷脂酰胆碱或其类似物及抗生素作为有效成分的免疫增强或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物、包括上述物质给药步骤的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法以及包含上述物质的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒。

Description

包含抗生素及溶血磷脂酰胆碱的免疫增强或细菌性感染疾病治疗用组合物

技术领域

本发明涉及包含溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine）或其类似物以及抗生素作为有效成分的免疫增强或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物、包括上述物质给药步骤的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法以及包含上述物质的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒。

背景技术

细菌性感染疾病为细菌出现在血液、体液及组织内，并开始栖息的同时产生的疾病，随着抗生素抗性微生物的增加，导致开发的新抗生素不足，从而较大地威胁着人类。细菌性感染疾病包括腹膜炎、肺炎、骨髓炎、蜂窝织炎、脑膜炎、肾炎、肠炎、胃炎、食管炎、十二指肠炎、大肠炎及败血症等。就这种细菌性感染疾病而言，可处于伴随有免疫系统无法正常感应到感染的中性粒细胞减少的发热状态，或者当抑制免疫系统时（例如，从像艾滋病（AIDS）一样的免疫缺陷病或正在免疫抑制剂给药中的患者），针对感染没有中性粒细胞减少地可伴随有发热。最近，随着出现针对抗生素的耐药菌的表达增大，治疗细菌性感染疾病的难度也增大。

尤其，败血症是指被微生物感染，使得全身出现严重的炎症反应的状态。仅在美国，因败血症而死亡的人数一年内超过200000名（Hoyert et al.Deaths：final data for1997.Natl.Vital Stat.Rep.47:1-104（1999）），已知败血症为因内部免疫的缺陷及过多的淋巴细胞凋亡而使免疫功能受损的症状。免疫抑制最终被认为败血症引起的死亡的重要的因子，高容量的化学治疗或放射治疗引起的从免疫功能的缺陷的恢复以重要的临床问题而留着。已知，就败血症患者而言，与干扰素-γ（IFN-γ，Interferon-γ）一起，巨噬细胞的活性化对败血症患者具有有用的效果，在患有败血症的实验动物中，嗜中性粒细胞以上的抑制以及淋巴细胞凋亡的抑制也对败血症动物具有有用的效果（Yan et al.Therapeutic effects of lysophosphatidylcholine in experimental sepsis.Nat.Med.10：161-167（2004））。

另一方面，已知，溶血磷脂酰胆碱（LPC，Lysophosphatidylcholine）作为氧化的低密度脂蛋白的主要结构要素对治疗败血症有用（Yanet al.Therapeutic effects of lysophosphatidylcholine in experimentalsepsis.Nat.Med.10：161-167（2004））。

在本说明书全文中，参照了多篇对比文件及专利文献，并示出了其引用。引用的文献及专利的公开内容全部插入于本说明书中作为参照，这能够使本发明所属技术领域的水准及本发明的内容更加明确。

发明内容

要解决的问题

本发明人为了开发用于从大量的感染中将溶血磷脂酰胆碱的治疗效果极大化的方法而锐意努力。其结果，当溶血磷脂酰胆碱及抗生素给药时，确认了与抗生素或溶血磷脂酰胆碱的单独给药情况相比，针对免疫增强或细菌性感染疾病的治疗效果显著提高，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的在于，提供免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用组合物。

本发明的再一个目的在于，提供免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法。

本发明的另一个目的在于，提供免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒。

以下发明内容、发明要求保护范围及附图使本发明的其他目的及优点更加明确。

解决问题的手段

根据本发明的一实施方式，本发明提供包含（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素作为有效成分的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物。

本发明人为了开发用于从大量的感染中将溶血磷脂酰胆碱的治疗效果极大化的方法而锐意努力。其结果，当溶血磷脂酰胆碱及抗生素给药时，确认了与抗生素或溶血磷脂酰胆碱的单独给药情况相比，针对免疫增强或细菌性感染疾病的治疗效果显著提高，从而完成了本发明。

在本说明书中，术语“溶血磷脂酰胆碱或其类似物”通常意味着作为基于磷脂酶活性的磷脂酰胆碱的部分水解的结果，去除一个脂肪酸基的磷脂酰胆碱的类似物。在本发明中，只要与抗生素并用时增强免疫，或者通过增强免疫来对细菌性感染疾病具有治疗效果，那么就无限地包含溶血磷脂酰胆碱及其类似物。

根据本发明的优选的一个实施例，本发明的溶血磷脂酰胆碱为由以下化学式1表示的化合物或由以下化学式2表示的溶血磷脂酰胆碱的醚类似物。

化学式1

在上述式中，R₁为C_4-30的烷基或具有一种或一种以上的双键的C_4-30的烯基。

化学式2

在上述式中，R₂为C_4-30的烷基或具有一种或一种以上的双键的C_4-30的烯基。

优选地，本发明的化学式1的化合物选自包含_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、硬脂酰（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，Stearoyl；Lysolecithin，stearoyl）；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、肉豆蔻酰（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，myristoyl）；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，Palmitoyl；Lysolecithin，palmitoyl）、；_DL-_α-溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰（_{D L}-_α-Lysophosphatidylcholine，Palmitoyl）；以及_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、油酰（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，Oleoyl；Lysolecithin，oleoyl）的组。

优选地，本发明的化学式2的化合物选自包含_L-_α-溶血磷脂酰胆碱，_γ-O-烷基-1-烯基（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，_γ-O-Alk-1-Enyl；Lysophosphatidalcholine）；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱，_γ-O-烷基（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，_γ-O-Alkyl；Lyso-platelet activating factor）；_DL-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-十六烷基（_DL-_α-Lysophosphatidylcholine，_γ-O-Hexadecyl；rac-Lyso-platelet activating factor）；以及_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-十六烷基（_L-_α-Lysophosphatidylcholine，_γ-O-Hexadecyl；Lyso-platelet activating factor；Lyso-PAF-C16）的组。

溶血磷脂酰胆碱及其类似物为哺乳动物体内的内在性物质，因而其安全性就等于被证明了。

优选地，本发明的溶血磷脂酰胆碱还包含其同分异构体（isomer）。在本发明的一实施例中，确认了溶血磷脂酰胆碱的同分异构体及抗生素的并用给药与单独给药相比，对免疫增强及细菌性感染疾病产生优秀的治疗效果（表4及表5）。

在本说明书中，术语“抗生素”作为用微生物生产的代谢产物以少量抑制其他微生物的生长或者使其他微生物死灭的物质，都包含由原来存在于自然界的抗生物质制成的和化学合成的。根据本发明的目的，如果本发明的抗生素为可将以与溶血磷脂酰胆碱或其类似物并用的方式给药，来将溶血磷脂酰胆碱或其类似物的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗效果极大化的抗生素，则无限制地包含。

优选地，本发明的抗生素选自包含碳青霉烯类（carbapenem）抗生素、头孢菌素类（cephalosporin）抗生素、糖肽类（glycopeptide）抗生素、青霉素类抗生素、喹诺酮类（quinolone）抗生素、丝氨酸蛋白酶类（serine protease）抗生素、多粘菌素类（polymyxin）抗生素、氨基糖苷类（aminoglycoside）抗生素、抑菌类（bacteriostatic）抗生素及上述抗生素的组合的组。

更优选地，上述碳青霉烯类抗生素包含多利培南（Doripenem），上述头孢菌素类抗生素包含头孢曲松钠（Ceftriaxone sodium），上述糖肽类抗生素包含盐酸万古霉素（Vancomycin hydrochloride），上述青霉素类抗生素包含青霉素钾（Potassium benzylpenicillin），上述喹诺酮类抗生素包含DW286（7-[3-（氨甲基）-4-（甲氧亚氨基）-3-甲基四氢-1H-1-吡咯]-1-环丙基-6-氟代-4-氧代-1、4-二氢[1，8]萘啶-3-羧酸盐酸盐）（DW286（7-[3-（aminomethyl）-4-（methoxyimino）-3-methyltetrahydro-1H-1-pyrrolyl]-1-cyclopropyl-6-fluoro-4-oxo-1、4-dihydro[1，8]naphthyridine-3-carboxylic acid hydrochloric acid salt））及环丙沙星盐酸盐水合物（Ciprofloxacin hydrochloride hydrate），上述丝氨酸蛋白酶类抗生素包含屈曲可近α（活性化）（Drotrecogin alfa（activated）），上述多粘菌素类（polymyxin）抗生素包含粘菌素（colistin），上述氨基糖苷类（aminoglycoside）抗生素包含妥布霉素（tobramycin），上述抑菌类（bacteriostatic）抗生素包含梭链孢酸（fusidic acid）。

在本发明中，可根据所包含的抗生素的种类，来决定包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的比例。

根据本发明的优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-45，优选为1:0.2-45，更优选为1:0.3-45，尤其优选为1:0.4-45，进而优选为1:0.5-45。

根据本发明的更优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-44，优选为1:0.2-44，更优选为1:0.3-44，尤其优选为1:0.4-44，进而优选为1:0.5-44。

根据本发明的更优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱及其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-43，优选为1:0.2-43，更优选为1:0.3-43，尤其优选为1:0.4-43，进而优选为1:0.5-43。

根据本发明的更优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-42，优选为1:0.2-42，更优选为1:0.3-42，尤其优选为1:0.4-42，进而优选为1:0.5-42。

根据本发明的更优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-41，优选为1:0.2-41，更优选为1:0.3-41，尤其优选为1:0.4-41，进而优选为1:0.5-41。

根据本发明的更优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的溶血磷脂酰胆碱或其类似物与抗生素之间的重量比可以为1:0.1-40，优选为1:0.2-40，更优选为1:0.3-40，尤其优选为1:0.4-40，进而优选为1:0.5-40。

在本说明书中，术语“DW286”可与“DW286AA”或“DW286aa”混用地使用。

根据本发明的优选的一个实施例，包含在本发明的组合物的DW286与溶血磷脂酰胆碱或其类似物之间的重量比可以为1:0.1-5，优选为1:0.2-5，更优选为1:0.3-5，尤其优选为1:0.4-5，尤其优选为1:0.5-5，尤其优选为1:0.6-5，尤其优选为1:0.7-5，尤其优选为1:0.8-5，尤其优选为1:0.9-5，尤其优选为1:1-5，尤其优选为1:1-4，尤其优选为1:1-3，尤其优选为1:2。

本发明涉及通过将抗生素和溶血磷脂酰胆碱或其类似物并用给药，来对免疫增强或细菌性感染疾病治疗产生增强作用的组合物，增强作用（synergistic effect）是指，当将两种以上的成分调配而使用时，发挥高于单一成分给药时发挥的效果之和的效果，或者发挥意料之外的不同的效果。上述术语“调配”是指，两种以上的成分同时混合给药，或者这些成分依次分别给药的过程。

在本发明的一实施例中，为了确认将LPC及DW286并用给药来增强免疫和治疗细菌性感染疾病的效果，CPA-CLP引起的败血症小鼠及CPA-处理的免疫抑制和/或变异的小鼠中，对Mix组（LPC：DW2862:1）、LPC-DW286组（预先给药LPC后的DW286给药组）、DW286-LPC组（预先给药DW286后的LPC给药组）、LPC单独给药组及DW286单独给药组进行了评价。其结果，从作为抗生素及LPC并用给药组的Mix组、LPC-DW286组及DW286-LPC组中，观察到了与单独给药组相比增强的免疫增强效果及细菌性感染治疗效果，从DW286-LPC组中，观察到了最高的免疫增强效果及细菌性感染治疗效果（表13）。同时，除了DW286之外，分别将环丙沙星盐酸盐水合物、青霉素钾、头孢曲松钠、多利培南、盐酸万古霉素或屈曲可近α（活性化）、粘菌素、妥布霉素及梭链孢酸与LPC并用给药的情况下，产生了与LPC单独给药组相比增强的免疫增强效果及细菌性感染治疗效果（表6至表11）。

具体地，小鼠模型的死亡数测定结果显示，在DW286-LPC组中，观察到了高的生存比例（表12及表13），察看器官重量（胸腺及脾脏）的变化，可见，DW286-LPC组有效地抑制因给药CPA而引起的淋巴器官重量的减少（表15）。进而，察看血液白细胞数的变化，结果发现了，具有显著性的白细胞数的增加局限于DW286-LPC给药组（表16），白细胞的分类计数（counts）的变化也同样，与LPC单独给药组相比，DW286-LPC给药组产生了更优秀的效果（表16）。测定了淋巴细胞的减少和显著的与脾脏萎缩相关的变化，其结果，DW286-LPC组与其他组（图7及图8）相比，对淋巴细胞的减少和脾脏萎缩呈现较高的抑制倾向（表18）。并且，察看胸腺及脾脏的免疫组织化学结果，可见CPA导致脾脏及胸腺内CD3+、CD4+、CD8+及TNF-α+细胞明显减少，但通过将LPC及DW286-LPC并用给药，来比较有效地抑制了因将CPA给药而引起的这些细胞的减少，与单独给药LPC相比，在DW286-LPC给药组中，观察到了更优秀的效果（表19）。基于这种结果，可知，本发明的并用制剂组合物增强免疫或者通过增强免疫来对治疗细菌性感染疾病有效。

在本说明书中，术语“细菌性感染疾病”是指，可通过增强免疫来治疗的，从渗透到生体内的细菌受到间接/直接影响而引起的疾病，包括作为免疫系统被抑制之后感染的疾病的没有中性粒细胞减少地像艾滋病等免疫缺陷性疾病，或将免疫抑制剂给药中的患者伴随发热或者对抗生素具有耐药性等多种疾病。

优选地，本发明的细菌性感染疾病包括腹膜炎、肺炎、骨髓炎、蜂窝织炎、脑膜炎、肾炎、心脏炎、肠炎、胃炎、食管炎、十二指肠炎、大肠炎或败血症。在本发明的一实施例中，执行盲肠结扎穿孔（CLP，Cecal Ligation and Puncture），来引起了腹膜炎。在本发明的一实施例中，利用处理CLP及环磷酰胺·H₂O（CPA，Cyclophosphamide·H₂O）的模型，来确认了本发明的并用制剂组合物的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗效果。CPA为抑制免疫系统的免疫反应的物质，因而可知本发明的组合物也对免疫反应被抑制（免疫功能下降）的疾病有效。

在说明书中，术语“免疫”作为存在于动物体内的自我防御体系，是指将从外部侵入的各种物质或生命体与其自身区别开来，从而去除上述侵入物的生物学现象。

在本发明中，术语“免疫增强”是指使宿主的特异或非特异、细胞性免疫和/或体液性免疫反应增强的现象。在本发明的组合物中，在免疫被抑制的状态下，也通过将抗生素和LPC或其类似物的并用给药来产生免疫增强效果，通过这种免疫增强，来最终对细菌性感染疾病的治疗有用。

本发明的组合物包含药学上可接受的载体，并且可被剂型化，以用于人体或兽医。

口服给药用的药剂学组合物能够以不同的单位，例如能够提出胶囊剂或片剂；散剂或颗粒剂；溶剂、糖浆或悬浮剂（水性或非-水性液状物中；食用发泡剂或搅打搅打剂（whip）或乳剂）。

适于片剂或硬质明胶胶囊的赋形剂有乳糖、玉米淀粉或其衍生物、硬脂酸或其盐。适合用于软质明胶胶囊的赋形剂例如有植物油、蜡、脂肪、半固体物或液态多元醇等。为了制备溶剂及糖浆剂可使用的赋形剂例如有水、多元醇及糖。为了制备悬浮剂，可使用油（例如，植物油）来提供水包油或油包水悬浮剂。适用为经皮给药用的药剂学组合物能够提出用于可长时间与需用者的表皮亲密接触的不同的贴片。

非口服给药用的药剂学组合物包含：可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂（bacteriostat）及溶质（实质上与需用者的血液呈现等张性）的水性及非-水性灭菌注射溶剂；以及可包含悬浮剂及增稠剂的水性及非-水性灭菌悬浮剂。可用在注射用溶剂的赋形剂例如包含水、乙醇、多元醇、甘油及植物油。可向单位-容量（一次量）或多-容量（数次量）容器例如向密封的安瓿及小瓶提出这种组合物，在使用之前，可在灭菌性液状载体，例如在仅要求附加注射用数的冷冻-干燥条件下储存上述组合物。方便的注射溶剂及悬浮剂可从灭菌性散剂、颗粒剂及片剂制备。

根据本发明的再一个实施方式，本发明提供包括将治疗学有效量的（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素个体化给药的步骤的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法。

在本发明的治疗方法中，上述溶血磷脂酰胆碱或其类似物、抗生素、免疫增强及细菌性感染疾病与上述内容相同，为了避免本说明书中的不必要的反复记载引起的过于复杂的情况，共同事项将被省略。

根据本发明的优选的一个实施例，上述物质的并用给药可根据各个抗生素的种类来同时或依次将（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素给药。可根据患者的疾病种类及重症度、年龄、性别、药物的活性、对药物的敏感度、给药时间、给药途径及排出比例、治疗时间、包含同时使用的药物的因素及其他医学领域中熟知的因素来决定给药间隔。并且，依次将上述物质给药的情况下，可经数次将抗生素和/或溶血磷脂酰胆碱或其类似物给药。

优选地，本发明的抗生素为DW286的情况下，可先将DW286给药之后，再将溶血磷脂酰胆碱或其类似物给药。

在本发明的一实施例中，CPA-CLP引起的败血症小鼠及CPA-处理的免疫抑制和/或变异的小鼠中，Mix组（LPC：DW286=2:1）、LPC-DW286组（预先将LPC给药之后的DW286给药组）、DW286-LPC组（预先将DW286给药后的LPC给药组）、LPC单独给药组及DW286单独给药组进行了评价，其结果，从抗生素及LPC并用给药组中，观察到了与单独给药组相比增强的免疫增强效果及细菌性感染治疗效果，与作为预先将LPC给药后的DW286给药组的LPC-DW286组相比，在作为预先将DW286给药后的LPC给药组的DW286-LPC组中，产生了最高的免疫增强效果及细菌性感染治疗效果。

在本说明书中，术语“个体”是指，需要增强免疫或者患有细菌性感染疾病或者有可能患有细菌性感染疾病的人类、牛、马、羊、猪、山羊、骆驼、羚羊、狗等哺乳动物，但并不局限于此。可通过将本发明的抗生素及溶血磷脂酰胆碱或其类似物个体化给药，来增强免疫或者治疗细菌性感染疾病。

在本说明书中，术语“给药”是指，用某种适当的方法来向个体导入预定的物质的过程，就给药途径而言，只要可以到达目标组织，就可以通过任一个普通的途径给药。可进行腹腔内给药、静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、皮内给药、口服给药、局部给药、鼻内给药、肺内给药、直肠内给药，但并不局限于此。并且，制药组合物能够通过活性物质可向靶细胞移动的任意装置进行给药。

本发明的溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及抗生素能够以治疗学有效量进行给药。

在本说明书中，术语“治疗学有效量”是指，用足够以适用于医学治疗的合理的受益/危险比例治疗疾病的量，并且可根据患者的疾病种类及重症度、年龄、性别、药物的活性、对药物的敏感度、给药时间、给药途径及排出比例、治疗时间、包含可同时使用的药物的因素及其他医学领域中熟知的因素来决定有效容量水准。上述物质能够以单一或多重方式给药。重要的是，以均考虑上述因素，能够无副作用地以最小限度的量获得最大效果的量给药，可由技术人员容易地决定。

根据本发明的另一个实施方式，本发明提供将（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素装入单一或不同的容器中的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒。

在本发明的试剂盒中，上述溶血磷脂酰胆碱或其类似物、抗生素、免疫增强及细菌性感染疾病与上述内容相同，为了避免本说明书中的不必要的反复记载引起的过于复杂的情况，共同事项将被省略。

根据本发明的优选的一个实施例，在本发明的试剂盒中，适量的溶血磷脂酰胆碱或其类似物及抗生素装入不同的容器，能够包括药学上可接受的载体、用于使用试剂盒的说明书。上述说明书可包括用于免疫增强或细菌性感染疾病的治疗的抗生素以及LPC或其类似物的混合方法、将抗生素给药后的LPC或其类似物给药顺序或方法；或者将LPC或其类似物给药后的抗生素给药顺序或给药方法。

发明的效果

归纳本发明的特征及优点如下：

（1）根据本发明，若与抗生素一起将溶血磷脂酰胆碱或其类似物并用给药，则在免疫增强或者细菌性感染疾病的治疗效果方面，发挥增强作用。

（2）在本发明中，能够有用地用于通过感染的免疫系统被抑制的疾病以及免疫系统被抑制之后感染的疾病的治疗等，因而能够显著地提高现有的抗生素或溶血磷脂酰胆碱的治疗效果。

附图说明

图1为简要示出用CPA-CLP诱导的模型的LPC给药组和给药顺序的图。

图2为简要示出用CPA-CLP诱导的模型的LPC同分异构体及抗生素的给药组和给药顺序的图。

图3为从用CPA-CLP诱导的模型中简要示出LPC和环丙沙星盐酸盐水合物、青霉素钾及头孢曲松钠的给药组和给药顺序的图。

图4为简要示出用CPA-CLP诱导的模型的LPC和多利培南、盐酸万古霉素、DW286aa、屈曲可近α（活性化）的给药组和给药顺序的图。

图5为简要示出用CPA-CLP诱导的模型的LPC和粘菌素、妥布霉素、梭链孢酸的给药组和给药顺序的图。

图6为从用CPA-CLP诱导的模型及CPA引起的免疫抑制模型中简要示出LPC和DW286AA的给药组和给药顺序的图。

图7为在CPA处理组中，在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出胸腺的组织病理学分布图的图。在CPA对照组中，探测了显著的胸腺皮质内淋巴细胞的减少。但是，这种萎缩性的变化通过LPC、LPC-DW286及DW286-LPC组的处理有效地被抑制，并且与其他组相比，出现了在DW286-LPC组中最高的抑制倾向。

图8为在CPA处理组中，在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出脾脏的组织病理学分布图的图。在CPA对照组中，探测了显著的脾脏的萎缩及淋巴细胞的减少。但是，这种萎缩性的变化通过LPC、LPC-DW286及DW286-LPC组的处理有效地被抑制，并且与其他组相比，出现了在DW286-LPC组中最高的抑制倾向。

图9为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出脾脏内CD3+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与未经任何处理的（INTACT）对照组相比，脾脏的CD3+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图10为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出脾脏内CD4+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，脾脏的CD3+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图11为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出脾脏内CD8+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，脾脏的CD3+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图12为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出脾脏内TNF-α细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，脾脏的CD3+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图13为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出胸腺内CD3+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，胸腺的CD3+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图14为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出胸腺内CD4+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，胸腺的CD4+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图15为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出胸腺内CD8+细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，胸腺的CD8+细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

图16为在CPA处理组中在INTACT（a）、CPA对照组（b）、LPC（c）、Mix（d）、DW286-LPC（e）、LPC-DW286（f）及DW285（g）组中示出胸腺内TNF-α细胞的变化的图。在CPA对照组中，示出了与INTACT对照组相比，胸腺的TNF-α细胞的显著的减少。但是，与CPA对照组相比，除了DW286组之外，在所有给药组中有效地体现了这种减少。尤其，与LPC组相比，在DW286-LPC组中探测了类似或更优选的效果。

具体实施方式

以下，通过实施例对本发明进行更为详细的说明。这些实施例仅用于更加具体地说明本发明，本发明的范围不根据本发明的要旨而局限于这些实施例，这对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。

实施例

实施例1：实验材料及实验动物的准备

DW286（[7-[3-（氨甲基）-4-（甲氧亚氨基）-3-甲基四氢-1H-1-吡咯]-1-环丙基-6-氟代-4-氧代-1，4-二氢[1，8]萘啶-3-羧酸盐酸盐]（[7-[3-（aminomethyl）-4-（methoxyimino）-3-methyltetrahydro-1H-1-pyrrolyl]-1cyclopropyl-6fluoro-4-oxo-1、4-dihydro[1，8]naphthyridine-3-carboxylic acid hydrochloric acid salt]），Lpt，20021）为由同和药品（韩国安阳（Anyang，Korea）合成的新的氟代-萘啶抗生素，使用了LPC（溶血磷脂酰胆碱；18:094％，磷脂有限公司（GmbH PHISPHOLIPID），德国）。作为LPC的同分异构体（isomer）的1-油酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸胆碱（1-Oleoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine，1-Oleoyl；18:1LPC）及环丙沙星盐酸盐水合物（Cipro，Ciprofloxacin hydrochloride hydrate）、青霉素钾（Peni，Potassium benzylpenicillin）、头孢曲松钠（Ceft，Ceftriaxone sodium）、多利培南（Dori，Doripenem）、盐酸万古霉素（Vanco，Vancomycin hydrochloride）、屈曲可近α（活性化）（Drotrecogin alfa（activated），Xigris）、粘菌素（colistin）、妥布霉素（tobramycin）及梭链孢酸（fusidic acid，fusidin）都分别从希格玛（SIGMA）等购买。LPC、DW286、环丙沙星盐酸盐水合物、青霉素钾、头孢曲松钠、多利培南、盐酸万古霉素及屈曲可近α（活性化）保管在干燥器，从而保护光和湿气引起的改性。

使用了经过7天或8天的适用期间的ICR小鼠（寿龄6周，SLC，日本（Japan））。在每个聚碳酸酯笼子放入5或4只动物，并将上述动物分配在温度（20℃-25℃）、湿度（40％-45％）被调节的房间里。铭记：记忆周期为12小时：12小时，饲料（韩国三阳（Korea））及水提供为容易接近。实验分为CPA-CLP及用CPA引起的免疫抑制小鼠模型组。通过'Guide for the Care'及'Use of Laboratory Animals byInstitute of Laboratory Animal Resources，Commission on Life Science，National Research Council，USA on1996，Washington D.C.'来处理了所有实验动物。

实施例2：实验动物模型的准备

2-1.CPA-诱导的免疫抑制小鼠模型的准备

在手术3天及1天之前，分别将150mg/kg及110mg/kg的环磷酰胺·H₂O（CPA，Cyclophosphamide·H₂O，美国希格玛（Sigma，USA））溶解在生理盐水，并以10ml/kg的浓度进行一次腹腔注射，从而引起了免疫抑制。在未经任何处理的（INTACT）对照组中，通过相同的方法将相同量的生理盐水给药，来替代了CPA。

CPA为广泛使用的抗肿瘤剂，单独使用或者与其他产品相结合而使用。CPA的处理严重有损于造血及淋巴性的组织，因而用作抗肿瘤剂，或者用作骨髓内移植预处理疗法（transplantation conditioning regimes）来引起高的白细胞减少症。已知，直到基于引起可实现核酸的烷基化的很多活性代谢产物的生成的微粒体酶的生体内变化后，CPA自身处于生物学非活性化状态，通过自由基的生成和DNA的烷基化来使染色体受损，从而引起突变。CPA诱导免疫抑制和/或突变的小鼠模型为用于探测抗突变效果或优选的免疫调节效果的有价值的动物模型。进而，引起基于CPA处理的免疫抑制及白细胞减少症，使胸腺及脾脏的T细胞，尤其CD4及CD8与包含TNF-α阳性细胞的多种细胞因子的减少一同大大减少。

2-2.CPA-CLP模型的准备

为了扩增对作为免疫抑制剂熟知的CPA的多菌性感染，在实施CLP3天及1天之前，分别将150mg/kg和110mg/kg的CPA（美国希格玛（Sigma，USA）溶解在生理盐水，并以10ml/kg的浓度进行一次腹腔注射，从而引起了免疫抑制。像这样，若在处理CPA之后实施CLP，则可用作细菌的大量感染模型。为了CLP，用盐酸氯胺酮（Ketamine hydrochloride，ICN生化股份有限公司（ICN Biochemicals Inc.），美国（USA））及盐酸赛拉嗪（Xylazine hydrochloride，日本和光纯药工业株式会社，日本（Wako Pure Chemical Industries Ltd.，Japan）来麻醉小鼠，并进行剖腹使盲肠露出，对于露出的盲肠，对回盲瓣（Ileocecal valve）下侧进行双重结扎之后，利用22号针头使其贯通2次，再按照常规的方法封闭了腹腔。在INTACT及CPA对照组中，使盲肠露出之后，再次封闭了腹腔，在INTACT对照组中，通过相同的方法将相同量的生理盐水给药来替代了CPA。

已知，CLP模型作为模仿人类的急性腹膜炎最接近的模型，是最与败血症临床地相关的动物模型，是用于探测抗败血症效果的有价值的动物模型（Urbaschek及Urbaschek，1987；Yan et al.2004；Ghiselli et al.2006；Wirtz et al.2006）。CLP模型为最接近地反映人类的腹部败血症的临床过程的模型，内因性的细菌病灶（脓毒性病灶（septic focus））与全身炎症反应综合征一同引起多菌性感染（Wichtermanet al.1980；Zantl et al.1998；Maier et al.2000；Emmanuilidis etal.2001）。

实施例3：实验方法

3-1.CPA-引起的免疫抑制小鼠模型

为了引起免疫抑制，分别将150mg/kg和110mg/kg的CPA溶解在生理盐水，在对CLP进行手术3天及1天之前或者最初给药时，向腹腔内给药一次。在INTACT对照组中，通过相同的方法将相同量的生理盐水给药来替代了CPA。

3-2.CLP手术

用氯胺酮（Ketamine）及甲苯噻嗪（Xylazine）麻醉小鼠，并进行剖腹来使盲肠露出，对于露出的盲肠，对回盲瓣（Ileocecal valve）下侧进行双重结扎之后，利用22号针头使其贯通2次，再按照常规的方法封闭了腹腔。在INTACT及CPA对照组中，使盲肠露出之后，再次封闭了腹腔，在INTACT对照组中，通过相同的方法将相同量的生理盐水给药来替代了CPA。第二次给药CPA之后，过一天后执行了CLP。

3-3.死亡数、生存数及体重的测定

在CPA-CLP模型中，5天内一天一次用全自动电子天平（automatic electronic balances）（美国赛多利斯有限公司（Sartorius Co.，Ltd.，USA）测定了体重、生存数及死亡数，在CPA-处理模型中，在两天内一天测定了一次。体重增加量的计算方法如下：

体重增加量（g）：

CPA-CLP模型（model）：牺牲当时体重－CLP时体重（5天）

CPA-treat模型（model）：牺牲当时体重－最初给药时体重（2天）

3-4.器官重量的测定

当CPA-处理的模型牺牲时，将脾脏及胸腺的湿重（wet-weight）测定为绝对重量，之后，根据以下式计算了相对器官重量（体重的％）。

相对器官重量＝[（绝对器官重量/牺牲当时个别体重）×100]

3-5.血液收集及WBC计算

从CPA-处理模型的大静脉收集血液，利用计数室来计算总血液白细胞数，使用稀释吸管（diluting pipette）和作为稀释溶液的吐克（Turk）溶液来进行计算。所有数字以×10³/mm³进行计算。进而，在用吉姆萨染液染色的血涂片样品内，从总100白细胞中计算了嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、单核白细胞及嗜碱性粒细胞的细胞数。

3-6.骨髓微核嗜多染红细胞的变化

通过以下方法来制作了CPA-处理模型的骨髓标本。总之，从非活性化的胎牛血清3ml内的股骨收集了（美国玉博生物技术研究室（USA，GIBCO BRL）骨髓细胞，进行离心分离并涂抹在载玻片。干燥标本并使其浸泡在无水甲醇（absolute methanol）而固定10～20分钟。通过以下方法来对固定的载玻片进行染色。

迈格林华染色（May-Grunwald stain）3分钟

迈格林华染色（May-Grunwald stain）（1:1稀释（diluted））2分钟

吉姆萨染色（1:6diluted）10分钟

载玻片被随机编码化，由两名不同的专家放大1000倍之后进行观察。在PCE（嗜多染红细胞，Polychromatic erythrocyte）的直径的1/5的条件下，用微核嗜多染红细胞数对1/20的范围尺寸的既小又圆或椭圆形的细胞体进行了计数。用1000PCE内的MNPCE（微核嗜多染红细胞，PCE with one or more nuclei）的数表示了结果。计算了MNPC±S.D.的平均数字。进而，对于PCE/（PCE＋NCE）比例，为了检测细胞毒性可能性，计算了500红细胞。

3-7.组织病理学

测定器官的重量之后，将胸腺和脾脏进行了样品化。将样品组织固定于10％中性缓冲福尔马林。用石蜡包埋之后，准备了3～4μm标本。为了光学显微镜检查，用苏木精和曙红（H&E，Hematoxylin&Eosin Stain）染色了代表性的部分。之后，观察了个别的器官的组织病理学图谱。

使用组织形态计量法-自动化的图像分析（分析图像处理（Analysis Image Processing）；德国（Germany）SIS），并用脾脏中的白髓的数（N）/组织病理学标本（×50）计算了脾脏内白髓（white pulps）的数。并且，计算了胸腺皮质的萎缩性的（atrophic）变化/观察的胸腺的总数。

3-8.免疫化学组织法（IHC）

在进行脱蜡化之后，在10mM三羟甲基氨基甲烷（Tris，Tris(hydroxymethyl)aminomethane）-1mM乙二胺四乙酸（EDTA，eathylene diamine tetraacetic acid）缓冲液（pH9.0）中执行了CD3抗原决定簇检索，在1mM EDTA缓冲液（pH8.0）及含有肿瘤坏死因子-α（TNF-α，tumornecrosisfactor-α）的10mM柠檬酸盐缓冲液（Citrate Buffer）（pH6.0）中，通过与上述方法相同的方法执行了CD4及CD8检索。本实验中使用的第一次抗血清如下表1所示。

用预热水浸湿包含缓冲液的染色盘，直到温度为95～100℃为止后，在室温条件下放置染色盘，并将载玻片放凉20分钟。在抗原决定簇检索之后，通过以下步骤来对标本进行了免疫染色。

首先，为了在室温条件下，阻断耐药性的过氧化酶活性，在甲醇及0.3％H₂O₂中，对切片进行30分钟培养之后，在0.01M PBS（pH7.2）清洗3次。接着，在恒湿机中，在正常马血清封闭液（normal horse serum blocking solution）、在室温条件下将切片培养1小时，从而防止免疫球蛋白的非特异性结合（Vector Lab.Inc.，CA，美国（USA）.稀释（Dilution）1:100）。之后，在0.01M PBS中清洗3次之后，在4℃温度的恒湿机中与4种第一次抗血清一同培养切片12小时。之后，在0.01M PBS清洗了3次。在恒湿机中，在室温条件下将切片与附着有生物素的通用第二抗体一同培养1小时。之后，在0.01M PBS中清洗了3次。在恒湿机中，将切片与卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC，avidin-biotin-peroxidase complex）试剂（Vectastain Elite ABC Kit，Vector Lab.Inc.，CA，美国（USA）.Dilution1:50）一同在室温条件下培养1小时之后，在0.01M PBS中清洗了3次。在过氧化物酶底物试剂盒（Peroxidae substrate kit）（矢量实验室公司，Vector Lab.Inc.，CA）中，在室温条件下，培养标本30秒钟。之后，用0.01MPBS清洗了3次。用美尔氏苏木素（Mayer's hematoxylin）溶液对比染色之后，在流动的自来水中清洗了30分钟。通过95％乙醇干燥2分钟，并在100％乙醇中干燥3小时之后，在二甲苯中清洗2小时。之后，用具有永久封固剂（permanent mounting medium）的盖玻片（Coverslip）及光学显微镜进行观察（德国蔡司（Zeiss，Germany））。

在组织形态计量法-1000个脾脏或胸腺细胞中，通过自动化的图像分析，观察了各免疫反应细胞（CD3+、CD4+、CD8+及TNF-α+）的数（N）/1000个脾脏细胞或胸腺细胞。在胸腺中，从皮质和髓质分离来执行了计算。

3-9.统计分析

计算了平均及标准偏差（平均±S.D.）。使用Mann-Whitney U-Wilcoxon Rank Sum W test（MW test）with SPSS for Windows（Release6.1.3.，SPSS Inc.，美国（USA））来执行了统计学分析。在CPA-处理模型中，为了有助于理解对INTACT及CPA对照组、CPA对照组及实验组之间的差异的实验物质的效率，使用了以下式。

对INTACT对照组的变化率（％）＝[（（CPA对照组的数据－INTACT对照组的数据）/INTACT对照组的数据）×100]

对CPA对照组的变化率（％）＝[（（实验组的数据－CPA对照组的数据）/CPA对照组的数据）×100]

实施例4：在用CPA-CLP诱导的模型中，对LPC浓度的生存产生 的影响分析

用CPA引起免疫抑制之后，利用用盲肠结扎穿孔（CLP，Cecal ligation及puncture）引起败血症的小鼠，来确认LPC的不同给药容量的药效。从CLP手术6小时之后开始，以12小时为间隔，4次将5容量（1、2.5、5、10及20mg/kg）的LPC皮下给药到CPA-CLP败血症小鼠之后，观察了死亡率及体重的变化。将LPC溶解在5％人血白蛋白（human albumin）（绿十字，韩国（Korea）），并分别给药10ml/kg。将这种给药组和给药顺序简单表示在图1。

具体地，将ICR小鼠（6周龄雄性，SLC，日本（Japan））分为共7组（每组10只），即，CPA对照组（将CPA给药后，假（Sham）手术介质给药组）、CPA-CLP对照组（将CPA给药后，CLP手术介质给药组）、CPA-CLP后LPC1mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC2.5mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC10mg/kg给药组及CPA-CLP后LPC20mg/kg给药组。给药以12小时4次皮下给药的方式进行，并将5％人血清白蛋白用作介质，给药10ml/kg。即，从CLP手术6小时之后开始，以12小时间隔，共4次将5容量的LPC给药到颈部皮下。将LPC溶解在5％人血清白蛋白（绿十字，韩国（Korea）），并分别给药10ml/kg，在假（Sham）手术介质给药组及CLP对照组中，仅将10ml/kg的5％人血清白蛋白以相同的间隔皮下给药。给药后，通过上述实施例3-3的方法观察了死亡率及体重的变化。

表2

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP008）的死亡率的LPC的效果

表3

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP008）的生存率（％）的LPC的效果

其结果，如上述表2及表3所示，可知，所有CPA对照组小鼠生存了作为观察期间的7天，但在CLP对照组中，CLP手术2天内，10只中的10只死亡，呈现了100％的死亡率，在LPC1mg/kg及2.5mg/kg给药组中，CLP分别在4天及5天内，所有实验动物死亡，在LPC5、10及20mg/kg给药组中，CLP手术7天后，所有实验动物死亡（表2）。另一方面，LPC1mg/kg给药组的所有实验动物死亡的CLP手术4天后，LPC2.5、5、10及20mg/kg给药组的生存率分别为10、30、50及40％（表3）。

在所有CPA-CLP手术组中，与死亡之前的CPA对照组相比，呈现了显著的体重减少，但在所有LPC给药组中，没有发生与CPA-CLP给药组相比有意义的体重的变化。

就这种败血症而言，被认为最重要的指标的生存时间的增加，在CPA-CLP小鼠中，通过将所有5容量的LPC给药而明显增加，因而可知LPC能够提高败血症患者的生存时间。并且，在LPC1、2.5、5及10mg/kg给药组中，给药容量依赖性的生存时间延长效果被认定，但在20mg/kg给药组中，被认定为与10mg/kg给药组类似或者较低的效果，从而LPC的CPA-CLP模型中的最小有效容量判断为1mg/kg左右，最佳有效容量观察为10mg/kg。

实施例5：在用CPA-CLP诱导的模型中，LPC的同分异构体的给 药对生存产生的影响分析

在用CPA引起免疫抑制之后，利用用CLP引起败血症的小鼠，来比较LPC与Xigris、LPA、18:1LPC、18:0LPC及DW286AA的药效。在CLP手术6小时之后，分别将5mg/kg的LPC、LPA、18:1LPC、18:0LPC、0.4及2mg/kg的Xigris、10及20mg/kg的DW286AA一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠之后，观察了死亡率及体重的变化。将所有实验物质溶解在灭菌生理盐水，并分别给药10ml/kg。将这种给药顺序和给药组简单表示在图2。

具体地，将美国癌症研究所（ICR，Institute of Cancer Research）小鼠（6周龄雄性，SLC，日本（Japan））分为共10组（每组10只），即，CPA对照组（将CPA给药后，假（Sham）手术介质给药组）、CPA-CLP对照组（将CPA给药后，CLP手术介质给药组）、CPA-CLP后LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后Xigris0.4mg/kg给药组、CPA-CLP后Xigris2mg/kg给药组、CPA-CLP后溶血磷脂酸（LPA，lysophosphatidic acid）5mg/kg给药组、CPA-CLP后18:1LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后18:0LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后DW286AA10mg/kg给药组及CPA-CLP后DW286AA20mg/kg给药组。将灭菌生理盐水用作介质，在CLP手术6小时之后，以10ml/kg进行一次静脉给药。即，在CLP手术6小时之后，分别将5mg/kg的LPC、LPA、18:1LPC、18:0LPC、0.4及2mg/kg的Xigris、10及20mg/kg的DW286AA一次给药到CPA-CLP败血症小鼠。将所有实验物质溶解在灭菌生理盐水，并给药10ml/kg，在假（Sham）手术介质给药组及CLP对照组中，仅将10ml/kg的灭菌生理盐水一次静脉给药。给药后，通过上述实施例3-3的方法观察了死亡率及体重的变化。

表4

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP009）的死亡率的LPC、其同分异构体、Xygris及DW286aa的效果

表5

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP009）的生存率（％）的LPC、其同分异构体、Xygris及DW286aa的效果

其结果，如上述表4及表5所示，可知，所有CPA对照组小鼠生存了作为观察期间的10天，在CLP对照组中，CLP手术2天内，10只中的10只死亡，呈现了100％的死亡率，在LPC5mg/kg、Xigris0.4及2mg/kg、18:0LPC5mg/kg给药组中，CLP手术8天内，所有实验动物死亡，在LPA5mg/kg给药组中，CLP手术3天后，所有实验动物死亡（表4）。另一方面，在18:1LPC5mg/kg给药组中，所有实验动物在CLP手术2天后死亡，在DW286AA10及20mg/kg给药组中，即使在CLP手术10天之后，也分别认定了3条生存例（3/10；30％）（表5）。

在所有CPA-CLP手术组中，呈现了与死亡之前的CPA对照组相比显著的体重减少，在LPC5mg/kg、DW286aa10及20mg/kg给药组中，除了分别在CLP手术1天之后，认定了与CPA-CLP对照组相比具有显著性的（p＜0.01或p＜0.05）体重的增加之外，在所有给药组中，没有认定与CPA-CLP给药组相比有意义的体重的变化。

这些结果有助于LPC、Xigris、18:0LPC及DW286AA能够提高败血症患者的生存时间，尤其，在DW286AA10及20mg/kg给药组中，呈现了显著的生存时间及生存率的增加，LPC5mg/kg给药组被认定为更优秀于Xigris2mg/kg给药组的效果，18:0LPC呈现了更优秀于18:1LPC的效果，从而呈现了与相同的容量的LPC类似的效果，这种结果有助于除了LPC之外，LPC的同分异构体也有可能具有免疫增强或细菌性感染疾病的治疗效果。

实施例6：在用CPA-CLP诱导的模型中，与LPC和现有的抗生素 的单独及并用给药对生存产生的影响分析

用CPA引起免疫抑制之后，利用用CLP引起败血症的小鼠，来将LPC与环丙沙星盐酸盐水合物（Cipro，Ciprofloxacin hydrochloridehydrate）、Peni（Potassium benzylpenicillin）及青霉素钾（Ceft，Ceftriaxone sodium）的并用效果进行比较。在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、Cipro（20mg/kg）、Peni（60mg/kg）、Ceft（25mg/kg）、LPC+Cipro（5+20mg/kg）、LPC+Peni（5+60mg/kg）及LPC+Ceft（5+25mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠之后，观察了死亡率及体重的变化。并且，将DW286AA（5mg/kg）用作对照药物，并将所有单一实验物质溶解在灭菌生理盐水，分别给药10ml/kg，在所有复合组成组中，将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。将这种给药顺序和给药组简单显示在图3。

具体地，将ICR小鼠（6周龄雄性，SLC，日本（Japan））分为共10组（每组10只），即，CPA对照组（将CPA给药后，假（Sham）手术介质给药组）、CPA-CLP对照组（将CPA给药后，CLP手术介质给药组）、CPA-CLP后LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后DW286AA5mg/kg给药组、CPA-CLP后Cipro20mg/kg给药组、CPA-CLP后Peni60mg/kg给药组、CPA-CLP后Ceft25mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC+Cipro5+20mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC+Peni5+60mg/kg给药组及CPA-CLP后LPC+Ceft5+25mg/kg给药组。将灭菌生理盐水用作介质，在CLP手术6小时之后，以10ml/kg进行一次静脉给药。即，在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、DW286AA（5mg/kg）、Cipro（20mg/kg）、Peni（60mg/kg）、Ceft（25mg/kg）、LPC+Cipro（5+20mg/kg）、LPC+Peni（5+60mg/kg）及LPC+Ceft（5+25mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠。将所有单一实验物质溶解在灭菌生理盐水，并分别给药10ml/kg，在所有复合组成组中，分别将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。给药后，通过上述实施例3-3的方法观察了死亡率及体重的变化。

表6

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP011）的死亡率的LPC及抗生素并用的效果

表7

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP011）的生存率（％）的LPC及抗生素并用的效果

其结果，如上述表6及7所示，所有CPA对照组小鼠生存了作为观察期间的3天，但在CLP对照组及Peni给药组中，CLP手术2天内，10只中的10只死亡，呈现了100％的死亡率，在LPC、Cipro、Ceft及LPC+Peni给药组中，CLP手术3天内，所有实验动物死亡。但是，与单独的LPC或各抗生素相比，在作为与LPC的并用组的LPC+Cipro、LPC+Peni、LPC+Ceft组中，死亡率减小或者死亡时间推迟（表6）。另一方面，在LPC+Ceft及DW286aa给药组中，在CLP手术3天之后，也分别认定了3（3/10；30％）及7（7/10；70％）只的生存例（表7）。

在所有CPA-CLP手术组中，从CLP手术1天后开始，呈现了与CPA对照组相比显著的体重减少，在LPC给药组中，除了在CLP手术1天之后，呈现了与CPA-CLP对照组相比具有显著性的（p＜0.05）体重的减少之外，在所有给药组中，没有发生与CPA-CLP给药组相比有意义的体重的变化。

与LPC及各个抗生素的单一给药组相比，就LPC+Cipro、LPC+Peni及LPC+Ceft给药组中呈现的生存率的增加而言，LPC与抗生素的并用有助于这些的效果增加，给出了本发明的并用制剂对免疫增强及细菌性感染疾病的治疗具有优秀的效果的启示。

实施例7：在用CPA-CLP诱导的模型中，LPC与现有的抗生素的 单独及并用给药对生存产生的影响分析

在用CPA引起免疫抑制之后，利用用CLP引起败血症的小鼠，比较LPC、多利培南（Dori，Doripenem）、盐酸万古霉素（Vanco，Vancomycin hydrochloride）及屈曲可近α（活性化）（Xigris，Drotrecogin alfa（activated））的并用效果。在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、DW286AA（5mg/kg）、Dori（200mg/kg）、Vanco（10mg/kg）、Xigris（2mg/kg）、LPC+DW286AA（5+5mg/kg）、LPC+Dori（5+200mg/kg）、LPC+Vanco（5+10mg/kg）及LPC+Xigris（5+2mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠之后，观察了死亡率及体重的变化。将所有单一实验物质溶解在灭菌生理盐水，并分别给药10ml/kg，在所有复合组成组中，分别将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。将这种给药顺序和给药组简单显示在图4。

具体地，将ICR小鼠（6周龄雄性，SLC，日本（Japan））分为共11组（每组10只），即，CPA对照组（将CPA给药后，假（Sham）手术介质给药组）、CPA-CLP对照组（将CPA给药后，CLP手术介质给药组）、CPA-CLP后LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后DW286AA5mg/kg给药组、CPA-CLP后Dori200mg/kg给药组、CPA-CLP后Vanco10mg/kg给药组、CPA-CLP后Xigris2mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC+DW286AA5+5mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC+Dori5+200mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC+Vanco5+10mg/kg给药组及CPA-CLP后LPC+Xigris5+2mg/kg给药组。将灭菌生理盐水用作介质，在CLP手术6小时之后，以10ml/kg进行一次静脉给药。即，在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、DW286AA（5mg/kg）、Dori（200mg/kg）、Vanco（10mg/kg）、Xigris（2mg/kg）、LPC+DW286AA（5＋5mg/kg）、LPC＋Dori（5＋200mg/kg）、LPC＋Vanco（5＋10mg/kg）及LPC＋Xigris（5＋2mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠。将所有单一实验物质分别溶解在灭菌生理盐水，并给药10ml/kg，在所有复合组成组中，分别将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。给药后，通过上述实施例3-3的方法观察了死亡率及体重的变化。

表8

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP012）的死亡率的LPC及抗生素并用的效果

表9

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP012）的生存率（％）的LPC及抗生素并用的效果

其结果，如上述表8及表9所示，可知，所有CPA对照组小鼠生存了作为观察期间的3天，但在CLP对照组中，CLP手术2天内，10只中的10只死亡，呈现了100％的死亡率，在Vanco给药组中，各CLP手术3天内，所有实验动物死亡，在LPC、Dori及Xigris给药组中，CLP手术3天内，分别死亡9、8、10只的实验动物。但是，与单独的LPC或DW286AA、Dori、Vanco及Xigris相比，在作为与LPC的并用组的LPC＋Dori、LPC＋Vanco、LPC＋Xigris组中，死亡率减少或者死亡时间推迟（表8）。另一方面，在DW286AA、LPC＋DW286AA、LPC＋Dori、LPC＋Vanco及LPC+Xigris给药组中，在CLP手术3天之后，也分别认定了4（4/10；40％）、9（9/10；90％）、5（5/10；50％）、4（4/10；40％）及3（3/10；30％）只的生存例（表9）。

在所有CPA-CLP手术组中，从CLP手术1天后开始，呈现了与CPA对照组相比显著的体重减少，在所有药物给药组中，没有发生与CPA-CLP给药组相比有意义的体重的变化。

与这种LPC及各个单一给药组相比，在LPC＋DW286AA、LPC＋Dori、LPC＋Vanco及LPC＋Xigris给药组中，认证的生存率及生存期间的增加意味着通过与LPC并用来增加这些的效果，这种结果有助于对本发明的并用制剂的免疫增强或细菌性感染疾病的优秀的治疗效果。

实施例8：在用CPA-CLP诱导的模型中，LPC与抗生素的单独及 并用给药对生存产生的影响分析

在用CPA引起免疫抑制之后，利用用CLP引起败血症的小鼠，将LPC与粘菌素（Colistin）、妥布霉素（Tobra，Tobramycin）及梭链孢酸钠（Fusidin，fusidic acide sodium）的并用效果。在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、colistin（5mg/kg）、tobramycin（4mg/kg）、fusidin（80mg/kg）、LPC＋colistin（5+5mg/kg）、LPC＋tobramycin（5＋4mg/kg）及LPC＋fusidin（5＋80mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠之后，观察了死亡率及体重的变化。并且，将DW286AA（5mg/kg）用作对照药物，分别将所有单一实验物质溶解在灭菌生理盐水，并给药10ml/kg，在所有复合组成组中，分别将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。将这种给药顺序和给药组简要显示在图5。

具体地，将ICR小鼠（6周龄雄性，SLC，日本（Japan））分为共10组，即，CPA对照组（将CPA给药后，假（Sham）手术介质给药组）、CPA-CLP对照组（将CPA给药后，CLP手术介质给药组）、CPA-CLP后DW286AA5mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC5mg/kg给药组、CPA-CLP后colistin5mg/kg给药组、CPA-CLP后tobramycin4mg/kg给药组、CPA-CLP后fusidin80mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC＋colistin5＋5mg/kg给药组、CPA-CLP后LPC＋tobramycin5＋4mg/kg给药组及CPA-CLP后LPC＋fusidin5＋80mg/kg给药组。将灭菌生理盐水用作介质，在CLP手术6小时之后，以10ml/kg进行一次静脉给药。即，在CLP手术6小时之后，分别将LPC（5mg/kg）、DW286AA（5mg/kg）、colistin（5mg/kg）、tobramycin（4mg/kg）、fusdin（80mg/kg）、LPC＋colistin（5＋5mg/kg）、LPC＋tobramycin（5＋4mg/kg）及LPC＋fusidin（5＋80mg/kg）一次静脉给药到CPA-CLP败血症小鼠。将所有单一实验物质分别溶解在灭菌生理盐水，并给药10ml/kg，在所有复合组成组中，分别将适当容量的各个药物直接溶解在溶解有LPC（0.5mg/ml）的溶液进行给药。给药后，通过上述实施例3-3的方法观察了死亡率及体重的变化。

表10

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP013）的死亡率的LPC及抗生素并用的效果

表11

对CPA-CLP败血症小鼠模型（SEP012）的生存率（％）的LPC及抗生素并用的效果

其结果，如上述表10及11所示，可知，所有CPA对照组小鼠生存了作为观察期间的3天，但在CLP对照组中，CLP手术2天内，10只中的10只死亡，呈现了100％的死亡率，在LPC、Fusidin、colistin及tobramycin单独给药组中，CLP在3天内，分别死亡了9、8、9及8只动物。但是，在LPC与colistin、tobramycin及fusidin并用给药组中，死亡率减少或者死亡时间推迟（表10）。另一方面，在DW286AA、LPC＋colistin、LPC＋tobramycin及LPC＋fusidin给药组中，即使CLP手术3天之后，也分别认定为8（8/10；80％）、4（4/10；40％）、5（5/10；50％）及5（5/10；50％）只的生存例（表11）。在所有CPA-CLP手术组中，从CLP手术1天后开始，呈现了与CPA对照组相比显著的体重减少，但在所有药物给药组中，没有发生与CPA-CLP给药组相比有意义的体重的变化。

与这种LPC及各个单一给药组相比，在LPC＋colistin、LPC＋tobramycin及LPC＋fusidin给药组中认定的生存率及生存期间的增加结果意味着通过与LPC并用来增加这些的效果，这种结果有助于对本发明的并用制剂的免疫增强或细菌性感染疾病的优秀的治疗效果。

实施例9：LPC与作为新喹啉抗生素的DW286AA的并用对生存 产生的影响分析

在对败血症的新的治疗剂开发过程中，为了寻找LPC及DW286AA的最佳并用给药方法，利用用CPA-CLP及CPA引起的免疫抑制小鼠进行了评价。对于CPA-CLP小鼠及CPA引起免疫抑制小鼠，单独混合（LPC:DW286AA2:1）LPC及DW286AA，先将LPC给药（2次）后，将DW286AA给药（2次），先将DW286AA给药后，将LPC给药，再将死亡率、胸腺及脾脏重量、血中白细胞数、胸腺及脾脏内CD3+、CD4+、CD8+及TNF-α+细胞的数的变化与骨髓内微核嗜多染红细胞数的变化一起进行评价。

共8组或9组（包括介质对照组），将每组雄性9只分为INTACT对照组：正常介质对照组（介质：5％人血清白蛋白）、CPA对照组：CPA引起免疫抑制介质对照组、CPA-CLP对照组：CPA及CLP实施介质对照组、LPC：LPC1mg/kg给药组、Mix：LPC-DW286AA（2:1）复合组成0.75mg/kg给药组、DW286-LPC：先将DW2860.5mg/kg给药2次后，将LPC1mg/kg给药2次的给药组、LPC-DW286：先将LPC1mg/kg给药2次后，将DW286AA0.5mg/kg给药2次的给药组、DW286：DW286AA0.5mg/kg给药组。将这种给药顺序和给药组简单显示在了图6。将适当量的候选物质溶解在5％人血清白蛋白，并以10ml/kg的浓度在手术6小时之后或者CPA给药结束24小时开始，以12小时间隔，以皮下注射方式总共给药4次。在INTACT、CPA或CPA-CLP对照组中，通过相同的方法将相同量的5％人血清白蛋白给药。

9-1.基于LPC及DW286aa的给药顺序的死亡数及体重评价

以上述实施例3-3的方法，评价了死亡数、生存数及体重。其结果，在INTACT及CPA对照组中，在观察期间几乎没有认定死亡例，而在CPA-CLP对照组中，在CLP手术1天及2天之后，分别认定了6及3例的死亡例，从而在CLP手术2天之后，所有实验动物（9/9，100％）死亡（表12）。另一方面，在LPC、LPC-DW286及DW286组中，在CLP手术4天后，所有实验动物死亡，在Mix及DW286-LPC组中，在CLP手术5天之后，所有实验动物死亡，与Mix组相比，在DW286-LPC组中，认定了更高的初始生存率（表12）。

在CLP手术1天之后，在CPA及CLP处理组中，显著的（p<0.01或p<0.05）体重的减少以与INTACT对照组进行比较的方式被探测。但是，所有实验组与本发明的CPA或CPA-CL对照组相比，没有观察到体重的有意义的变化（表12）。给药期间的体重增加量在CPA对照组的情况下，与INTACT对照组相比，呈现了-3.95％的变化，在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286给药组中，与CPA对照组相比，分别呈现了-12.35、-17.65、2.16、-8.82及-1.37％的变化。

在所有CPA给药组中认定的体重减少被判断为CPA的直接的毒性症状，LPC及DW286被观察到无法抑制CPA给药引起的体重减少。

另一方面，实验物质给药后引起的轻微的体重增加量的减少被判断为皮下注射引起的刺激等导致的第二次见解。

并且，在LPC及DW286AA的单独给药时，也观察到使CPA-CLP引起的死亡例明显减少，但相比的各个单独给药，在混合组成以及先将DW286AA给药后，将LPC给药的DW286-LPC组中，呈现了更优秀的生存率，尤其，与Mix相比，在DW286-LPC组中，呈现了更高的初始生存率（表13），当治疗败血症时，先将DW286AA给药后，将LPC给药，这样可期待呈现更优秀的治疗效果。

表13

9-2.CPA-处理模型的体重的变化

所有CPA处理组与INTACT对照组相比，呈现了显著的体重减少（p＜0.01）。与本发明的CPA对照组相比，在所有实验组中，检测出了没有意义的体重的变化。进而，在包含CPA对照组的所有实验组中，向牺牲物初始给药后，观察到了显著的体重增加（表14）。

表14

CPA_-处理小鼠的重量的变化观察

n=9;（Mean±S.D.）,g；^1）一宿之后；^2）CLP给药后2天内重量的变化；^*p＜0.01及^**p＜0.05与对MW实验的intact对照组的比较

9-3.CPA-处理模型的器官重量的变化

通过上述实施例3-4的方法测定了器官重量。其结果，与INTACT对照组相比，在CPA对照组中为相对，并观察到绝对的脾脏及胸腺的重量的减少。但是，在LPC、Mix及DW286中观察到了不显著的胸腺重量的增加，与（p＜0.01）CPA对照组进行比较，分别从LPC、Mix及DW286-LPC中观察到了显著的脾脏重量的增加（表15）。

表15

在CPA-处理小鼠中，绝对及相对器官重量的变化观察

n=9;（Mean±S.D.）,g or％；相对重量（％）＝[（绝对器官重量/牺牲当时体重）×100]；^*p＜0.01与对MW实验的intact对照组的比较；#p＜0.01与基于MW实验的CPA对照组的比较

在CPA对照组中，与INTACT对照组相比，绝对及相对胸腺重量分别变化了-55.74及-52.62％。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，绝对的胸腺重量变化了13.31、10.24、7.17、2.39及-2.73％，相对的胸腺重量相与CPA对照组相比，分别变化了7.56、13.74、9.51、5.47及-3.12％。但是，具有显著性的增加未在所有给药组中被认定。

在CPA对照组中，与INTACT对照组相比，绝对且相对的脾脏的重量发生了-63.38及-60.63％的变化。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286中，绝对的脾脏的重量以35.62、28.77、31.28、11.87及-7.08％变化，相对的脾脏的重量与CPA对照组相比，分别呈现了40.69、32.54、32.96、14.38及-7.46％变化。

在所有CPA给药组中认定的脾脏及胸腺的重量减少认定为淋巴细胞减少引起的变化，LPC及DW286-LPC并用给药观察到有效地抑制CPA给药引起的淋巴器官重量的减少，与LPC单独给药相比，在Mix及LPC-DW286给药组中呈现了类似或较低的减少抑制效果。

9-4.在CPA-处理模型中，总血液WBC数的变化

通过上述实施例3-5的方法计算了血液收集及白细胞（WBC，white blood cell）。其结果，与INTACT对照组相比，在所有CPA诱发组中，发生了具有显著性的（p＜0.01）血中总白细胞数的减少，但与CPA对照组相比，在除了DW286给药组的所有给药组中，观察到了显著的总白细胞数的增加，而具有显著性的（p＜0.01）增加局限于DW286-LPC给药组（表16）。

在CPA对照组中，血液总WBC数与INTACT对照组相比，呈现了-91.58％变化。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，与CPA对照组相比，分别变化了25.00、32.74、61.31、19.64及-11.31％。即，CPA给药时，已知，通常引起显著的白细胞减少，而根据本实验的结果，观察到LPC比较有效地抑制CPA给药引起的白细胞的减少，与LPC单独给药相比，在DW286-LPC给药组中，呈现更优秀的效果。这种结果表示并用制剂的情况下先将DW286给药能得到更好的效果。

9-5.在CPA-处理模型（treated model）中，WBC的分类计数的变化

根据分类计数（count）结果，CPA引起的白细胞的减少主要以淋巴细胞的减少引起的变化来观察，并观察到引起了嗜中性白细胞及单核细胞比例的相对增加（表16）。另一方面，根据本实验的结果，LPC及DW286-LPC并用给药观察到比较有效地抑制CPA给药引起的白细胞的减少，与LPC单独给药相比，在DW286-LPC给药组中认定了更优秀的效果。

CPA对照组中的淋巴细胞、嗜中性白细胞及单核细胞的比例与INTACT对照组相比，分别变化了-72.47、88.11及456.43％。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，淋巴细胞的比例以268.78、244.85、290.37、204.01及-23.56％变化，嗜中性白细胞的比例呈现-51.07、-46.05、-50.01、-18.81及-1.09％的变化，单核细胞的比例与CPA对照组相比，呈现了-85.27、-82.32、-91.16、-86.45及13.43％的变化。

9-6.在CPA-处理模型（treated model）中，骨髓MNPCEs的变化

通过上述实施例3-6的方法观察了骨髓微核嗜多染红细胞变化。其结果，已知，CPA为提高突变发生率的物质，并显著增加了骨髓内的微核嗜多染红细胞。与INTACT对照组相比，在CPA对照组中，微核嗜多染红细胞（MNPCEs）显著地增加（p＜0.01）PCE/（PCE＋NCE）减少。在所有给药组中，没有发生与CPA对照组相比有意义的微核嗜多染红细胞及PCE比例的变化（表17）。

表17

CPA-处理小鼠的骨髓MNPCE及PCE/（NCE＋PCE）的变化观察

n=9;（Mean±S.D.）；*p＜0.01与对MW实验的intact对照组比较

在CPA对照组中，骨髓微核嗜多染红细胞及嗜多染红细胞的比例与INTACT对照组相比变化了1512.50及-60.38％。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，MNPCE数呈现了-14.34、-0.78、-12.02、-5.43及-10.85％的变化，嗜多染红细胞的比例（PCE/（PCE＋NCE））分别与CPA对照组相比，以-12.98、6.14、-11.80、-1.49及-14.79％表示变化。

这种结果有助于LPC及DW286单独给药和并用给药均通过CPA不对骨髓内微核嗜多染红细胞的增加产生特别的影响。嗜多染红细胞的比例为评价实验物质的骨髓内细胞毒性的项目，根据本实验的结果，在所有CPA给药组中，引起了显著的PCE比例的减少，这种PCE比例的减少判断为CPA给药过度。

9-7.在CPA-处理模型中，胸腺和脾脏的组织病理变化

通过上述实施例3-7的方法观察了组织病理学变化。其结果，在胸腺皮质中，在CPA对照组中探测到了淋巴细胞的减少及显著的脾脏萎缩。但是，这种萎缩性的变化通过LPC、LPC-DW286及DW286-LPC的处理有效地被抑制，DW286-LPC组与其他组相比，呈现最高的抑制倾向（表7及表8）。在组织形态计量法中，脾脏中的白髓的数（p＜0.01）与INTACT对照组相比，在CPA对照组中显著性地减少，但在除了DW286单独给药组之外的所有给药组中显著性地增加。进而，胸腺皮质中的淋巴性细胞的减少也相比于除了DW286组的CPA对照组在所有给药组中显著地被抑制（表18）。

表18

在组织病理学上，CPA-处理小鼠的脾脏及胸腺的组织形态计量变化

n＝9;（Mean±S.D.）；^1）N/组织切片；^2）胸腺皮质的萎缩性的变化的数/总观察的胸腺的数（观察的％）；*p＜0.01与对MW实验的intact对照组的比较；#p＜0.01与基于实验的CPA对照组的比较

脾脏内白髓的数，在CPA对照组中，与INTACT对照组相比，呈现了-66.67％的变化。这些在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，与CPA对照组相比，呈现了101.79、71.43、105.36、101.79及-1.79％的变化。

在INTACT对照组、CPA对照组、LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，胸腺皮质萎缩频率（胸腺皮质中的淋巴性细胞的减少现象）分别观察到0、100、88.89、88.89、66.67、77.78及100％。

根据本实验的结果，LPC及DW286-LPC并用给药观察到比较有效地抑制CPA给药引起的淋巴器官内淋巴细胞的减少，并且与LPC单独给药相比，在DW286-LPC给药组中认定为更优秀的效果。

9-8.在CPA-处理模型中，胸腺及脾脏的免疫组织化学分析

通过上述实施例3-8的方法执行了免疫组织化学分析。其结果，与INTACT对照组相比，从CPA对照组中观察了脾脏的CD3+、CD4+、CD8+及TNF-α+细胞的显著的减少（p＜0.01），并且分别从胸腺的皮质及髓质中观察了CD3+及TNF-α+细胞的显著的减少。但是，这种细胞在除了DW286组的所有给药组中，与CPA对照组相比，显著性地增加。尤其，与LPC单独给药组相比，在DW286-LPC组中认定了类似或更优秀的减少抑制效果（表19及图9至图16）。

在脾脏内CPA对照组中，CD3+、CD4+及CD8+细胞（cells）的数与INTACT对照组相比，呈现-68.32、-83.15及-73.26％的变化。LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组的CD3+细胞的数变化18.29、77.26、99.32、81.03及-14.02％，CD4+细胞的数变化136.54、99.76、135.58、79.81及-10.82％，CD8+细胞与CPA对照组相比变化72.89、48.81、109.33、38.83及-10.63％。

在胸腺皮质内CPA对照组中，CD3+、CD4+及CD8+细胞的数与INTACT对照组相比变化-75.41、64.29及28.57％。LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组的CD3+细胞的数变化328.69、216.61、323.44、279.91及-9.16％，CD8+细胞的数与CPA对照组的数相比变化11.11、33.33、-7.41、11.11及33.33％。

在胸腺髓质内CPA对照组中，CD3+、CD4+及CD8+细胞的数与INTACT对照组相比呈现-90.00、-8.33及28.57％的变化。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，CD3+细胞的数变化为2466.67、500.00、2366.67、2466.67及-33.33％，CD4+细胞的数与CPA对照组相比变化-9.09、-18.18、-13.64、4.55及27.27％。CD8+细胞的数与CPA对照组相比变化-5.56、-11.11、-5.56、-16.67及-22.22％。

在脾脏、胸腺皮质及髓质内CPA对照组中，TNF-α+细胞与INTACT对照组相比呈现了-51.73、-51.06及-155.56％的变化。在LPC、Mix、DW286-LPC、LPC-DW286及DW286组中，脾脏的TNF-α+细胞变化36.75、12.89、34.84、27.68及-13.84％，在胸腺皮质内TNF-α+细胞变化65.22、30.43、60.87、30.43及-13.04％，胸腺髓质内TNF-α+细胞与CPA对照组相比呈现了133.33、0.00、0.00、133.33及0.00％的变化。即，由CPA引起显著的脾脏及胸腺内CD3+、CD4+、CD8+及TNF-α+细胞的减少，但LPC及DW286-LPC并用给药观察到比较有效地抑制CPA给药引起的这些细胞的减少，并且与LPC单独给药相比，在DW286-LPC给药组中认定了更优秀的效果。

LPC单独及LPC与DW286的并用给药观察到比较有效地抑制CPA给药引起的免疫抑制及基于CPA-CLP引起的败血症的死亡例，尤其，确认了先将DW286给药后，将LPC给药的情况（DW286-LPC）下，呈现了最优秀的效果。

如上所述的结果有助于，在将本发明的LPC同时与多种抗生素一起或者依次并用给药的情况下，与LPC单独给药相比，可呈现显著的免疫增强效果及细菌性感染疾病的优秀的治疗效果。

以上，详细记述了本发明的特定的部分，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，这种具体的技术仅属于优选的实施例，且应当理解的是，本发明并不局限于此。因此，本发明的实质性的范围由所附的发明要求保护范围和与其等同的技术方案定义。

Claims (12)

1.一种免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述溶血磷脂酰胆碱由以下化学式1表示，上述溶血磷脂酰胆碱的类似物为由以下化学式2表示的化合物：

化学式1

在上述式中，R₁为C_4-30的烷基或者具有一种或一种以上的双键的C_4-30的烯基；

化学式2

在上述式中，R₂为C_4-30的烷基或者具有一种或一种以上的双键的C_4-30的烯基。

3.根据权利要求2所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述化学式1的化合物选自包含_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、硬脂酰；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、肉豆蔻酰；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰；_DL-_α-溶血磷脂酰胆碱、棕榈酰；以及_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、油酰的组。

4.根据权利要求2所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述化学式2的化合物选自包含_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-烷基-1-烯基；_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-烷基；_DL-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-十六烷基；以及_L-_α-溶血磷脂酰胆碱、_γ-O-十六烷基的组。

5.根据权利要求1所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述溶血磷脂酰胆碱包含同分异构体。

6.根据权利要求1所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述抗生素选自包含碳青霉烯类抗生素、头孢菌素类抗生素、糖肽类抗生素、青霉素类抗生素、喹诺酮类抗生素、丝氨酸蛋白酶类抗生素、多粘菌素类抗生素、氨基糖苷类抗生素、抑菌类抗生素及上述抗生素的组合的组。

7.根据权利要求6所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述碳青霉烯类抗生素为多利培南，上述头孢菌素类抗生素为头孢曲松钠，上述糖肽类抗生素为盐酸万古霉素，上述青霉素类抗生素为青霉素钾，上述喹诺酮类抗生素为DW286（7-[3-（氨甲基）-4-（甲氧亚氨基）-3-甲基四氢-1H-1-吡咯]-1-环丙基-6-氟代-4-氧代-1、4-二氢[1，8]萘啶-3-羧酸盐酸盐）或环丙沙星盐酸盐水合物，上述丝氨酸蛋白酶类抗生素为屈曲可近α（活性化），上述多粘菌素类抗生素为粘菌素，上述氨基糖苷类抗生素为妥布霉素，上述抑菌类抗生素为梭链孢酸。

8.根据权利要求1所述的免疫增强用或细菌性感染疾病治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述细菌性感染疾病为腹膜炎、肺炎、骨髓炎、蜂窝织炎、脑膜炎、肾炎、心脏炎、肠炎、胃炎、食管炎、十二指肠炎、大肠炎或败血症。

9.一种免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法，其特征在于，包括：将（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素个体化给药的步骤。

10.根据权利要求9所述的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗方法，其特征在于，上述（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素同时或依次给药。

11.一种免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒，其特征在于，将（i）溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及（ii）抗生素装入单一或不同的容器中。

12.根据权利要求11所述的免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒，其特征在于，上述免疫增强或细菌性感染疾病的治疗用试剂盒还包括说明书，上述说明书记载有溶血磷脂酰胆碱或其类似物以及抗生素的混合方法；抗生素给药后的溶血磷脂酰胆碱或其类似物给药顺序或给药方法；或者溶血磷脂酰胆碱或其类似物给药后的抗生素给药顺序或给药方法。

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