CN103751777B - 甘草酸二铵佐剂及含甘草酸二铵佐剂的疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种甘草酸二铵佐剂及含有甘草酸二铵佐剂的疫苗。所述含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：每单份疫苗剂中含有0.1mg～1mg的甘草酸二铵佐剂。本发明提供的佐剂效果良好、成本低廉、性质稳定、安全可靠，可以作为疫苗佐剂。该佐剂与疫苗联合使用能有效增强机体的体液免疫应答，具有一定的应用价值。

Description

甘草酸二铵佐剂及含甘草酸二铵佐剂的疫苗
技术领域
本发明涉及一种新型疫苗佐剂，具体涉及一种甘草酸二铵佐剂以及含该佐剂的疫苗，属于免疫学技术领域。
背景技术
铝佐剂作为疫苗的免疫佐剂，现在已经广泛应用于甲肝疫苗、乙肝疫苗、百白破三联疫苗等。铝佐剂的作用机理主要是在组织中形成抗原贮藏库，产生颗粒性抗原，促进抗原递呈给免疫细胞，使抗原滞留，缓慢释放，从而吸引活性淋巴细胞，激活补体系统。经过几十年的使用，证实铝佐剂作为免疫佐剂是有效的。但由于目前铝佐剂仍存在诸如不能诱导细胞免疫、注射部位偶有局部严重反应、诱导IgE介导的变态反应等缺陷，使其应用范围受到限制。
研究人员一直致力于开发一种新型佐剂以替代氢氧化铝佐剂。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，具有诱生干扰素和增强非特异性免疫功能的作用，具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。
发明内容
为解决现有疫苗佐剂存在的毒副作用、价格昂贵等问题，本发明提供一种安全、有效、稳定、经济的甘草酸二铵佐剂。
本发明还提供一种含有甘草酸二铵佐剂的疫苗。
本发明所述甘草酸二铵在制备疫苗佐剂中的应用。
本发明提供的疫苗佐剂——甘草酸二铵，分子式为C42H62O16·2H3N，分子量为856.997，结构式如图1所示，在人体中的推荐剂量为小于或者等于200mg，优选0.1～1mg。
甘草酸二铵佐剂诱导的免疫反应为体液免疫反应。
甘草酸二铵佐剂能显著增强抗原特异性的体液免疫反应。
本发明提供这样一种疫苗，其特征在于每单份疫苗剂中含有0.1mg～1mg的甘草酸二铵佐剂。
所述每单份疫苗剂为临床或者动物实验中使用的常规单次注射参考量。
本发明提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗经过下列方法制备：
按每单份疫苗剂加入0.1～1mg甘草酸二铵的量，在疫苗中加入甘草酸二铵后，再加生理盐水至100－200ul，按常规混合，得含有甘草酸二铵佐剂的疫苗。
所述疫苗为常规甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一种。
本发明的有益效果是：（1）甘草酸二铵佐剂无毒、副作用，在免疫剂量范围内使用是安全可靠的；（2）甘草酸二铵佐剂能够有效的诱导抗原特异性的体液免疫应答。（3）甘草酸二铵佐剂原料易得，制备工艺简单，成本低，性能稳定。
附图说明
图1为甘草酸二铵分子结构式。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。这个实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。文中所述的较佳条件实施方法仅作示范之用。
实施例1
本实施例提供的甘草酸二铵佐剂用量为0.1mg。
本实施例提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：在每单份HAV抗原（即动物实验中使用的单次注射剂量）中，加入0.1mg甘草酸二铵，再加生理盐水至200ul，按常规混合后，得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗，其中甘草酸二铵为市购产品，购自江苏正大天晴药业股份有限公司，国药准字H10940190；HAV抗原为市购的抗原滴度为512EU/ml的18EUHAV抗原液，购自中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所。
本实施例1所得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗的免疫试验和效果如下：
A、免疫
将6～8周龄、18～22g的清洁级ICR小鼠随机分为甘草酸二铵佐剂组、氢氧化铝佐剂组、无佐剂组和空白组，共四组，每组8只，所用的氢氧化铝为常用的氢氧化铝胶体佐剂，其制法参照《中国药典（三部）》，（国家药典委员会.北京:人民卫生出版社.2005:118-119），在人体中的剂量为1.8～2.7mg。
对甘草酸二铵佐剂组：将上述实施例1的含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗腹部皮下多点注射到小鼠体内，注射剂量为每只小鼠200μL，其中疫苗中含有甘草酸二铵佐剂0.1mg，甲肝抗原18EU；
对氢氧化铝佐剂组：将氢氧化铝0.3mg与甲肝抗原18EU混合后加生理盐水至200ul，再经腹部皮下多点注射到小鼠体内，注射剂量为每只小鼠200μL；
对无佐剂组：将甲肝抗原18EU与生理盐水混合至200ul，再经腹部皮下多点注射到小鼠体内，注射剂量为每只小鼠200μL；
对空白组仅注射生理盐水，注射剂量为每只小鼠200ul；
免疫方案：在第0周经腹部皮下多点注射到小鼠体内，免疫次数为一次；
B、ELISA检测血清抗-HAVIgG抗体效价
在免疫后的第4、8、12、16周，采集小鼠尾静脉血，分离血清，ELISA检测血清抗-HAVIgG水平，按KPL公司生产的小鼠IgGELISA试剂盒说明书所述方法进行检测；
C、数据分析
对所获得的实验数据以SPSS16.0统计软件进行单因素方差分析，以P﹤0.05为差异的统计学意义；
表1为使用实例提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAVIgG水平（抗体效价值）。
表1
通过数据分析可以看出，从免疫后第4周开始，除空白组外，各实验组都能产生抗-HAVIgG抗体，并普遍于第八周达到峰值。其中铝佐剂组所取得的免疫效果最佳，16周之内抗体水平都显著高于无佐剂疫苗组，且能够维持较高的水平。甘草酸二铵佐剂组的抗体水平也显著高于无佐剂组，P＜0.05。
实施例2
本实施例提供的甘草酸二铵佐剂用量为0.5mg。
本实施例提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：在每单份HAV抗原（即动物实验中使用的单次注射剂量）中，加入0.5mg甘草酸二铵，再加生理盐水至200ul，按常规混合后，得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗，其中，甘草酸二铵、HAV抗原同实施例1。
本实施例2所得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表2。
表2为使用实例提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAVIgG抗体效价。
表2
通过数据分析可以看出，从免疫后第4周开始，除空白组外各实验组都能产生抗-HAVIgG抗体，并普遍于第八周达到峰值。其中铝佐剂组所取得的免疫效果最佳，16周之内抗体水平都显著高于无佐剂疫苗组，且能够维持较高的水平。甘草酸二铵佐剂组的抗体水平也显著高于无佐剂组，P＜0.05。
实施例3
本实施例提供的甘草酸二铵佐剂用量为1mg。
本实施例提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：在每单份HAV抗原（即动物实验中使用的单次注射剂量）中，加入1mg甘草酸二铵，再加生理盐水至200ul，按常规混合后，得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗，其中，甘草酸二铵、HAV抗原同实施例1。
本实施例3所得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表3。
表3为使用实例提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-HAVIgG抗体效价。
表3
通过数据分析可以看出，从免疫后第4周开始，除空白组外各实验组都能产生抗-HAVIgG抗体，并普遍于第八周达到峰值。其中铝佐剂组所取得的免疫效果最佳，16周之内抗体水平都显著高于无佐剂疫苗组，且能够维持较高的水平。甘草酸二铵佐剂组的抗体水平也显著高于无佐剂组，P＜0.05。
实施例4
本实施例提供的甘草酸二铵佐剂用量为1mg。
本实施例提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：在每单份乙肝表面抗原（即临床使用的单次注射剂量）中，加入1mg甘草酸二铵，再加生理盐水至200μL，按常规混合后，得含有甘草酸二铵佐剂的乙肝疫苗，其中，甘草酸二铵同实施例1；乙肝表面抗原为常规的含乙肝表面抗原1μg的市购产品，购自中国医学科学院医学生物学研究所。
本实施例4所得含有甘草酸二铵佐剂的乙肝疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表4。
表4为使用实例提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-乙肝表面抗原IgG抗体效价。
表4
通过数据分析可以看出，从免疫后第4周开始，除空白组外各实验组都能产生抗-乙肝表面抗原IgG抗体，并普遍于第八周达到峰值。其中铝佐剂组所取得的免疫效果最佳，16周之内抗体水平都显著高于无佐剂疫苗组，且能够维持较高的水平。甘草酸二铵佐剂组的抗体水平也显著高于无佐剂组，P＜0.05。
实施例5
本实施例提供的甘草酸二铵佐剂用量为1mg。
本实施例提供的含有甘草酸二铵佐剂的疫苗是：在每单份狂犬疫苗液（即动物实验中使用的单次注射剂量）中，加入1mg甘草酸二铵，再加生理盐水至200μL，按常规混合后，得含有甘草酸二铵佐剂的狂犬疫苗，其中，甘草酸二铵同实施例1；狂犬病毒抗原为常规的含狂犬病毒抗原0.125IU的市购产品，购自大连汉信生物制药有限公司。
本实施例5所得含有甘草酸二铵佐剂的狂犬疫苗的免疫试验同实施例1，结果见表5。
表5为使用实例提供的佐剂后，16周内，各实验组小鼠血清抗-狂犬病毒IgG抗体效价。
表5
通过数据分析可以看出，从免疫后第4周开始，除空白组外各实验组都能产生抗-狂犬病毒IgG抗体，并普遍于第八周达到峰值。其中铝佐剂组所取得的免疫效果最佳，16周之内抗体水平都显著高于无佐剂疫苗组，且能够维持较高的水平。甘草酸二铵佐剂组的抗体水平也显著高于无佐剂组，P＜0.05。

Claims (3)

1.一种含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗，其特征在于每单份甲肝疫苗剂中含有0.1mg～1mg的甘草酸二铵佐剂；并经过下列方法制备：按每单份甲肝疫苗剂加入0.1～1mg甘草酸二铵的量，在甲肝疫苗中加入甘草酸二铵后，再加生理盐水至100－200ul，按常规混合，得含有甘草酸二铵佐剂的甲肝疫苗。
2.一种含有甘草酸二铵佐剂的乙肝疫苗，其特征在于每单份乙肝疫苗剂中含有0.1mg～1mg的甘草酸二铵佐剂；并经过下列方法制备：按每单份乙肝疫苗剂加入0.1～1mg甘草酸二铵的量，在乙肝疫苗中加入甘草酸二铵后，再加生理盐水至100－200ul，按常规混合，得含有甘草酸二铵佐剂的乙肝疫苗。
3.一种含有甘草酸二铵佐剂的狂犬疫苗，其特征在于每单份狂犬疫苗剂中含有0.1mg～1mg的甘草酸二铵佐剂；并经过下列方法制备：按每单份狂犬疫苗剂加入0.1～1mg甘草酸二铵的量，在狂犬疫苗中加入甘草酸二铵后，再加生理盐水至100－200ul，按常规混合，得含有甘草酸二铵佐剂的狂犬疫苗。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1911954A (zh) * 2006-09-14 2007-02-14 杭州耀恒医药科技有限公司 带氨基酸的甘草酸衍生物、其制备方法及含有它们的药物组合物
CN101292952A (zh) * 2008-06-12 2008-10-29 武汉华纳生物工程有限公司 甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶及其制法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1911954A (zh) * 2006-09-14 2007-02-14 杭州耀恒医药科技有限公司 带氨基酸的甘草酸衍生物、其制备方法及含有它们的药物组合物
CN101292952A (zh) * 2008-06-12 2008-10-29 武汉华纳生物工程有限公司 甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶及其制法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
口服和注射甘草酸二铵对小鼠的免疫功能影响的比较;方红英，宋小莉，吴锡铭;《中国现代应用药学杂志》;20020831;275 *

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